植物组织培养技术.pptx
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植物组织培养技术(一)
精选课件
3
发展简史
• 1838-1839年，德国科学家Schleide 和Schwann发表了细胞学 说，奠定了组织培养的理论基础。
1902年，德国植物学家Haberlandt 根据细胞学说，提出单个 细胞的植物细胞全能性（totipotency）理论。
1904年，Hanning 最先成功地培养了萝卜和辣根菜的胚。 1922年，Knudson 采用胚培养法获得大量兰花幼苗。 1934年，White 用番茄根尖建立起第一个活跃生长的无性繁 殖系，从而使非胚器官的培养首先获得成功。
精选课件
5
植物组织培养的分类
• 外植体（explant)：由活体（in vivo)植物体上 提取下来的，接种在培养基上的无菌细胞、组 织、器官等。
• 广义的组织培养依外植体不同，可分为：器官 培养（organ culture）、茎尖分生组织培养 (shoot tip culture,shoot apex culture,apical meristem culture)、愈伤组织培养(calluse cultrue)、细胞培养(cell culture)、原生质体培养 (protoplast culture)
的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可能
表现出全能性，发育成完整的植株。人工条件下实现
的这一过程，就是植物精组选织课件培养。
13
植物细胞全能性的表达
• 脱分化（dedifferentiation)：将来自已分 化组织的已停止分裂的细胞从植物体部 分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞 的分裂活性。
精选课件
15
植物组织培养特点
• ①培养条件可以人为控制
组织培养采用的植物材料完全是在人为提供的培养基质和小气候环境条件下 进行生长，摆脱了大自然中四季、昼夜的变化以及灾害性气候的不利影响， 且条件均一，对植物生长极为有利，便于稳定地进行周年培养生产。
植物的组织培养技术ppt课件
答案：(1)灭菌 消毒 (2)外植体 真菌(霉菌) 细菌 (3)果胶 (4)萃取(浸取) 水浴
无菌箱
后进
1．被子植物的花粉发育过程
花粉母细胞 小孢子母细胞⇒
四分体时期
⇒ 单核期
⇒双核期⇒花粉粒
2．产生花粉植株的两条途径
3．影响花药培养的因素
(1)主要因素：
和
。
(2)月季花药培养一般材选料择的选择期，细胞培核养由基中的央组移成向细胞一侧的时期。
单核
4．实验操作[判断正误]
(1)在剥离花药时，不要损伤花药，否则接种后不能脱分化形成愈伤组织。
2．影响植物组织培养的因素[判断正误]
(1)菊花组织培养，一般选择开花植株的茎上部新萌生的侧枝。
() (2)植物激素的浓度可影响细胞分化，但使用的先后顺序及比例不影响×组织
培养的过程。
()
(3)pH、温度和光照等也影响植物组织培养。 ( ) ×
√
3．实验操作过程
配制各种母液
(1)制备 MS 固体培养基配制培养基
[典例3] 某二倍体植物是杂合体，下图为其花药中未成熟花粉在适宜的 培养基上培养产生完整植株的过程。请据图回答：
(1)图中①表示的是该花粉培养过程中的________过程，②表示的是________ 过程，X代表的是________，③表示的是________过程，④表示的是诱导 ________过程。
灭菌
(2)外植体消毒：
体积分数为70% 的酒精消毒
―→
无菌水 清洗
―→
质量分数为0.1%
的氯化汞溶液消毒
―→
无菌水
清洗
(3)接种：始终在
酒精灯旁火进焰行，对接种工具要用
植物组织培养常规技术幻灯片PPT
（3）确定最佳的取材时期 。 （4）内部已污染的材料弃之不用 。 2. 材料表面灭菌 （1）对灭菌剂的要求 （2）常用灭菌剂种类 （3）灭菌方法
常用外表灭菌剂的使用及其效果
种类
酒精 升汞 漂白粉 次氯酸钠 次氯酸钙
使用浓度 （%）
70-75 0.1-0.2 饱和上清液 2-10 9-10
灭菌时间 （分）
使用超净工作台应注意的问题
超净工作台不应安装在尘埃太多的地方。
在使用前应预热30-40分钟。
操作前应先将实验材料和操作器械、药品等物品事 先放入台内，不要中途拿进。
台面上放置的东西不宜太多，特别是注意不要把东 西迎面堆的太高，以免挡住气流。
定期检查，更换过滤器。
〔六〕接种器械的灭菌
❖灭菌方法 灼烧灭菌法：
离心机
〔五〕驯化移植室
❖ 用途：主要用于试管苗的驯化和移栽；也可用于 母株的预栽培。
❖ 设施：室内应备有弥雾装置、荫棚、移植床〔苗 床〕、恒温恒湿控制仪、光照调节装置等设施以 及培养土、培养盆〔钵〕、育苗盘等器材。
❖ 驯化移植室1、2
二、常用仪器设备与器械
〔一〕常用仪器设备： 超净工作台 ；高压蒸汽灭菌锅 ；冰箱 ；烘箱 ； 天平 ；蒸馏水器 ；酸度计 ；摇床与转床 ；光照 培养箱
20~50
15
75~150
20
250~500
25
1000
30
1500
35
2000
40
121℃ 122℃ 120℃
排汽一 定舒缓， 以免造成 培养基沸 腾，沾染 瓶塞引起 污染。
负压过滤器
〔三〕植物材料消毒
