抗生素类药物的质量分析方法
生物药物分析与检测抗生素药物分析
2．旋光性 四环素类抗生素分子结构中具有不对称碳原子，有旋光 性，可用于定性、定量分析。
第四节 四环素类抗生素
一、化学结构与性质
（二）性质 3．紫外吸收和荧光性质 四环素类抗生素分子结构中具有共轭双键系统，在紫外
区有吸收，在紫外照射下可产生荧光，它们的降解产物也 具有荧光。 4．与金属离子络合
第四节 四环素类抗生素
一、化学结构与性质 （一）化学结构
四环素类抗生素具有十二氢化并四苯基本结构，属于广 谱抗菌药物。
药物名称
四环素 金霉素
R
H Cl
R1 OH OH
R2
R3
CH3 H CH3 H
第四节 四环素类抗生素
一、化学结构与性质
（二）性质 1．酸碱性与溶解度 本类抗生素结构中含有酚羟基、烯醇型羟基，显弱酸性，
与金属离子Ca2+ 、Mg2+、Fe3+、Al3+生成有色配位化合 物，并在pH3 ~ 7.5产生荧光。
第四节 四环素类抗生素
一、化学结构与性质
（二）性质 5．不稳定性 （1）差向异构化 弱酸性（pH2.0~6.0）溶液中，A环上手性C4构型的改变，
发生差向异构化，形成差向四环素。 四环素和金霉素很易差向异构化，形成4-差向四环素、4-
第三节 氨基糖苷类抗生素
三、特殊杂质检查及组分分析
取本品适量，精密称定，加水制成含0.65mg·ml-1的溶液， 取4ml置10ml容量瓶中，加异丙醇2ml与邻苯二醛试液 1.6ml，用异丙醇稀释至刻度，摇匀，置60℃水浴中加热 15min，冷却，滤过，量取滤液10μl注入高效液相色谱仪， 记录色谱图。另取庆大霉素标准品，同法测定。C组分的 保留时间依次为：C1、C1α、C2α、C2。量取C1、C1α、C2α、 C2的峰高，按峰面积归一化法计算：
抗生素质量分析研究和质量标准的制定
抗生素分类和研发策略
根据化学结构（目前较好的分类方法）
• ß-内酰胺－头孢菌素类
第一代： 头孢乙氰(Cefacetril) 头孢氨苄(Cefalexin) 头孢噻吩(Cefalotin) 头孢拉定(Cefradine) 头孢噻啶(Cefalordiine) 头孢羟氨苄(Cefadroxil) 头孢唑啉(Cefazolin) 头孢去甲唑啉(Ceftezole) 头孢吡啉(Cefapirin)
核糖霉素（Ribostamycin）
抗生素分类和研发策略
分类 根据化学结构（目前较好的分类方法）
• 大环内酯类
14元大环内酯
红霉素（Erythromycin）
依托红霉素（Erythromycin estolate）
地红霉素（ Dirithromycin ） 克拉霉素（Clarithromycin） 罗红霉素（Roxithromycin）
0 0%
峰高随含水量的变化曲线
10%
20%
30%
溶剂含水量（%）
变构1峰高 变构2峰高 主峰峰高
2000 1500 1000
500 0 0
放置时间对变构的影响
50
100
时间（分钟）
变构1峰高 变构2峰高 主峰峰高
乙腈溶解样品的HPLC图谱 乙腈-水溶解样品的HPLC图谱
抗生素质量研究热点
3. 异构体
抗生素质量研究热点
1. 结构确证：强调水合物和盐
• 方法 ➢ 核对生产工艺 ➢ 是否有单晶x-射线衍射结果 ➢ 单晶与粉末x-射线衍射结果是否一致 ➢ 利用TG、DSC综合判断水分的结合形式 ➢ 测定药品碱/酸基与成盐反离子的比例
抗生素质量研究热点
2. 晶型
(抗生素类药物的分析)
ChP（2000
【鉴别】（3）本品显芳香第一胺类的鉴别反 应附（ 录附Ⅲ录一Ⅲ般）鉴。别试验
