蛋白质变性与沉淀

下次实验： P70页
酶的特异性
实验报告可以下课交， 最晚明天交，请组长负起 责任。谢谢同学们配合！
实验项目 蛋白质变性与沉淀
一、实验目的
1.掌握蛋白质变性与沉淀 的原理及各种沉淀方法； 2.熟悉刻度吸量管的正确 使用； 3.了解蛋白质变性与沉淀 两者的关系。
二、实验原理
（一） 蛋白质沉淀原理
蛋白质溶于水形成稳定的胶体溶液， 维持蛋白质胶体溶液稳定因素：
1.蛋白质颗粒表面的水化膜；
2.蛋白质颗粒表面的电荷。
1.仪器 试管、刻度吸量管、洗耳球等。
2.试剂 5％蛋白质溶液、 2.5％蛋白质
溶液、10％ZnSO4溶液、 o.1mol/LNaOH、 1％三氯醋酸、无 水乙醇、NaCl（固体）
四、实验内容及操作步骤 （一）实验内容 1.重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质 2.乙醇沉淀蛋白质
（二）操作步骤
ຫໍສະໝຸດ Baidu
1.重金属盐及有机酸类沉淀蛋白质
溶液 结晶NaCl 无水乙醇
现象
试管1 0.5 mL
— 1mL
试管2
0.5 mL 数粒（适量）
1mL
3）观察、记录实验现象，并解释之。
五、注意事项 1.试剂瓶滴管不能交叉使用，否则污 染试剂。 2.刻度吸量管不能交叉使用，否则污 染试剂，影响反应现象。 3. 做完实验把把试剂按原样摆放，试 管和刻度吸量管冲洗干净，桌面擦干净， 登记签名。 4.值日生听老师安排，认真打扫，经 老师批准才能离开实验室。
试管1 2D 2D 20D —
现象
试管2 2D — — 20D
试管3 2D — 20D —
3）观察、记录实验现象，并解释之。
2. 乙醇沉淀蛋白质 1）实验原理 乙醇溶解于水，破坏蛋白 质分子的水化膜，加入少量中 性盐抑制蛋白质的解离，使电 荷减少，沉淀更完全。
2）操作步骤
试剂（mL） 2.5%蛋白质
去除上述稳定因素可使蛋白质沉淀 析出。
蛋白质沉淀析出常用的方法有等 电点法、盐析法、重金属离子沉淀 法、有机酸试剂沉淀法、有机溶剂 沉淀法等。
（二）蛋白质变性原理
蛋白质受某些物理或化学因素 的影响，空间结构发生改变，生 物活性丧失。称为蛋白质变性。
蛋白质变性，分可逆；不可逆。
三、实验仪器与试剂
1）实验原理
负电荷
OHCOO-
COOP
pH > pI NH2
重金属离子M+
P
H+ NH3+
COOH P
pI pH < pI NH + 3
两性离子 正电荷
酸根X-
盐↓
COO-M+
P NH
2
COOH
P NH3+X-
盐↓
2）操作步骤
试剂（滴） 5%蛋白质溶液 0.1mol/L NaOH
10% ZnSO4 1%三氯醋酸
六、思考题
1.临床抢救重金属中毒患者，为 什么用鸡蛋清或牛奶？
2.蛋白液中加入适量乙醇，为什 么会产生沉淀？
3.蛋白液在碱性条件下加入 ZnSO4 ，为什么会产生沉淀？
4.蛋白液中加入三氯醋酸 ，为 什么会产生沉淀？
下次实验： P74页
激活剂及抑制剂对酶活性的影响
实验报告明天交，请组长负起责 任。谢谢同学们配合！