蒽环类抗肿瘤抗生素的测定方法

药物分析结课论文

题目：蒽环类抗肿瘤抗生素的分析方法

姓名：彭军

学号：2 0 0 9 0 7 1 9 2 2

班级：09应用化学3班

蒽环类抗肿瘤抗生素的分析方法

摘要：蒽环类药物是最具活性的抗肿瘤药物之一，对造血系统肿瘤和实体肿瘤具有高效的作用。在临床化疗方案中蒽环类药物呈现出明显的剂量—效应线性关系。但随着剂量的增加，其骨髓抑制、心脏毒性、脱发等副作用也愈加突出，尤其是心脏毒性的累积作用，限制了它的长期使用。因此长期以来对于蒽环类抗生素的测定有较多的研究本文综述了蒽环类抗生素为主要研究对象，研究和发展了用高效液相色谱法、电化学法等测定这类药物的新体系和新方法。

关键词：综述蒽环类抗肿瘤抗生素表面增强拉曼散射法高效液相色谱电化学法分光光度法毛细管电泳法

1高效液相色谱(HPLC)

高效液相色谱是测定蒽环类抗生素的重要的方法之一，中国药典己将HPLC法定为多柔比星、柔红霉素等蒽环类抗肿瘤药物的标准分析方法[1]。

目前所报道的高效液相色谱法主要是用于蒽环类抗生素及其代谢物的分离和测定。如利用高效液相色谱和电化学方法检测测定了人体血浆中表柔比星、13-S-二氢表柔比星、阿霉素和13-S-氢阿霉素[2]。此方法可以同时测定四种药物或是表柔比星和他的代谢物，以及柔红霉素和它的代谢物。用阿霉素作为内标物质可以用这种方法分析服用过表柔比星的病人的血样。另外HPLC己发展成为专一性测定全血和不同组织中(肝、心脏、脾和肾)米托蒽醌的方法[3]。提取出的米托葱醒加入到内标物质aroetsLntrone中。不同组织在含有20%抗坏血酸的柠檬酸缓冲溶液中均匀化。C18柱将米托蒽醌与内标物质分离，流动相含有33%的乙睛和0.16M的甲酸按缓冲溶液，在pH2.7时利用吸收光谱进行检测，测定波长为658nm。全血和组织中的线性范围为2-200µg/mL和2-700µg/rnL。实验表明精密度和重现性较好，适合用于不同组织中米托蒽醌分布的药代动力学研究。

液相色谱仪和质谱仪联用，是对复杂组分分析最有效的手段之一，自80年代诞生以来

己得到快速发展。该技术结合了色谱对复杂基体化合物的高分离能力与质谱独特的选择性、灵敏度、分子量及结构信息于一体，具有广泛的应用领域。Rachelwan等[4]建立了利用高效液相色谱-大气压电离质谱法(HPLC-APCI一S)测定血清和细胞样品中的表柔比星的新方法。以柔红霉素为内标，表柔比星代谢物通过质谱的裂解方式可以容易区别出来。该方法己经应用于分析癌症细胞样品中的表柔比星，并且用于确认临床病人血清样品中己知或未知的代谢物。龚晓丽等[5]研究建立了测定大鼠血浆及组织中表阿霉素浓度的方法。此方法的特点是采用了RP-HPLC荧光和质谱两种检测器。质谱以MRM模式测定，内标法定量。荧光检测峰位于λEx=450nm，λEm=530nm，结果荧光检测标准曲线在2.44~2.50 ×103µg/L有良好线性，定量限µg/L，质谱检测标准曲线在0.49~2.00×103µg/L有良好线性，定量限0.49µg/L，该方法快速简便、灵敏准确，适用于血浆及组织中表阿霉素的测定及药物动力学研究。

2毛细管电泳法

毛细管电泳是近年来发展迅速的一种新的分离分析技术，与传统的分离分析手段相比较，具有高效、快速、微量和易于自动化等优势。毛细管电泳法分析抗生素的研究正引起人们的关注。王建[6]等用高效毛细管电泳法分别测定了盐酸表柔比星和盐酸多柔比星的含量。以β一萘环酸钠为内标，考察不同实验条件下两种药物的胶束电泳毛细管电泳行为，于231nm波长处测定。结果表明该方法快速简便，且稳定性好。

