7个控制菌讲解学习
控制菌总结
控制菌总结1. 引言控制菌是指通过特定的手段和方法，控制和抑制有害微生物，以保护人类健康和维护环境卫生的一类微生物。
控制菌被广泛应用在各个领域，如医疗、食品加工、环境卫生等。
本文将对控制菌的分类、作用机制和应用领域进行总结。
2. 控制菌分类2.1 按作用方式分类根据控制菌的作用方式，可以将其分为以下几类： - 抑制菌：能够抑制有害微生物的生长和繁殖，常见的有抗菌素和抑菌剂。
- 竞争菌：通过占领和利用资源，竞争有害微生物的生存空间，常见的有乳酸菌和酵母菌。
- 构建菌群：通过形成有益微生物的群体，保持菌群平衡，降低有害菌的数量和活性。
2.2 按应用领域分类控制菌的应用领域多种多样，主要包括以下几个方面： - 医疗领域：如医用抗菌素的使用，酸碱调节剂的应用等。
- 食品加工领域：如乳酸菌的发酵过程，表面处理剂的使用等。
- 环境卫生领域：如空气净化剂的使用，水处理剂的应用等。
-农业领域：如生物农药的使用，益生菌的施用等。
3. 控制菌作用机制控制菌的作用机制主要包括以下几个方面： - 生理阻断：抑制菌通过破坏有害微生物的细胞结构、代谢途径等，阻断其正常的生理过程。
- 酸碱调节：通过改变环境的酸碱度，使有害微生物难以生存和繁殖。
- 竞争优势：竞争菌通过利用资源、占领生存空间等，与有害微生物竞争，减少其数量和活性。
- 净化作用：控制菌通过吸附、分解、转化等作用，将环境中的有害物质转化为无害物质。
- 免疫调节：有些控制菌能够调节宿主的免疫系统，增强宿主对有害微生物的抵抗能力。
4. 控制菌的应用4.1 医疗领域在医疗领域，控制菌的应用非常广泛。
抗菌素是常见的控制菌，通过干扰或破坏有害微生物的细胞结构和代谢途径，起到抑制和杀灭病原菌的作用。
此外，某些酸碱调节剂也常用于医疗上，通过改变皮肤或黏膜的酸碱度，抑制细菌的生长和繁殖。
4.2 食品加工领域在食品加工领域，乳酸菌是常见的控制菌。
乳酸菌通过发酵作用，将食品中的糖转化为乳酸，使食品呈酸性，从而抑制有害微生物的生长和繁殖。
7个控制菌
（1）大肠埃希菌（Escherichia coli）取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml、10cm2），直接或处理后接种至适量（不少于100ml）的胆盐乳糖培养基中，培养18～24 小时，必要时可延长至48 小时。
取上述培养物0.2ml，接种至含5ml MUG 培养基的试管内，培养，于5 小时、24 小时在366nm 紫外线下观察，同时用未接种的MUG 培养基作本底对照。
若管内培养物呈现荧光，为MUG 阳性；不呈现荧光，为MUG 阴性。
观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。
本底对照应为MUG 阴性和靛基质阴性。
如MUG 阳性、靛基质阳性，判供试品检出大肠埃希菌；如MUG 阴性、靛基质阴性，判供试品未检出大肠埃希菌；如MUG 阳性、靛基质阴性，或MUG 阴性、靛基质阳性，则应取胆盐乳糖培养基的培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上，培养18～24 小时。
若平板上无菌落生长、或生长的菌落与表3 所列的菌落形态特征不符，判供试品未检出大肠埃希菌。
若平板上生长的菌落与表3 所列的菌落形态特征相符或疑似，应进行分离、纯化、染色镜检和适宜的鉴定试验，确认是否为大肠埃希菌。
表3 大肠埃希菌菌落形态特征培养基菌落形态曙红亚甲蓝琼脂呈紫黑色、浅紫色、蓝紫色或粉红色，菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，常有金属光泽麦康凯琼脂鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润（2）大肠菌群（Coliform）取含适量（不少于10ml）的乳糖胆盐发酵培养基管3 支，分别加入1∶10 的供试液1ml（含供试品0.1g 或0.1ml）、1∶100的供试液1ml（含供试品0.01g 或0.01ml）、1∶1000 的供试液1ml（含供试品0.001g 或0.001ml），另取1 支乳糖胆盐发酵培养基管加入稀释液1ml 作为阴性对照管。
微生物限度检查法(2).控制菌检查方法验证讲义
5.联合使用
适用于抑菌作用较强的中西药制剂。 如：①复方洗必泰栓（水溶性基质）金黄 色葡萄球菌的检验—用1%吐温-80稀释液制 备供试液＋膜法过滤＋滤膜置含5%吐温-80 的硫乙醇酸盐增菌液中→（+）；②生白安 片（含盐酸小檗胺）大肠杆菌检验—低速 离心＋薄膜过滤法→（+）。
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3.薄膜过滤法
本法适用于有抑菌作用的液体制剂。 如：葡萄糖酸洗必泰含漱剂，氯霉素滴眼 剂等。 注意：供试液应加入较多量的稀释液稀释 后，再注入滤器中。
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4.中和法
