阿司匹林原料含量测定及有关物质检查

阿司匹林原料及肠溶片有关物质和含量测定方法比较（中国药典（2005）和中国药典（2010）），要求结合大家药物分析实验和课本知识及药典内容进行比较，说明各方法的原理及比较方法的优缺点
一、阿司匹林结构及理化性质
1．结构
2．理化性质
阿司匹林为固体，具有一定的熔点。

在水中微溶或几乎不溶，而能溶于乙
醇、乙醚、三氯甲烷等有机溶剂中，根据溶解行为的差异可作为供试品溶液
的配制或含量测定时滴定介质选择的依据。

（1）酸性：阿司匹林的结构中具有羧基，pKa=3.49水溶液显酸性，并能
与碱发生中和反应。

（2）具有酚羟基：阿司匹林结构中都具有潜在的酚羟基，可与铁盐试液
作用显色。

可用于鉴别试验。

（3）具有酯结构：阿司匹林结构中具有酯结构，在碱性条件下可水解产
生酚羟基和羧酸盐。

阿司匹林原料药的含量测定
1、阿司匹林原料测定（2005版）：直接滴定法（2010年版阿司匹林原料测定
与2005版的相同）
阿司匹林的含量测定方法：取本品约0.4g，精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20ml溶解后，加酚酞指示液3滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定。

每1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于18.02mg 的C9H8O4
1．直接滴定法原理：阿司匹林中具羧基，在一定条件下与氢氧化钠反应。

测
定阿司匹林含量的反应式如下：
《中国药典》（2005年版）阿司匹林的含量测定方法为：取本品约0.4g，
精密称定，加中性乙醇（对酚酞指示液显中性）20mL溶解后,加酚酞指示液3
滴，用氢氧化钠标准滴定溶液（0.lmol/L）滴定。

每1mL的氢氧化钠标准滴定
溶液（0.1moL/L）相当于18.02mg的阿司匹林（C
9H8O4）。

滴定度：
1ml NaOH滴定液（0.1mol/L）≡ 0.1 mmol NaOH
≡ 0.1 mmol阿司匹林
≡ 0.1×180.16mg 阿司匹林
≡ 18.02 mg 阿司匹林
含量测定结果计算公式为：
式中V—样品消耗的氢氧化钠滴定溶液的体积，mL；
T—滴定度，mg／mL；
F—氢氧化钠滴定溶液的浓度校正因子；
W—待测药物的称样量，g。

原理：阿司匹林结构中有游离羧基，显酸性，pKa3～6。

优点：简便、快速。

缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）；
酸性杂质干扰（如水杨酸（因本法缺乏专属性，易受酯键水解产物水杨酸和醋酸干扰）
注：适用范围：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，只能用于合格原料药的含量测定。

1、乙醇的作用：（阿司匹林在水中微溶，但易溶于乙醇.）乙醇溶解阿司匹林；防
止阿司匹林在水溶液中滴定过程易水解
2、溶剂用中性乙醇的原因：乙醇对酚酞指示剂显酸性，可消耗NaOH而使结果偏高，故在使用前需用氢氧化钠中和至对酚酞指示剂显中性。

（中性乙醇：对指示剂(酚酞)而言为中性，可消除滴定误差)
3、滴定应在不断振荡下稍快进行，以防止局部浓度过大，致使阿司匹林酯水解
4、温度在0-40℃对测定结果无显著影响。

5、指示剂(酚酞)：阿司匹林与氢氧化钠形成强碱弱酸盐，碱性区显色，pH8.2
2、水解后剩余滴定法
原理：阿司匹林中酯结构，在碱性溶液中易于水解，加入过量标准碱滴定液，加热使酯水解，剩余碱用酸回滴。

1mol NaOH ≡½mol 阿司匹林
1mol H2SO4≡2 mol NaOH
方法：取本品1.5g，精密称定加氢氧化钠滴（0.5mol/l）50.0ml，混合，缓缓煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mol/l）滴定剩余的氢氧化钠。

并将滴定结果用空白试验校正。

每1ml 氢氧化钠滴定液（0.5mol/L）相当于45.04mg的阿司匹林
（剩余）NaoH硫酸实验组：称量（过量定量）NaoH滴定
滴定(消耗体积V)
空白组：（过量定量）NaoH 硫酸滴定液滴定（消耗体积V0）NaoH滴定度（T）=0.5X180.16 X 1/2=45.04(mg/ml)
（V:样品测定时消耗硫酸滴定液体积（ml）V
空白试验时消耗硫酸滴定液的体积（ml）T:
0：
滴定度W：供试品称样量（g）F:硫酸滴定液浓度校正因子F=滴定液实际浓度/滴定
液规定浓度）
优点：消除了酯键水解的干扰
缺点：酸性杂质干扰
注：进行空白校正（不加样品或等量溶剂）的原因：消除CO2的干扰。