1．减少材料带菌的防范措施 （1）取材前对母株的预处理 ：减少带菌机会，改善生理
常用外表灭菌剂的使用及其效果
种类
酒精 升汞 漂白粉 次氯酸钠 次氯酸钙
使用浓度 （%）
70-75 0.1-0.2 饱和上清液 2-10 9-10
灭菌时间 （分）
使用超净工作台应注意的问题
超净工作台不应安装在尘埃太多的地方。
在使用前应预热30-40分钟。
操作前应先将实验材料和操作器械、药品等物品事 先放入台内，不要中途拿进。
台面上放置的东西不宜太多，特别是注意不要把东 西迎面堆的太高，以免挡住气流。
定期检查，更换过滤器。
〔六〕接种器械的灭菌
❖灭菌方法 灼烧灭菌法：
离心机
〔五〕驯化移植室
❖ 用途：主要用于试管苗的驯化和移栽；也可用于 母株的预栽培。
❖ 设施：室内应备有弥雾装置、荫棚、移植床〔苗 床〕、恒温恒湿控制仪、光照调节装置等设施以 及培养土、培养盆〔钵〕、育苗盘等器材。
❖ 驯化移植室1、2
二、常用仪器设备与器械
〔一〕常用仪器设备： 超净工作台 ；高压蒸汽灭菌锅 ；冰箱 ；烘箱 ； 天平 ；蒸馏水器 ；酸度计 ；摇床与转床 ；光照 培养箱
20~50
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75~150
20
250~500
25
1000
30
1500
35
2000
40
121℃ 122℃ 120℃
排汽一 定舒缓， 以免造成 培养基沸 腾，沾染 瓶塞引起 污染。
负压过滤器
〔三〕植物材料消毒
1．减少材料带菌的防范措施 （1）取材前对母株的预处理 ：减少带菌机会，改善生理
《植物组织培养技术》 精品课程.ppt
课程设计思路
课程的设计思路－－课程设计与开发流程
课程定位及服务面向
行业企业技术人员、专业教师
典型工作任务
社
Hale Waihona Puke 会 评知识、能力、素质要求
价
及
行 业
课程标准
调
查
课程内容结构
教材
教学过程设计
教学做一体化教学
校内外实训基地
教学内容的选取、组织与实施
• 教学内容的针对性与适用性
课程主要根据组培企业所需要的培养基制作 工、接种工、组培苗驯化工和组培生产管理员等 职业岗位实际工作任务制定课程标准，选取教学 内容，同时，兼顾学生未来的可持续发展，渗透 “必需、够用”的理论知识。
本课程教学队伍由7名专职教师和3名来自企业的兼职 教师组成。教师队伍 7名专任教师中有博士生研究生1名， 硕士研究生5名。专任教师主编和参编了国家及行业“十一 五”规划教材11本，其中主编1人，副主编2人；编写了具 有高等职业特色的校本教材4本。课程负责人近年来发表论 文14篇，第一作者发表的SCI论文1篇，国家级一级期刊论 文2篇，核心期刊论文2篇;主编校本教材一部。本团队的教 师近年来参与校外实训基地以及周边地区的技术服务项目 20多项，取得了较好的社会效益和经济效益。
务
课程学习项目设计
模块二 基本技术
模块三
模块四
拓展技术 综合应用
1、 导入
2、 解析
3、 实施
4、 展示
5、 评价
导
项项
项
项
项
项
项
向
目目
目
目
目
一二
三
四
五
目 六
目 七
组 培 必 备 知 识
课程的设计思路－－课程设计与开发流程
课程定位及服务面向
行业企业技术人员、专业教师
典型工作任务
社
Hale Waihona Puke 会 评知识、能力、素质要求
价
及
行 业
课程标准
调
查
课程内容结构
教材
教学过程设计
教学做一体化教学
校内外实训基地
教学内容的选取、组织与实施
• 教学内容的针对性与适用性
课程主要根据组培企业所需要的培养基制作 工、接种工、组培苗驯化工和组培生产管理员等 职业岗位实际工作任务制定课程标准，选取教学 内容，同时，兼顾学生未来的可持续发展，渗透 “必需、够用”的理论知识。
本课程教学队伍由7名专职教师和3名来自企业的兼职 教师组成。教师队伍 7名专任教师中有博士生研究生1名， 硕士研究生5名。专任教师主编和参编了国家及行业“十一 五”规划教材11本，其中主编1人，副主编2人；编写了具 有高等职业特色的校本教材4本。课程负责人近年来发表论 文14篇，第一作者发表的SCI论文1篇，国家级一级期刊论 文2篇，核心期刊论文2篇;主编校本教材一部。本团队的教 师近年来参与校外实训基地以及周边地区的技术服务项目 20多项，取得了较好的社会效益和经济效益。
务
课程学习项目设计
模块二 基本技术
模块三
模块四
拓展技术 综合应用
1、 导入
2、 解析
3、 实施
4、 展示
5、 评价
导
项项
项
项
项
项
项
向
目目
目
目
目
一二
三
四
五
目 六
目 七
组 培 必 备 知 识
第二章植物组织培养的一般技术ppt课件
称量大量元素的化合物用感量为0.01克的扭力天平 即可。
微量元素母液的配制
微量元素母液浓度宜为原培养基配方中用量的100 倍。
一般将微量元素分别称量溶解，贮存在一个瓶个， 但也有将KI分别配制，单独贮存在棕色瓶中。
称量微量元素化合物宜用感量为0.0001g的电子分 析天平。
铁盐母液配制
无菌操作
大量元素母液的配制
大量元素母液浓度一般为原培养基浓度的10、20或 50倍，有时也可用l00倍，倍数不宜过高，也不宜过 低。
有时将CaCl2·2H2O单独配制保存，以免长期贮存发 生沉淀。
将全部大量元素配在一起时，为防止在混合时发生沉 淀，须在各药品充分溶解后，按表中顺序混合，氯化 钙最后加入，以免与硫酸镁形成沉淀。