芳香第一胺类反应 取供试品约50mg，加稀盐酸 1ml，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mol/L 亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数滴， 视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。
青霉素G（苄青霉素）
青霉素钾 青霉素钠
（K）
（Na
）
氨苄西林（氨苄青霉素）
阿莫西林（羟氨苄青霉素）
普鲁卡因青霉素
·
磺苄西林钠
头孢菌素类
手性C
**
酰胺 侧链
不稳定
7-氨基头孢菌烷酸 酸性 （7-ACA）
头孢氨苄
头孢羟氨苄
头孢拉定
（二）性质 1. 羧基 酸性 pKa=2.5～2.8 *与碱金属成盐 易溶于水 *与有机碱成盐 难溶于水
0.4 1.4 12 92 336 218 125 31.2 9.3 1.4
半衰期(h)
温度对青霉素钠稳定性的影响
pH2，30′
温度℃ 5
26
37
↓%
6
77
97
二、鉴别反应 （一）羟肟酸铁反应
OH-
H+ Fe3+/3
红褐色
OH-
H+ Fe3+/3
例 磺苄西林钠
ChP（2000）
【鉴别】（1）取本品约20mg，加水15ml溶
取1ml，加入不少于200单位的青霉素酶溶液1ml
，
在37℃灭活1小时后，取灭菌滤纸片，分别用上述
溶液浸湿后，用滤纸吸去多余的液体，置摊布金
黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003] 的培养基上。
（二）检查
抗生素药物的质量分析以及各类抗生素的特点及应用
青霉素水溶液在pH 6～6.8时较稳定
例 青霉素的降解反应
H2O/OHˉ 青霉噻唑酸
青霉素酶
青
H2O
HgCl2
青霉酸
霉 pH2
100℃
素 pH4
青霉烯酸
青霉醛 青霉胺 CO2
NH2OH α–青霉噻唑酰基羟胺酸
头 孢 菌 素 酸 内 、 类 酰 碱 胺 酶、 降 失 胺类 解 效
(头孢噻吩钠水溶液25℃24h失活8%)
2. 茚三酮反应
CH2 COHN
NH2
O
S CH3
N
CH3
COOH
氨基 茚 三 酮 蓝紫色 △
CO C= O
CO
茚三酮
R H2N CH COOH
CO
C NCH2 R
CO 酮式
CO C NH2
C OH
+
CO C= O
CO
茚三酮
H2 O
缩合
CO
C N CHR
C 烯醇式
OH
CO
CO
CNC
C
CO
CH2 CONH
NH2
O
S
N
CH3
COOH
头孢氨苄
CH2 CONH
NH2
O
S
N
CH3
COOH
头孢拉定
HO
CH2 CONH
NH2
O
S
N
CH3
COOH
头孢羟氨苄
S
S
CH2 CONH
ON
CH2OCOCH3
COONa
头孢噻吩钠
（一）羧基
酸性：pKa值在2.5~2.8之间 与碱金属(Na+、K+)成盐后，易溶于水
抗菌药物与抗生素类的分析
A
B
TLC法 HPLC法 IR法
与丙二酸反应
C
D
E
鉴别试验
（一） 与丙二酸的反应
叔胺化合物
[示例] 诺氟沙星乳膏的鉴别：
取含量测定项下的供试品溶液5ml，置水浴上 蒸干，残渣中加丙二酸约50mg与酸酐1ml，在 水浴中加热10分钟，溶液显红棕色。
精密称取本品适量（约相当于诺氟沙星4mg ），置分液漏斗中，加 氯仿15ml，振 摇后，用氯化钠饱和的0.1 ％氢氧化钠溶液25、20、20和10ml分次提取，提取液置 100ml 量瓶中，加0.1 ％氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液 ，精 密量取续滤液10ml，加0.4 ％氢氧化钠溶液制成每1ml 中含5μg的溶液，照分光光 度法（附录Ⅳ A），在273nm 的波长处测定吸收度；另精密称取诺氟沙星对照品
