去甲斑蝥素片的制备工艺及其含量测定

去甲斑蝥素片的制备工艺及其含量测定

目的建立一种去甲斑蝥素片的制备方法，采用HPLC法检测去甲斑蝥素片的含量。方法以去甲斑蝥素为主药，以淀粉、微晶纤维素（MCC）、乳糖为填充剂，以羧甲基淀粉钠（CMS-Na）为崩解剂，以聚乙烯吡咯烷酮-K30（PVP-K30）为黏合剂，以硬脂酸镁为润滑剂，制备去甲斑蝥素片。采用高效液相色谱法（HPLC）检测去甲斑蝥素片的含量；HPLC色谱条件为Spherigel ODS-C18色谱柱；流动相：乙腈-pH 3.1磷酸水溶液（10∶90）（V/V）；流速：1.0 ml/min；柱温：25℃；检测波长：210 nm；进样量：20 μl。選定A（淀粉）、B（MCC）、C （CMS-Na）为考察因素，采用U7（73）均匀设计，通过溶出度指标优化去甲斑蝥素片的制备工艺。结果HPLC标准曲线方程：Y=925.374X-1778.8（r=0.9999）；线性范围：20～800 μg/ml。日内精密度RSD：1.880%、0.172%、0.945%；日间精密度RSD：1.420%、1.126%、1.468%。低、中、高浓度的回收率分别为（98.77±1.24）%、（100.08±1.14）%、（99.59±0.58）%（n=5）。均匀设计回归方程为：K=-0.107-0.004A+0.017B-0.025C-0.0002B2+0.007C2（F=245.312，P＜0.05）；确定优化处方组成为：淀粉10%、MCC 40%、乳糖43%、CMS-Na 7%；验证得溶出速率常数K为（0.332±0.019）/min。结论按优选处方制备的去甲斑蝥素片外形美观，流动性、润滑性、压缩成形性均良好；采用HPLC法可有效控制片剂质量。

[Abstract] Objective To establish a preparation method of Norcantharidin tablets，and to detect content of Norcantharidin Tablets by using HPLC method. Methods Norcantharidin tablets were prepared with norcantharidin as the main drug，microcrystalline cellulose （MCC）and lactose as the fillers，sodium carboxymethyl starch （CMS-Na）as the disintegrating agent，polyvinylpyrrolidone K30 （PVP-K30）as adhesive.Content of Norcantharidin tablets was detected with the method of HPLC；HPLC chromatographic conditions were：Spherigel ODS C18 chromatographic column；mobile phase：acetonitrile - pH 3.1 phosphoric acid aqueous solution （10∶90）（V/V）；the flow rate of 1.0 ml/min；column temperature 25 ℃；detection wavelength of 210 nm；sample quantity 20 μl.The factors A （starch），B （MCC）and C （CMS-Na）were selected，U7 （73）uniform design was adopted，and preparation of Norcantharidin tablets was optimized through the dissolution index. Results HPLC standard curve equation：Y=925.374X-1778.8 （r=0.9999）；linear range：20～800 μg/ml.The intra-day precision RSD were 1.880%，0.172%，0.945%；inter-day precision RSD were 1.420%，1.126% and 1.468%.Coefficient of recovery in low，medium and high concentrations were separately （98.77±1.24）%，（100.08±1.14）%，（99.59±0.58）% （n=5）.Uniform design regression equation was K=-0.107-0.004A+0.017B-0.025C-0.0002B2+0.007C2 （F=245.312，P＜0.05）；the optimized prescription composition was 10% starch，40% MCC，43% lactose and 7% CMS-Na；dissolution rate constant K was validated of （0.332±0.019）/min. Conclusion Norcantharidin tablets prepared with the optimized prescription preparation are with beautiful shape，good liquidity，lubricity and compression

formability；HPLC method can effectively control the quality of tablets.[Key words] Norcantharidin tablets；High performance liquid chromatography；Dissolution；Uniform design

去甲斑蝥素是人工合成的新型抗癌药物，其作用机制在于促进肿瘤细胞及感染的细胞死亡，在G2期与M期特异性地抑制肿瘤细胞的增殖及癌细胞DNA的合成，干扰细胞分裂，破坏癌细胞骨架及其超微结构，提高癌细胞呼吸控制率，调节机体免疫力；在抗癌的同时，可减少机体的不良反应。另外，去甲斑蝥素还具有升高白细胞的作用[1-3]，可用于原发性肝癌、消化道腫瘤，也适用于白细胞低下症、肝炎、肝硬化、乙型肝炎病毒携带者[4-5]。本研究制备去甲斑蝥素片，并采用高效液相色谱法（HPLC）评价其制剂质量，以期建立一种有效的药品检验方法，获得优化的去甲斑蝥素片制备工艺，有利于获得较好的抗肿瘤临床疗效。

1 材料与方法

1.1 试药与仪器

1.1.1 药品与试剂去甲斑蝥素（山东信谊制药有限公司，批号20130906）；淀粉（濮阳市华鲁药用辅料有限公司）；微晶纤维素（MCC，曲阜市天利药用辅料有限公司）；乳糖（镇江市康富生物工程有限公司）；羧甲基淀粉钠（CMS-Na，安徽山河药用辅料有限公司）；聚乙烯吡咯烷酮-K30（PVP-K30，博爱新开源制药股份有限公司）；硬脂酸镁（山东聊城阿华制药有限公司）；去甲斑蝥素标准品（上海永叶生物科技有限公司）；乙腈（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）；其他试剂均为分析纯。

1.1.2 仪器美国Agilent 1100 Series型高效液相色谱系统（紫外检测器，四元泵，Agilent 1100工作站，手动进样器，在线真空脱气机）；Spherigel ODS-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）（瑞士Spherigel公司）；ZP19型旋转式压片机（扬州诺亚机械有限公司）；ZRS-4型智能药物溶出试验仪（天津大学无线电厂）。

1.2 去甲斑蝥素的测定方法

1.2.1 HPLC色谱条件色谱柱：Spherigel ODS-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-pH 3.1磷酸水溶液（10∶90）（V/V）；流速：1.0 ml/min；柱温：25℃；检测波长：210 nm；进样量：20 μl。

1.2.2 HPLC标准曲线精密称取100 mg去甲斑蝥素标准品加入0.2%乙酸溶液，配制成1.0 mg/ml贮备液。分别稀释成浓度为800、400、200、100、50、25、20 μg/ml标准溶液，进样20 μl，以峰面积（Y）对质量浓度（X，μg/mL）回归得标准曲线方程。

1.2.3 精密度配制25、200、600 μg/ml去甲斑蝥素0.2%乙酸溶液，连续进样5次，计算日内精密度。另取25、200、600 μg/ml去甲斑蝥素0.2%乙酸溶液，