复习思考题及答案1用光学显微镜观察细菌时为什么一般都需要

第四章复习思考题及答案

1. 用光学显微镜观察细菌时, 为什么一般都需要先将细菌进行染色？制作细菌染色标本片时，为什么必须先对涂在载玻片上的细菌样品进行固定？固定时应注意什么问题？

答：由于细菌细胞小且无色透明, 直接用光学显微镜观察时, 菌体和背景反差很小，难

以看清细菌的形态, 更不易识别某些细胞结构, 因此，一般都需要先将细菌进行染色, 借助于颜色的反衬作用, 以提高观察样品不同部位的反差, 能更清楚地进行观察和研究。此外，某些染色法还可用于鉴别不同类群的细菌, 故细菌的染色是工业微生物学实验中重要的基

本技术。

染色前必须先对涂在载玻片上的细菌样品进行固定，固定的作用一是杀死细菌并使菌体

粘附于玻片上, 一是增加菌体对染料的亲和力。一般常用酒精灯火焰加热固定的方法，但

应注意防止细胞膨胀和收缩，尽量保持细胞原形。

2. 革兰氏染色法包括哪几个基本步骤？你认为影响革兰氏染色结果正确性的关键环

节是什么？

答：革兰氏染色法的基本步骤是: 先用初染剂草酸铵结晶紫进行初染, 再用媒染剂碘液媒染,然后用脱色剂乙醇处理, 最后用复染剂石炭酸复红或番红进行复染。经此法染色后, 若细菌不被酒精脱色，能保持结晶紫与碘的复合物而呈现蓝紫色，则该菌称为革兰氏阳性细菌(G+)；反之，若细菌能被酒精脱色，而被复红或番红复染成红色, 则称之为革兰氏阴性细菌(G-)。被普遍采用的经Hucker氏改良的革兰氏染色法, 其操作步骤为：制片→初染→媒染→脱色→复染→干燥→观察。

影响革兰氏染色结果正确性的关键环节是用脱色剂乙醇处理, 为了保证革兰氏染色结

果的正确性, 必须控制乙醇脱色时间, 尽量采用规范的染色方法。

3. 放线菌、酵母菌和霉菌显微标本片的制作分别可采用哪些方法？各有什么特点？

答：放线菌与细菌的单染色一样，可用石炭酸复红或吕氏美兰等染料着色后，在显微镜下观察其形态。但为了观察放线菌在自然生长状态下的形态特征, 可应用各种培养、制片和

观察方法, 其中印片法、插片法和玻璃纸法是三种常用的方法。

观察酵母菌形态可制备水浸片，若加入一滴美兰染色液，还可区别死活细胞（呈兰色的为死细胞，无色的为活细胞）, 这是因为活细胞具有较强的还原能力，能使无毒性的美蓝从

蓝色的氧化型变成无色的还原型。

霉菌具有复杂分枝的菌丝体, 分基内菌丝和气生菌丝。由气生菌丝分化产生繁殖菌丝, 再由繁殖菌丝产生孢子。霉菌菌丝较粗大，制片时容易收缩变形，孢子也容易分散。为了得

到清晰、完整、保持自然状态的标本片，常用载片培养法和玻璃纸培养法进行制片观察。

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