CO2H
R4
N
R5 R1
结构与性质
（三）旋光性
O
F
CO2H
﹡ N
N
N
O
氧氟沙星
O
F
CO2H
﹡ N
N
N
O
左氧氟沙星
结构与性质
（四）与金属离子络合
➢与钙、镁、铁、锌等离子形成螯合物 ➢不宜与牛奶等食物或药品同服 ➢长期服用会引起缺铁、缺钙等
三、鉴别试验
与丙二酸 呈色反应
UV法
与叔丙胺二基酸反团应
棕红-红紫-蓝
1
溶解性
R2 O
2
酸碱两性
R3 X
CO2H
R4
N
3
紫外吸收
R5 R1
4
旋光性
5
分解反应
6 与金属离子反应
结构与性质
第12章抗生素类药物
检测三步曲示意图
•色谱流出物与通入 •的气体混合雾化
•蒸发除去流动相
•样品组分 •形成气溶胶
•强光照射气溶胶，产生散射光，检测
第四节 四环素类抗生素
一．化学结构与性质
（一）结构 四并苯或萘并萘的衍生物
• 多西环素：R3-羟基 • 美他环素：R3-羟基
• （二）性质
1．两性与溶解度
弱酸性
•酚羟基、2个烯醇型羟基
差向异构化 降解性质
（1）差向异构化
•pH2.0~6.0
•A
•A
PO43-、枸橼酸根、Ac-等阴离子：
可加速差向异构化
土霉素：不易差向异构化(氢键形成→较稳定)
（2）降解性 酸性下降解：6位上-OH与5a位上的H发生消去反应
•D •C •B
•D •C •B
•D •C •B •脱水四环素类
• 碱性降解：
• 羟氨苄青霉素（钠） 即阿莫西林（钠）amoxicillin
• 氨苄青霉素（钠） 即氨苄西林（钠）ampicillin
头孢菌素族代表药物：
头孢氨苄：氨苄头孢菌素 cefalexin
头孢羟氨苄：羟氨苄头孢菌素 cefadroxil
•（二）性质
溶解性 旋光性 酸性 β–内酰胺环的不稳定性 UV 特性
酸性条件下在阳离子交换柱上分离
反相色谱法
例：HPLC-蒸发光散射法测定硫酸依替米星含量 SP：ODS MP：三氟醋酸溶液-甲醇 分离模式：RP-离子对色谱 检测器：蒸发光散射
蒸发光散射检测器工作原理
• 检测三步曲
•雾化
•蒸
发
•检测
• 流动相要求：
必须是挥发性的，不能含有缓冲盐
• 样品要求：
阿莫西林的质量控制及检测方法
阿莫西林的质量控制及检测方法引言：阿莫西林是一种广泛应用于临床的抗生素，常用于治疗呼吸道、泌尿道和皮肤软组织感染等疾病。
作为一名专业医学人员，了解阿莫西林的质量控制及检测方法对于保障患者的用药安全至关重要。
本文将深入探讨阿莫西林的质量控制和检测方法，以帮助读者更好地了解这一药物。
一、质量控制的重要性阿莫西林作为一种抗生素，其药物质量直接关系到患者的治疗效果和安全性。
因此，对阿莫西林的质量进行严格控制是至关重要的。
质量控制的目标是确保阿莫西林的纯度、稳定性和安全性，以提供高质量的药物给患者使用。
二、质量控制的方法1. 化学分析方法化学分析方法是评估阿莫西林质量的主要手段之一。
常用的化学分析方法包括高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）和红外光谱法（IR）等。
这些方法可以通过测定药物的含量、杂质和纯度等指标来评估阿莫西林的质量。
2. 物理分析方法物理分析方法是评估阿莫西林质量的另一种重要手段。
常用的物理分析方法包括粒度分析、溶解度测定和热分析等。
这些方法可以评估阿莫西林的颗粒大小、溶解度和热稳定性等特性，从而判断其质量是否符合标准要求。
3. 生物学分析方法生物学分析方法主要用于评估阿莫西林的生物活性和生物等效性。