①磺胺类可加对氨基苯甲酸（100ml增菌培养基 中含1%对氨基苯甲酸0.5-1.0ml）如：复方新诺明 片 ②含重金属盐类可用含巯基化合物（硫乙醇酸钠， L-胱氨酸）的培养基作增菌培养液。如：磺胺嘧 啶银软膏-金黄色葡萄球菌与绿脓杆菌的检验 ③脂溶性药物用表面活性剂中和。如：复方痔疮 栓（含洗必泰）中的绿脓杆菌的检验，仅用吐温80制备供试液即可
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2.离心沉淀集菌法
低速离心（500转/分5分钟）取上清液（弃取抑菌 成分的固体微粒） 高速离心（3000-3500转/分30分钟）弃去上层抑 菌的液体部分，留管底2ml。 本法适用于抑菌作用不强的中西药品，如：平喘 胺片 、速效感冒片（先低速，后高速）；小儿惊 风散（低速离心）。本法操作较烦琐，药品中污 染的微生物有一定的损失。
方法:1.培养基稀释法 2.离心沉淀集菌法 3.薄膜过滤法 4.中和法 5.联合使用
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1.培养基稀释法
供试品加稀释剂稀释到一定倍数后进行检 验（虽然供试品中污染的菌也稀释，但由 于检验结果规定是不得检出，因而有些品 种用稀释法可检出目的菌）。 如百喘朋片[1：10 稀释液3ml 结果（＋） 试验菌28-96个] 。 本法适用于一般抑菌作 用不强的中西药品。
细菌的控制和利用(四校)PPT课件
结束语
当你尽了自己的最大努力时，失败也是伟大的， 所以不要放弃，坚持就是正确的。
When You Do Your Best, Failure Is Great, So Don'T Give Up, Stick To The End
演讲人：XXXXXX 时 间：XX年XX月XX日
2.根据今天学到的知识,你能解释细菌几乎无处 不在的原因吗?
个体小,繁殖快,有些能形成芽孢并且营养方式及 呼吸类型多样等.
甲大烷肠杆菌制根菌：杀瘤:产肠—虫道生—剂根有沼瘤益气菌菌
醋酸杆菌——醋
乳棒状酸杆菌菌
伤寒:是一种叫做伤寒杆菌引起的急性肠道传染 病。病人的主要症状是持续高热， 脾肿大和白
细胞减少等。可发生肠出血、肠穿孔等严重并 发症。
荚荚膜膜
细细胞胞壁壁 细细胞胞膜膜 细细胞胞质质
拟拟核核
细胞壁 细胞膜 叶绿体
细胞核 液泡 细胞质
荚膜 细胞 细壁胞膜 细胞质
拟核 鞭毛细胞 植物细胞
细胞壁
有
有
有
细胞膜
有
有
有
细胞核 没有成形的细胞核 有
有
细胞质
有
有
有
特有结构 荚膜、鞭毛
液泡、叶绿体
推测营养方式
多数细菌利用现成的有机物生活
细菌 数
1
24
8 16 32 64 128 256 512
1.算一算，从第1代起到形成第十代时，经过了多少时间？
答：3个小时
细菌的休眠体—芽孢
思考：芽孢是不是细菌的生殖细胞?
不是，因为生殖是使个体数量增加，而细菌在环境 条件不适宜时，只形成一个芽孢，一个芽孢在环境 适宜时也只形成一个细菌,数量没有增加，所以芽孢 不是细菌的生殖细胞，只是细菌抵抗不良环境的休 眠体。
微生物控制培训课件
微生物控制培训课件微生物控制培训课件微生物是一类微小的生物体，它们存在于我们周围的环境中，包括空气、土壤、水体以及人体等。
微生物的存在对我们的生活和健康有着重要的影响，有些微生物对我们有益，如帮助我们消化食物的肠道菌群，而另一些微生物则可能对我们造成危害，如引发传染病的病原微生物。
为了控制微生物的影响，微生物控制成为了一个重要的课题。
微生物控制的目标是减少或消除微生物的存在和活动，以保护人类和环境的健康。
微生物控制涉及到多个领域，包括医疗卫生、食品安全、环境保护等。
在医疗卫生领域，微生物控制的重点是预防和控制传染病的传播。
这包括通过手卫生、消毒和灭菌等措施，减少病原微生物在医疗机构和社区中的传播。
在食品安全领域，微生物控制的目标是防止食品中的微生物污染和食源性疾病的发生。
这需要在食品生产、加工和储存过程中采取适当的卫生措施，如保持食品的卫生和质量，避免交叉污染等。
在环境保护领域，微生物控制的重点是减少微生物对环境的污染和破坏。
这包括处理废水、垃圾和污染物，以及维护自然环境的生态平衡。
微生物控制的方法主要包括物理方法、化学方法和生物方法。
物理方法是利用物理原理对微生物进行控制，如高温灭菌、紫外线照射和过滤等。
化学方法是利用化学物质对微生物进行控制，如消毒剂和抗生素等。
生物方法是利用其他生物对微生物进行控制，如利用益生菌对有害菌群进行竞争和抑制。
不同的方法适用于不同的场景和目标，综合运用可以提高微生物控制的效果。
微生物控制的过程需要进行培训和教育，以提高人们对微生物控制的认识和技能。
培训课件是一种常用的培训工具，它可以通过文字、图片和视频等形式，向受训者传达微生物控制的相关知识和技术。
培训课件的设计应该符合受训者的需求和特点，具有易懂、易学和易操作的特点。
同时，培训课件还应该具有足够的深度和广度，以满足不同受训者的需求。
在设计微生物控制培训课件时，可以从以下几个方面进行论述。
首先，介绍微生物的基本知识。
微生物7 微生物的生长及其控制
第七章 微生物的生长及其控制
z z z z z z
生长 (growth)：个体体积或重量的变化 繁殖 (reproduction)：个体数量的变化 个体生长→个体繁殖→群体生长 群体生长＝个体生长 ＋ 个体繁殖 生长和繁殖是交替进行的 衡量群体生长的量： 重量、体积、密度、浓度、个体数目等 生理指标：测含氮量、测含碳量、测磷、 DNA、RNA、ATP、呼吸
