病毒转基因技术原理 概述ppt
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课程内容
分为理论课与实践课 转基因技术概述 病毒转基因技术原理、纯化制备技术和医学应用
—DNA病毒 —RNA病毒 —源自文库合病毒
生物安全 医学伦理问题 表达外源基因的复制缺陷型重组腺病毒的构建和鉴定
-
研究生高水平课程——《病毒转基因技术原理》
第一章 转基因技术概述
范雄林 86-27-83650639 xlfan@hust.edu.cn 华中科技大学同济医- 学院病原生物学系
转染 (transfection)
定义
现象
分类
-
用途
转化 （transformation ）
现象: 肺炎链球菌的转化试验 定义: 分类和应用:自然转化:感受态,宿主菌种类
人工转化: 低温CaCl2、电穿孔
-
小鼠的肺炎链球菌的转化试验
-
转导(transduction )
现象:“U”型管实验 定义: 分类和应用:普遍性转导
2012年12月欧盟批准地全球第三种基因治疗药物上市。
迄今，多达1900种基因治疗临床试验方案并正在进行临床 试验。转基因技术正成为分子医学的一种革命性的技术手段， 并已成为治疗许多遗传性和获-得性疾病的潜在希望所在。
问题
社会公众对健康需求的增加 生命科学和医学研究的推动 对转基因技术的安全和伦理关注持续增加。
-
基因转移入真核细胞的影响因素
转移入原核细胞的影响因素:
限制-修饰系统 质粒宿主范围和相容性 同源重组与非同源重组
真核与原核细胞具有显著区别; 外源基因要进入真核细胞，要突破三大障碍; 理想的转基因技术方法
-
外源基因转移入真核细胞的类型和方法
质粒型载体:
物理方法 传统的针头注射
显微注射 粒子轰击 电穿孔 流体动力学 包裹微球
化学方法 超声
磷酸钙法 脂质体法 DEAE-D- xtran法
常用的物理方法介导基因转移
-
外源基因转移入真核细胞的类型和方法
病毒颗粒型载体(病毒介导的转基因技术)
假型病毒载体（复制缺陷性病毒载体）：具有感染性 重组型病毒载体：具有感染性
DNA病毒载体：AdV, AAV,HSV-1,etc. RNA病毒载体: HIV, etc. 杂合型病毒载体
主要内容
基因转移方式 真核细胞的转基因技术 外源基因表达读框的构建原理
-
1. 定 义
基因转移（gene transfer）: 自然发生
转基因技术(transgene technology): 人工利用
-
2. 常见的基因转移方式
转化(transformation)
转导(transduction )
课程背景
1980s, 转基因技术随分子克隆技术出现
2003年，我国SFDA批准了全球第一种基因治疗药物“今 又生”上市。（State Food and Drug Administration）
2005年，我国SFDA批准了全球第二种基因治疗药物 HB101上市。（国家食品药品监督管理局）
2009年12月18日出版的《Science》杂志将”return of gene therapy”作为年度重大的科学突破之一。
局限性转导
-
局限性转导
-
转染 (transfection)
现象: 感染(infection)、病毒感染 定义: 广义和狭义 分类和应用:物理化学方法
生物学方法(病毒载体)
-
野生型病毒的自然感染、病毒载-体转染和质粒经化学法介导的转染
3. 基因转移入真核细胞的方法
基因转移入真核细胞的影响因素 外源基因转移入真核细胞的类型 和方法 构建外源基因的基本要素
-
-
不同类型转基因技术方法的优缺点比较
-
构建外源基因的基本要素
转录控制元件 翻译控制元件 病毒复制包装信号
-
复习思考题
影响外源基因进入真核细胞的因素。 物理、化学和病毒载体转基因技术的优缺
点比较。 不同病毒载体转基因技术的优缺点比较。 外源基因表达读框的构建原理。
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课程内容
分为理论课与实践课 转基因技术概述 病毒转基因技术原理、纯化制备技术和医学应用
—DNA病毒 —RNA病毒 —源自文库合病毒
生物安全 医学伦理问题 表达外源基因的复制缺陷型重组腺病毒的构建和鉴定
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研究生高水平课程——《病毒转基因技术原理》
第一章 转基因技术概述
范雄林 86-27-83650639 xlfan@hust.edu.cn 华中科技大学同济医- 学院病原生物学系
转染 (transfection)
定义
现象
分类
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用途
转化 （transformation ）
现象: 肺炎链球菌的转化试验 定义: 分类和应用:自然转化:感受态,宿主菌种类
人工转化: 低温CaCl2、电穿孔
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小鼠的肺炎链球菌的转化试验
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转导(transduction )
现象:“U”型管实验 定义: 分类和应用:普遍性转导
2012年12月欧盟批准地全球第三种基因治疗药物上市。
迄今，多达1900种基因治疗临床试验方案并正在进行临床 试验。转基因技术正成为分子医学的一种革命性的技术手段， 并已成为治疗许多遗传性和获-得性疾病的潜在希望所在。
问题
社会公众对健康需求的增加 生命科学和医学研究的推动 对转基因技术的安全和伦理关注持续增加。
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基因转移入真核细胞的影响因素
转移入原核细胞的影响因素:
限制-修饰系统 质粒宿主范围和相容性 同源重组与非同源重组
真核与原核细胞具有显著区别; 外源基因要进入真核细胞，要突破三大障碍; 理想的转基因技术方法
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外源基因转移入真核细胞的类型和方法
质粒型载体:
物理方法 传统的针头注射
显微注射 粒子轰击 电穿孔 流体动力学 包裹微球
化学方法 超声
磷酸钙法 脂质体法 DEAE-D- xtran法
常用的物理方法介导基因转移
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外源基因转移入真核细胞的类型和方法
病毒颗粒型载体(病毒介导的转基因技术)
假型病毒载体（复制缺陷性病毒载体）：具有感染性 重组型病毒载体：具有感染性
DNA病毒载体：AdV, AAV,HSV-1,etc. RNA病毒载体: HIV, etc. 杂合型病毒载体
主要内容
基因转移方式 真核细胞的转基因技术 外源基因表达读框的构建原理
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1. 定 义
基因转移（gene transfer）: 自然发生
转基因技术(transgene technology): 人工利用
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2. 常见的基因转移方式
转化(transformation)
转导(transduction )
课程背景
1980s, 转基因技术随分子克隆技术出现
2003年，我国SFDA批准了全球第一种基因治疗药物“今 又生”上市。（State Food and Drug Administration）
2005年，我国SFDA批准了全球第二种基因治疗药物 HB101上市。（国家食品药品监督管理局）
2009年12月18日出版的《Science》杂志将”return of gene therapy”作为年度重大的科学突破之一。
局限性转导
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局限性转导
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转染 (transfection)
现象: 感染(infection)、病毒感染 定义: 广义和狭义 分类和应用:物理化学方法
生物学方法(病毒载体)
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野生型病毒的自然感染、病毒载-体转染和质粒经化学法介导的转染
3. 基因转移入真核细胞的方法
基因转移入真核细胞的影响因素 外源基因转移入真核细胞的类型 和方法 构建外源基因的基本要素
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不同类型转基因技术方法的优缺点比较
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构建外源基因的基本要素
转录控制元件 翻译控制元件 病毒复制包装信号
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复习思考题
影响外源基因进入真核细胞的因素。 物理、化学和病毒载体转基因技术的优缺
点比较。 不同病毒载体转基因技术的优缺点比较。 外源基因表达读框的构建原理。
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