植物DNA提取经典方法

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CTAB法提取植物总DNA

关于CTAB法提取基因组DNA，原理CTAB法原理CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。

在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉淀核酸。

通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。

CTAB提取缓冲液的经典配方Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，在于液相中；CTAB 溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。

用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。

用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。

蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。

使用酚的优点：1.有效变性蛋白质；2抑制了DNase的降解作用。

缺点：1.能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly(A)RNA。

2.不能完全抑制RNase的活性。

氯仿的作用？氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。

最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。

（酚易溶于氯仿中）用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。

异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。

另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。

提取植物DNA方法

提取植物DNA方法植物DNA的提取方法是将植物细胞中的DNA分离出来，以便进行进一步的研究。

以下是常用的植物DNA提取方法：1. CTAB法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种表面活性剂，可以溶解脂质，破坏细胞膜，从而释放DNA。

首先，将植物样品粉碎，加入CTAB缓冲液中并进行润湿，然后加入蛋白酶，破坏细胞膜。

接下来，加入CTAB-蛋白酶混合液，室温静置，使DNA与CTAB结合。

之后，将混合液经过苯酚-氯仿提取，将DNA从其他组分中分离出来。

最后，使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀，洗涤并溶解。

2. 硅胶柱法：硅胶柱法适用于小规模提取和纯化植物DNA。

首先，将植物样品粉碎，加入提取缓冲液中，并加入蛋白酶进行细胞壁降解。

接下来，将溶有脂质的提取液加载到硅胶柱上，使用重力流动分离DNA。

然后，使用洗涤缓冲液去除残余的污染物。

最后，使用低盐缓冲液将DNA从硅胶柱上洗脱，并收集纯化的DNA。

3. 高盐法：高盐法适用于粗提植物DNA。

首先，将植物样品细碎，加入高盐缓冲液中，其中含有高浓度的盐和蛋白酶。

高盐浓度可以破坏细胞膜，并使DNA 从蛋白质中解离出来。

然后，使用异丙醇沉淀法将DNA沉淀，洗涤并溶解。

4. 快速提取法：快速提取法是一种高效和便捷的方式，适用于大规模提取植物DNA。

首先，将植物样品经过快速研磨处理，将DNA释放到提取缓冲液中。

然后，使用聚乙二醇或盐酸沉淀方法使DNA沉淀，然后洗涤并溶解。

这些方法在植物科学研究中被广泛使用。

在选择提取方法时，需要考虑样品量、样品类型、实验目的和所需纯度等因素。

植物DNA的提取方法的选择也可以根据实验室设备和研究经验进行调整，以获得满意的结果。

需要注意的是，植物样品在提取DNA之前需要进行适当的贮存和处理。

样品应在低温下保存，以保持DNA的完整性。

此外，处理样品时要避免污染和酶解，以确保提取的DNA质量。

实验一 DNA提取

实验一DNA的小量制备小量法提取植物基因组DNA（CTAB法）1 实验目的：随着基因工程等分子生物学技术的迅速发展及广泛应用，人们经常需要提取高分子量的植物DNA，用于构建基因文库、基因组southern 分析、酶切及克隆等，这是研究基因结构和功能的重要步骤。

