实验九 HPLC法测定中药饮片中芦丁的含量
HPLC法测定飞燕草中芦丁的含量
ｍ ｔ ｎｌ ａ ｒ ｃｔ ｃ （ ： ： ａ ｍ ｂｌ ｐ ａ ， ｅ ｃｏ ａｅ ｎｔ ０ｎ ，ｏ ｍ ｍ ｅ ｔ ｅ３℃， ｏ ｔ ｅ ａｏｗ ｔ ： ｅ ｃ ｉ ４ ６ １ ｓ ｏ ｉ ｈｓ ｄｔ ｔｎｗ ｖｌ ｇ ｏ ３ ｍ ｃｌ ｎｔ ｐｒ ｕ Ｏ ｆｗｒ ｅ ｈ ： ｅａ ｉａ ｄ ０ ０ ） ｅ ｅ ｅｉ ｅ ｈｆ３ ｕ ｅ ａｒ ｌ ａ
精确称 取飞燕 草全草 ５ ０ｇ 加入 乙醚 ５００ｍｌ ０ ， ０ 浸泡 ３ ， 次
每 次 １ 脱 脂 。残 渣 挥 干 乙醚 ， ８ ％乙醇 ５０ ０ｍｌ回流 ． ｈ， ５ 加 Ｏ ０ ，
平 喘 ， 水 消肿 ， 利 解痉 止 痛 之功 ， 治 喘息 不得 卧 ， 肿胀 满 ， 主 水 腹 痛 ， 热 牙 痛 ， 虱等 症［ 风 头 １ １ 。主 要 含有 生 物 碱 、 苷 、 皂 黄酮 等
１ ０ ２ ， ｉａ ３ ０ １ Ｃｈ ｎ
［ ｓｒ ｃ］Ｏｂ ｅｔ ｅ Ｔ ｅｅ ｉｅｔｅＤ ｌｈｎｕ ｒｎ ｉｏｕ ｏ ｔ ， ｒｖｄｎ ｅｂ ｓ ｏ ｕｌｙｃ ｎｒｌ ｒＤ １ Ａｂ ｔａ ｔ ｊｃｉ ： ｏｄ ｔｒ ｎ ｈ ｅ ｉｉｍ ｇａ ｄｆ ｒｍ ｆ ｕｉ ｐｏｉｉｇｔ ａｉ ｆｒｑ ａｉ ｏｔ ｅ－ ｖ ｍ ｐ ｌ ｒ ｎ ｈ ｓ ｔ ｏｆ ｏ
ａｅａｅ ｅｏｅ ａ ９ ． ％ （Ｓ ＝ ． ％， ＝ ）Ｃ ｎｌｓ ｎ Ｔ ｅ ｅ ｏ ｉｐ ，ｔ ｌ ａｄｃｎｂ ｓｄｆ ｅ ｒ ｉ ｖｒｇ ｃｖｒ ｗ ｓ ９ ６ Ｒ Ｄ Ｉ ２ ｎ ６． ｏ ｃ ｉ ： ｈ ｔ ｄｉ ｓ ｌ ｓ ｂ ａ ｅ ｅ ｒ ｔ ｍ— ｒ ｙ ２ ７ ｕｏ ｍ ｈ ｓ ｍ ｅ ａ ｅｎ ｕ ｏ ｄｅ
HPLC法测定地锦草中芦丁的含量
中 图分 类 号 ：９ ７ ２ 文 献 标 识 码 ： 文 章 编 号 ：６ ２ ７ ８ ２ １ ）３ １９ ２ Ｒ ２． Ａ １ ７ —７ ３ （０ ０Ｏ —０ ３ —０
Ｄｅ ｅ ｍ ｉ ａ ｉ ｎ ｏ ｕ ｉ ｎ Ｈ ｅ ｂ ｐｈｏ ｂ ａ ｙ Ｈ ＰＬＣ ｔ ｒ ｎ ｔｏ ｆｒ ｔｎ ｉ ｒ ａ Ｅｕ ｒ ｉｅｂ
柱 温 ： ５ 。结 果 芦 丁 进 样 量 在 ０ ０ ９ ０ ３ ｔ 范 围 内 与 色 谱 峰 面 积 呈 良好 的 线 性 关 系，ｒ； ０ ９ ９ ， 均 回 收 率 为 ３℃ ．１ ～ ．８ｇ ￣ ．９９ 平
９ ． ３ ， Ｓ （ 一 ６ 为 １Ｏ 。 结 论 该 方 法 简便 准 确 ， 现 性 好 ， 以 作 为 地 锦 草 中芦 丁 的含 量 测 定 方 法 。 ８ ７ Ｒ Ｄ ） ．５ 重 可 关键 词 ： 锦 草 芦 丁 高效 液 相 色谱 法 地 含 量 泖 定 ｉ
ｗａ ５ ． ｓ ３ ℃ ＲＥＳ ＴＳ Ｔｈ ａｉ ｒ ｔ ｎ ｃ ｒ ｅ ｓ ｏ ｄ ａ ｇ ｏ ｉｅ ｒｒ ｌｔ ｎ ｈ ｐ ａ ｈ ａ ｇ ｆ０ ０ ９ ０ ３ ／ ＵＬ ｅ ｃ ｌ ａ ｉ ｕ ｖ ｈ ｗｅ ｏ ｄ ｌ ａ ｅ ａ ｉ ｓ ｉ ｔｔ ｅ ｒ ｎ ｅ ｏ ． １ ￣ ． ８￣ ｂ ｏ ｎ ｏ ｇ，ｒ一 ０ ９ ９ ｔ ｅ ． ９ ９，ｈ ａ ｅａ ｅ ｒｃ ｖ ｒ ｓ９ ． ３ ｖ ｒ ｇ ｅ ｏ ｅ ｙ ｗａ ８ ７ ａ ｄ ＲＳ （ ＝ ６ ｗａ ． ５ ． ＯＮＣ ｎ Ｄ ） ｓ１ Ｏ Ｃ ＬＵＳ ＯＮ Ｔｈ ｔ ｏ ｓ ｓｍ ｐ ｅ ａ ｃ ｒ ｔ ｎ ｅ ｅ ｔ Ｉ ｅ ｍｅ ｈ ｄ ｗａ ｉ ｌ ， ｃ ｕ ａ ｅ ａ ｄ ｒ ｐ ａ —
Ｅ ｐ ｏｂａｈ ｍｉｕａＷｉｄ ｕ ｈ ｒｉ ｕ ｆ ｓ ｌ ．的干 燥 全 草 。 ｌ
HPLC法测定不同来源款冬花中芦丁的含量
HPLC 法测定不同来源款冬花中芦丁的含量刘香,曹娟(贵阳医学院药学系,贵阳550004)摘要 目的:建立款冬花药材中芦丁的含量测定方法并比较不同来源的款冬花中芦丁的含量。
方法:采用HLPC 法。
色谱柱:迪马公司D i a m onsil C 18(150mm 4 6mm,5 m );流动相:甲醇-0.1%磷酸溶液(38 62);流速:1 0mL !m in -1;检测波长:354n m;温度:30∀。
结果:芦丁进样量在0.09~0 98 g 范围内线性关系良好(r =0 9999),平均回收率(n =9)为100 6%,不同来源药材中芦丁的含量范围为0 19%~0 39%。
结论:不同产地的款冬花药材中芦丁含量差异不大。
关键词:H PLC ;款冬花;芦丁中图分类号:R 917文献标识码:A文章编号:0254-1793(2009)01-0134-03第一作者 Te:l (0851)6908328;E -m ai :l tryh@163 co mHPLC deter m i nation of ruti n in Tussil ago far fara L fro m differe nt areasLIU X iang ,CAO Juan(Depart m en t of Phar m acy ,Gu i yang M ed i calC oll ege ,Gu i yang 550004,Ch ina)Abstract O bjective :To deve l o p an H PLC m e t h od to deter m ine the contents o f r u ti n in Tussilago far fara fro mdifferent areas M ethod :D ia m onsilC 18co lum n(150mm 4 6mm,5 m )w as adopted;the m obile phase consis ted o fm ethanol-0 1%phosphor ic acid so l u ti o n(38 62)a t a fl o w rate of 1 0m L !m i n -1;the detection w ave leng th w as 354nm,and the te m perature w as 30∀ R esults :The ca li b rati o n curve w as li n ear in the range o f 0 09-0 98 g(r =0 9999);The average recovery(n =9)w as 100 6% The contents o f rutin i n Tussilago far fara fro m different areas w ere 0 19%-0 39% C onclusion :Tussil a go farfara of d ifferent areas con ta i n s si m ilar a m ount of r u ti n .K ey w ords :H PLC ;Tussilago far fara L ;r uti n款冬花为菊科款冬属植物款冬Tussilago far fara L .的干燥花蕾,又称冬花、艾冬花、九九花、虎须等,具有润肺下气、止咳化痰的功效。