第一节 微生物生长的测定
测定生长量 测体积 称干（湿）重 比浊法 颜色改变单位 生理指标法：测含氮量 测含碳量 测磷、DNA、RNA、ATP 呼吸
微生物生长的测定
测细胞的个数
¾比例计数法 ¾血球计数法 ¾平板活菌计数法：
菌落形成单位 (cfu, colony forming unit） ¾膜过滤法 ¾稀释摇管法
比浊法
turbidity
血球计数法
z
又被称为Petroff-Hausser counting。
平板活菌计数法
平板活菌计数法的两种策略——涂布 和倾注
膜过滤法——用于较稀溶液的计数 方法
膜过滤法
硝酸纤维素滤膜法是最经典的获得同步生长的方法
由于细胞的个体差异，同步生长往往只能维持2-3随后又逐渐转变为随机生长。
邻苯基苯酚
六氯酚
哈拉腙
十六烷基吡啶氯
氯苯甲烷铵
丙炔内酯Disinfectants and antiseptics。
《细菌的控制和利用》课件
蛋白质工程
蛋白质工程是通过改变蛋白质的氨基酸序列 和结构来改变其功能的一种技术。在细菌的 二度利用中，蛋白质工程可以用来设计和优 化细菌产生的蛋白质，使其具有更好的性能 或功能。例如，通过蛋白质工程技术可以设 计和优化酶的活性、稳定性和选择性，使其 在工业、农业和医疗等领域中具有更好的应 用价值。
蛋白质工程还可以用来研究细菌的蛋白质结 构和功能，了解其与生命活动的关系和作用 机制，为进一步利用细菌提供理论依据和技
术支持。
细胞工程
细胞工程是通过改变细胞的结构和功能来改变其遗传 特性和表现的一种技术。在细菌的二度利用中，细胞 工程可以用来改变细菌的细胞结构和功能，使其具有 更好的生长和繁殖能力或产生更多的有用物质。例如 ，通过细胞工程技术可以改变细菌的细胞膜通透性或 细胞壁结构，使其更容易吸收和利用营养物质；或者 通过改变细菌的代谢途径来提高其产生某种有用物质 的能力。
使用和发展。
应用前景
细菌控制和利用技术在医疗、环 保、农业等领域具有广泛的应用 前景，随着技术的不断进步，其
应用范围将进一步扩大。
THANKS
感谢观看
医药用途
抗生素生产
某些细菌可以产生抗生素，用于治疗 细菌感染引起的疾病。
生物材料和组织工程
利用细菌合成生物材料或构建组织工 程所需的细胞支架。
疫苗生产
部分细菌可以用于生产疫苗，通过激 发人体免疫系统来预防疾病。
工业生产
生物燃料的生产
通过细菌发酵将有机废弃 物转化为生物燃料，如乙 醇和生物柴油。
生物塑料的生产
免疫
是指机体对病原体的识别、排除和预防疾病的能力，是机体 的一种自我保护机制。
微生物的控制
棉花、玻璃纤维 或石棉
微生物的控制
滤膜
核孔滤器
第262页6
微生物的控制
过滤除菌装置
第272页7
微生物被的控制阻留在滤膜上大肠杆菌和放线菌扫描电镜照片 第282页8
微生物的控制
过滤除菌装置
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超声波和渗透压
超声波（ultrasonic） 1 破碎细胞（eg：E.coli），提取细胞组分或
无油脂。 火焰灼烧、焚烧 （1）金属制品（镊子，接种环等）。 （2）动物尸体，废弃物。
微生物的控制
第9页 9
微生物的控制
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湿热灭菌法
湿热灭菌法比干热灭菌效果好
（1）水蒸汽穿透力强
（2）水蒸汽含热潜能高. （100℃时，1克水分 子由气态变为液态，释放2255J热量）
（3）水蒸汽更易传递热量
72℃/15s，
135-150℃/2-6s。
微生物的控制
第131页3
煮沸法和间歇灭菌法
煮沸法 （1）不能在短时间内杀死全部微生物芽胞和病毒 （2）沸水中加入2%NaCO3或2％~5％石炭酸 可加速细菌芽胞死亡
（3）电饭煲不打开盖子可使食品保留较长时间
间歇灭菌法 （1）丁达尔灭菌法或分段灭菌法，适合用于不耐热
PRE能够将TT二聚体切除
。
微生物的控制
第232页3
过滤除菌
主要用于空气和不耐热液体物质抗生素、 血清、酶、糖类溶液等除菌。
细菌滤器—材料为玻璃棉，陶瓷，石 棉等。取得无菌空气。
微生物的控制
第242页4
滤膜
（1）材料为醋酸纤维素，硝酸纤维素；
（2）孔径为0.22μm，0.45μm；
（3）应用—啤酒，饮料，药品等（对热不稳定， 如蛋白质等）。
控制菌检查
供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出 结果为准，不再复试。
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7/26/2016
耐胆盐革兰阴性菌（Bile-Tolerant Gram-Negative Bacteria） 大肠埃希菌（E.coli） 沙门菌（Salmonella） 铜绿假单胞菌（Ps.aeruginosa） 金黄色葡萄球菌（S.aureus） 梭菌（Clostridia） 白色念珠菌（C.albicans）
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7/26/2016