玻璃器皿及耐热用具等可采用干热灭菌
用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌
布制品采用高压灭菌
其他
植物材料的表面灭菌
培养基的成分及作用
在完善的培养基配方中至少应包括下述几个部分：
大量元素 微量元素 铁盐 有机成分 琼脂 糖 植物激素 PH 其它成分
多年的研究结果： Cu有促进离体根生长的作用； Mo是合成活跃硝酸还原酶所必不可少的元素，也
肌醇：本身没有促进生长的作用，但有助于活性物质的发挥， 并参与糖代谢，能使培养组织快速生长，对胚状体和芽的形 成有良好的影响
氨基酸：甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、 水解酪蛋白、水解乳蛋白
有机添加物：椰乳、香蕉等
琼脂
一种从海藻中提取出来的凝固剂，一般使用浓度为 0.6%—1%。以前使用琼脂条，现在使用琼脂粉， 以色白、洁净的为好。
它们作用强弱顺序：2，4－D >NAA>IBA>IAA
微量元素母液的配制
微量元素母液浓度宜为原培养基配方中用量的100 倍。
一般将微量元素分别称量溶解，贮存在一个瓶个， 但也有将KI分别配制，单独贮存在棕色瓶中。
称量微量元素化合物宜用感量为0.0001g的电子分 析天平。
铁盐母液配制
无菌操作
大量元素母液的配制
大量元素母液浓度一般为原培养基浓度的10、20或 50倍，有时也可用l00倍，倍数不宜过高，也不宜过 低。
有时将CaCl2·2H2O单独配制保存，以免长期贮存发 生沉淀。
将全部大量元素配在一起时，为防止在混合时发生沉 淀，须在各药品充分溶解后，按表中顺序混合，氯化 钙最后加入，以免与硫酸镁形成沉淀。
玻璃器皿及耐热用具等可采用干热灭菌
用于无菌操作的器械采用灼烧灭菌
布制品采用高压灭菌
其他
植物材料的表面灭菌
培养基的成分及作用
在完善的培养基配方中至少应包括下述几个部分：
大量元素 微量元素 铁盐 有机成分 琼脂 糖 植物激素 PH 其它成分
多年的研究结果： Cu有促进离体根生长的作用； Mo是合成活跃硝酸还原酶所必不可少的元素，也
肌醇：本身没有促进生长的作用，但有助于活性物质的发挥， 并参与糖代谢，能使培养组织快速生长，对胚状体和芽的形 成有良好的影响
氨基酸：甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、 水解酪蛋白、水解乳蛋白
有机添加物：椰乳、香蕉等
琼脂
一种从海藻中提取出来的凝固剂，一般使用浓度为 0.6%—1%。以前使用琼脂条，现在使用琼脂粉， 以色白、洁净的为好。
它们作用强弱顺序：2，4－D >NAA>IBA>IAA
《植物组织培养技术》课件
04 植物组织培养技术的应用实例
快速繁殖技术
快速繁殖技术是指利用植物组 织培养技术，快速、大量繁殖
植物种苗的一种方法。
该技术广泛应用于花卉、果树 、林木等植物的快速繁殖，能 够大大缩短繁殖周期，提高繁
殖系数。
快速繁殖技术还可以通过控制 培养条件，实现植物的定向繁 殖，如矮化、无病毒等。
快速繁殖技术具有高效、环保 、可重复利用等优点，是现代 农业和林业生产的重要手段之 一。
濒危植物保护与复壮是保护生 物多样性和维护生态平衡的重 要手段之一，具有深远的社会 意义和生态意义。
05 植物组织培养技术的挑战与前景
技术瓶颈与解决方案
技术瓶颈
目前植物组织培养技术面临的主要瓶颈包括培养基的优化、外植体的选择与处 理、污染控制以及基因转化效率等。
解决方案
针对这些问题，研究者们正在探索新型的培养基成分、优化外植体的选择标准 、开发新型的消毒方法以及改进基因转化技术，以期提高植物组织培养的效率 和成功率。
指任何一个植物细胞都包含该物种的 全套遗传信息，具有发育成完整个体 的潜在能力。
植物细胞全能性证明
植物细胞全能性的应用
植物组织培养技术利用植物细胞的全 能性，通过离体培养获得完整的植株 ，广泛应用于植物繁殖、品种改良、 基因工程等领域。
许多植物细胞如胡萝卜、烟草、草莓 等在适宜条件下能够发育成完整的植 株，证明了植物细胞的全能性。
技术发展趋势与展望
发展趋势
随着生物技术的不断发展，植物组织培 养技术也在不断进步和完善。未来，该 技术将更加注重与基因编辑、合成生物 学等新兴技术的结合，以实现更为精准 和高效的植物育种和种质资源保护。
VS
展望
未来，植物组织培养技术有望在农业、园 艺、林业等领域发挥更大的作用，为解决 全球粮食安全、生态恢复等问题提供有力 支持。
植物的组织培养技术(共27张PPT)
➢按培养方法分为
固体培养 液体培养
看护培养 微室培养
按培养过程分为
初代培养
继代培养
离体的植物器官、组织、细胞 将植物的器官如胚、胚乳、珠心、子房、根、茎、叶、花和幼果的部分组织接种在无菌培养基上进行培养。
初代培养 继代培养 运用组织培养的途径，一个单株一年可以繁殖几万到几百万个植株，而且均来自一单一的个体，遗传性状一致。
再分化：经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件 下可有转变为各种不同细胞类型的能力。
4.植物组织培养分类
➢按材料的类别分
愈伤组织培养 细 胞 培养
器 官 培养
原生质体培养
最为常见的组织培养
悬浮细胞培养 单细胞培养