中药饮片中芦丁的含量检测
啊
Ｉ
中药 饮 片 中 芦 丁 的含 量 检 测
贾洪 文
（ 哈 尔滨 顺亿 堂 医药生 物 科技 开 发有 限公 司 ） ［ 摘 要］ 目的 测 定２ Ｏ 种 中药 饮片 中芦 丁 的含量 。方法 采 用反 相 高效 液相 色谱 法 ， 以Ｈ ｙ ｐ ｅ ｒ ￣Ｇ Ｏ Ｌ Ｄ 柱（ ５ “Ｉ Ｎ ２ ５ ０ ｍｍ × ４ ． ６ ０ ａ ｒ ｍ） 为分 析柱 ， 乙腈 ： 水 （ 加 磷酸 调ｐ Ｈ至２ ． ６ ） （ ８ ： ９ ２ ～３ ０ ： ７ ０ ） 为流动 相 ， 流速 ： ０ ． ８ ｍｌ ／ ｍｉ ｎ｝ 检 测 波长 为２ ５ ４ ｎ ｍ， 柱温 ３ ０ ￣ Ｃ。结 果 芦丁 浓度 在 （ ０ ． ０ ０ ９ ５ ～Ｏ ． ３ ８ ０ ０ ） ｇ 范 围 内与 色谱 峰 面积 呈 良 好 的线性 关 系 。 结论 该 方法 简易 准确 ， 重现性 好 ， 在本 色谱 条件 及样 品处理 方法 下 ， 可 以准 确 测出 该２ ０ 种 中药 饮片 中芦 丁 的含量 。 ［ 关键 词］ 中药 ； 芦丁， 高效 液相 色谱 法 中图 分类号 ： Ｇ ０ ０ ５ 文 献标识 码 ： Ａ 芦丁， 即芸香 苷 ， 是 中药饮 片 中较 多见 的一种黄 酮类成 分 ， 有 抗炎 、 降 血脂 、 抗病毒 及维 生素Ｐ 样 等作 用 。 有关芦 丁 的Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ 测试 方法 已有很 多报道 ， 笔者 采 用反相 高 效液相 色谱 法在 ５ Ｏ 余种 常用 中药饮 片 中分离 、 检 测芦 丁成 分 ， 经在 时 间轴上 （ 调 节色 谱条 件 以使 出峰保 留时 间在 １ ０ －３ ５ ｍｉ ｎ 范 围内改 变 ） 反 复与 芦
１ ． ７ 回收 率测 试 称 取 符合 定 性要 求 的２ ０ 种样 品粉 末各 ２ ｇ ３ 份， 置６ ０ 只 ｌ Ｏ Ｏ ｍｌ 量瓶中， 选择３ 种 上述稀 释 的对照 品溶 液 ， 分别 加入 ｌ ｍｌ ， 同样 品处理 方法 处理 后进 样 ， 记录 峰面 积 ， 同 时以 同种相 同量对 照 品稀释 液直接 进样 的峰 面积 为对 照 ，计 算 回收 率 。 测得 ２ ０ 种 试液 的 平 均 回收率 见 表 Ｉ ， Ｒ Ｓ Ｄ 值见表１ 中
HPLC法测定苦荞茶中芦丁＼槲皮素的含量
HPLC法测定苦荞茶中芦丁＼槲皮素的含量[摘要] 建立了高效液相色谱法测定常见苦荞茶中芦丁槲皮素成分含量的方法。
色谱柱：SHIMDZU VP-ODS，流动相：甲醇-0.08%磷酸溶液（6∶4），流速：0.9 5mL·min-1，检测波长：360 nm，进样量：5 µL。
芦丁在0.048-0.32 µg范围内与峰面积成良好线性关系，r=0.9997，槲皮素在0.028-0.19 µg范围内与峰面积成良好线性关系，r=0.9996，加标回收率为98.7%，RSD 为0.013%。
本方法操作简便快捷，重复性好，结果准确可靠。
[关键词] HPLC法苦荞茶芦丁槲皮素含量测定苦荞是我国独有的药食两用粮食作物，主要分布于我国内蒙古、陕西、甘肃、宁夏、四川、云南等高寒地区[1]，近年来苦荞茶作为人们最热衷的保健饮品之一，在降低血压胆固醇，防治心脑血管疾病及高脂血症方面疗效显著[2]。
苦荞茶中富含黄酮类物质，其主要成分为芦丁、槲皮素等[3,4]，能够降低毛细血管脆性，改善微循环功能，具有抑制肿瘤、防止衰老、降低血脂、增强免疫力、镇静止痛、保护心脏和肝脏等作用[5]，在临床上主要用于糖尿病、高血压的辅助治疗[6,7]。
本实验通过优化提取工艺，进行了方法学考察，建立了苦荞茶的HPLC 含量测定方法，并对不同苦荞茶中两种黄酮类组分进行了比较，为更好地控制苦荞茶的质量提供了一种简便、可行、重复性好的质量控制方法。
1、仪器与试药LC210AT型高效液相色谱仪（岛津公司），二极管阵列检测器，CLASS2vp510色谱数据处理工作站，CDT26A色谱柱温箱；SZ293型自动双重纯水蒸馏器。
芦丁、槲皮素对照品，由中国药品生物制品检定所提供。
4种苦荞茶样品购于绵阳专卖店，（生产企业及批号见表2），甲醇为色谱纯，磷酸等其他试剂为分析纯，水为高纯水。
2、方法与结果2.1 色谱条件色谱柱：SHIMDZU VP反相色谱柱；流动相：甲醇-0.08%磷酸溶液（6∶4）；检测波长：360 nm；流速：0.95 mL·min-1；柱温：35℃。
芦丁的提取与鉴定实验报告
芦丁的提取与鉴定实验报告
《芦丁的提取与鉴定实验报告》
芦丁是一种常见的植物化合物，具有抗氧化、抗炎和抗癌等多种药理作用，因此备受关注。
为了更好地利用芦丁的药用价值，科研人员进行了大量的提取与鉴定实验，以期找到最有效的提取方法和鉴定手段。
提取芦丁的方法有很多种，常见的包括溶剂提取法、超声波提取法和微波辅助提取法等。
在实验中，研究人员首先选择了适合的植物材料，然后进行了不同提取方法的比较实验。
他们发现，微波辅助提取法在短时间内可以获得较高的芦丁提取率，因此被认为是一种较为有效的提取方法。
在芦丁的鉴定方面，常用的方法包括高效液相色谱法（HPLC）、质谱法和红外光谱法等。
这些方法可以对提取得到的芦丁进行定量和定性分析，从而确保其纯度和活性。
在实验中，研究人员利用HPLC对提取得到的芦丁进行了定量分析，结果表明芦丁的含量达到了预期的标准，证实了提取方法的有效性。
通过这些提取与鉴定实验，科研人员为芦丁的药用开发提供了重要的参考。
他们的实验结果不仅可以指导生产实践，还可以为相关疾病的治疗和预防提供有力的支持。
相信随着进一步的研究，芦丁的药用潜力将会得到更好的发挥，为人类健康事业做出更大的贡献。
中药饮片中芦丁的含量检测
中药饮片中芦丁的含量检测作者：贾洪文来源：《中国科技博览》2014年第13期[摘要]目的测定20种中药饮片中芦丁的含量。
方法采用反相高效液相色谱法，以Hypersil GOLD柱（5μm 250mm×4.60mm）为分析柱，乙腈∶水（加磷酸调pH至2.6）（8∶92～30∶70）为流动相，流速：0.8ml/min；检测波长为254nm，柱温30℃。
结果芦丁浓度在（0.0095～0.3800）μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系。
结论该方法简易准确，重现性好，在本色谱条件及样品处理方法下，可以准确测出该20种中药饮片中芦丁的含量。
[关键词]中药；芦丁；高效液相色谱法中图分类号：G005 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）13-0355-01芦丁，即芸香苷，是中药饮片中较多见的一种黄酮类成分，有抗炎、降血脂、抗病毒及维生素P样等作用。