1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 3. 检验方法的适用性
目的： 某种样品采用某种方法得到一个检验结果
样品的影响 检验方法的影响
1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 3. 检验方法的适用性
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7/26/2016
1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法
3. 检验方法的适用性
供试液的制备
供试液、试验 菌加入规定的
培养基
如有抑菌活性： 稀释 中和 薄膜过滤
依相应的控制 菌检查法检验
结果判定
1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 3. 检验方法的适用性
结果判定： 上述试验若检出试验菌，按此供试液制备法和控制菌检查方法 进行供试品检查；若未检出试验菌，应消除供试品的抑菌活 性…，并重新进行方法适用性试验。
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7/26/2016
1106 非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法 3. 供试品检查 – 大肠埃希菌
结果判定： 麦康凯琼脂平板上有菌落生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验, 确证 是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但 鉴定结果为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。
非无菌产品微生物限度检查中控制菌检查原理
非无菌药品微生物限度检查中控制菌检查及原理一、大肠埃希菌1.菌体特性大肠埃希菌属于肠杆菌科埃希菌属，菌体细胞两端钝圆，为革兰染色阴性无芽孢杆菌，细胞大小为1.1～1.5×2～6.0 µm。
周身鞭毛、运动或不运动。
能形成荚膜和微荚膜。
最适生长温度37℃，可在15～46℃生长。
最适pH为7.4～7.6。
在营养肉汤培养基中，37℃培养24小时后，形成菌膜，管底粘液状沉淀，培养物有粪臭味。
在伊红美兰琼脂（EMB）平板上，典型的菌落呈紫黑色，有金属光泽，菌落扁平，低度凸起，光滑湿润。
也有呈粉红色、无金属光泽、中心紫色的菌落。
在麦康凯琼脂（MaCC）平板上，菌落扁平、圆形、光滑湿润。
呈桃红色、微红色或菌落中心桃红色。
2. 生化实验原理（1）MUG试验97％的大肠埃希菌含有β—葡萄糖醛苷酶，可分解4—甲基伞形酮β－D－葡萄糖苷酸，生成的4—甲基伞形酮在366nm紫外灯下产生蓝白色荧光。
（2）靛基质试验（I实验)有些细菌具有色氨酸酶，在蛋白胨水培养基中生长时，能分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚）。
靛基质无色，不能直接观察，加入靛基质试液（对二甲氨基苯甲醛试液），产成红色的玫瑰靛基质。
色氨酸酶活性的最适pH为7.4～7.8。
pH降低，靛基质产生减少，可能出现假阴性或弱阳性反应，故培养基pH应为7.4～7.6 。
因产生靛基质的细菌都能发酵糖类而产酸，增加培养基的酸度，不宜用含葡萄糖的培养基进行此试验。
（3）甲基红试验（M）肠杆菌科细菌均可发酵葡萄糖产生酸性代谢产物，使培养基pH值下降，最初可使甲基红指示液［变色域pH4.5－5.4（红→黄）］变色而呈现阳性反应。
但继续培养后，产气杆菌能将两分子的丙酮酸脱羧生成一分子的中性乙酰甲基甲醇而使培养基pH值上升至5.4以上，使甲基红指示液变为桔黄色（甲基红试验阴性）。
而大肠埃希菌则继续产生大量的酸，如甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，保持高氢离子浓度，故甲基红试验为阳性反应。
实验室菌种的使用和管理知识讲解
xxx食品检测中心作业指导书1.目的规范实验室菌种的收集、使用、保管程序；确保实验室的安全。
2.范围本管理细则适用于实验室菌种的使用和管理。
3.职责3.1菌种保管员：按照本指导书做好菌种的收集、转种、使用、保存和发放以及销毁工作。
3.2科室负责人：负责监督菌种的使用及管理。
4.管理细则本实验室保存的菌种仅包括一部分致病性较弱的三类细菌、一部分无致病能力的普通细菌和常见真菌。
不包括病毒、螺旋体、衣原体、立克次体；保存的菌种主要用于各类培养基、检测试剂的性能测试和质量控制。
4.1在本实验室保管的菌种名4.1.1保留工作菌种：大肠杆菌ATCC25922、鼠伤寒沙门氏菌50013、福氏志贺氏菌2a ATCC12022、副溶血性弧菌200904-1、金黄色葡萄球菌ATCC25923、表皮葡萄球菌ATCC12228溶血性链球菌23310、铜绿假单胞菌10211、普通变形杆菌，克雷伯氏杆菌，小肠结肠炎耶森氏菌ATCC 23715 、单核增生李斯特菌ATCC19111、枯草芽胞杆菌ATCC6633b 、蜡状芽胞杆菌A TCC11778、白色念珠菌A TCC10231、酿酒酵母ATCC9763、黑曲霉菌、展青霉菌、黄曲霉菌。
