高效液相色谱系统ppt
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《高效液相》课件
蛋白质分离与纯化
蛋白质分离
高效液相色谱技术可以用于蛋白质的分离和纯化，通过不 同的分离模式和固定相选择，实现对蛋白质的快速分离和 纯化。
蛋白质性质分析
通过高效液相色谱技术可以对蛋白质的性质进行分析，如 蛋白质的分子量、等电点等，为蛋白质的结构和功能研究 提供有力支持。
蛋白质相互作用研究
高效液相色谱技术可以用于研究蛋白质之间的相互作用， 如蛋白质与配体、抑制剂等之间的相互作用，有助于深入 了解蛋白质的功能和作用机制。
原理
利用不同物质在固定相和流动相之间 的分配系数差异进行分离，通过检测 器进行检测，收集各个组分，达到分 析样品组分的目的。
发展历程
01
02
03
04
起源
20世纪初，俄国植物学家茨 维特发明了色谱法。
1940年代
气相色谱法（GC）出现，并 逐渐发展成熟。
1960年代
高效液相色谱法（HPLC）开 始发展，并逐渐取代气相色谱
02
高效液相色谱仪
仪器组成
进样器
将样品注入色谱柱，是 色谱仪的重要部件之一
。
色谱柱
用于分离样品中的各组 分，由固定相和流动相
组成。
检测器
检测色谱柱流出的组分 ，并将其转换为电信号
。
数据处理系统
用于采集、处理和显示 检测器输出的信号。
重要部件介绍
01
02
03
色谱柱填料
常用的填料有硅胶、氧化 铝、活性炭等，根据不同 分离需求选择合适的填料 。
《高效液相》ppt课件
目录
• 高效液相色谱法简介 • 高效液相色谱仪 • 高效液相色谱分离技术 • 高效液相色谱在生物医药领域的应用 • 高效液相色谱实验技术 • 高效液相色谱技术前沿与展望
高效液相色谱-HPLCppt课件.ppt
色谱法的分类
按固定相的形态分:
平面色谱 o 纸色谱
o 薄层色谱
柱色谱
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
色谱法的分类示意图
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
▪ 高压梯度洗脱（高压混合，高压进柱，2个 泵。）
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
▪安捷伦泵：小视频 ▪色谱学堂：泵
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
色谱法原理及分类
什么是色谱法 色谱法溯源 Tswett（茨维特)的实验 色谱法原理 色谱法的分类
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
什么是色谱法
色谱法是一种现代的分离分析方法 1906年正式命名(见诸文献) 20世纪30年代开始广泛研究和应用 高效液相色谱法的广泛应用始于20世纪70年代
1. 紫外—可见光度检测器：
①固定波长：254nm ， 低压汞 灯。
② 可 调 波 长 ： 190 ～ 800mm ， 钨灯，氘灯。
UV
③光电二极管矩阵检测器： 190～700nm。
接色谱柱 石英窗 光电倍增管
废液
▪篮球比赛是根据运动队在规定的比赛 时间里 得分多 少来决 定胜负 的，因 此，篮 球比赛 的计时 计分系 统是一 种得分 类型的 系统
waters-e高效液相色谱ppt课件
4.使用缓冲溶液时，做完样品后应立即用甲醇水溶液冲洗。 5.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存，注意不能用纯水冲洗及
保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水极性太强且易长霉。 。 6.开机时，流速和柱压要逐渐增加。 7.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
流动相流出检测器可被送至废液瓶，或按需被收集。 当流动相含有一个分开的化合物谱带，高效液相色谱可以收集含有纯
化的化合物的该洗脱组分，用于进一步分析。
注意高压管路和附件用来连接泵、进样器、色谱柱和检测器单元，形 成流动相、样品和化合物分离谱带的通路。
高 检将效测电器信液连号相接转计换色算为谱机色数谱如据图站 ，何在，工显高示效作屏液上相展色现谱出系来统。单元先记录电信号，再
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀 泵
色谱柱