有关芦丁的HPLC测试方法已有很多报道，笔者采用反相高效液相色谱法在50余种常用中药饮片中分离、检测芦丁成分，经在时间轴上（调节色谱条件以使出峰保留时间在10～35min范围内改变）反复与芦丁对照品比较，最后确认其中的20种中药饮片中含有较高的黄酮类物质芦丁。
文献曾报道该20种药材中的8种含有芦丁，但具体含量不详，笔者查阅国内有关文献，未发现在另12种药材中也含有芦丁的最新报道。
实验结果可供有关科研和临床工作者参考。
1 实验研究1.1 仪器和试药 Waters高效液相色谱仪，包括510泵，484紫外检测器，680梯度控制器。
芦丁对照品（中国药品生物制品检定所），50种药材样品分3次每次50种分别购自浙江中医学院实验药厂、浙江省中医院和浙江中医学院门诊部。
经鉴定并确认。
乙腈为色谱醇，磷酸为分析醇，水为纯净水。
1.2 色谱条件 Hypersil GOLD柱（5μm 250mm×4.6mm）；流动相：乙腈∶水（8∶92～30∶70），加磷酸调pH至2.6；流速：0.8ml/min；检测波长为254nm，柱温为30℃。
HPLC法测定飞燕草中芦丁的含量
HPLC法测定飞燕草中芦丁的含量
徐力
【期刊名称】《中国当代医药》
【年(卷),期】2011(18)33
【摘要】目的:测定飞燕草中芦丁的含量,为飞燕草的质量控制提供依据.方法:本实验采用HPLC法测定芦丁含量,使用C18色谱柱,甲醇∶水∶冰醋酸(40∶60∶1)为流动相,检测波长为330 nm,柱温30℃,流速1.0 ml/min.结果:芦丁在0.912～4.560 μg与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 8,n=5),平均回收率为99.26％(RSD为1.72％,n=6).结论:该法简便、稳定,可用于测定飞燕草中芦丁的含量和定性鉴别.【总页数】2页(P49-50)
【作者】徐力
【作者单位】长春中医药大学附属医院药剂科,吉林长春130021
【正文语种】中文
【中图分类】R931.5
【相关文献】
1.密闭微波辅助提取-HPLC法测定还亮草中硬飞燕草碱和巴比翠雀碱的含量 [J], 樊轻亚;郝艳红;代春美
2.HPLC法测定雪莲浸膏粉中绿原酸、芦丁、槲皮苷的含量 [J], 马庆东;严俊仓;于乾;唐雪君;王新宇;杨璐;王金辉
3.RP-HPLC法测定不同厂家芦丁片和复方芦丁片中芦丁的含量 [J], 马君义;张串霞;赵保堂
4.HPLC法测定楚雄本地苦蒿中芦丁的含量 [J], 高垚;郭向群
5.HPLC法测定唇香草中迷迭香酸与芦丁的含量 [J], 毛丽旦·阿扎提;王莹;兰卫因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
HPLC测定金菊五花茶冲剂中芦丁的含量
ＨＰＬＣ测定金菊五花茶冲剂中芦丁的含量金菊五花茶冲剂为棕褐色颗粒剂，从配方知道其中槐花的处方量相对较大，槐花有时会搀杂槐角或以槐角代替作为生产提取药。
芦丁是槐花和槐角的主要活性成分，因分子中含有邻二酚羟基，性质不太稳定，暴露空气中在光的作用下能缓慢分解，变为暗褐色，在碱性的条件下更易被氧化分解。
故有必要对芦丁的含量做出测定。
对成药使用HPLC法测定芦丁含量的报道不多，2005中国药典以HPLC法作为测定槐花及槐角中芦丁含量标准，而取代了以往用分光光度法和薄层扫描的方法，所以使用HPLC测定金菊五花茶冲剂中芦丁的含量显得很有必要，既可以验证该法的实用性，也可以作为测定成药中芦丁含量的参考。
1仪器与材料1.1仪器LC-9A型高效液相色谱仪（日本岛津公司）、uv/vis检测器、2010型数据分析软件。
超声仪(250 W,华南超声设备厂)。
1.2药品与试剂芦丁对照品（编号080-9002，含量99.4%，中国药品生物制品检定所），金菊五花茶15批，甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。
2方法2.1色谱条件色谱柱为Wasters-C18柱（150 mm×4.6 mm，内径5 μm）T13451型，流动相为甲醇—1%冰醋酸（32∶68），流速0.7 ml/min，柱温40 ℃。
紫外检测波长257 nm，进样10 μl。
在此色谱条件下,芦丁峰理论塔板数均≥4 000,分离度均＞1.5,拖尾因子0.62。
2.2供试品制备精密称取金菊五花茶冲剂2 g，研细，再精密加入甲醇50 ml，称重，振摇，加盖超声提取30 min，放冷至室温，补重，用滤纸过滤，取续滤液，过微孔滤膜即得。
2.2.1标准曲线的制备精密称取芦丁对照品8.92 mg，用甲醇配制成浓度为0.446、0.223、0.116、0.056、0.028 mg/ml系列对照品溶液，分别进样10 μl，记录峰面积，以峰面积为y，进样浓度为x，计算回归方程为y = 6.412 0×107x -3.175 8×105 （5例），相关系数为r=0.999 6。
HPLC法测定飞燕草中芦丁的含量
HPLC法测定飞燕草中芦丁的含量目的：测定飞燕草中芦丁的含量，为飞燕草的质量控制提供依据。
方法：本实验采用HPLC法测定芦丁含量，使用C18色谱柱，甲醇∶水∶冰醋酸（40∶60∶1）为流动相，检测波长为330 nm，柱温30℃，流速1.0 ml/min。
结果：芦丁在0.912～4.560 μg与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 8，n=5），平均回收率为99.26%（RSD为1.72%，n=6）。
结论：该法简便、稳定，可用于测定飞燕草中芦丁的含量和定性鉴别。
[Abstract] Objective: To determine the Delphinium grandiflorum of rutin, providing the basis for quality control for Delphinium grandiflorum. Methods: The experimental determination of rutin content by HPLC method, using C18 column, methanol∶water∶acetic acid (40∶60∶1) as mobile phase, detection wavelength of 330 nm, column temperature 30℃, flow rate 1.0 ml/min. Results: Rutin in the 0.912-4.560 μg and the peak area showed good linear relationship (r=0.999 8, n=5), the average recovery was 99.26% (RSD=1.72%, n=6). Conclusion: The method is simple, stable and can be used for determination of rutin in Delphinium grandiflorum and qualitative identification.[Key words] Delphinium grandiflorum; Rutin; HPLC method; Quality control飞燕草（Delphinium grandiflorum）为毛茛科翠雀属的多年生草本植物，又名大花飞燕草、千鸟草、翠雀、萝小花等，分布于我国各地。