4.1.2常规检测,科研分离得到的有保留价值的三类/四类菌种根据需要可继续保留；如果在食品中分离到二类/一类菌种,及时送上级单位进一步鉴定,并按规定立即销毁。
本实验室不保存一类、二类菌种。
4.2 菌种的保管4.2.1实验室菌种保存于专用的菌种室。
4.2.2菌种保管员及科室负责人双人双锁负责保管菌种。
4.2.3使用菌种需提出申请、经科室负责人批准后，向菌种保管员领用。
4.2.4菌种应按规定的时间定期转种，一般每转种3代做一次鉴定，如发现污染或变异应及时处理。
4.2.5保管人员工作变动时应作好交接工作。
4.3 菌种的使用和保存4.3.1菌种的类别4.3.1.1实验室内的标准菌种根据用途不同，分为储存菌种、传代用菌种和工作用菌种。
7个控制菌讲解学习
（1）大肠埃希菌（Escherichia coli）取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml、10cm2），直接或处理后接种至适量（不少于100ml）的胆盐乳糖培养基中，培养18～24 小时，必要时可延长至48 小时。
取上述培养物0.2ml，接种至含5ml MUG 培养基的试管内，培养，于5 小时、24 小时在366nm 紫外线下观察，同时用未接种的MUG 培养基作本底对照。
若管内培养物呈现荧光，为MUG 阳性；不呈现荧光，为MUG 阴性。
观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。
本底对照应为MUG 阴性和靛基质阴性。
如MUG 阳性、靛基质阳性，判供试品检出大肠埃希菌；如MUG 阴性、靛基质阴性，判供试品未检出大肠埃希菌；如MUG 阳性、靛基质阴性，或MUG 阴性、靛基质阳性，则应取胆盐乳糖培养基的培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上，培养18～24 小时。
若平板上无菌落生长、或生长的菌落与表3 所列的菌落形态特征不符，判供试品未检出大肠埃希菌。
若平板上生长的菌落与表3 所列的菌落形态特征相符或疑似，应进行分离、纯化、染色镜检和适宜的鉴定试验，确认是否为大肠埃希菌。
表3 大肠埃希菌菌落形态特征培养基菌落形态曙红亚甲蓝琼脂呈紫黑色、浅紫色、蓝紫色或粉红色，菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，常有金属光泽麦康凯琼脂鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润（2）大肠菌群（Coliform）取含适量（不少于10ml）的乳糖胆盐发酵培养基管3 支，分别加入1∶10 的供试液1ml（含供试品0.1g 或0.1ml）、1∶100的供试液1ml（含供试品0.01g 或0.01ml）、1∶1000 的供试液1ml（含供试品0.001g 或0.001ml），另取1 支乳糖胆盐发酵培养基管加入稀释液1ml 作为阴性对照管。
第一节细菌控制和应用
7.肺炎球菌侵入人体肺部后，少量的细菌 形成大量的菌群，导致人体表现出病症，
这一过程是细菌的（ c）
A.细胞生长 B.芽孢增多 C.分裂生殖
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▪ 8.大肠杆菌的结构与桃树细胞相近,都有细 胞壁，但大肠杆菌与桃树的营养方式却截
然不同，它们的主要区别是（ C ）
▪ A.是否独立生活 ▪ B.能否进行呼吸作用 ▪ C.能否将无机物合成有机物 ▪ D.生命活动中是否消耗能量
鞭毛
细胞质 荚膜 细胞膜 细胞壁
细菌的主要结构有：细__胞__壁___ 细、胞__膜_ _细__胞、质_______,
细菌虽然有遗传物质DNA,却成没形有的细胞核
.
像植物细胞一样有细胞壁,却没有叶绿体 .
有些细菌的细胞壁外面还有 鞭__毛_____ 荚和膜
.8
思考：推测细菌的营养方式
▪细菌以什么为食？
细菌能像绿色植物一样通 过光合作用自己制造有机物吗？ 为什么？
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植物细胞有 叶绿体
可进行 光合作用 自己制造有机物 （自养型）
细菌没有 叶绿体
不可进行 光合作用 利用现成的有机物生活 （异养型）
只能利用现成的有机物来维 持生活的营养方式叫做异养。
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自养 能利用光合作用自己制造有机物
异养 利用现成的有机物来维持生活
100×28 =
25600
要养成搞好个人卫生的习惯，要经常洗手、 洗澡、换洗衣物，这样才能减少自身携带的细 菌数目，减少被细菌感染而生病的可能。
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3、芽孢
细菌的休眠体
个体缩小、细胞 壁增厚形成
对不良环境有较 强抵抗的能力
一般细菌在100ºC的高温下煮10分钟就被杀死， 芽孢要在140ºC的高温下蒸煮2～3小时才能死亡。 16
微生物限度检查——控制菌检查.