常用的生物学分析方法包括细菌抑制试验和动物药效学试验等。
这些方法可以评估阿莫西林的抗菌活性和药效学特性，从而判断其治疗效果和安全性。
三、质量控制的关键指标1. 含量阿莫西林的含量是评估其质量的重要指标之一。
高效液相色谱法（HPLC）是常用的测定阿莫西林含量的方法。
根据药典要求，阿莫西林的含量应在90%~110%之间，以确保其疗效的稳定性和安全性。
2. 杂质阿莫西林的杂质是评估其质量的另一个重要指标。
常见的阿莫西林杂质包括阿莫西林酸、阿莫西林二聚体和阿莫西林酯等。
高效液相色谱法（HPLC）和气相色谱法（GC）是常用的测定阿莫西林杂质的方法。
根据药典要求，阿莫西林的杂质含量应在一定范围内，以确保其纯度和安全性。
抗生素类药物的质量分析方法
抗生素类药物的质量分析方法引言抗生素是一类用于预防和治疗细菌感染的药物。
然而，由于抗生素在生产、运输和储存过程中可能遭受各种因素的影响，因此需要对其质量进行严格的分析和监控。
本文将介绍一些常用的质量分析方法，以帮助我们更好地评估抗生素类药物的质量。
1. 物理性质测试物理性质测试是衡量药物质量的重要手段之一。
以下是一些常见的物理性质测试方法：1.1 外观检查外观检查是最简单和直观的方法之一。
通过观察药物粉末或溶液的颜色、形状、气味等特征，可以初步判断其质量。
1.2 粒度测定粒度测定是通过测量药物粒子的大小分布来评估药物颗粒的均匀程度。
常用的方法包括激光粒度分析法和显微镜观察法。
1.3 溶解度测定药物的溶解度是指在一定温度下，在给定的溶剂中所能溶解的最大量的药物。
通过测定药物在不同条件下的溶解度，可以评估药物的纯度和溶解性。
2. 化学性质分析化学性质分析可以帮助我们确定药物的成分和纯度。
以下是一些常用的化学性质分析方法：2.1 紫外-可见光谱法紫外-可见光谱法是通过测定药物在紫外或可见光区的吸收特性来判断药物的纯度和含量。
该方法操作简单，结果准确可靠。
2.2 气相色谱法气相色谱法是通过将药物样品蒸发成气体，然后通过气相色谱仪进行分离和检测。
该方法适用于分析含量低的化合物，能够准确测定药物中各个成分的含量。
2.3 高效液相色谱法高效液相色谱法是将药物样品与流动相一起通过色谱柱，通过不同成分在固定相上的分离作用来进行分析。
该方法具有分离效果好、分析速度快的优点。
3. 生物学性质测试除了物理和化学性质的测试外，还可以使用生物学性质测试来评估抗生素类药物的质量。
以下是一些常用的生物学性质测试方法：3.1 抗菌活性测定抗菌活性测定是通过对药物对特定细菌的抑制活性进行评估来判断药物的有效性。
常用的方法包括纸片扩散法和克利金墨菌悬浮法。
3.2 细菌内毒素测试细菌内毒素是细菌细胞外毒素，能够引发一系列炎症反应。
通过测定药物样品中的细菌内毒素含量，可以评估药品的安全性和纯度。
罗红霉素胶囊质量标准
罗红霉素胶囊质量标准罗红霉素是一种广谱抗生素，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、立克次体、衣原体、支原体、螺旋体等都有较强的抑制作用，因此在临床上被广泛应用。
而作为一种常用的抗生素药物，罗红霉素胶囊的质量标准显得尤为重要。
本文将对罗红霉素胶囊的质量标准进行详细介绍。
一、外观和性状。
罗红霉素胶囊应为淡黄色或黄色颗粒或粉末，无明显气味。
其外观应整齐，无明显凝块和异物，胶囊应完整，无破损。
二、含量测定。
取罗红霉素胶囊粉末，精密称取，加入适量的甲醇，超声处理溶解，用甲醇定容至刻度，摇匀。
取适量溶液，经过滤，取上清液，测定罗红霉素的含量。