泵输液 进样
分离
检测器
检测
AB C
DE
G
F
记录
液 液相相流色色动谱谱相实：的验种所类各需及的部配基比分本，参示等数度-意-或亦梯图称度色谱条件
固定相：色谱柱类型及内径、长短 流动相输送系统参数：流速 检测器参数：紫外检测波长，灵敏度等 温度控制 进样量
四元梯度洗脱的溶剂输送动进样系统 柱温箱 液晶显示器 内置的柱塞杆密封垫清洗系统 溶剂瓶托盘 键盘用户界面及软盘驱动器
打开电源至on位置，开机依次接通 2695 分离单元、检测
2器开、机计算机和打印机的电源。接通后，约 20s 仪器开始自
检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化。
溶 流【剂动M管相en理脱u/气系St确a统tu认s的所】有，准溶进备剂入管“路St都at充us满（溶1 剂），”按屏幕
保存柱子，而应该用有机相(如甲醇等)，因为纯水极性太强且易长霉。 。 6.开机时，流速和柱压要逐渐增加。 7.要注意柱子的PH值范围，不得注射强酸强碱的样品，特别是碱性样品。
流动相流出检测器可被送至废液瓶，或按需被收集。 当流动相含有一个分开的化合物谱带，高效液相色谱可以收集含有纯
化的化合物的该洗脱组分，用于进一步分析。
注意高压管路和附件用来连接泵、进样器、色谱柱和检测器单元，形 成流动相、样品和化合物分离谱带的通路。
高 检将效测电器信液连号相接转计换色算为谱机色数谱如据图站 ，何在，工显高示效作屏液上相展色现谱出系来统。单元先记录电信号，再
液相色谱的基本流程图
流动相
进样阀 泵
色谱柱
泵输液 进样
分离
检测器
检测
AB C
DE
G
F
记录
液 液相相流色色动谱谱相实：的验种所类各需及的部配基比分本，参示等数度-意-或亦梯图称度色谱条件
固定相：色谱柱类型及内径、长短 流动相输送系统参数：流速 检测器参数：紫外检测波长，灵敏度等 温度控制 进样量
四元梯度洗脱的溶剂输送动进样系统 柱温箱 液晶显示器 内置的柱塞杆密封垫清洗系统 溶剂瓶托盘 键盘用户界面及软盘驱动器
打开电源至on位置，开机依次接通 2695 分离单元、检测
2器开、机计算机和打印机的电源。接通后，约 20s 仪器开始自
检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化。
溶 流【剂动M管相en理脱u/气系St确a统tu认s的所】有，准溶进备剂入管“路St都at充us满（溶1 剂），”按屏幕
高效液相色谱仪优秀PPT
DNA电泳与色谱分析，生 物技术药物纯化及鉴定，生 物标志物色谱分析，蛋白质 组学研究等
紫外检测器
技术参数LC3000B
高压恒流泵
紫外检测器
自动进样器AS3100
普析LC-3000型液相色谱仪
流量范围：0.001-9.999ml/min 最高工作压力：42Mpa 流量精度：±0.5% 流量重复性：RSD≤0.1%（1ml/min）
上海普析LC3000紫外
UV3000紫外检测器性能指标： 波长范围：190-700nm 灯源：氘灯（标准配置），钨灯（可替换） 波带宽度：8nm 波长精度：±1.0 nm 波长重复性：0.2nm 基线噪音：1×10-5AU 基线漂移：2×10-4AU 检测池体积：10ul 外形尺寸：398*149*267 （深*高*宽）
耗样品少。
应用范围广——百分之七十以上的有机化合物可用高效 液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳 定性差化合物的分离分析，显示出优势。
药物分析
中药质量控制，化学药物 质量控制，抗生素质控分析， 生化药质量控制，新型高效 手性药物中手性对映体含量 的测定等
环境污染物分析
大气、水、土壤和食品中的多 环芳烃、多环联苯，阴离子表 面活性剂，有机氯农药、有机 磷农药，除草剂，酚类胺类、 黄曲霉毒素等污染物的分离与 测定
食品质量分析
食品质量分析
高效液相色谱仪适用于高沸点不易挥发的、分子量大、极性不同的有机物的定性和定量分析。
自动进样器AS3100
农药残留，兽药残留；防腐剂、 高标准的关键部件
关键部件世界知名品牌原装进口，泵头采用钛合金材质，更加耐腐蚀高温 ； 应用范围广——百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分 析，显示出优势。
紫外检测器
技术参数LC3000B
高压恒流泵
紫外检测器
自动进样器AS3100
普析LC-3000型液相色谱仪
流量范围：0.001-9.999ml/min 最高工作压力：42Mpa 流量精度：±0.5% 流量重复性：RSD≤0.1%（1ml/min）