本实验目的是学习从植物材料中提取和测定DNA 的原理并掌握CTAB 提取DNA 的方法，进一步了解DNA 的性质。

2 实验原理细胞中的DNA 绝大多数以DNA-蛋白复合物（DNP）的形式存在于细胞核内。

提取DNA 时，一般先破碎细胞释放出DNP，再用含少量异戊醇的氯仿除去蛋白质，最后用乙醇把DNA 从抽提液中沉淀出来。

DNP 与核糖核蛋白（RNP）在不同浓度的电解质溶液中溶解度差别很大，利用这一特性可将二者分离。

以NaCl 溶液为例：RNP 在0.14mol/L NaCl中溶解度很大，而DNP 在其中的溶解度仅为纯水中的1％。

当NaCl 浓度逐渐增大时，RNP的溶解度变化不大，而DNP 的溶解则随之不断增加。

当NaCl 浓度大于1mol/L 时，DNP的溶解度最大，为纯水中溶解度的2 倍，因此通常可用1.4mol/L NaCl 提取DNA。

为了得到纯的DNA 制品，可用适量的RNase 处理提取液，以降解DNA 中搀杂的RNA。

关于植物总DNA 的提取主要有两种方法：1．CTAB 法：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵，hexadecyltrimethylammonium bromide, 简称CTAB）：是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，它能与核酸形成复合物，在高盐溶液中（0.7mol/LNaCl）是可溶的，当降低溶液盐的浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时从溶液中沉淀，通过离心就可将CTAB 与核酸的复合物同蛋白、多糖类物质分开，然后将CTAB 与核酸的复合物沉淀溶解于高盐溶液中，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB 能溶解于乙醇中。

DNA提取总结

(1)将小麦叶片（约0.1g）放入研钵中，加入液氮冷冻，快速研成粉末后倒入1.5mL离心管中；(2)每管加入600μL SDS DNA提取液（含2%的巯基乙醇），于65℃水浴30min，其间温和混匀几次；(3)取出离心管，加入60μL 5mol/L KAc，立即上下颠倒温柔混匀（5~6次），冰上放置20min；(4)于12,000 rpm离心10min；(5)将上清液（约600μL）转移至新的离心管中，加入4μL RNase，室温放置5min；(6)加入600μL酚：氯仿：异戊醇（25:24:1）；(7)于12,000 rpm离心15min；(8)将上清液转移至新的离心管中，记下体积，加入0.6~0.7倍体积的异丙醇，于-20℃下沉淀10~30min；(9)于10,000 rpm离心5min，弃上清，将沉淀用75%乙醇洗2~3次；(10)挥发干净乙醇，加入50μL ddH2O，-20℃保存;(11)1.0%琼脂糖凝胶电泳检测。

一、实验目的掌握植物总DNA的抽提方法和基本原理。

学习根据不同的植物和实验要求设计和改良植物总DNA抽提方法。

二、实验原理通常采用机械研磨的方法破碎植物的组织和细胞，由于植物细胞匀浆含有多种酶类(尤其是氧化酶类)对DNA的抽提产生不利的影响，在抽提缓冲液中需加入抗氧化剂或强还原剂(如巯基乙醇)以降低这些酶类的活性。

在液氮中研磨，材料易于破碎，并减少研磨过程中各种酶类的作用。

十二烷基肌酸钠(sarkosyl)、十六烷基三甲基溴化铵(hexadyltrimethyl ammomum bromide，简称为CTAB)、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulfate，简称SDS)等离子型表面活性剂，能溶解细胞膜和核膜蛋白，使核蛋白解聚，从而使DNA得以游离出来。