（碱液在受热时易吸收CO2，生成碳酸盐，当用酸回滴时，算滴定液消耗的体积会偏小，使测定结果偏小，故需空白校正。

）
阿司匹林有关物质检查
阿司匹林的合成工艺：
1、阿司匹林中的“有关物质”系指除“游离水杨酸”外的合成原料药苯酚及其他合成副产物，如醋酸苯酯、水杨酸苯酯、水杨酸水杨酸、水杨酸酐、乙酰水杨酸苯酯、等杂质。

在2005版药典当中，并没有单独列出有关物质的检查方法，只通过检查原料药的澄清度从而间接的来检查有关物质的限量。

①溶液的澄清度检查碳酸钠试液中不溶物。

不溶物杂质有未完全反应的酚类，或水杨酸精制时由于温度过高，产生脱羧副反应的苯酚，以及合成工艺过程中由副反应生成的醋酸苯酯、水杨酸苯酯和乙酰水杨酸苯酚等。

这些杂质均不溶于碳酸钠试液，而阿司匹林可溶解。

利用溶解行为的差异，由一定量阿司匹林在碳酸钠试液中溶解应澄清来加以控制。

原理——根据这些杂质与阿司匹林的酸性强弱，利用它们在碳酸钠溶液中的溶解度差异，规定一定量样品在碳酸钠溶液中应澄清。

方法——取本品0.50g，加温热至约45℃的碳酸钠试液10ml溶解后，溶液应澄清。

而2010版药典当中不仅检查了药物的澄明度，还利用了HPLC进一步的量化了杂质的限量。

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）为流动相A，乙腈为流动相B，按下表进行线性梯度洗脱；检测波长为276nm。

阿司匹林峰的保留时间约为8分钟，理论板数按阿司匹林峰计算不低于5000，
阿司匹林峰与水杨酸峰分离度应符合要求。

时间（分钟）流动相A（%）流动相B（%）
0.0 100 0
60.0 20 80
测定法取该品约0.1g，精密称定，置10ml量瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液；精密量取供试品溶液1ml，置200ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得对照溶液；精密量取对照溶液10ml，置100ml量瓶中，用1%冰醋酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得灵敏度试验溶液。

分别精密量取供试品溶液、对照溶液、灵敏度试验溶液及水杨酸检查项下的水杨酸对照品溶液各10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

供试品溶液色谱图中如显杂质峰，除小于灵敏度试验溶液中阿司匹林主峰面积的单个杂质峰、溶剂峰及水杨酸峰不计外，其余各杂质峰面积的和不得大
于对照溶液主峰峰面积（0.5%）。

方法——HPLC梯度洗脱，主成分自身对照法（0.5%）
色谱柱：ODS
流动相：A：乙腈-四氢呋喃-冰醋酸-水（20:5:5:70）
B：乙腈
检测波长：276nm
原料药：
供试品溶液：0.01g/ml
对照溶液：0.05mg/ml
灵敏度试验溶液：0.005mg/m
有关物质:除水杨酸峰外，其他各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积（0.5%）2005年在有关物质检查时未使用HPLC很大可能是因为当时HPLC不够普及，而使用澄明度发检查是简单快捷且便宜的方法,但该方法只检查了无羧基杂质如苯酚、醋酸苯酯、水杨酸苯酯，而水杨酸水杨酸、水杨酸酐等含羧酸的杂质并不能检查到，而且由于每个人的眼睛对澄清的鉴别界限不同，作为定性检查灵敏度也是不够的；而HPLC的使用则增加了选择性和
灵敏度，但同时也增加了成本和实验要求。

附：高效液相色谱的优点是：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量精度高，应用范围广。

适用于分析高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物。

其缺点是：价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，分析生物大分子和无机离子困难，流动相消耗大且有毒性的居多。

三、总结
通过上述分析发现，阿司匹林原料药与其片剂的检验方法是不同的，比如，
鉴别实验中，需要将制剂时引入的辅料等干扰因素除去，然后再按照原料药的检
查方法进行检查。

含量测定时，两者采用了不同的方法，原料采用的是直接酸碱
滴定法，片剂采用的是二步酸碱滴定法，原因是在片剂制剂中引入的辅料不允许
采用直接酸碱滴定法，会干扰实验结果。

由此可以看出，在进行原料药及其制剂
的分析时，原料测定方法要求选择具有较高的准确度的方法，而制剂的测定方法
要求侧重于具有较高的专属性。