HPLC法测定芦丁含量
OH
O
Rha
在沸乙醇中略溶(1:60),易溶于
碱性溶液、甲醇及乙醇，不溶
于氯仿、乙醚和苯.
色谱条件
✓色谱柱 :各种十八烷基硅烷键合相(ODS)色谱柱
Spherisorb ODS (150 mm×4.6 mm，5m) Hypersil ODS (250mm×4.6mm，5m) Kromasil ODS (250mm×4.6mm，5m)
➢ 甲醇-乙腈-冰醋酸-水(22:10:3:65)
实验表明单纯使用乙腈-水或甲醇-水虽然能够把 被测组分和其他组分分离，但拖尾严重。而二者 的合用可以达到较理想的分离度
若不加入少量冰醋酸或磷酸调节酸性，峰形有拖 尾现象，这主要是由于绿原酸、芦丁中羧基和黄 酮苷元的酚羟基产生电离，因而在固定相表面存 在着双保留机制。
临床应用：用于防治脑溢血，高血压，视网膜出 血，急性出血肾炎，慢性气管炎等.
化学结构及理化性质
芦丁（ rutin ）
分子量: 610.5244；
OH
分子式: C27H30O16 ；
OH 性状: 浅黄色针状结晶；
HO
O
酸碱性: 酸性
溶解度: 芦丁在冷水中极微溶
O Glc
(1:10000),在沸水中微溶(1:200),
色谱条件
Diamonsil C18柱(200mm×4.6mm，5 m) 色谱柱柱温: 室温 流动相:甲醇-乙腈-冰醋酸-水(22:10:3:65)； 体积流量:1.0 mL/min； 检测波长：配制样品液,在可见紫外分光光度计200~400nm的
范围内进行扫描，选择适宜最大吸收波长处检测.
GC测定赤芍中有机溶剂残留量
曹戟 张建祥 高明 蒋鹏 蔡瑜 柴晓鹃
实验九 HPLC法测定中药饮片中芦丁的含量
实验九HPLC法测定中药饮片中芦丁的含量一、实验目的1 ．理解反相色谱的原理和应用。
2 ．掌握外标定量方法。
二、实验原理芦丁，即芸香苷，是中药饮片中较见的种黄酮类成分，有抗炎、降血脂、抗病毒及维生素P样等作用。
高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的淋洗液和固定相间的分配系数不同，当试样随着流动相进入色谱柱中后，组分就在其中的两相间进行反复多次（103-106）的分配（吸附－脱附－放出），由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。
三、实验试剂、仪器及设备仪器: LC100高效液相色谱仪（UV检测器;二元梯度泵），上海五丰。
样品:桑叶、芦丁标准品。
试剂:甲醇(HPLC纯) ,重蒸馏水。
四、实验内容1. 标准液制备及标准曲线制备: 准确称取制备好的芦丁标准样品10mg，加蒸馏水溶解后移人10mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇晃使其浓度均匀，制得1mg/ml芦丁标准液，分别取该标溶液2μL, 4μL, 8μL, 16μL进样,分别测出峰面积, 不强制过原点，以浓度对峰面积进行回归, 得标准曲线和回归方程。
数据处理机给出峰面积值,以标准品进样量(μg) 为纵坐标( Y) ,峰面积为横坐标( X) ,得标准曲线。
2. 样品液制备:精取桑叶叶粉末(过20目筛) 5.00 g置于250ml烧瓶中，加入50ml甲醇水浴回流提取30min,过滤，取续滤液20ml，氮气吹干后，用甲醇定容至5.00ml,用滤头过滤后即为供试液。
3. 色谱测定用微量注射器吸取大2倍20uL试样溶液注入色谱仪，取得色谱图，以保留时间对照定性，确定芦丁色谱峰，并记录锋面积。
五、 实验过程原始记录1 .记录色谱条件:色谱柱Agilent XDB-C18 色谱柱(4.6mm ×250 mm ,5 μm) ;流动相甲醇:水 = 50∶50 ; 柱温为30℃;流速1 mL/min ;检测波长254nm ;进样量20μL 。
HPLC法测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量
HPLC法测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量李启彬1，刘涛2，曹晓庆，李青丽（1．河南省驻马店市药品检验所，驻马店463000；2．河南天方药业股份有限公司，驻马店463000）摘要：目的利用HPLC测定芦丁中芦丁和槲皮素的含量。
方法采用Zorbox SBC18色谱柱，流动相为水-甲醇-乙酸（45:50 :5），流速1.0ml ·min-1,检测波长256nm。
结果芦丁在60 ~ 140μg · ml-1 浓度范围内，线性关系良好，r =1.00 000，槲皮素在2.4 ~ 5.6μg ·ml-1 浓度范围内, 线性关系良好，r=0.99998。
芦丁的平均回收率为99.3%，RSD为0.6%，槲皮素的平均回收率为99.6%，RSD为0.4%。
结论本法结果准确，重复性良较好，方法简便可行。
关键词：芦丁；槲皮素；HPLCDeterminaition of Rutin and Its Quermination by HPLCLI Qi-bin1，LIU Tao2，CAO Xiao- qing，LI Qing-li（1. Zhumadian Institute of Quality Control of Drug, Zhumadian 463000,China；2. Henan Topfond Pharmaceutical Co.,Ltd Zhumadian463000,China）ABSTRACT: OBJECTIVE A HPLC method for the determination of rutin and its quermination was established. METHODS A zorbox SBC18 column was used，with the mobile phase of water-methanol-Vinegar(45：50：5)，at the flow rate of 1.0ml · min-1，the detection wavelength was 256nm. RESULTS The linear range of rutin (r=1.00000) was 60~140ug·ml-1，and quermination (r=0.99998) was 2.4~5.6μg ·ml-1，The average recovery of Rutin was 99.3%，RSD0.6%，and quermination was 99.6%，RSD0.4%.CONCLUSION It was accurate and rapid.KEY WORDS：rutin；quermination；HPLC芦丁又名芸香苷、芸香苷是从槐米中提取的一种浅黄色或微绿色针状结晶或粉末。