上海普析LC3000紫外
UV3000紫外检测器性能指标： 波长范围：190-700nm 灯源：氘灯（标准配置），钨灯（可替换） 波带宽度：8nm 波长精度：±1.0 nm 波长重复性：0.2nm 基线噪音：1×10-5AU 基线漂移：2×10-4AU 检测池体积：10ul 外形尺寸：398*149*267 （深*高*宽）
耗样品少。
应用范围广——百分之七十以上的有机化合物可用高效 液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳 定性差化合物的分离分析，显示出优势。
药物分析
中药质量控制，化学药物 质量控制，抗生素质控分析， 生化药质量控制，新型高效 手性药物中手性对映体含量 的测定等
环境污染物分析
大气、水、土壤和食品中的多 环芳烃、多环联苯，阴离子表 面活性剂，有机氯农药、有机 磷农药，除草剂，酚类胺类、 黄曲霉毒素等污染物的分离与 测定
食品质量分析
食品质量分析
高效液相色谱仪适用于高沸点不易挥发的、分子量大、极性不同的有机物的定性和定量分析。
自动进样器AS3100
农药残留，兽药残留；防腐剂、 高标准的关键部件
关键部件世界知名品牌原装进口，泵头采用钛合金材质，更加耐腐蚀高温 ； 应用范围广——百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分 析，显示出优势。
高效液相色谱HPLC简介.ppt
种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不
同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
2
操作过程图示
3
色谱分离的机理
分离是一个 物理的过程。
固定相(Stationary Phase) 流动相(Mobile Phase) 样品 (溶解于流动相中的溶质)
4
项目 进样方式 流动相 分离原理 检测器
14
液-液分配色谱
固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定 液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性 （反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反； 固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的 游离羟基上。反相键合相色谱柱最常用的就是ODS柱，也就是C18柱。
15
液相色谱类型
• 正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。 • 反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。用的最多，约占60～70％。
16
色谱柱简介
• 正相柱------固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2） 和氰基团（CN）的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离 的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色 谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷，氯仿，二氯 甲烷等。
9
检测器简介（二）
◆ 电导检测器（ECD） 原理：监测溶液的电导率变化的检测器。 特点：选择性检测器、测量时要求恒温、对流动相的组成变化有明显响应、 灵敏度低（10-3g）。适用于离子型化合物。
《高效液相色谱仪》课件
《高效液相色谱仪》ppt课件
目 录
• 高效液相色谱仪简介 • 高效液相色谱仪的组成和工作原理 • 高效液相色谱仪的操作流程 • 高效液相色谱仪的维护与保养 • 高效液相色谱仪的实验技术与应用实例
01
高效液相色谱仪简介
定义与特点
定义
高效液相色谱仪是一种分离和分 析复杂混合物中各组分的仪器， 基于物质在固定相和流动相之间 的分配差异实现分离。
。
食品工业
用于检测食品中的添加剂、农 药残留和营养成分等。
高效液相色谱仪的发展历程
起源
20世纪50年代初，基于经典液 相柱色谱的原理，开发出了高
效液相色谱法。
发展
20世纪60年代，出现了填充柱 和柱切换技术，提高了分离效 率。