提纲
一、耐胆盐革兰阴性菌 二、大肠埃希菌 三、沙门菌 四、铜绿假单胞菌 五、金黄色葡萄球菌 六、梭菌 七、白色念珠菌
一、耐胆盐革兰阴性菌的检查
二、大肠埃希菌的检查
三、沙门菌的检查
供试液制备 及增菌培养
选择培养
分离培养
结果判断
供品
胰酪大豆胨 液体培养基
30~35℃ 18~24h
预培养物
预培养 物 0.1ml
沙门增菌 液体培养 物
接种 划线接种
10mlRV沙门增 菌液体培养基
30~35℃ 18~24h
木糖赖氨酸脱氧胆 30~35℃
酸盐琼脂平板
18~48h
沙门增菌液体培养物
观察
穿刺接种 疑似菌落
三糖铁琼脂培养基斜面 培养18~24h
若木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂平板上没有菌落生长，或有菌落生长但鉴定结果为阴性，或三糖铁琼脂 培养基斜面未见红色、底层未见黄色；或斜面黄色、底层未见黄色或黑色，判供试品未检出沙门菌
若木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂平板上有疑似菌落生长，且三糖铁琼脂培养基斜面为红色、底层为黄色 或斜面为黄色、底层为黄色或黑色，应进行适宜鉴定试验，确证是否为沙门菌
四、铜绿假单胞菌的检查
五、金黄色葡萄球菌的检查
六、梭菌的检查
七、白色念珠菌的检查
制作人：王丽娟 重庆医药高等专科学校
控制菌(大肠埃希菌)检查操作规程
控制菌（大肠埃希菌）检查操作规程1 .目的建立一个控制菌大肠埃希菌控制菌大肠埃希菌检查标准工作程序，规范QC控制菌大肠埃希菌检查人员的控制菌大肠埃希菌检查的操作。
2 .范围适用于本公司的口服制剂完成内包后外包前的中间体和局部给药制剂产品的内包装材料的控制菌大肠埃希菌的检测。
3 .责任者QC控制菌大肠埃希菌检查人员；质量管理部4 .内容4.1 检测准备4.1.1 QC人员接到控制菌大肠埃希菌检查的《工作进程计划单》后，核对《取样指令》，确定控制菌大肠埃希菌检查所需容器具、试液、培养基等项目和数量，执行微生物检查准备工作操作程序和培养基配制操作规程，进行控制菌大肠埃希菌检查前的准备工作。
4.1.2 为了保证被检品在取样后规定的时间内完成检验，取样前应准备好检验需要的各种器皿（清洗一干燥一包裹）、培养基和稀释剂等（配制一分装一包裹），并灭菌备用。
4.2 供试液的制备4.2.1 供试液供试液是指按照供试品的理化特性与生物学特性，采取适宜的方法将供试品制成供试验用的均匀液体。
4.2.2 供试液的制备根据供试品的理化特性与生物需特性，采取适宜的方法制备供试液。
如果使用了乳化剂、分散剂、中和剂和灭活剂，其用量应证明是有效的，并对微生物的生长和存活无影响性。
4.2.2.1 可溶性液体供试品取供试品10ml,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白冻缓冲液至100ml,混匀，作为供试液。
可溶性液体制剂可用混合的供试品原液作为供试液。
4.2.2.2 非水溶性液体供试品油剂可先加入适量的无菌聚山梨酯80使供试品分散均匀，然后再加0.9%无菌氯化钠-蛋白陈缓冲液至100m,混匀，作为供试液。
4.2.2.3 水溶性固体、半固体或黏稠性供试品称取供试品10g,置PH7.0无菌氯化钠-蛋白冻缓冲液至100ml中，用匀浆仪或其他适宜方法，混匀，作为1:10供试液。
必要时可加适量的无菌聚山梨酯80,并置水浴中适当加温使供试品分散均匀。
4.2.2.4 非水溶性供试品取供试品5g（5m1）,加入含溶化的（温度不超过45C）5g司盘80、3g单硬脂酸甘油酯、10g 聚山梨酯80无菌混合物的烧杯中，用无菌玻棒搅拌成团后，慢慢加入45CpH7.0无菌氯化钠-蛋白冻缓冲液至100ml,边加边搅拌，使其充分乳化，作为1:20供试液。
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（1）大肠埃希菌（Escherichia coli）取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml、10cm2），直接或处理后接种至适量（不少于100ml）的胆盐乳糖培养基中，培养18～24 小时，必要时可延长至48 小时。
取上述培养物0.2ml，接种至含5ml MUG 培养基的试管内，培养，于5 小时、24 小时在366nm 紫外线下观察，同时用未接种的MUG 培养基作本底对照。
若管内培养物呈现荧光，为MUG 阳性；不呈现荧光，为MUG 阴性。
观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液，液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性；呈试剂本色，为靛基质阴性。
本底对照应为MUG 阴性和靛基质阴性。
如MUG 阳性、靛基质阳性，判供试品检出大肠埃希菌；如MUG 阴性、靛基质阴性，判供试品未检出大肠埃希菌；如MUG 阳性、靛基质阴性，或MUG 阴性、靛基质阳性，则应取胆盐乳糖培养基的培养物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上，培养18～24 小时。