胚、胚乳、珠心、子房、根、茎、叶、 花和幼果的部分组织的培养
⑴愈伤组织培养
将外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存 在，而其细胞脱分化形成愈伤组织，然后通过再分化形成再 生植株。它是最为常见的。
1.组织培养定义
组织培养是指用
无菌方法使植 物体的离体器
官、组织和细胞 在人为提供的条 件下生长和发育 的所有培养技术 的总称，也称之 为离体培养。
（二）奠基阶段（从20世纪30
年代末到50年代中）：
1934年，White 用番茄根尖 建立起第一个活跃生长的无性繁 殖系，从而使非胚器官的培养首 先获得成功。
脱 分 化
离体的植物器官、 组织、细胞
愈伤组织
植物全能性 的表达
根、芽
胚状体 再生植株
游离单细胞 或原生质体
人工种子
培养条件：基 本培养基和适 宜的植物生长 调节物质，适 宜的温度、空 气、无菌环境、 适合的PH、 适时光照等。
脱分化：将分化组织的已停止分裂的细胞从植物体 部分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的分裂活性。
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③插入时应注意方向，不要倒插。茎段、茎尖 基部插入培养基利于吸收水分和养分
思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实 验吗？
答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。 设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养 基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养， 用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
（四）培养
愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡 化的、成无定形状态的薄壁细胞。
人参的愈伤组织
菠萝的愈伤组织
1、影响植物组织培养的因素 （1）植物材料的选择
烟草和胡萝卜的组织培养较为容易
枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 同一植物材料的年龄、保存时间的长短会 影响实验结果
菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎 上部新萌生的侧枝
使用顺序
先使用生长素，后使用 细胞分裂素
先使用细胞分裂素后使 用生长素
同时使用
实验结果 有利于细胞分裂，但不 利分化 细胞既分裂也分化
分化频率高
③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例 对植物细胞发育方向的影响 生长素 > 细胞分裂素： 有利于根的分化 生长素 < 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑
2、配置培养基
① 配制培养液
② 调PH ③培养基的分装 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此 不必添加植物激素
3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸 汽灭菌
（二）外植体消毒
1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 2、消毒
①流水冲洗
菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷 轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右
必要条件： 一定的营养物质、激素和其他 外界条件
原理: 细胞的全能性
相关概念: 外植体
从活植物体上切下进行培养的那部分细胞、 组织或器官
植物组织培 养流程图
脱分化：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组
织的过程，称为植物细胞的脱分化，或去 分化。
再分化： 脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又
可以重新分化成根或者芽等器官，这个过 程叫做再分化。
专题3 植物组织培养技术
课题1 菊花的组织培养
课题1： 菊花的组织培养
一、原理：细胞的全能性
①定义：已经分化的细胞，仍然具有发育成完整 个体的潜能。
②原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所 特有的全套遗传物质，都有发育成为完 整个体所必需的全部基因。
③全能性的比较: 受精卵>生殖细胞>体细胞
二、植物组织培养 细胞离体
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
4、接种注意事项