HPLC法测定新疆罗勒中芦丁的含量
HPLC法测定新疆罗勒中芦丁的含量帕丽达·阿不力孜;王小青;米仁沙·牙库甫;依巴代提;阿吉尼沙【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2007(22)5【摘要】目的建立测定维吾尔药新疆罗勒中芦丁含量的HPLC法.方法采用C18色谱柱,以磷酸水溶液(pH=3.0)-甲醇(60∶40)作为流动相,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为360 nm,柱温为40 ℃,外标法计算含量.结果芦丁线性范围为1.18～23.58 mg·L-1(r=0.999 6,n=3),平均回收率为94.9%,RSD为0.6%(n=9).结论方法操作简便、快速、准确,可作为芦丁的定量分析方法.【总页数】2页(P235-236)【作者】帕丽达·阿不力孜;王小青;米仁沙·牙库甫;依巴代提;阿吉尼沙【作者单位】新疆医科大学药学院,新疆,乌鲁木齐,830054;新疆医科大学药学院,新疆,乌鲁木齐,830054;新疆医科大学药学院,新疆,乌鲁木齐,830054;新疆医科大学药学院,新疆,乌鲁木齐,830054;新疆医科大学药学院,新疆,乌鲁木齐,830054【正文语种】中文【中图分类】R927.2【相关文献】1.RP-HPLC法测定新疆蓝刺头花乙醇提取物中芦丁的含量 [J], 周容;许晶晶;波拉提·马卡比力;潘兰;贾晓光2.RP-HPLC法测定新疆哈萨克族常用药材包尔胡特果实中芦丁和槲皮素的含量 [J],木合买提·岳尔林;叶力夏提·达那别克;吾古丽汗·努尔哈别克;阿斯亚·拜山伯3.RP-HPLC法测定新疆6种红枣中芦丁的含量 [J], 王东东;侯旭杰;田树革4.HPLC法测定新疆贯叶连翘中芦丁及槲皮素的含量 [J], 张丽静;易新萍;李革;符继红5.HPLC法测定新疆贯叶连翘中绿原酸和芦丁的含量 [J], 张丽静;符继红;易新萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
用RP-HPLC法测定芦丁的纯度
2018.No19芦丁又名芸香苷、紫槲皮苷，是槲皮素的3-O-芸香糖苷，属于黄酮类化合物。
芦丁是槐米的主要活性成分，具有广泛的药理作用，开发前景广阔。
芦丁的分析方法很多，已报道的有分光光度法、薄层色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法等[1-3]。
本实验采用RP-HPLC法，测定芦丁纯度，结果表明，该方法准确有效。
1 实验材料1）主要仪器。
日本岛津LC-20A高效液相色谱系统，LC-SOLUTION色谱工作站；Hypersil BDS C18色谱柱（大连依利特科学仪器有限公司生产）。
2）主要试剂。
槐米购于重庆市北碚中医院；芦丁对照品（含量﹥98%），购于上海融禾医药科技有限公司（批号：070521）；甲醇为色谱级，水为三重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
2 实验方法与结果1）芦丁的提取与精制。
根据文献[4]，从槐米中得芦丁粗品。
取粗芦丁20g，用100mL甲醇加热回流溶解，过滤，滤液放冷，结晶，过滤得湿芦丁。
母液回收甲醇，放冷结晶，过滤得湿芦丁，然后2次湿芦丁冷冻干燥24小时，得精制芦丁。
实验流程图如下：2）色谱条件。
Hypersil BDS C 18，5μm（4.6mm×200mm）色谱柱，以甲醇:水:冰乙酸（40:59:1/v/v）为流动相；检测波长254nm；流速为1.0ml/min，柱温30±1.0℃，结果见图1。
3）线性关系的考察。
准确称取芦丁对照品30mg，用甲醇溶解定容于100ml容量瓶中，再精密吸取0.5ml，1ml，1.5ml，2ml，2.5ml，3ml，4ml分别置10ml容量瓶中，用甲醇定容，用20μl微量进样器进样，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，做标准曲线，计算得回归方程为：y=5E+06x+279 241, r=0.999 2，结果表明：芦丁进样量在0.02～0.1mg/ml范围内有良好的线性关系。
4）供试品溶液的制备。
精密称取上述条件下精制芦丁用RP-HPLC法测定芦丁的纯度陈洪源 牛小花（通讯作者）（重庆三峡医药高等专科学校 重庆 404020）50mg，加甲醇溶解定容为50ml，精密取1ml于10ml容量瓶中，用甲醇定容。
芦丁的提取与鉴定实验报告
芦丁的提取与鉴定实验报告芦丁的提取与鉴定实验报告一、引言芦丁是一种天然的植物化合物，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤等多种生物活性。
因此，对芦丁的提取与鉴定具有重要的研究价值。
本实验旨在通过提取与鉴定芦丁的过程，探索其化学性质与活性成分。
二、实验材料与方法2.1 实验材料- 高效液相色谱仪（HPLC）设备- 芦丁标准品- 高纯度乙醇- 石油醚- 甲醇- 无水氯化钠2.2 实验方法1. 提取芦丁将鲜芦荟叶片切碎，加入石油醚中，用搅拌器搅拌30分钟。
然后将悬浮液过滤，并用石油醚洗涤固体残渣，重复此步骤3次。
最后，将洗涤后的固体残渣用乙醇进行提取，搅拌1小时，然后过滤。
2. 高效液相色谱鉴定将提取得到的芦丁溶液通过HPLC进行鉴定。
设置流动相为甲醇-水（70:30），流速为1.0 mL/min，检测波长为280 nm。
通过对比样品峰面积与标准品峰面积，计算出芦丁的含量。
三、实验结果与讨论通过HPLC鉴定，我们成功获得了芦丁的峰图，并计算出其含量为X mg/g。
这表明我们的提取方法能够有效地获得芦丁，并且鉴定结果准确可靠。
芦丁是一种黄色结晶性化合物，其化学结构为柚皮苷。
它在植物中主要存在于芦荟、柚子等植物中，具有丰富的药用价值。
芦丁的抗氧化活性使其具有抗衰老、抗炎症和抗肿瘤等多种生物活性。
因此，芦丁的提取与鉴定对于药物研发和保健品生产具有重要的意义。
在芦丁的提取过程中，我们选择了石油醚和乙醇进行提取。
石油醚是一种非极性溶剂，可以有效地提取植物中的脂溶性成分。
而乙醇则可以提取植物中的水溶性成分。
通过这两步的提取，我们能够全面地提取芦丁，并确保其纯度。
在鉴定芦丁的过程中，我们选择了HPLC作为分析方法。
HPLC是一种高效、准确的分析技术，可以对复杂的混合物进行分离和鉴定。
通过设置合适的流动相和检测波长，我们能够准确地测定芦丁的含量。
通过与标准品的对比，我们可以确定样品中芦丁的含量，并计算出其纯度。
本实验的结果表明，我们成功地提取和鉴定了芦丁，并得到了较高的纯度。
HPLC法测定芦丁和木犀草素的含量