含量应符合国家药典规定的标准，且相对标准偏差不得超过2.0%。
三、溶出度。
取罗红霉素胶囊2个，粉末取样，精密称取，加入适量的磷酸缓冲液，振荡溶解，用磷酸缓冲液定容至刻度，摇匀。
取适量溶液，经过滤，取上清液，测定罗红霉素的溶出度。
溶出度应符合国家药典规定的标准，且不得低于80%。
四、微生物限度。
按照国家药典规定的方法进行检测，结果应符合规定的标准，即大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的数量不得超过1个/克，霉菌和酵母菌的数量不得超过100个/克。
五、不溶物。
取罗红霉素胶囊的粉末，精密称取，加入适量的无水乙醇，超声处理溶解，离心，取上清液，蒸干残渣，加入氯仿，振荡溶解，离心，取上清液，蒸干残渣，干燥至恒重，称取残渣质量。
不溶物的含量应符合国家药典规定的标准。
六、其它。
除了上述几项主要的质量标准外，罗红霉素胶囊还应符合国家药典规定的其它相关要求，如PH值、残留溶剂、重金属、有机氯农药等的检测。
综上所述，罗红霉素胶囊的质量标准是保证其药效和安全性的重要保障。
生产和使用单位应严格按照国家药典的标准进行质量控制，确保罗红霉素胶囊的质量稳定可靠，为临床治疗提供有效的保障。
头孢比罗酯钠质量标准
头孢比罗酯钠质量标准
头孢比罗酯钠是一种头孢菌素类抗生素，通常用于治疗各种感染。
其质量标准通常根据制药行业的相关规定和药典要求而确定。
下面是一般情况下头孢比罗酯钠的质量标准的一些主要要求：
1. 外观：头孢比罗酯钠应为白色或类白色的结晶性粉末，无可见异物。
2. 纯度：头孢比罗酯钠的纯度应符合相关药典标准，一般要求其纯度超过98%。
纯度测试通常包括高效液相色谱（HPLC）和质谱（MS）等分析方法。
3. 含量：头孢比罗酯钠的含量应符合制定的规范，一般以头孢比罗酯钠的有效成分含量为依据。
常见的含量测定方法包括HPLC、紫外分光光度法等。
4. 溶解性：头孢比罗酯钠应在指定的溶剂中能够溶解得足够快和彻底。
5. pH值：头孢比罗酯钠在水溶液中的pH值通常应在指定的范围内，以确保其稳定性和适合性。
需要注意的是，具体的头孢比罗酯钠的质量标准可能会因制药厂商、国家药典和药物监管机构的规定而有所差异，因此最准确和最具体的质量标准应以相应的官方发布的文献和规范为准。
对于具体的药物质量标准，最好在相关药典或相关机构的指导下进行查询和理解。
抗生素类药物的分析
• （4）坂口反应
R N=C NH2 NH2
链霉胍
BrO-
R N=C NHBr OHNH2
R N=C N- Br NH2
R N=C=N NH2
OH
O
O
N
BrO-
N
Br
Br
N
R N=C=N NH2
O
RNHCONH N 橙红色
此为链霉素水解产物链霉胍的特有反应。本品水溶液加氢氧化钠试 液， 水解生成链霉胍。链霉胍和8-羟基喹啉（或a-萘酚）分别同次溴酸 钠反应， 其各自产物再相互作用生成橙红色化合物
头孢菌素类母核在260nm有强的紫外吸收
（二）鉴别试验
（1）色谱法 HPLC:规定在含量测定项下的色谱图中，供试品主 峰的保留时间应与对照品主峰的保留时间一致 TLC: 比较供试品与对照品主峰斑点的比移值 是否一致 • 中国药典大多采用HPLC法进行鉴别
（2）光谱法 1．紫外吸收光谱（UV）
根据吸收光谱的特征数值，比如最大吸收波长 、吸收系数，鉴别原料药的真伪 2．红外吸收光谱（IR）
• （5）硫酸盐反应
SO 42 B H +2aBa4S白 O
（6）色谱法
（7）光谱法
（8）molisch试验来自（三）含量测定（链霉素、庆大霉素）
回顾
概述
β-内酰胺类抗生素
氨基糖苷类抗生素
Thank you!