再加入苯酚和氯仿等有机溶剂，能使蛋白质变性，并使抽提液分相，因核酸(DNA、RNA)水溶性很强，经离心后即可从抽提液中除去细胞碎片和大部分蛋白质。

植物dna提取方法

植物dna提取方法
提取植物的DNA可以通过以下几个步骤：
1. 植物材料准备：选择新鲜的植物组织，如叶片、茎、根或花朵。

使用刀片将组织切碎，将其放入离心管或试管中。

2. 细胞破碎：可以使用物理或化学方法将细胞破碎，以释放DNA。

常用的方法有研钵法、冻融法或特定的细胞破碎缓冲液。

3. DNA溶出：将细胞破碎液加入含有溶出缓冲液的试管中，使DNA从细胞中溶出。

溶出缓冲液通常含有EDTA、盐和洗涤剂等成分。

4. 蛋白质消化：加入蛋白酶K等蛋白质消化酶，去除DNA溶液中的蛋白质。

蛋白酶K可以在高温下活性化，并能降解多种蛋白质。

5. DNA沉淀：加入等体积的冷乙醇或异丙醇，使DNA分子沉淀。

可以通过离心沉淀DNA，并将上清液倒掉。

6. DNA纯化：用70%的乙醇洗涤DNA沉淀物，以去除杂质。

然后用适量的缓冲液重新溶解DNA。

7. DNA检测：可以使用紫外光谱仪或凝胶电泳等方法检测DNA的浓度和质量。

注意事项：
- 实验操作时应注意无菌条件，以避免污染。

- 建议在化学通风橱等无菌环境下进行DNA提取。

- 每个步骤中所用试剂和设备应事先消毒或经过无菌处理。

- DNA提取过程中应尽量避免DNA的降解，可以采取低温、迅速和轻柔的操作方式。

CTAB法提取植物DNA

清洗
• 将上清液再次离心，去除其中的杂质和蛋白质。将得到的上清液转移到新的离心管中。
DNA的纯化与溶解
在上清液中加入等体积的异丙醇，混匀后放置一段时间，使DNA沉淀下来。
将清洗后的DNA晾干，然后加入适量的TE缓冲液溶解DNA。此时可以得到高质量的植物DNA样品，可用于后续的实验或保存备用。
利用ctab法提取的DNA进行遗传多样性分析，有助于了解植物种群的遗传结构和演化历程。
在植物育种中的应用
分子标记辅助育种
利用ctab法提取的DNA进行分子标记辅助育种，能够快速准确地鉴定优良基因型，提高育种效率。
转基因育种
通过ctab法提取的DNA可以用于构建基因，为转基因育种提供重要的基因资源。
DNA浓度测定
根据DNA溶液的吸光度值，计算DNA的浓度。
DNA完整性评估
通过电泳检测DNA片段的大小和完整性，评估DNA的质量。
04 ctab法提取植物DNA的应用与展望
在植物遗传研究中的应用
基因定位
通过ctab法提取的DNA可用于基因定位，确定基因在染色体上的位置和功能。
VS
遗传多样性分析
实验过程中的安全注意事项
实验操作安全
在实验过程中，应遵循实验室安全规定，避免交叉污染和意外事故的发生。
防护措施
佩戴实验服、手套、口罩等防护用品，确保实验操作人员的安全。
化学品使用
正确使用和处理实验过程中涉及的化学试剂，避免对实验操作人员造成伤害。
实验结果的判定与评估
DNA纯度检测
通过紫外分光光度计检测DNA溶液的A260/A280值，判断DNA 的纯度。
参考文献3
CTAB法提取植物DNA的步骤包括将植物组织研磨成粉末，加入预热的缓冲液和CTAB，混合均匀后进行离心，取上清液加入乙醇沉淀，离心后取出 DNA进行洗涤和干燥。在提取过程中需要注意避免交叉污染和样品间的混淆。

提取dna的方法及原理

提取dna的方法及原理提取DNA的方法及原理DNA是生物体中的遗传物质，它携带着生物体的遗传信息。

提取DNA是研究基因组学、遗传学等领域的重要基础工作。

本文将介绍几种常用的DNA提取方法及其原理。

1. CTAB法CTAB法是一种经典的DNA提取方法。

其原理是利用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）与DNA结合形成离子对，然后通过盐溶液的浓度差异，使DNA从溶液中沉淀出来。