药物分析H P L C 法测定芦丁和木犀草素的含量李㊀鹏１,王㊀鹏２,王小宾１,杨广德１∗(１．西安交通大学药学院,西安㊀７１００６１;２．咸阳市公安刑警支队药剂科,咸阳㊀７１２０００)摘要:目的㊀建立H P L C 法测定芦丁和木犀草素的含量.方法㊀采用G e r m s i l C １８色谱柱(１５０m m ˑ４．６m m ,５μm );乙腈Ｇ１m L L －１磷酸为流动相;梯度洗脱;流速为１．０m L m i n －１;检测波长为３６０n m .结果㊀芦丁和木犀草素的线性范围分别为７５．０６~７５０ ６４μg m L －１(r ＝０．９９９７)和２８．９８~２８９．８０μg m L －１(r ＝０．９９９９),芦丁和木犀草素的平均加样回收率分别为９９．２６％(R S D＝１ １４％,n ＝９)和９８．８８％(R S D＝１．８７％,n ＝９).结论㊀该方法简单㊁快速㊁重复性好,能同时测定芦丁和木犀草素的含量.关键词:芦丁;木犀草素;H P L C 法D O I :１０．３９６９/j ．i s s n ．１００４Ｇ２４０７．２０１８．０４．０１０中图分类号:R ９２７．２㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀文章编号:１００４Ｇ２４０７(２０１８)０４Ｇ０４６２Ｇ０３C o n t e n t d e t e r m i n a t i o no f r u t i na n d l u t e o l i nb y HP L C L IP e n g １,WA N GP e n g ２,WA N G X i a o b i n １,Y A N G G u a n g d e １∗(１．S c h o o l o fP h a r m a c y ,X i ᶄa nJ i a o t o n g U n i v e r s i t y,X i ᶄa n７１００６１,C h i n a ;２．D e p a r t m e n t o fP h a r m a c y ,t h eP o l i c eF o r c e o fX i a n y a n g P u b l i cS e c u r i t y B u r e a ,X i a n y a n g ７１２０００,C h i n a )A b s t r a c t :O b j e c t i v e T o e s t a b l i s ha nH P L Cm e t h o d f o r d e t e r m i n i n g t h e c o n t e n t o f r u t i n a n d l u t e o l i n ．M e t h o d s AG e r m s i l C １８ch r o m Ｇa t o g r a p h i c c o l u m n (１５０m mˑ４．６m m ,５μm )w a s u s e dw i t ha c e t o n i t r i l e Ｇ１m L L －１p h o s p h o r i c a c i d a s t h em o b i l e p h a s e ,g r a d i e n t e l u t i o n ．T h e f l o wr a t ew a s １．０m L m i n －１,a n d t h e d e t e c t i o nw a v e l e n g t hw a s ３６０n m．R e s u l t s T h e l i n e a r r a n ge s of r u t i n a n d l u t e o Ｇl i nw e r e ７５．０６Ｇ７５０．６４μg m L －１(r ＝０．９９９７)a n d２８．９８Ｇ２８９．８０μg m L －１(r ＝０．９９９９),r e s p e c t i v e l y ,a n d th e a v e r a ge r e c o v e r Ｇi e s of r u t i na n d l u t e o l i nw e r e ９９．２６％(R S D＝１．１４％,n ＝９),a n d９８．８８％(R S D＝１．８７％,n ＝９),r e s p e c t i v e l y ．C o n c l u s i o n T h i s m e t h o d i s s i m p l e ,r a p i da n d r e p r o d u c i b l e ,a n d c a nb eu s e d t od e t e r m i n e r u t i na n d l u t e o l i n c o n t e n t s i m u l t a n e o u s l y．K e y wo r d s :r u t i n ;l u t e o l i n ;H P L C 基金项目:国家自然科学基金项目(编号:８１３７３３６８)作者简介:李鹏,女,硕士研究生∗通信作者:杨广德,男,教授,博士生导师㊀㊀木犀草素(l u t e o l i n )(见图１A )是一种天然四羟基黄酮类化合物,具有抑制肿瘤细胞增殖㊁诱导肿瘤细胞凋亡以及增敏抗癌药物活性等抗肿瘤作用,还具有抗氧化㊁抗炎㊁保护神经㊁抗病毒以及降血脂和胆固醇等作用,有广泛的应用价值和良好的开发前景[１Ｇ４].目前,木犀草素的来源除了天然提取外[５Ｇ７],还有全合成与半合成法获取[４].采用芦丁(见图１B )为原料,能合成高收率和高含量的木犀草素[８Ｇ１４],该工艺原料易得㊁工艺简单㊁成本低.由于合成反应过程中,通常需要检测反应的进度以及合成物的质量分数,参考有关文献[１５Ｇ２０],制定用H P L C 法测定芦丁和木犀草素的含量.１㊀仪器与试药１．１㊀仪器㊀L Ｇ３０００型高效液相色谱仪(北京普源精仪科技有限责任公司);G e r m s i lC １８色谱柱(１５０m m ˑ４．６m m ,５μm ,西安武本生物科技有限公司);C P A ２２５D 型十万分之一电子天平(沈阳神宇龙腾天平有限公司);K Q ５２００B 型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司);U V ７６５型紫外分光光度计(上海仪分科学仪器有限公司).图１㊀木犀草素和芦丁的结构式A．木犀草素;B ．芦丁.F i g．１S t r u c t u r a l f o r m u l a o f r u t i na n d l u t e o l i n A．l u t e o l i n ;B ．r u t i n ．１．２㊀试药㊀对照品:芦丁(批号１００８０Ｇ２０１４０９,质量分数９１．９％),木犀草素(批号１００８６Ｇ２０１５０３,质量分数９８．３７％),均购自中国食品药品检定研究院;乙腈(色谱纯,美国(T E D I A )天地试剂公司);水(重蒸水,实验室自制);磷酸(分析纯,广州市锦旺化工有限公司);乙醇(分析纯,南京化学试剂股份有限公司);样品,实验室自制.２㊀方法与结果２．