免疫学技术论文

鲁东大学生命科学学院2013 －2014 学年第一学期《免疫学技术(Immunological Technique)》课程论文课程号：2522340-01

任课教师王晓洁成绩

正文

【提要】免疫胶体金技术是四大免疫标记技术之一，已经成为继荧光素、放射性同位素和酶之后，在免疫标记技术中常用的非放射性示踪剂。1971年Faulk和Taytor将胶体金引入免疫化学，此后免疫胶体金技术（ICG）作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。免疫胶体金技术有很多种，目前医学检验中应用的免疫胶体金快速诊断技术主要有两种：胶体金快速免疫层析法和快速斑点免疫金渗滤法（DIGFA）。这两种方法的基本原理都是以微孔滤膜为载体，包被已知抗体或抗原，加入待检标本后，经滤膜的毛细管作用或渗滤作用使标本中的抗原或抗体与膜上包被的抗体或抗原结合，再用胶体金结合物标记而达到检测目的。

【关键词】胶体金硝酸纤维素膜免疫快速层析技术

【正文】

一、胶体金快速免疫层析技术的基本原理

免疫层析法是20世纪90年代国外兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体或抗原先固定与硝酸纤维素（NC）膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素膜一端浸入样品（尿液或血清）后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体或抗原的区域时，样品中相应的抗原或抗体即与该抗体或抗原发生特异性结合，再通过标记技术使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。胶体金

免疫层析（GICA）就是利用胶体金本身的显色特点结合免疫层析技术诊断特异性的待测物。同样是层析法的金标纸条，根据胶体金标记的抗原或抗体不同可分成间接法、竞争法和双抗体夹心法等不同种类。例如德国BOEHRINGER MANNHEIM公司生产的测定缺血性心肌损伤试剂条，只需要130~160μL血，灵敏度达到0.1ng/mL肌钙蛋白-T，5~20min出结果。

二、快速斑点免疫金渗滤技术的基本原理

斑点免疫渗滤技术（DIFA）真正推广使用始于1985年，美国的Valkirs 等运用斑点免疫酶渗滤法检测人绒毛膜促性腺激素获得了成功。1989年Spielberg等又利用胶体金代替酶来检测抗HIV，从而建立了斑点免疫金渗滤技术（DIGFA）。该技术类似酶联免疫吸附试验，基本原理仍是间接法或夹心法，只是利用胶体金作为标记物，并将反应发生的场所转移到特定的渗滤装置里，一般为：扁形小盒（4cm×3cm×0.6cm）中充满吸水垫料，小盒分底部和盖部两部分，盖部中央有直径0.5cm的小孔，小孔下紧贴的吸水垫料上放置一片NC膜，紧闭盒盖。试验时将标本和金标结合物先后滴加在膜上，通过渗滤使抗原抗体在膜上发生免疫结合反应并显色。

三、免疫胶体金快速诊断技术的优点

免疫胶体金快速诊断技术在诊断工业中的迅速崛起主要是因为与其他检测方法比较，它具有以下的一些优点：

1.快捷迅速，大大缩短出结果时间。不论是胶体金免疫层析法还是斑点免疫金渗滤技术都具有快速的特点。两种反法出结果的时间都在几分钟之内，这是目前其他快速检测方法所无法达到的。如市场上销售的金标hCG快速检测纸条一般1~2min内就能出结果；又如Huang Q.等用DIGFA检测人血中的梅毒抗体，整个试验过程也只需要2min。这种快速与胶体金本身显色特点有关，也与免疫层析法和斑点免疫渗滤的“免疫浓缩”（ICON）有关。而其他如ELLSA法出结果要1~2h；以灵敏度高见长的PCR也步骤繁琐，耗时甚长。

2.灵敏准确，结果受外因影响较少。免疫胶体金快速诊断方法并不因为其快速而牺牲了它的灵敏准确性。如用GICA与酶免疫法比较，用DIGFA检测人血清标本中HBsAg，两法符合率为99.0%。再如，与ELISA 法比较，用DIGFA检测人血清中抗结核IgG抗体，相对敏感性为95.5%，相对特异性为9