该方法适用于提取植物细胞中的DNA。

2. 酚/氯仿法酚/氯仿法是一种常用的DNA提取方法。

其原理是利用DNA在酚相中溶解，而其他细胞组分则在氯仿相中溶解，通过酚/氯仿两相的分离，从而将DNA分离出来。

该方法适用于提取动物细胞和细菌等样品中的DNA。

3. 硅胶柱法硅胶柱法是一种高效、纯化度较高的DNA提取方法。

其原理是利用硅胶柱上的硅胶颗粒与DNA之间的亲和性，将DNA吸附在硅胶颗粒上，然后通过洗涤、离心等步骤，将DNA从硅胶颗粒上洗脱下来。

该方法适用于提取各种样品中的DNA。

4. 磁珠法磁珠法是一种基于磁性颗粒的DNA提取方法。

其原理是将带有亲和基团的磁性颗粒与DNA结合，然后通过磁力的作用，将颗粒和DNA一起沉淀下来，最后通过洗涤等步骤，将DNA从颗粒上洗脱下来。

该方法具有快速、高效的特点，适用于高通量的DNA提取。

以上是几种常用的DNA提取方法及其原理。

不同的方法适用于不同类型的样品和实验需求。

在实际操作中，可以根据具体情况选择合适的方法进行DNA提取。

同时，为了保证提取到的DNA质量和纯度，还需要注意提取过程中的一些关键步骤，如细胞破碎、蛋白质酶处理、DNA沉淀等。

DNA的提取是基因研究和遗传学研究的重要步骤，通过合适的提取方法可以获取到高质量的DNA样品，为后续的实验和分析提供可靠的基础。

随着技术的不断进步，提取方法也在不断改进和优化，为科学研究提供更多的可能性。

植物根部dna提取方法

植物根部dna提取方法
植物根部DNA提取方法：
1. 取植物根部样本，洗净表面的土壤，用滤纸吸干表面水分；
2. 将根部样本用刀割碎成小段，放入离心管；
3. 加入提取液（含有CTAB）混匀，放入水浴中加热至70℃，静置20分钟；
4. 加入等体积的氯仿混匀，离心5分钟；
5. 将上层水相转移至新的离心管中，加入等体积的异丙醇混匀；
6. 冷冻-解冻3次，离心5分钟，取上层清液至新的离心管中；
7. 加入等体积的冷乙醚混匀，离心5分钟，取上层清液至新的离心管中；
8. 加入1/3体积的3M NaAc，和相当体积的无水乙醇混匀，离心5分钟，倒掉上层液体；
9. 加入体积相当的冷70%乙醇混匀，离心5分钟，倒掉上层液体；
10. 接下来将沉淀经过漂白、洗涤、乙醇干燥等步骤，最后加入适量的无菌水或TE缓冲液溶解即可获取纯净的植物根部DNA。

有关药用植物DNA提取的问题及答案

有关药用植物DNA提取的问题及答案怎么提取植物药基因组的DNA？DNA分子标记应用于中药资源、鉴定、栽培等方面有着很好的发展前景，目前研究报道正日益增多。

一般来说，该技术涉及的分子生物学原理比较简单，实验方法也不复杂，但熟练掌握，灵活运用，并有效地解决实验中出现的各种情况，仍有许多问题值得重视，我为该研究的策略性问题作过论述，现则着重介绍技术方面的一些关键问题。

材料的预处理洁净：目的是去除任何可能的外源DNA污染，如细菌、真菌等。

根、茎、果类材料要用刀认真刮取干净部分。

花、叶、种子或小饮片等材料则在尽可能切去菌斑、菌块之后，用次氯酸、乙醇浸洗，或用紫外灯照射，有些植物有与细菌或真菌共生现象，菌丝深入到组织内部，则外来DNA不可能去除干净。

而有些材料，如冬虫夏草，本身就为多种生物的复合体，研究时应予以注意。

粉碎：材料经液氮速冻后粉碎是通用方法。

对于新鲜材料，液氮处理可抑制DNase(DNA酶)的活性，防止DNA的降解，但对干材料，液氮速冻只使材料变脆易磨，因而加玻璃砂或砂子共研则更经济，效果也很好，而且如果没有液氮，对于新鲜材料也可用砂子共研，只要同时加入提取缓冲液(可抑制DNase的活性)即可。

基因组DNA的有效提取是进行任何DNA下游工作的前提和基础，有效提取指的是得到的基因组DNA(或称总DNA)有足够的量，尽可少的降解和不含有影响下一步酶反应的杂质，植物药中的小分子次生产物如萜类、黄酮、香豆素、有机酸、鞣质等含有酚羟基的化合物，氧化后易与DNA结合，引起DNA降解或抑制酶的活性，而植物中存在的多糖类由于与DNA同属大分子化合物，一般提取过程很难去除干净，也可能影响DNA的进一步酶处理或PCR(聚合酶链式反应)扩增。

一般提取方法2CTAB法：CTAB(Cetyltriethylammonium bromide)是一种去污剂，它可与核酸形成复合物，这些复合物在高盐溶液(＞0.7 mol/L NaCl)中可溶并且稳定存在，但如果降低盐的浓度(＜0.5 mol/LNaCl)，CTAB与核酸的复合物就会因溶解度降低而沉淀出来，大部分的蛋白及多糖仍溶于溶液中。