抗生素类药物的分析
主要内容
概述 β-内酰胺类抗生素 氨基糖苷类抗生素
一、概述
（一）抗生素的定义
➢Text ➢Text ➢Text
抗生素是指在低微浓度下即可对某些生命活 动有特异抑制作用的化学物质。
抗生素主要是细菌、放线菌和真菌等微生物 的代谢产物，对各种病原微生物有强大的抑 制或杀灭作用。
抗生素类药物的分析
青霉素族
OH- R - SH （水解）
pH4.6 Hg 2+
（RS）2 Hg
2、方法
NaOH HNO3 Hg(NO3)2
水解 醋酸盐缓冲液 滴定
V样(总)
样
pH4.6
品
醋酸盐pH缓4冲.6液 Hg滴N定O32 V空降
以未经水解的样品作空白测定
剩余
反应分两步进行： （1）水解反应 (按化学计算量进行) （2）氧化-还原反应 (无固定的量关系， 受温度、PH值和时间等因素影响，应严 格控制反应条件并采用标准品平行对照 测定)
2、方法
+缓冲液+碘液+回滴 V样空 供试液
+碱+酸+缓冲液+碘液+回滴 V样
+缓冲液+碘液+回滴 V对空 对照液
四、含量测定 本类药物多采用理化测定方法进行
含量测定，Chp收载的主要方法有：碘量 法、电位配位滴定法、可见 –紫外分光 光度法、HPLC法等。
（一）碘量法 β-内酰胺类
1、原理
水解产物
定量过量
青霉素族 头孢菌素族
（N水aO解H） 4HHI+2+ 8I
I2＋Na2S2O3 2NaI＋Na2S4O6
（一）聚合物 中国药典对头孢他啶、头孢哌酮钠、
头孢噻肟钠等规定了各自聚合物的检查。
（二）有关物质和异构体
通常采用色谱法（HPLC、反相TLC 法等）检查β-内酰胺类抗生素中的有关 物质和异构体。
（三）吸收度
药典常采用测定杂质吸收度的方法来 控制本类抗生素的杂质含量。
例如：将青霉素钠（钾）配成1.80mg/ml 的溶液，在280nm处的A≦0.10（控制杂 质量）；264nm处的A为0.80～0.88（检 查药物量）。
抗生素类药物的分析
抗生素类药物的分析1. 引言抗生素是一类用于治疗由细菌引起的感染疾病的药物。
它们通过抑制或杀死细菌的生长来发挥作用。
抗生素类药物的分析对于研究其疗效、剂量和毒性等方面非常重要。
本文将对抗生素类药物的分析方法进行综述。
2. 抗生素的分类抗生素可以根据其来源、化学结构和作用方式进行分类。
常见的抗生素分类包括β-内酰胺类抗生素、四环素类抗生素、氨基糖苷类抗生素等。
每种类别的抗生素在分析方法上可能存在差异。
3. 抗生素分析方法3.1 色谱分析法色谱分析法是一种常用的抗生素分析方法。
它包括气相色谱法、液相色谱法和超高效液相色谱法等。
这些方法的优点是分离能力强、精确度高、灵敏度好。
例如，在β-内酰胺类抗生素的分析中，液相色谱法常用于测定不同种类抗生素的含量。
3.2 光谱分析法光谱分析法是另一种常见的抗生素分析方法。
它包括紫外-可见吸收光谱分析法、红外光谱分析法、质谱分析法等。
这些方法的优点是快速、简便，并且可以获得抗生素分子的结构信息。
例如，在四环素类抗生素的分析中，红外光谱法可以用来鉴定抗生素的结构。
3.3 生化分析法生化分析法是一种用于检测抗生素活性和毒性的方法。
常用的生化分析方法包括抗生素敏感性试验、最小抑菌浓度试验和细菌生长曲线分析等。
这些方法可以用于评估抗生素的疗效和剂量。
4. 抗生素研发与质量控制抗生素的研发和质量控制是抗生素分析中的重要环节。
研发阶段需要对抗生素进行结构解析、药效评价以及药代动力学和药物相互作用等研究。
质量控制阶段需要对抗生素进行质量指标的确定和检验，以确保其药效和安全性。
常用的质量控制方法包括纯度分析、杂质分析和稳定性分析等。
5. 抗生素分析在临床应用中的意义抗生素分析在临床应用中具有重要意义。
通过对抗生素的定量分析，可以确保患者在用药过程中获得正确的剂量；通过对抗生素的质量控制，可以保证抗生素的疗效和安全性。
抗生素分析还可以用于治疗过程中的药物监测，及时调整剂量和用药方案。