１㊀色谱条件㊀采用G e r m s i l C １８色谱柱(１５０m m ˑ４ ６m m ,５μm );流动相A 为乙腈,流动相B 为１m L L －１磷酸,梯度洗脱:０~８m i n :２０％A ,８~１５m i n :２０％２０％A,２５~３０m i n:２０％A;流速为１．０m L m i n－１;检测波长为３６０n m;进样量为１０μL;柱温:３０ħ.２．２㊀溶液的制备２．２．１㊀对照品溶液㊀分别精密称取芦丁和木犀草素对照品４０ ８４和１４．７３m g,置于同一５０m L量瓶中,加入体积分数为７０％的乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀.配制成芦丁和木犀草素质量浓度分别为７５０．６４和２８９ ８０m g L－１的对照品溶液.２．２．２㊀样品溶液㊀分别精密称取同一批号的芦丁合成木犀草素样品１６．８３和１７．９５m g,置于５０m L量瓶中,加入４０m L体积分数为７０％的乙醇超声溶解,冷却至室温,用体积分数为７０％的乙醇稀释至刻度,０．４５μm微孔滤膜滤过,备用.２．３㊀系统适用性实验㊀分别吸取２．２项下制备的对照品溶液㊁空白溶剂以及样品溶液,按照２．１项下色谱条件分别进样１０μL,记录色谱图.结果表明,在此色谱条件下,芦丁和木犀草素的分离良好,分离度大于１ ５,拖尾因子在０．９５~１．０５之间,且理论塔板数不低于４０００,空白溶液不干扰测定.色谱图见图２.图２㊀H P L C图A．对照品;B．样品;C．溶剂;１．芦丁;２．木犀草素.F i g．２H P L Cc h r o m a t o g r a m sA．r e f e r e n c e s u b s t a n c e;B．s a m p l e;C．s o l v e n t;１．r u t i n;２．l u t e o l i n．２．４㊀线性关系考察㊀精密量取２．２．１项下制备的对照品溶液１,２,４,６和８m L,分别置于１０m L量瓶中,加体积分数为７０％的乙醇稀释至刻度,摇匀.连同对照品溶液各吸取１０μL,注入液相色谱仪,测定.以对照品溶液的质量浓度(μg m L－１)为横坐标(x)㊁峰面积为纵坐标(y),绘制标准曲线,芦丁和木犀草素的回归方程分别为:y＝１５．１４５x－１３５．６,r＝０．９９９７和y＝３８．０７５x－４５．４４,r＝０．９９９９.实验结果表明,芦丁和木犀草素的质量浓度分别为７５．０６~７５０．６４和２８．９８~２８９．８０μg m L－１,与峰面积呈良好的线性关系.２．５㊀精密度实验㊀取同一对照品溶液,精密吸取１０μL,注入液相色谱仪,测定峰面积,重复进样６次,芦丁和木犀草素的R S D值分别为０．４６％和１．０２％.结果表明,该方法精密度良好.２．６㊀重复性实验㊀取同一批号样品平行制备６份供试品溶液,依照２．２．２项下方法制备样品溶液,测定,采用外标法计算供试品含量.结果表明,芦丁和木犀草素的平均含量分别为２１．６８％和６２．３７％,R S D值分别为０ １２％和０．３７％.２．７㊀稳定性实验㊀取同一供试品溶液,分别放置０,２,４,８,１２和２４h后,分别进样１０μL,测定峰面积.芦丁和木犀草素的R S D值分别为１．１４％和０．８１％.２．８㊀加样回收实验㊀精密称取已知含量的同一供试品(芦丁和木犀草素含量分别为１８．２８％和６４．３７％)９份,分别置于５０m L量瓶中,样品中加入不同量的芦丁和木犀草素对照品溶液,按照２．２．２项下方法制备样品溶液,分别进样１０μL,记录芦丁和木犀草素所对应的峰面积,计算回收率,芦丁和木犀草素的平均回收率分别为９９．２６％和９８．８８％,R S D值均小于２ ０％.结果见表１.表１㊀加样回收实验结果T a b．１R e s u l t s o f r e c o v e r y t e s t s o f r u t i na n d l u t e o l i n取样量/g样品含量/g芦丁木犀草素对照品加入量/g芦丁木犀草素测得量/g芦丁木犀草素回收率/％芦丁木犀草素平均回收率/％芦丁木犀草素R S D/％芦丁木犀草素０．２３７７０．０４３５０．１５３００．０６５１０．０２９００．１０８２０．１８１２９９．４６９７．４２９９．２６９８．８８１．１４１．８７０．２６７３０．０４８９０．１７２１０．０６５１０．０２９００．１１３２０．２００８９８．８２９９．１６０．２５４９０．０４６６０．１６４１０．０６５１０．０２９００．１１０３０．１９２６９７．９９９８．４１０．３０９３０．０５６５０．１９９１０．１３０１０．０５８００．１８８００．２５５４１０１．０４９７．０６０．２５８６０．０４７３０．１６６５０．１３０１０．０５８００．１７６４０．２２３４９９．２６９８．２１０．２８４７０．０５２００．１８３３０．１３０１０．０５８００．１８３２０．２４２１１００．７９１０１．４７０．３０６２０．０５６００．１９７１０．２２５２０．０８６９０．２７７６０．２８０９９８．４２９６．３３０．２６２５０．０４８００．１６９００．２２５２０．０８６９０．２７２５０．２５６８９９．７１１０１．０４０．２８０００．０５１２０．１８０２０．２２５２０．０８６９０．２７１５０．２６７９９７．８５１００．８４２．９㊀样品测定结果㊀分别精密吸取２．２项下制备的对照品溶液和样品溶液各１０μL,依照２．１项下色谱条件进行测定,采用外标法分别计算芦丁和木犀草素的含量,结果芦丁和木犀草素的平均含量分别为１８．４５％和６４ ２１％.３㊀讨论３．１㊀流动相的选择㊀本实验分别考察了以甲醇２m L L－１磷酸水溶液㊁乙腈Ｇ１m L L－１磷酸和甲醇Ｇ０．１m L L－１磷酸水溶液为流动相,进行梯度洗脱,乙腈和甲醇做有机相均能达到分离效果,但考虑到乙腈分离效果较理想,所以最终采用乙腈Ｇ１m L L－１磷酸,梯度洗脱为流动相,峰形最佳,此时所有组分的出峰时间均在２５m i n前,且分离度好.３．２㊀色谱柱的选择㊀选用G e r m s i lC１８(１５０m mˑ４．６m m,５μm)和D i a m e n s i l C１８(１５０m mˑ４．６m m,５μm)色谱柱,按照２．１项下色谱条件分别进样测定,分离效果良好,选用G e r m s i lC１８(１５０m mˑ４．６m m,５μm)色谱柱,出峰时间早,故优先选择该色谱柱.３．３㊀检测波长的选择㊀取２．２．１项下制备的对照品溶液,按照紫外分光光度法[２１],在２００~６００n m波长处进行扫描,在３６０n m处,芦丁和木犀草素均有最大吸收,故选择两者的共同检测波长为３６０n m.３．４㊀样品溶解溶剂的选择㊀分别称取相同质量的供试品５份,分别选用相同体积的甲醇㊁体积分数为５０％的甲醇㊁乙醇㊁体积分数为７０％的乙醇以及流动相溶解样品,观察样品的溶解情况,结果体积分数为７０％的乙醇溶解样品的效果最好,样液清澈透明;甲醇㊁体积分数为５０％的甲醇以及流动相对产品的溶解样液不够清澈,故选用体积分数为７０％的乙醇作为样品溶解的溶剂.参考文献:[１]㊀吕畅,王红芳,阎雪莹．木犀草素抗氧化作用研究进展[J]．黑龙江医药,２０１５,２８(５):１０１９Ｇ１０２２．[２]㊀王月华,李爱峰,付崇罗．木犀草素抗肿瘤活性研究[J]．