植物提取dna的方法有哪些方法有哪些

植物提取dna的方法有哪些方法有哪些
植物提取DNA的方法有如下几种常见的方法：
1. CTAB法（Cetyltrimethylammonium bromide法）：这是一种常见的DNA 提取方法，利用CTAB和其他化学试剂来分离DNA。

2. 酚/氯仿提取法：通过酚和氯仿来提取DNA，可以有效地分离植物细胞中的DNA。

3. 细胞壁酶法：使用细胞壁酶来降解细胞壁，然后通过物理方法和化学方法提取DNA。

4. 硅胶柱法（Silica column法）：使用硅胶柱来吸附DNA，然后通过洗涤和洗脱的处理，得到纯净的DNA。

5. 盐法：通过高盐浓度和乙醇等试剂来沉淀DNA，然后经过洗涤和离心分离。

6. 磁珠法：使用具有磁性的珠子来吸附和纯化DNA，具有操作简便和高纯化度的优点。

除了以上提到的方法，还有一些其他的DNA提取方法，如酶解法、离心分离法等。

每种方法都有其特定的优缺点，适用于不同的样本和实验需求。

对于特定的
植物种类和实验目的，可根据需要选择最合适的DNA提取方法。

植物DNA的提取的几种有效方法

植物ＤＮＡ的ＣＴＡＢ提取法：1 称取新鲜叶片2-3ｇ,剪碎放入研钵中,在液氮中研磨成粉末。

2 将粉末转移到的加有7ｍｌ经预热的1 5×ＣＴＡＢ提取缓冲液15ｍｌ离心管中,迅速混匀后置于65℃水浴中,温育30ｍｉｎ。

3 取出离心管,冷却至室温,加入氯仿/异戊醇(24:1),充分混匀,室温下2300×ｇ离心20ｍｉｎ。

4 将上清转移至另一新的15ｍｌ离心管中,加入1/10体积10%的ＣＴＡＢ和等体积的氯仿/异戊醇。

充分混匀,2300×ｇ离心20ｍｉｎ。

5 转移上清至另一新的15ｍｌ离心管中,加入等体积1%的ＣＴＡＢ沉淀缓冲液,轻轻摇晃至形成ＤＮＡ絮状沉淀。

1000×ｇ离心10ｍｉｎ,使ＤＮＡ沉淀于管底。

6 加入1 5-2ｍｌ的1ｍｏｌ/ＬＮａＣｌ及5μｌＲＮａｓｅ置于56℃水浴中过夜。

待ＤＮＡ完全溶解后,加2-3ｍｌ4℃预冷的95%的冰乙醇使ＤＮＡ沉淀,挑出ＤＮＡ,置于1 5ｍｌ离心管中,用70%乙醇清洗30ｍｉｎ,用离心机甩5ｓ,倒出70%乙醇,再用95%乙醇浸泡5ｍｉｎ,倒出95%乙醇,在超净工作台上吹干。

7 将风干的ＤＮＡ直接在4℃保存备用或溶于100μｌＴＥ溶液中于-20℃保存。

植物ＤＮＡ的ＳＤＳ提取法：1 取2-3ｇ新鲜叶片,在液氮中研磨成粉状(防止溶化)后转入15ｍｌ离心管中。

2 加入5ｍｌ于65℃预热的提取缓冲液,65℃水浴保温30ｍｉｎ(摇动数次),使提取液与样品充分混合。

3 加入2ｍｌ5ｍｏｌ/ＬＫＡｃ,剧烈振荡,冰浴保温20ｍｉｎ以上。

4 2700×ｇ离心20ｍｉｎ,将上清液倒入新的15ｍｌ离心管中,(若提取ＤＮＡ用于Ｓｏｕｔｈｅｒｎ等实验,一般在转移上清时加滤膜,防止样品残渣混入,可保证ＤＮＡ纯度)。