①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分 数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒 精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种
②外植体在培养基中要分ຫໍສະໝຸດ 均匀，放置外植体 数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－ 4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充 分利用培养基中的营养成分和光照条件
（2）培养基的配置
MS培养基主要成分包括： 大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等
微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、 Co等
有机物、植物激素
讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题 2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方 有哪些明显的不同？
答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必 需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞 的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满 足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后 所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营 养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需 提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长 必须的大量元素和微量元素两大类。
制根的分化 生长素、细胞分裂素适中：促进愈伤组织生长
（4）pH、温度、光照
pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每 日用日光灯照射12h
3、植物组织培养过程:
植物细胞培养
细胞分裂
离
素>生长素
体 组
脱分化
愈 伤 再分化
芽
织 或 细
细胞分 裂素≈
组 织
根 细胞分裂
植 物 体
胞 生长素
素<生长素
4、植物组织培养的应用：
1、培育无病毒植株
2、 培养紫草愈伤组织,提取紫草素（治疗烫伤 和割伤的药物以及染料和化妆品的原料）
3、诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力 的胚状体结构，包裹上人造种皮，制成人工种 子，可以解决有些作物品种繁殖能力差，结子 困难或发芽率低等问题
4、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法
② 酒精处理
用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体 积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－ 7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗
③消毒液处理
取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分， 放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min， 取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液
（三）接种
1、接种室消毒 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种 室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空 气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外 线照射20分钟
人工种子
二、实验操作 （一）制备MS固体培养基
MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般 使用4。C保存配制好的培养基母液来制备
1、配置各种母液
①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓 缩100倍，常温保存
②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一 般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液
③用母液配制培养基时，需要根据各种母液 的浓缩倍数，计算用量
（3）植物激素的影响