3.2%，相对符合率为97.6%。而结合银染色时，检测的敏感性更大大提高。此外，由于胶体金标记蛋白质是一物理结合过程，结合牢固，很少引起蛋白质活性改变，所以试机非常稳定，不受温度等外界因素影响，可在室内甚至野外进行检测，实验结果也可长期保存。

3.安全简便，不需要任何仪器设备。免疫胶体金检测方法不需要任何仪器和设备，只需制备好的试纸条或试剂盒即可；更由于胶体金本身具有颜色，比ELISA省略了加显示剂和终止液的步骤，大大简化了操作，更适合于野外或室内的现场应用。因为没有诸如放射性同位素、邻苯二

铵等有害物质参与，所以也不会污染环境，具有放射性同位素或酶标等检测方法所无法比拟的安全性。

4.成本低廉，所需试剂和样本量少。因为“免疫浓缩”，GICA和DIGFA 所需试剂和样本量都非常少，样本量可低至1~2μL；再加上无需任何仪器和设备，并且可进行单份标本检测，使成本大幅下降。

四、免疫胶体金快速诊断技术的应用现况

由于免疫胶体金快速诊断技术已日趋成熟，以及它的便捷、灵敏、安全、低成本等特点，使其在诊断领域中迅速推广。目前市场上出售的产品和各文献报道主要集中在以下四个方面。

1.妇女妊娠检测系列：胶体金免疫层析较早的运用于妇女妊娠检测。主要是检测血中或尿中的人绒毛促性腺激素（hCG），也有检测促黄体生成激素（LH）和促卵泡成熟激素（FSH）等。如市场销售的有早早孕尿血联用测试卡、早早孕尿血联用测试条、LH测试卡、LH测试条等。这些商品特异性强，灵敏度搞，再加上操作简单，出结果仅需要几分钟，故已经较广泛地应用于临床，前些年国内市场销售的早孕试纸条均系进口或采用进口散件国内装配，目前则已有完全由国内自行生产的试纸条。试纸条的快速特性来源于胶体金免疫层析法的固有特性，但与原材料选择特别是NC膜的孔径大小密切相关，准确性则取决于抗β-hCG等抗体的特异性。

2.药物滥用检测系统：GICA由于方便快捷，也常被用来进行药物滥用的检测。市售的有：吗啡测试条/卡、可卡因测试条/板、麻黄碱测试条/板、鸦片毒测试条/板、大麻测试条/板、苯异丙胺条/卡等。

3.疾病相关蛋白检测系列：对某些疾病的相关蛋白的检测多用胶体金免疫层析法。市售的该类型试剂有：甲胎蛋白血清测试条/板、甲胎蛋白全血测试条/板、胚胎癌抗原血清测试条/板、胚胎癌抗原全血测试条/板、类风湿因子血清测试条/板、类风湿因子全血测试条/板、心肌钙特意蛋白血清/血浆测试板、肌球蛋白血清/血浆测试板、尿微量白蛋白测试条/板、单核白细胞增多症血清测试条/板、单核白细胞增多症全血测试条/板、促甲状腺素血清测试条/板、促甲状腺素全血测试条等。

4.病原体抗原或抗体检测系列：应用于免疫胶体金对病原体的抗原和抗体的检测也日趋增多。市售的有关免疫层析胶体金类试剂有：乙型肝炎表面抗原血清测试条/板、乙型肝炎表面抗原全血测试条/板、乙肝表面抗体血清测试条/板、乙肝表面抗体全血测试条/板、丙型肝炎表面抗体血清测试条/板、A族乙型溶血性链球菌感染测试条/板、胃幽门螺旋杆菌感染血清测试条/板、B族乙型溶血性链球菌感染测试条/板、艾滋病感染测试板、梅毒抗体血清测试条/板。市售的有关免疫渗滤胶体金类试剂有：沙眼衣原体GIFA IgM/IgG、肺炎支原体GIFA IgM/IgG、幽门螺旋杆菌GIFA IgM/IgG、结核杆菌GIFA IgM/IgG/IgA、HSV-ⅡGIFAIgM/IgG等。

此外，文献报道利用胶体金快速诊断技术检测的还有：恶性疟原虫循环抗原、血吸虫循环抗原、血吸虫循环抗原、抗囊尾蚴抗体、抗棘球