5 加入4ｍｌ氯仿/异戊醇(24∶1),摇匀,平衡,2700×ｇ离心15ｍｉｎ。

6 在另一新的15ｍｌ离心管中加入5ｍｌ预冷的异丙醇,将上清液用移液枪转入此管,在-20℃冷却30ｍｉｎ以上。

DNA和RNA提取方法及原理

基因组DNA－SDS法
SDS法原理
SDS是一种阴离子去垢剂，在高温（55～65℃）条件下能裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性，释放出核酸；
提高盐(KAc或NH4Ac)浓度并降低温度（冰浴），使蛋白质及多糖杂质沉淀，离心后除去沉淀；
上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反复抽提后用乙醇沉淀水相中的 DNA。
差速离心法原理
是利用物质比重的不同分离混合物的一种方法。
将待分离物质置于均匀介质（蔗糖）中，以一定的转速进行离心，比重大的物质优先沉降，比重小的却处于上层，从而得以分离。
内容
第一部分：DNA提取方法简介第二部分：DNA提取及常见问题分析
DNA提取的基本步骤
I.材料准备 II.破碎细胞或包膜－内容物释放
根据核酸分离纯化方式的不同有：
吸附材料结合法：
• 硅质材料
高盐低pH值结合核酸，低盐高pH值洗脱。快捷高效。
• 阴离子交换树脂低盐高pH值结合核酸，高盐低pH值洗脱。
适用于纯度要求高的实验。
• 磁珠
磁性微粒挂上不同基团可吸附不同的目的物，从而达到分离目的。
基因组DNA－其它方法
浓盐法：
常用RNA酶抑制剂
焦磷酸二乙酯（DEPC）：与RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。
异硫氰酸胍：目前是最有效的RNA酶抑制剂，裂解组织的同时也使 RNA酶失活。既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来，又对 RNA酶有强烈的变性作用。
氧钒核糖核苷复合物：由氧化钒离子和核苷形成的复合物，它和 RNA酶结合形成过渡态类物质，几乎能完全抑制RNA酶的活性。
3. 增加吸附的时间，或低温沉淀

植物基因组DNA的提取

③ 移入经过预冷的研钵中，加入液氮研钵至粉末状，用干净的灭菌不锈钢药匙快速转移粉末至 1.5mL离心管中；加入250μL的CTAB提取液，总体积达到500μL，混匀后置65 ℃磁力搅拌水
浴锅中保温60min；
④ 加入等体积的氯仿-异戊醇（24:1），轻轻地颠倒混匀，室温下12000rpm离心10min，移至上清至新1.5mL EP管；（可重复④ ，抽提两次）
4、参考文献
[1] 钟卫鸿.基因工程技术实验指导[M].北京：化学工业出版社，2007，7. [2] 王镜岩，朱圣庚，徐长法.生物化学教程[M]. 北京：高等教育出版社，2008，6. [3] 孙明.基因工程[M].北京:高等教育出版社， 2006，5. [4] 彭学贤.植物分子生物技术应用手册[M].北京：化学工业出版社，2006，2.
3、方法与步骤
①
②
在CTAB提取液中加入2% β-巯基乙醇，在65 ℃水浴锅中预热（CTAB需在65 ℃保温溶解，充分混匀后使用）；取幼嫩的水稻叶子0.5g，洗净、吸干、剪碎（冻存材料必须直接研磨，绝对不能化冻；研磨后的粉末应在化冻前转移，否则内源性 DNase有可能降解）
3、方法与步骤
4、注意事项

CTAB在低于15 ℃时溶于沉淀，所以
使用之前要65 ℃时预热，用前再加巯基乙醇或者加入亚精胺（100μL DNA加5μL 0.1M的亚精胺）；在研磨前，研钵里不得有任何水分，否则加液氮时容易结冰；在用不锈钢灭菌后的药匙移取粉末时，可用枪头的大头移取；
4、注意事出离心管时动作要轻缓，吸取上层溶液时所用的枪头要减去下面尖端部分，吸取时不要吸取中间的蛋白质层；用70%的乙醇洗DNA后，要使乙醇完全挥发，否则会对后续的PCR产生影响，甚至对限制性酶作用产生非特异性；