若平板上无菌落生长、或生长的菌落与表3 所列的菌落形态特征不符，判供试品未检出大肠埃希菌。
若平板上生长的菌落与表3 所列的菌落形态特征相符或疑似，应进行分离、纯化、染色镜检和适宜的鉴定试验，确认是否为大肠埃希菌。
表3 大肠埃希菌菌落形态特征培养基菌落形态曙红亚甲蓝琼脂呈紫黑色、浅紫色、蓝紫色或粉红色，菌落中心呈深紫色或无明显暗色中心，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润，常有金属光泽麦康凯琼脂鲜桃红色或微红色，菌落中心呈深桃红色，圆形，扁平，边缘整齐，表面光滑，湿润（2）大肠菌群（Coliform）取含适量（不少于10ml）的乳糖胆盐发酵培养基管3 支，分别加入1∶10 的供试液1ml（含供试品0.1g 或0.1ml）、1∶100的供试液1ml（含供试品0.01g 或0.01ml）、1∶1000 的供试液1ml（含供试品0.001g 或0.001ml），另取1 支乳糖胆盐发酵培养基管加入稀释液1ml 作为阴性对照管。
培养18～24 小时。
乳糖胆盐发酵管若无菌生长、或有菌生长但不产酸产气，判该管未检出大肠菌群；若产酸产气，应将发酵管中的培养物分别划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培养基或麦康凯琼脂培养基的平板上，培养18～24 小时。
若平板上无菌落生长，或生长的菌落与表4 所列的菌落形态特征不符或为非革兰阴性无芽孢杆菌，判该管未检出大肠菌群；若平板上生长的菌落与表4 所列的菌落形态特征相符或疑似，且为革兰阴性无芽孢杆菌，应进行确证试验。
表4 大肠菌群菌落形态特征培养基菌落形态曙红亚甲蓝琼脂呈紫黑色、紫红色、红色或粉红色，圆形，扁平或稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润麦康凯琼脂鲜桃红色或粉红色，圆形，扁平或稍凸起，边缘整齐，表面光滑，湿润确证试验从上述分离平板上挑选4～5 个疑似菌落，分别接种于乳糖发酵管中，培养24～48 小时。
若产酸产气，判该乳糖胆盐发酵管检出大肠菌群，否则判未检出大肠菌群。
根据大肠菌群的检出管数，按表5 报告1g 或1ml 供试品中的大肠菌群数。
表 5 可能的大肠菌群数表各供试品量的检出结果0.1g 或0.1ml 0.01g 或0.01ml 0.001g 或0.001ml可能的大肠菌群数N（个/g 或ml）+ + + ＞103+ + - 102＜N＜103+ - - 10＜N＜102- - - ＜10注：+代表检出大肠菌群；-代表未检出大肠菌群。
（3）沙门菌（Salmonella）取供试品10g 或10ml，直接或处理后接种至适量（不少于200ml）的营养肉汤培养基中，用匀浆仪或其他适宜方法混匀，培养18～24 小时。
取上述培养物1ml，接种于10ml 四硫磺酸钠亮绿培养基中，培养18～24 小时后，分别划线接种于胆盐硫乳琼脂（或沙门、志贺菌属琼脂）培养基和麦康凯琼脂（或曙红亚甲蓝琼脂）培养基的平板上，培养18～24 小时（必要时延长至40～48 小时）。
若平板上无菌落生长，或生长的菌落不同于表6 所列的特征，判供试品未检出沙门菌。
若平板上生长的菌落与表6 所列的菌落形态特征相符或疑似，用接种针挑选2～3 个菌落分别于三糖铁琼脂培养基高层斜面上进行斜面和高层穿刺接种，培养18～24 小时，如斜面未见红色、底层未见黄色；或斜面黄色、底层无黑色，判供试品未检出沙门菌。
否则，应取三糖铁琼脂培养基斜面的培养物进行适宜的鉴定试验，确认是否为沙门菌。
表6 沙门菌菌落形态特征培养基菌落形态胆盐硫乳琼脂无色至浅橙色，半透明，菌落中心带黑色或全部黑色或无黑色沙门、志贺菌属琼脂无色至淡红色，半透明或不透明，菌落中心有时带黑褐色曙红亚甲蓝琼脂无色至浅橙色，透明或半透明，光滑湿润的圆形菌落麦康凯琼脂无色至浅橙色，透明或半透明，菌落中心有时为暗色（4）铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml、10cm2），直接或处理后接种至适量（不少于100ml）的胆盐乳糖培养基中，培养18～24 小时。
取上述培养物，划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基的平板上，培养18～24 小时。
铜绿假单胞菌典型菌落呈扁平、无定形、周边扩散、表面湿润，灰白色，周围时有蓝绿色素扩散。
如平板上无菌落生长或生长的菌落与上述菌落形态特征不符，判供试品未检出铜绿假单胞菌。
如平板生长的菌落与上述菌落形态特征相符或疑似，应挑选2～3 个菌落，分别接种于营养琼脂培养基斜面上，培养18～24小时。
取斜面培养物进行革兰染色、镜检及氧化酶试验。
氧化酶试验取洁净滤纸片置于平皿内，用无菌玻棒取斜面培养物涂于滤纸片上，滴加新配制的1％二盐酸二甲基对苯二胺试液，在30 秒内若培养物呈粉红色并逐渐变为紫红色为氧化酶试验阳性，否则为阴性。