时珍国医国药,２０１６,２７(７):１５８７Ｇ１５９０．[３]㊀张伟敏,张盛林,钟耕．木犀草素的研究概况[J]．中国食品添加剂,２００５,(２):１１Ｇ１６．[４]㊀赵长祺,郭志义．木犀草素的药理作用研究进展[J]．承德医学院学报,２０１５,３２(２):１４８Ｇ１５０．[５]㊀仇洋,徐艳阳,刘辉,等．微波Ｇ超声辅助提取玉米须木犀草素的工艺优化[J]．食品安全质量检测学报,２０１６,７(４):１６３７Ｇ１６４４．[６]㊀王后苗,雷永,晏立英,等．花生及其他植物中木犀草素的研究进展[J]．中国油料作物学报,２０１５,３７(３):３８３Ｇ３９３．[７]㊀孟庆焕,祖元刚,王化,等．酶解辅助乙醇提取牡丹种皮中的木犀草素[J]．东北林业大学学报,２０１５,４３(６):１３３Ｇ１３６．[８]㊀刘克建,邓冬莉．木犀草素合成研究进展[J]．广州化工,２０１３,４１(１１):２９Ｇ３１．[９]㊀闻永举,申秀丽,张洁．木犀草素㊁木犀草苷㊁木犀草素芸香糖苷半合成的方法:中国,C N１０３８３３７１４A[P]．２０１４Ｇ０２Ｇ２３．[１０]李玉山．一种橙皮苷制备木犀草素的新技术:中国,C N１０３１４５６６８A[P]．２０１３Ｇ０６Ｇ１２．[１１]李玉山．一种半合成制备木犀草素的新工艺:中国,C N１０３１４５６７０A[P]．２０１３Ｇ０６Ｇ１２[１２]自俊青,王基伟,黄毕生．微波法制备木犀草素[J]．大理学院学报,２０１２,１１(４):４５Ｇ４７．[１３]王超．一种合成木犀草素的方法:中国,C N１０２００２０２８A [P]．２０１１Ｇ０４Ｇ０６．[１４]自俊青,闫卫东,邵云东,等．一种木犀草素化合物的制备方法:中国,C N１６８７０５４[P]．２００５Ｇ１０Ｇ２６．[１５]梁春辉,张寒,任连新．R PＧH P L C测定山竹花不同部位芦丁㊁木犀草素的含量[J]．应用化工,２０１５,４４(１２):２３３６Ｇ２３３８．[１６]木合塔尔 吐尔洪,买买提 吐尔逊,热萨莱提 伊敏,等．R PＧH P L C法同时测定昆仑雪菊中绿原酸㊁芦丁㊁槲皮素和木犀草素的量[J]．中草药,２０１６,４７(９):１６０１Ｇ１６０４．[１７]木合买提 岳尔林,叶力夏提 达那别克,吾古丽汗 努尔哈别克,等．R PＧH P L C法测定新疆哈萨克族常用药材包尔胡特果实中芦丁和槲皮素的含量[J]．西北药学杂志,２０１７,３２(２):１３８Ｇ１４２．[１８]W a n g Y,L i S,H a nD,e t a l．S i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o n o f r u t i n,l u t e o l i n,q u e r c e t i n,a n db e t u l i n i ca c i d i nt h ee xＧt r a c t o f D i s p o r o p s i s p e r n y i(H u a)D i e l s b y U P L C[J]．JA n a lM e t h o d sC h e m,２０１５,２０１５:１３０８７３．[１９]T e s i oA Y,R o b l e d oSN,G r a n e r oA M,e t a l．S i m u l t a n eＧo u s e l e c t r o a n a l y t i c a ld e t e r m i n a t i o no f l u t e o l i na n dr u t i n u s i n g a r t i f i c i a ln e u r a ln e t w o r k 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实验九HPLC法测定中药饮片中芦丁的含量
一、实验目的
1 ．理解反相色谱的原理和应用。
2 ．掌握外标定量方法。
二、实验原理
芦丁，即芸香苷，是中药饮片中较见的种黄酮类成分，有抗炎、降血脂、抗病毒及维生素P样等作用。
高效液相色谱分离是利用试样中各组分在色谱柱中的淋洗液和固定相间的分配系数不同，当试样随着流动相进入色谱柱中后，组分就在其中的两相间进行反复多次（103-106）的分配（吸附－脱附－放出），由于固定相对各种组分的吸附能力不同（即保存作用不同），因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，顺序离开色谱柱进入检测器，产生的离子流信号经放大后，在记录器上描绘出各组分的色谱峰。
三、实验试剂、仪器及设备
仪器: LC100高效液相色谱仪（UV检测器;二元梯度泵），上海五丰。
样品:桑叶、芦丁标准品。
试剂:甲醇(HPLC纯) ,重蒸馏水。
四、实验内容
1. 标准液制备及标准曲线制备: 准确称取制备好的芦丁标准样品10mg，加蒸馏水溶解后移人10mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇晃使其浓度均匀，制得1mg/ml芦丁标准液，分别取该标溶液2μL, 4μL, 8μL, 16μL进样,分别测出峰面积, 不强制过原点，以浓度对峰面积进行回归, 得标准曲线和回归方程。
数据处理机给出峰面积值,以标准品进样量(μ
g) 为纵坐标( Y) ,峰面积为横坐标( X) ,得标准曲线。
2. 样品液制备:精取桑叶叶粉末(过20目筛) 5.00 g置于250ml烧瓶中，加入50ml甲醇水浴回流提取30min,过滤，取续滤液20ml，氮气吹干后，用甲醇定容至5.00ml,用滤头过滤后即为供试液。
3. 色谱测定
用微量注射器吸取大2倍20uL试样溶液注入色谱仪，取得色谱图，以保留时间对照定
性，确定芦丁色谱峰，并记录锋面积。
五、 实验过程原始记录
1 .记录色谱条件:
色谱柱Agilent XDB-C18 色谱柱(4.6mm ×250 mm ,5 μm) ;流动相甲醇:水 = 50∶50 ; 柱温为30℃;流速1 mL/min ;检测波长254nm ;进样量20μL 。
2. 标准品和样品色谱图。
min -200
-100
100
200
300
400
500
600
700
800
900
1000
1100
1200
1300
1400
1500
1600
1700
1800mAU
317nm4nm (1.00)/smth
图1 对照品色谱图
0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.07.08.09.0min -200
-100
100
200
300
400
500
600
700
800
900
1000
1100
1200
1300
mAU 317nm4nm (1.00)/smth
图2 样品色谱图
六、结果及分析
1. 芒果苷标准曲线及回归方程
Y=6.16853e-007X-0.2017519,r=0.9999
2. 根据回归方程计算样品中芦丁的浓度（根据各自实验结果撰写）
3．回答“问题与讨论”中所提问题（根据各自实验结果撰写）
七、参考文献。