琼脂凝胶电泳法提取植物dna的原理

琼脂凝胶电泳法提取植物dna的原理下载提示：该文档是本店铺精心编制而成的，希望大家下载后，能够帮助大家解决实际问题。

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植物DNA提取方法

黄瓜基因组DNA的提取：（SDS-CTAB法）Cucumber Genomic DNA Extracting【实验目的】【Experiment objective】利用本法提取黄瓜基因组DNATo Extract gDNA of Cucumber【实验原理】【Experiment principle】用液氮对植物组织进行研磨，破碎细胞膜；用细胞提取液抽提DNA；通过氯仿/异戊醇去除DNA提取液中的蛋白、糖、色素等污染物；用RNAse消化RNA；最后通过70%酒精沉淀获得纯化的DNA。

Grind leaf samples into fine powder in liquid nitrogen to break cell; with CTAB to isolate DNA; with chloroform: isoamyl alcohol (24:1) to get rid of protein, amylase and pigment et al.; RNAse digest RNA; with 70% alcohol to deposit DNA.【仪器、材料、试剂】【Apparatus, material and reagent】(一)仪器Apparatus1.低温离心机Temperature regulated centrifuge2.恒温水浴锅Constant temperature water bath3.电泳仪Electrophoresis apparatus4.凝胶成像系统Gel imaging system(二)材料Material1.离心管Eppendorf tube2.研钵Mortar3.移液枪Removing liquid instrument4.枪头Tips(三)试剂Reagent1.聚乙烯吡咯烷酮PVP2.三羟甲氨基甲烷Tris3.乙二胺四乙酸EDTA4.氯化钠Nacl5.十二烷基磺酸钠SDS6.十六烷基三甲基溴化胺CTAB7.в巯基乙醇β-mercaptoethano8.异戊醇Isoamyl alcohol9.氯仿Chloroform10.异丙醇Isopropanol11.乙醇Alcohol12.琼脂糖Agarose◆提取缓冲液：100mmol/L Tris-HCl （pH8.0）50mmol/L EDTA （pH8.0）1.0mol/L NaCl2％SDS2% PVP4020uL~50u L/mL β-巯基乙醇（现用现加）◆5% CTAB Buffer：5% CTAB◆TE Buffer：10mmol Tris-Cl (pH8.0)1mmol EDTA (pH8.0)【实验步骤】【Protocal 】1.取幼嫩的黄瓜叶片约4g于液氮中研磨，并将磨碎的叶片粉末放入预冷的2mL离心管中。

植物提取物提取dna方法

植物提取物提取dna方法植物提取物提取DNA方法植物提取物提取DNA是进行植物遗传学和分子生物学研究的重要一环。

本文将介绍几种常用的植物提取物提取DNA的方法。

一、CTAB法CTAB法是一种经典的植物提取物提取DNA的方法。

其原理是利用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）作为提取试剂，通过蛋白酶K的作用，溶解细胞膜和核膜，释放出DNA。

然后通过酚/氯仿提取和乙醇沉淀的步骤，最终得到DNA。

二、改良的CTAB法为了提高DNA的纯度和产量，研究者们对CTAB法进行了改良。

其中一种常用的改良方法是添加聚丙烯酰胺（PVP）和β-己内酰胺（β-ME）。

PVP能够结合并沉淀多酚等杂质，提高DNA的纯度。

而β-ME可以解除DNA与蛋白质的交联作用，增加DNA的产量。

三、快速法为了节省时间和提高DNA的产量，研究者们开发出了一种快速的植物提取物提取DNA的方法。

该方法利用碱裂解和酚/氯仿提取的原理，通过简化操作步骤和缩短提取时间，快速获取高质量的DNA。

四、商业化试剂盒除了传统的提取方法，市场上也有一些商业化的试剂盒可供选择。

这些试剂盒通常采用快速离心柱或磁珠技术，简化了操作步骤，提高了提取效率和纯度。

研究者们可以根据自己的需求选择合适的试剂盒。

需要注意的是，无论使用哪种提取方法，都需要注意以下几点：1. 植物材料的选择：应选择新鲜、健康的植物组织，避免病虫害或老化组织，以保证提取到高质量的DNA。

2. DNA的保存：提取到的DNA应保存在低温下，避免酶解和降解。

3. DNA的纯度和浓度检测：使用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳等方法对提取到的DNA进行纯度和浓度检测，以确保后续实验的准确性。

总结起来，植物提取物提取DNA的方法多种多样，研究者可以根据实际需求选择合适的方法。

无论使用哪种方法，都需要严格操作，保证提取到高质量的DNA。

这些方法的应用将有助于深入了解植物的遗传背景和分子机制，为植物育种和基因工程提供重要的依据。

DNA提取过程中各种试剂的作用及原理

DNA提取过程中各种试剂的作用及原理1．溶液I—溶菌液：溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。