①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和 赤霉素 生长素类：（2，4－D）、（IAA）、（NAA）、
（IBA）
细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤 （ 6－BA）、玉米素（ZT）
赤霉素类： 赤霉酸（GA3）
②生长素和细胞分裂素作用
植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、 脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在 的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势
1、愈伤组织的培养
从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。2 周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白 色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温 箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈 伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽， 必须更换培养基，进行继代培养
思考：你打算做几组重复？你打算设置对照实 验吗？
答：每种材料或配方至少要做一组以上的重复。 设置对照实验可以取用一个经过灭菌的装有培养 基的锥形瓶，与接种操作后的锥形瓶一同培养， 用以说明培养基制作合格，没有被杂菌污染。
（四）培养
愈伤组织:细胞排列疏松而无规则,是高度液泡 化的、成无定形状态的薄壁细胞。
人参的愈伤组织
菠萝的愈伤组织
1、影响植物组织培养的因素 （1）植物材料的选择
烟草和胡萝卜的组织培养较为容易
枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 同一植物材料的年龄、保存时间的长短会 影响实验结果
菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎 上部新萌生的侧枝
使用顺序
先使用生长素，后使用 细胞分裂素
先使用细胞分裂素后使 用生长素
同时使用
实验结果 有利于细胞分裂，但不 利分化 细胞既分裂也分化
分化频率高
③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例 对植物细胞发育方向的影响 生长素 > 细胞分裂素： 有利于根的分化 生长素 < 细胞分裂素： 有利于芽的分化，抑
2、配置培养基
① 配制培养液
② 调PH ③培养基的分装 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此 不必添加植物激素
3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸 汽灭菌
（二）外植体消毒
1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 2、消毒
①流水冲洗
菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷 轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右
必要条件： 一定的营养物质、激素和其他 外界条件
原理: 细胞的全能性
相关概念: 外植体
从活植物体上切下进行培养的那部分细胞、 组织或器官
植物组织培 养流程图
脱分化：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组
织的过程，称为植物细胞的脱分化，或去 分化。
再分化： 脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又
可以重新分化成根或者芽等器官，这个过 程叫做再分化。
专题3 植物组织培养技术
课题1 菊花的组织培养
课题1： 菊花的组织培养
一、原理：细胞的全能性
①定义：已经分化的细胞，仍然具有发育成完整 个体的潜能。
②原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所 特有的全套遗传物质，都有发育成为完 整个体所必需的全部基因。
③全能性的比较: 受精卵>生殖细胞>体细胞
二、植物组织培养 细胞离体
2、无菌操作要求
操作要在酒精灯火焰旁完成，每次使用器械后， 都需要用火焰灼烧灭菌，接种后立即盖好瓶盖。
3、材料的切取和接种
4、接种注意事项
①每接种一块外植体前，镊子需放入体积分 数为75％的酒精溶液中消毒一次，然后在酒 精灯火焰上烧一遍，冷却后再接种
②外植体在培养基中要分ຫໍສະໝຸດ 均匀，放置外植体 数量根据锥形瓶的大小确定，一般胡萝卜3－ 4块，菊的茎或叶6－8块，也不要太少，以充 分利用培养基中的营养成分和光照条件
（2）培养基的配置
MS培养基主要成分包括： 大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等