在文献报道中，以细管电泳与激光诱导荧光联用分离测定蒽环类抗生素最为常见。Gcorg HemPel等[7]将毛细管电泳与激光诱导荧光用于测定血浆中的道诺霉素和道诺红菌素醇。Adrian B.Anderson等[8]将毛细管电泳与激光诱导荧光用于分离测定多柔比星及其代谢物。此法的最大特点在于使用了两个萃取过程:液一液萃取和反一毛细管单细胞溶解。在液一液萃取过程中，多柔比星的回收率为50%一99%，单细胞溶解分析过程可以全部回收，而且分离毛细管中的单细胞溶解过程可以阻止多柔比星或其代谢物在这期间遗失或溶解。Nina Griese等[9]用毛细管电泳法定量的快速测定儿童的50μL血浆中的脂质体柔红霉素，游离柔红霉素和它的代谢物。此方法涉及到固相萃取然后经过毛细管电泳测定和激光诱导荧光检测。游离柔红霉素它的代谢物检出限为，精确度和准确度都符合生物分析方法的要求，且方法快速并且以用于多组样品的同时测定。

3 电化学法

电化学方法在蒽环类抗肿瘤抗生素与核酸相互作用的研究中越来越多，为二者的反应机理提供了非常重要的信息。在葱环类抗肿瘤抗生素的测定中，电化学方法也起了非常重要的作用。

龚兰新等[10]用固定在氧化铟锡(ITo)电极上的多壁碳纳米管为基底吸附纳米钴，制备了复合纳米材料修饰的电极(Co/CNT/ITo)。用纳米钴碳纳米管/ITO电极，研究了阿霉素的电化学行为。该体系具有吸附性的不可逆过程，峰电位为0.65V(vs.Ag/AgCl)，峰电流与阿霉素浓度在1.0×10-9-5.0×10-7mol/L范围内呈线性关系;检出限为1.0×10-9mol/L。Hui Jiang 等[11]研究了利用碳纳米修饰电极测定柔红霉素的新方法。纳米碳与柔红霉素之间的超分子作用可导致电子转移能力显著增强，因此大大地增加了检测的灵敏度。在最佳实验条件，柔红霉素的线性范围为20～500nM，检测灵敏度为5.9nA/nM，将此方法用于模拟血清样品中测定，结果满意。

武五爱等[12]研究了在弱酸性条件下，以邻氨基酚为单体交联剂，米托蒽醌为模板分子，用循环伏安法电聚合成米托蒽醌分子印迹聚邻氨基酚敏感膜传感器。该传感器对米托蒽醌具有良好的选择性和敏感度，米托慈醒浓度分别在3.3×10-7-1.0×10-5比及 1.0×10-5一5.0×10-5mol/L范围内与峰电流减小量呈线性关系，检测下限为1.6×10-7mol/L，同时对分子印迹膜的结构和性能进行了研究。

4分光光度法

由于分光光度法具有方法简便、分析精度高、重复性好，可测范围广，仪器价廉等优点，而成为药物分析中应用较多的一类方法。蒽环类抗肿瘤抗生素的分子是由一个四环发色团(糖苷配基)通过糖苷链与一个或几个糖或氨基糖连接而成的化合物。因此它们在可见光区均有吸收，如柔红霉素最大吸收波长位于498nm，表柔比星的最大吸收波长为496nm，米托蒽醌则存在两个吸收峰分别为609nm和663nm。药典中盐酸米托葱醒的测定方法就是利用它们在可见光区663nm处的吸收进行测定的[13]。但因测定的灵敏度不高，因此发展高灵敏的简便的测定蒽环类抗肿瘤抗生素的分光光度法是十分有意义的。

周泽清等[14]以乙醇为溶剂，采用分光光度法测定米托蒽醌的含量。米托蒽醌浓度在4～10mg/L范围，线性关系良好r=0.9999)，方法的平均回收率为99.20%，RsD为0.20%(n=8);7