当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。

葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。

EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase 作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。

2．溶液II－NaOH－SDS液：NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。

但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。

在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。

SDS：SDS是离子型表面活性剂。

它主要功能有：（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。

（2）解聚细胞中的核蛋白。

（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。

但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。

3. 溶液III--3mol／L NaAc（pH4.8）溶液：NaAc的水溶液呈碱性，为了调节pH至4.8，必须加入大量的冰醋酸。

所以该溶液实际上是NaAc-HAc的缓冲液。

用pH4.8的NaAc溶液是为了把pH12.6的抽提液，调回pH至中性，使变性的质粒DNA能够复性，并能稳定存在。

而高盐的3mol／L NaAc有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。

前者是因为中和核酸上的电荷，减少相斥力而互相聚合，后者是因为钠盐与SDS－蛋白复合物作用后，能形成较小的钠盐形式复合物，使沉淀更完全。

兰花DNA的优化提取

兰花DNA的优化提取摘要：我国的兰花品种繁多，因而鉴别起来比较困难，而现在我们采用分子标记进行兰花品种鉴别是一种比较有效的方法，而在进行分子标记实验时，DNA的浓度和纯度的要求都是相当严格的。

因此，本实验采用SDS方法和CTAB方法分别对兰花的四个品种春兰(Cymbidium goe-ring)、蕙兰(Cymbidium)、寒兰(CyambidumMakion)、墨兰(Cymbidium sinense)进行DNA提取并进行比较，结果表明SDS方法是这几种兰花DNA的优化提取法。

关键词：兰花；DNA；SDS；CTAB；优化提取Abstract: orchid is kinds of variety in china,Thus more difficult to identify,Now using molecular markers to identify species is a more effective method,Conducted experiments marker, of the requirements are quite stringer DNA concentration and purity of the requirements are quite stringent,Therefore, the use of experimental methods and CTAB SDS respectively Chunlan(Cymbidium goe-ring)、Huilan (Cymbidium)、Hanlan(Cyambidum Makion)、Molan(Cymbidium sinense)orchid varieties of extracting DNA comparison,The results showed SDS is these types of orchids DNA optimization of extraction method.Key words：Orchlid,DNA,SDS,CTAB,Optimization of extraction兰花一般是指兰科植物(Orchlidaceae)，它是鲜花植物中最大科之一，全世界约有800 多属，25000多种，分布于世界各地，大多数种类分布于东南亚、澳大利亚、中南美洲、非洲和马达加斯加。

植物DNA提取实验步骤

植物DNA提取实验步骤
DNA提取实验步骤（修改1）
1.取2-5g鲜嫩的叶片于研钵中，加适量液氮研磨。

2.取500mg –1g粉末于1.5ml离心管（不超过1/3），加入700微升提取缓冲液，搅拌均匀
后，水浴（65?）保温10分钟。

3.离心（12000 rpm,5min）, 取上清于另一离心管，加入等体积（约600微升）苯酚：氯
仿：异戊醇（25：24：1）溶液上下摇动均匀几次。

4.离心（12000 rpm,5分钟），取上清于另一离心管，加入10微升5M醋酸钠和0.6倍体积
的异丙醇，摇匀，于-20 ?置10分钟。

5.离心（12000rpm,5min）, 去上清，用75%酒精洗两次，在室温或真空干燥DNA
6.加入TE，37 ?下保温1小时
7.测浓度，将原液稀释成50微克/微升。

DNA buffer
100mM Tris-HCl,ph8.0
50mM Na2EDTA,ph8.0
500mM NaCl
10mM ?-巯基乙醇
3%SDS。