微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、 Co等
有机物、植物激素
讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题 2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方 有哪些明显的不同？
答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必 需的无机盐；蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞 的渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满 足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后 所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营 养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需 提供大量无机营养，无机盐混合物包括植物生长 必须的大量元素和微量元素两大类。
制根的分化 生长素、细胞分裂素适中：促进愈伤组织生长
（4）pH、温度、光照
pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每 日用日光灯照射12h
3、植物组织培养过程:
植物细胞培养
细胞分裂
离
素>生长素
体 组
脱分化
愈 伤 再分化
芽
织 或 细
细胞分 裂素≈
组 织
根 细胞分裂
植 物 体
胞 生长素
素<生长素
4、植物组织培养的应用：
1、培育无病毒植株
2、 培养紫草愈伤组织,提取紫草素（治疗烫伤 和割伤的药物以及染料和化妆品的原料）
3、诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力 的胚状体结构，包裹上人造种皮，制成人工种 子，可以解决有些作物品种繁殖能力差，结子 困难或发芽率低等问题
4、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法
② 酒精处理
用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体 积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－ 7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗
③消毒液处理
取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分， 放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min， 取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液
（三）接种
1、接种室消毒 污染的主要来源是空气中的细菌和孢子，接种 室消毒是至关重要的。用70％的酒精喷雾使空 气消毒， 酒精或新洁尔灭搽洗工作台并用紫外 线照射20分钟
人工种子
二、实验操作 （一）制备MS固体培养基
MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般 使用4。C保存配制好的培养基母液来制备
1、配置各种母液
①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓 缩100倍，常温保存
②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一 般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液
③用母液配制培养基时，需要根据各种母液 的浓缩倍数，计算用量
（3）植物激素的影响
①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和 赤霉素 生长素类：（2，4－D）、（IAA）、（NAA）、
（IBA）
细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤 （ 6－BA）、玉米素（ZT）
赤霉素类： 赤霉酸（GA3）
②生长素和细胞分裂素作用
植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、 脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在 的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势
1、愈伤组织的培养
从接种外植体到出现愈伤组织需经过2周时间。2 周之内可以看到外植体上逐渐长出乳白色或黄白 色的瘤状愈伤组织。首次培养愈伤组织时，恒温 箱的门应该关闭不必见光，因为在无光条件下愈 伤组织长的更快。2周后，培养基成分接近耗尽， 必须更换培养基，进行继代培养