革新
20世纪70年代，出现了高效微 粒固定相和新型检测器，提高 了灵敏度和选择性。
流动相的纯化和过滤
确保流动相的纯度和清洁度，以避免对色谱柱和检测器造成污染。
流动相的脱气
使用真空脱气法或超声波脱气法去除流动相中的气泡，以避免对色 谱分离造成干扰。
色谱柱的安装与选择
安装色谱柱
按照仪器说明书正确安装色谱柱 ，确保密封性和稳定性。
色谱柱的选择
根据样品的性质和分离要求，选择 合适的色谱柱类型和规格。
检测器对流出的组分进行 检测，并将信号记录下来 ，形成色谱图。
高效液相色谱仪的分离原理
分配原理
组分在固定相和流动相之 间的分配平衡是实现物质 分离的基础。
吸附与解吸平衡
组分在固定相上的吸附与 流动相中的溶解度差异导 致分离。
分子间作用力
分子间的相互作用力（如 范德华力、氢键等）影响 组分的吸附与解吸平衡。
物的分子结构和化学键信息。
目 录
• 高效液相色谱仪简介 • 高效液相色谱仪的组成和工作原理 • 高效液相色谱仪的操作流程 • 高效液相色谱仪的维护与保养 • 高效液相色谱仪的实验技术与应用实例
01
高效液相色谱仪简介
定义与特点
定义
高效液相色谱仪是一种分离和分 析复杂混合物中各组分的仪器， 基于物质在固定相和流动相之间 的分配差异实现分离。
。
食品工业
用于检测食品中的添加剂、农 药残留和营养成分等。
高效液相色谱仪的发展历程
起源
20世纪50年代初，基于经典液 相柱色谱的原理，开发出了高
效液相色谱法。
发展
20世纪60年代，出现了填充柱 和柱切换技术，提高了分离效 率。
革新
20世纪70年代，出现了高效微 粒固定相和新型检测器，提高 了灵敏度和选择性。
流动相的纯化和过滤
确保流动相的纯度和清洁度，以避免对色谱柱和检测器造成污染。
流动相的脱气
使用真空脱气法或超声波脱气法去除流动相中的气泡，以避免对色 谱分离造成干扰。
色谱柱的安装与选择
安装色谱柱
按照仪器说明书正确安装色谱柱 ，确保密封性和稳定性。
色谱柱的选择
根据样品的性质和分离要求，选择 合适的色谱柱类型和规格。
检测器对流出的组分进行 检测，并将信号记录下来 ，形成色谱图。
高效液相色谱仪的分离原理
分配原理
组分在固定相和流动相之 间的分配平衡是实现物质 分离的基础。
吸附与解吸平衡
组分在固定相上的吸附与 流动相中的溶解度差异导 致分离。
分子间作用力
分子间的相互作用力（如 范德华力、氢键等）影响 组分的吸附与解吸平衡。
物的分子结构和化学键信息。
高效液相色谱法培训PPT课件
注意事项与常见问题解答
样品处理注意事项
01
避免样品污染、损失或变质，确保处理过程的准确性和可重复
性。
常见问题及解决方法
02
针对样品处理过程中可能出现的问题，如回收率低、干扰物质
多等，提供相应的解决方法。
安全与防护
03
注意有毒有害试剂的使用安全，做好个人防护和环境保护工作。
04 方法开发与优化策略
梯度洗脱程序设计思路
初始比例确定
根据待测组分的极性差异，选 择合适的初始流动相比例。
梯度斜率设置
根据组分的分离情况，调整梯 度斜率，使各组分在合适的保 留时间内洗脱出来。
梯度时间设置
确保梯度洗脱过程中，各组分 能够充分分离，同时避免过长 的分析时间。
梯度曲线类型
根据实际需求选择合适的梯度 曲线类型，如线性梯度、凹形
梯度或凸形梯度等。
方法验证内容及标准
精密度
准确度
通过添加回收率试验，验证方法 的准确度，确保测定结果可靠。
考察方法的重复性和中间精密度， 确保测定结果的稳定性。
线性范围
确定方法的线性范围，确保待测 组分浓度在该范围内时，测定结 果准确可靠。
专属性
考察方法对待测组分的选择性， 确保其他共存物质不干扰测定。
长期稳定性
考察样品在规定的储存条件下放置一定时间后的稳定性，以确定 样品的保质期和储存条件。
方法学考察
对分析方法本身进行稳定性考察，包括方法的耐用性、重复性和 中间精密度等指标的评估。
质量控制图绘制和应用
质量控制图绘制
根据长期稳定性考察数据，绘制质量控 制图，包括平均值、标准差和控制限等 指标。
VS
发展历程及应用领域
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- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
• 管路与连接件
• 脱气装置：在线脱气机或超声波清洗器
• 过滤器：溶剂过滤器和针筒式过滤器• 进样器：平头进样器
不同材质的管路