若斜面培养物为非革兰阴性无芽孢杆菌或氧化酶试验阴性，均判供试品未检出铜绿假单胞菌。
否则，应进行绿脓菌素试验。
绿脓菌素（Pyocyanin）试验取斜面培养物接种于PDP 琼脂培养基斜面上，培养24 小时，加三氯甲烷3～5ml 至培养管中，搅碎培养基并充分振摇。
静置片刻，将三氯甲烷相移至另一试管中，加入1mol/L 盐酸试液约1ml，振摇后，静置片刻，观察。
若盐酸溶液呈粉红色，为绿脓菌素试验阳性，否则为阴性。
同时用未接种的PDP 琼脂培养基斜面同法作阴性对照，阴性对照试验应呈阴性。
若上述疑似菌为革兰阴性杆菌、氧化酶试验阳性及绿脓菌素试验阳性，判供试品检出铜绿假单胞菌。
若上述疑似菌为革兰阴性杆菌、氧化酶试验阳性及绿脓菌素试验阴性，应继续进行适宜的鉴定试验，确认是否为铜绿假单胞菌。
（5）金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml、10cm2），直接或处理后接种至适量（不少于100ml）的亚碲酸钠（钾）肉汤（或营养肉汤）培养基中，培养18～24 小时，必要时可延长至48小时。
取上述培养物，划线接种于卵黄氯化钠琼脂培养基或甘露醇氯化钠琼脂培养基的平板上，培养24～72 小时。
若平板上无菌落生长或生长的菌落不同于表 7所列特征，判供试品未检出金黄色葡萄球菌。
表7 金黄色葡萄球菌菌落形态特征培养基菌落形态甘露醇氯化钠琼脂金黄色，圆形凸起，边缘整齐，外围有黄色环，菌落直径0.7～1mm卵黄氯化钠琼脂金黄色，圆形凸起，边缘整齐，外围有卵磷脂分解的乳浊圈，菌落直径1～2mm若平板上生长的菌落与表7 所列的菌落特征相符或疑似，应挑选2～3 个菌落，分别接种于营养琼脂培养基斜面上，培养18～24 小时。
取营养琼脂培养基的培养物进行革兰染色，并接种于营养肉汤培养基中，培养18～24 小时，作血浆凝固酶试验。
血浆凝固酶试验取灭菌小试管3 支，各加入血浆和无菌水混合液（1∶1）0.5ml，再分别加入可疑菌株的营养肉汤培养物（或由营养琼脂培养基斜面培养物制备的浓菌悬液）0.5ml、金黄色葡萄球菌营养肉汤培养物（或由营养琼脂培养基斜面培养物制备的浓菌悬液）0.5ml、营养肉汤或0.9%无菌氯化钠溶液0.5ml，即为试验管、阳性对照管和阴性对照管。
将3 管同时培养，3 小时后开始观察直至24 小时。
阴性对照管的血浆应流动自如，阳性对照管血浆应凝固，若试验管血浆凝固者为血浆凝固酶试验阳性，否则为阴性。
如阳性对照管或阴性对照管不符合规定时，应另制备血浆，重新试验。
若上述疑似菌为非革兰阳性球菌、血浆凝固酶试验阴性，判供试品未检出金黄色葡萄球菌。
（6）梭菌（Clostridium）取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml）2 份，其中1 份置80℃保温10 分钟后迅速冷却。
上述2 份供试液直接或处理后分别接种至100ml 的梭菌增菌培养基中，置厌氧条件下培养48 小时。
取上述每一培养物0.2ml，分别涂抹接种于含庆大霉素的哥伦比亚琼脂培养基平板上，置厌氧条件下培养48～72 小时。
若平板上无菌落生长，判供试品未检出梭菌；若平板上有菌落生长，应挑选2～3 个菌落分别进行革兰染色和过氧化氢酶试验。
过氧化氢酶试验取上述平板上的菌落，置洁净玻片上，滴加3%过氧化氢试液，若菌落表面有气泡产生，为过氧化氢酶试验阳性，否则为阴性。
若上述可疑菌落为革兰阳性梭菌，有或无卵圆形或球形的芽孢，过氧化氢酶阴性，判供试品检出梭菌，否则判供试品未检出梭菌。
（7）白色念珠菌（Candida albicans）取供试液10ml（相当于供试品1g、1ml、10cm2）直接或处理后接种至适量（不少于100ml）的沙氏葡萄糖肉汤培养基中，培养48～72 小时。
取上述培养物划线接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基平板上，培养24～48 小时（必要时延长至72 小时）。
白色念珠菌在沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的菌落呈乳白色偶见淡黄色，表面光滑有浓酵母气味，培养时间稍久则菌落增大，颜色变深、质地变硬或有皱摺。
若平板上无菌落生长或生长的菌落与上述菌落形态特征不符，判供试品未检出白色念珠菌。
如平板上生长的菌落与上述菌落形态特征相符或疑似，应挑选2～3个菌落分别接种至念珠菌显色培养基平板上，培养24～48 小时（必要时延长至72 小时）。
若平板上无绿色或翠绿色的菌落生长，判供试品未检出白色念珠菌。
若平板上生长的菌落为绿色或翠绿色，挑取相符或疑似的菌落接种于1%吐温80-玉米琼脂培养基上，培养24～48 小时。
取培养物进行染色，镜检及芽管试验。
芽管试验挑取1%吐温80-玉米琼脂培养基上的培养物，接种于加有一滴血清的载玻片上，盖上盖玻片，置湿润的平皿内，置35～37℃、1～3 小时，置显微镜下观察，可见到由孢子长出短小芽管。
若上述疑似菌为非革兰阳性菌，显微镜未见厚膜孢子、假菌丝、芽管，判供试品未检出白色念珠菌。
结果判断供试品检出控制菌或其他致病菌时，按一次检出结果为准，不再复试。