细菌室标本采集规范

血样采集和培养瓶接种

（一）采血指征

对入院的危重病人未进行系统性抗生素治疗时，应及时进行血液培养，病人出现以下临床表现时可作为采集血培养的重要指征。

1. 发热（>38℃）或低温（<36℃）

2. 寒战

3. 白细胞增多（>10×10^9/L，特别有“核左移”未成熟的或杆状的白细胞增多）

4. 粒细胞减少（成熟的多核白细胞<1×10^9/L）

5. 血小板减少

6. 皮肤、粘膜出血

7. 昏迷

8. 多器官衰竭

9. 血压降低

10. 呼吸加快

或同时具备上述几种临床表现时应采集血培养。在评估可疑新生儿败血症时，除发热或低温外，很少培养出细菌，应该增加尿液和脑脊液培养。肺炎链球菌与流感嗜血杆菌菌血症患儿（特别是2岁或2岁以下的幼儿）一般在门诊就诊，常伴有明显发热（>38.5℃）和白细胞增多（>20×10^9/L）。老年菌血症病人可能不发热或不低温，如伴有身体不适、肌痛或中风，可能是感染性心内膜炎的重要指征。

（二）消毒程序

要点：防止皮肤寄生菌或环境微生物引起的污染是血培养的关键问题。由污染菌引起的假阳性增加了病人抗生素的使用量。然而，在理想的消毒条件下，仍有3%-5%血培养中混有污染菌，它们来源于皮肤（表皮葡萄球菌、痤疮丙酸杆菌、梭杆菌属、类白喉群）或环境（革兰阳性芽孢杆菌属、不动杆菌属），故进行血培养阳性统计处理时，通过将单次血培养生长革兰阳性芽孢杆菌属、棒状杆菌属、痤疮丙酸杆菌或凝固酶阴性葡萄球菌的标本视为污染，一次血培养的阳性瓶数对区分真正的病原菌和污染菌无太大帮助。

皮肤消毒：血培养为防止皮肤寄生菌污染，可使用消毒剂[碘酊或聚维酮碘(碘伏)]对皮肤进行严格仔细的消毒处理，最大限度地降低皮肤污染。

培养瓶消毒：用70%酒精消毒血培养瓶橡皮塞子；酒精作用待60S；在血液注入血培养瓶之前，用无菌纱布或棉签清除橡皮塞子表面剩余的酒精，然后注入血液。

（三）采血量和血培养的数量

采血量：对从菌血症或真菌菌血症病人血培养中获得的微生物，每个培养瓶抽取的血量是唯

一重要的变量。对婴幼儿和儿童，一般采血1-5ml用于血培养。成人血培养的标本量为10ml，血液和肉汤比一般推荐为1:5~10。每增加1ml血量平均提高阳性率3.2%。

血培养的数量：血培养的数量和采血时间关系到菌血症的病理生理学，一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单份血培养。一般而言，采集血培养都应该在使用抗生素之前进行，推荐同时采集2~3份血。

(四) 采血时机：应在用抗菌素治疗前，最好在患者发冷发热前半小时采血为宜。

(五)采血次数与间隔

1. 急性感染患者：从两臂分别采2份血样。

2. 感染性心内膜炎患者：24h内采血3次，每次间隔不少于30分钟。

(六) 采血部位：多次采血时，应在不同部位进行。

(七) 培养条件：视患者的感染、用药情况选用不同的培养瓶。

尿液标本

1、标本采集：应在用药前或停药5天后留取标本，并使尿液在膀胱内停留6-8h以上（给细菌足够的繁殖时间）。

（1）清洁排尿法：冲洗尿道口后用无菌容器留取中段尿送检。

（2）膀胱穿刺法：此法是收集尿液的最好方法，尤其对厌氧菌检查。

（3）肾盂尿采集法：应请泌尿科医生采取，左右侧的标本要标记明确。

（4）留置导管取尿法：应穿刺导尿管壁抽取尿液。

结核分枝杆菌的检查，应留取24小时尿；检测衣原体时，尿液标本不能代替尿（阴道分泌物；巨细胞病毒的检测，需多次检测标本，因其释放是周期性的。

2、标本的运送和保存：用无菌带螺帽的容器盛标本，标本应在1小时内送检。

痰标本

众所周知，传统习惯程序的痰标本细菌学检验其临床符合率并不高,其原因是多方面的。除了痰标本采集不规范导致的不合格标本带来的培养结果与病人感染不相符外，还因为微生物和人体的相关性本身就具有复杂性：源自细菌的致病与条件致病的辨证性，如致病菌可能为正常携带，而细菌在肺通气功能异常病人的下呼吸道的可以发生单纯定植或感染，要证明培养结果与感染的相关性是医学微生物学所面临的难题，这也使得一直以来在对于痰培养的标准化进展十分缓慢，以至在各版《全国临床检验操作规程》上也未提出相应详细可行的令全国同行公认的统一规范的标准化操作程序（SOP）和完整的痰液培养的质量控制办法。

目测：黄色、灰色、血性、铁锈色，浑浊、稠厚，呈现团块状的标本为合格标本；

而无色透明、有灰白片状物或黑色小点，有明显食物渣滓、纸屑灰尘的为不合格标本。

标本留取质量的好坏直接影响到对下呼吸道病原学的诊断，导致抗菌治疗失败,以及造成耐药菌的出现。应在用药前或停药1天后留取标本。

1、自然咳痰：要求患者留痰前用清水漱口3次，用力咳出。首先用灭菌生理盐水将痰液洗3次，然后将痰块打碎，制成悬液后再接种。

2、气管穿刺法：适用于昏迷患者。

3、纤维支气管镜抽取法：适用于纤维支气管镜检查或治疗的患者。

4、胃液抽取法：适用于婴幼儿患者。

咽拭子

1、拭子的选择：要求无菌、不含抑制剂；

2、预先沾湿拭子；

3、直取感染部位，减少污染。

生殖道标本

1、男性患者：

（1）尿道标本：清洗龟头,用碘伏等消毒后,挤出分泌物或以专用细拭子插入尿道口旋转采取分泌物送检。

（2）前列腺标本：应由医师按摩前列腺,以无菌手续自尿道口采取前列腺液送检。

2、女性患者：

（1）成年患者：应在扩阴器的支持下，以无菌棉拭子取分泌物送检。

（2）未成年患者：不应使用扩阴器，应以无菌拭子在阴道口处采取分泌物送检。

厌氧菌检查

厌氧菌是人体许多部位（如皮肤、口咽部、肠道和泌尿生殖道）正常菌群中的一部分，因此下列材料无需做厌氧菌培养：（1）咽、鼻、尿道或直肠拭子。（2）咳出的痰，通过支气管镜取的分泌物，排出或导出的尿、粪及胃内容物。

1、正确地选择标本：为排除或尽量减少正常菌群中厌氧菌的污染，用注射器抽取标本比用拭子更好，特别适用于下列临床情况：

（1）从未开放的脓肿抽取脓液。

（2）通过胸腔穿刺抽出的胸腔液。