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抗生素类药物的质量分析方法
离子交换色谱法（IEC）
l 采用高效阴离子交换色谱分离硫酸庆大霉素、 硫酸新霉素和硫酸奈替米星及其杂质，然后采 用积分脉冲安培检测进行直接测定，不需衍生， 简便快速。
l 缺点：检测器的灵敏度对药物中的微量杂质仍 显不足，体系对有些组分的分离不尽理想，重 现性较差
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抗生素类药物的质量分析方法
一、色谱分析法
➢ 气相色谱法(GC) ➢ 高效液相色谱法(HPLC) ➢ 离子交换色谱法（IEC） ➢ 薄层色谱法(TLC) ➢ 高效毛细管电泳法(HPCE)
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抗生素类药物的质量分析方法
气相色谱法(GC)
氨基糖苷类抗生素为非挥发性化合物，且在紫外可见光 区无吸收，须先进行衍生化，使其适于分析。HoebusL 等用六甲基二硅烷柱前衍生测定大观霉素，用填充柱气 相色谱法，氢火焰离子化检测器检测，在75％一125％的 浓度范围内，呈良好的线性，杂质的定量限为0.1％。 PreuL等选择适当的衍生化试剂，采用毛细管气相色谱。 气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术分析氨基糖苷类抗生素 也是应用比较广泛的一种联用技术。
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抗生素类药物的质量分析方法
薄层色谱法(TLC)
l TLC作为一种定性的方法鉴别氨基糖苷类抗生素 已被各国药典广泛采用。扫描密度计与TLC技术 相结合产生的高效薄层色谱法(HPTLC)因其灵敏 度、分离度和准确度都有很大提高，已用于药 物定量分析。 TLC具有使用范围广，样品预处 理简单，优化展开剂的组成方便等优点，随着 吸附剂高效化，定量分析仪器化、自动化，TLC 仍然是不可替代的一种分析方法。
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ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
抗生素类药物的质量分析方法
高效液相色谱法(HPLC)
HPLC测定此类药物含量大多采用反相色谱或离子对色谱 系统，根据检测手段的不同可分为紫外检测、荧光检测、 电化学检测及质谱检测等。柱前衍生反相HPLC是此类药 物最为常用的一种测定方法。中国药典采用邻苯二甲醛 (0PA)柱前衍生化，紫外检测硫酸庆大霉素C组份。同时， 有报道用柱后衍生，荧光检测食品中的链霉素残留量。 为了避免使用衍生化试剂，可以采用灵敏度较高的电化 学检测器及采用LC-MS联用技术。LC-MS将HPLC的高分离 效能和质谱的高选择性、高灵敏度及丰富的结构信息相 结合，已成为重要的分离分析方法之一。
l 来源：仪器分析网
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抗生素类药物的质量分析方法
HPLC—蒸发光散射检测法(HPLC— ELSD)
l 近年来出现的蒸发光散射检测器(ELSD)由于其响应值不 依赖被测物质的光学性质，任何挥发性低于流动相的样 品均能被检测，并且物理性质相似的物质其响应因子基 本一致，灵敏度是示差折光检测器的2-10倍，现已逐渐 成为目前常用的通用型检测器。在用HPLC-ELSD法测定 硫酸小诺霉素(C2b)注射液时发现有些样品含有庆大霉素 C1a杂质；在分析庆大霉素C组分时发现有的样品在C2与 C2a峰之间有小诺霉素(C2b)杂质峰。由此看出，蒸发光 散射检测器的应用已为全面分析无紫外吸收的氨基糖苷 类抗生素的质量提供了一种新的手段。但本法也有一些 不足之处，例如灵敏度比紫外检测的低(2—3个数量 级)．数据处理相对繁琐。
