实验九 HPLC法测定中药饮片中芦丁的含量

实验九HPLC法测定中药饮片中芦丁的含量
一、实验目的
1 ．理解反相色谱的原理和应用。

2 ．掌握外标定量方法。

二、实验原理
芦丁，即芸香苷，是中药饮片中较见的种黄酮类成分，有抗炎、降血脂、抗病毒及维生素P样等作用。

高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的淋洗液和固定相间的分配系数不同，当试样随着流动相进入色谱柱中后，组分就在其中的两相间进行反复多次（103-106）的分配（吸附－脱附－放出），由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。

三、实验试剂、仪器及设备
仪器: LC100高效液相色谱仪（UV检测器;二元梯度泵），上海五丰。

样品:桑叶、芦丁标准品。

试剂:甲醇(HPLC纯) ,重蒸馏水。

四、实验内容
1. 标准液制备及标准曲线制备: 准确称取制备好的芦丁标准样品10mg，加蒸馏水溶解后移人10mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇晃使其浓度均匀，制得1mg/ml芦丁标准液，分别取该标溶液2μL, 4μL, 8μL, 16μL进样,分别测出峰面积, 不强制过原点，以浓度对峰面积进行回归, 得标准曲线和回归方程。

数据处理机给出峰面积值,以标准品进样量(μ
g) 为纵坐标( Y) ,峰面积为横坐标( X) ,得标准曲线。

2. 样品液制备:精取桑叶叶粉末(过20目筛) 5.00 g置于250ml烧瓶中，加入50ml甲醇水浴回流提取30min,过滤，取续滤液20ml，氮气吹干后，用甲醇定容至5.00ml,用滤头过滤后即为供试液。

3. 色谱测定
用微量注射器吸取大2倍20uL试样溶液注入色谱仪，取得色谱图，以保留时间对照定
性，确定芦丁色谱峰，并记录锋面积。

五、 实验过程原始记录
1 .记录色谱条件:
色谱柱Agilent XDB-C18 色谱柱(4.6mm ×250 mm ,5 μm) ;流动相甲醇:水 = 50∶50 ; 柱温为30℃;流速1 mL/min ;检测波长254nm ;进样量20μL 。

2. 标准品和样品色谱图。

min -200
-100
100
200
300
400
500
600
700
800
900
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800mAU
317nm4nm (1.00)/smth
图1 对照品色谱图
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.07.08.09.0min -200
-100
100
200
300
400
500
600
700
800
900
1000
1100
1200
1300
mAU 317nm4nm (1.00)/smth
图2 样品色谱图
六、结果及分析
1. 芒果苷标准曲线及回归方程
Y=6.16853e-007X-0.2017519,r=0.9999
2. 根据回归方程计算样品中芦丁的浓度（根据各自实验结果撰写）
3．回答“问题与讨论”中所提问题（根据各自实验结果撰写）
七、参考文献。