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抗生素类药物的质量分析方法
高效毛细管电泳法(HPCE)
HPCE是一类以毛细管为分离通道，以高压直流 电场为驱动力的新型液相色谱分离技术。根据 分离模式的不同，又可分为毛细管区带电泳 (CZE)、毛细管等电聚焦(CIEF)、毛细管凝胶电 泳(CEC)，胶束电动毛细管色谱(MEKC)等。氨基 糖苷类抗生素的HPCE检测方法，最为常用的是 柱前及柱内衍生的CZE技术，然后进行紫外检测。
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抗生素类药物的质量分析方法
结构——庆大霉素
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抗生素类药物的质量分析方法
结构——链霉素
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抗生素类药物的质量分析方法
一、药典方法
中国药典(2000年版)，美国药典(25版)、英国药典 (2000年版)对氨基糖苷类抗生素的含量测定大多采用微 生物法，有关物质的检查大多采用薄层色谱法或反相高 效液相色谱法。微生物法作为一种经典的方法，仍被各 国药典所采用。本法系利用抗生素在琼脂培养基内的扩 散作用，采用量反应平行线原理设计，比较标准品与供 试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供 试品效价。微生物法所需设备简单，价格低廉，但影响 因素复杂，操作费时 。以下介绍本组同学查阅的其他 方法：
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抗生素类药物的质量分析方法
二、免疫法(IA)
l IA是近年发展起来的一种用于体内药物监测的 分析方法，将分析方法与免疫原理相结合，进 行超微量分析，具有灵敏度高、特异性强、用 样少等优点。
l 根据对抗原标记方法不同，IA可分为放射免疫 法 (RIA) ， 酶 免 疫 法 (EIA) ， 荧 光 免 疫 法 (FIA) ， 化学发光免疫法(CLIA)，毛细管电泳免疫分析 法（CEIA)和浊度免疫分析法。
抗生素类药物的质量分 析方法
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2020/11/20
抗生素类药物的质量分析方法
概况
l 抗生素是指在低浓度下即能杀灭或抑制其他病 原微生物的药物，按其结构可以分为β-内酰胺 类、四环素类、氨基糖苷类及其他抗生素。氨 基糖苷类抗生素是由氨基环醇与氨基糖缩合而 成的一类多羟基抗生素，是临床上常用的一类 广谱抗生素。可通过微生物发酵或半合成而制 得。目前药典收载的品种主要有：链霉素、卡 那霉素、阿米卡星、妥布霉素、奈替米星、依 替米星、庆大霉素、新霉素等
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抗生素类药物的质量分析方法
三、流动注射法(FIA)
流动注射法(FIA)是一种自动分析法，适用于医院制剂的 快速检验及中间体质量控制。 用恒流量泵使硫酸铁铵试剂和载液(水)流过内径为0.5l mm的四氟乙烯泵管，与进样口注量的一定浓度硫酸链霉 素水溶液在反应圈中混合，反应呈包，于520nm处用721 分光光计测A，通过对数转换器，在记录仪上获得相应 的峰高。 硫酸链霉素呈色原理：硫酸链霉素在NaOH中水解成麦芽 酚，与Fe3+呈色，在520nm处有最大吸收峰。