• 不锈钢管：耐腐蚀性好，有精密的同轴度， 一般用于高压部分 • 聚合物管：用在液相色谱系统中从储液瓶 到泵、检测器出口以后和进样器排液口等 低压部分 • PEEK（聚醚醚酮）管：是一种耐高温、高 性能的工程塑料，具有良好的惰性，适宜 于生物样品的分离分析
梯度洗脱
低 压 梯 度
B A D
比例阀
C
高压输 液泵
阻尼器 混合器
色谱柱 进样器 检测器
高 压 梯 度
高压输 液泵
色谱柱 进样器 检测器
高压输 液泵
梯度混合器
梯度洗脱的特点
• 优点
– 缩短分析时间 – 增加分离能力 – 提高检测灵敏度
• 缺点
– 仪器设备要求高 – 不适合某些检测方式(RI) – 柱需再生平衡 – 定量分析的重复性较低
功能特点：
• 使用波长范围宽
• 波长精度准确 • 能够实现多波长测定
LC-5500工作站
功能特点： • 具有仪器控制系统、数据采集和处理系统； • 可进行波长程序控制 • 可设定柱温 • 可对两台泵进行程序控制，进行梯度洗脱
LC-5510
高效 液相 色谱 仪
LC-5510 在线脱气机
• 在线脱气机主要由真空泵、脱气膜管、传感器、 控制电路、真空腔等组成 • 在线脱气机的主要目的是脱除流动相中的气泡
高效液相色谱系统
——液相色谱培训（二）
液相色谱流程图
色谱柱 储液瓶 高压泵 检测器 色谱工作站
进样器
高压输液泵
柱
输液系统功能： 溶剂输送 目标： 稳定 准确
双柱塞往复式串联泵
双柱塞往复式并联泵
重要指标： 耐压能力
压力脉动
流量精密度
柱
流量准确性
各品牌输液泵的基本参数
项目 Waters 515型 0.001~10 Agilent 1100 型 0.001~10 LC-10ATvp 型 0.001~9.99 9 0.001 Elite P200 II型 0.01~4.99 LC-5500 型 0.01～ 4.99 检定 要 求
原理：基于被分析组分对特定波长紫外光 的选择性吸收 定量基础：朗伯-比耳定律，A＝KCL
优点： 1）灵敏度高
2）对温度和流速不敏感
3）可用于梯度洗提
缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质
二极管阵列检测器
样品池 光栅
D2 / W 灯
每一组分可在每一波 长处得到一吸光度值
二极管阵列
二极管阵列检测器
色谱柱
分离系统 功能：
组分分离 目标： 分辨力强 效率高
液相色谱柱是高效液相 色谱仪的核心部分，是 分析好坏、成败的关键
键合相色谱柱
• 键合相: – 反相: 70%; C18, 65%; C8, 15%; 苯基柱 <5%, – 正相: 20%; 硅胶、 -NH2、 -CN、-OH
– 其它 (手性柱, 离子交换柱): 10%
LC-5510紫外-可见光检测器
功能特点： • 使用波长范围宽 • 波长精度高 • 噪声低漂移小 • 可用汞灯自动校正波长 • 采用LCD带背光的显示屏来显示波长的设 置参数和运行参数
LC-5510工作站
功能特点： • 具有色谱仪控制系统、数据采集和处理系 统； • 可进行波长程序控制 • 可对两台泵进行程序控制，进行梯度洗脱 • 功能健全，操作便捷
LC-5510紫外-可见光检测器
技术指标： • 波长范围：190～650nm • 波长精度: ±0.2nm • 波长重复性:优于0.2nm • 基线噪声：±6×10-5AU（动态，254nm） • 基线漂移：±2.5×10-4AU/h（动态，254nm） • 光谱带宽：8nm • 流通池体积：5ul • 最小检测浓度：＜1×10-8g/mL (萘的甲醇溶液)
LC-5500高效液相色谱仪主机
主机包括两部分：
• 柱温箱
• 紫外-可见光检测器
LC-5500柱温箱
技术指标： • 温度控制范围：室温＋10～80℃ • 温度控制精度：±1℃ 功能特点： • 控温精度准确 • 更换色谱柱方便 • 分析结果重现性好 • 保证检测稳定性
LC-5500紫外-可见光检测器
原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试 样中各组分浓度。 优点：通用型检测器，
缺点：
1）对温度变化敏感
2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测
3）属于中等灵敏度的检测器
电导检测器
原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的 电导变化来测定电离物质含量。广泛应用于离 子色谱法 优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可 用于梯度洗脱
• 反相色谱是目前应用得最为广泛的高效液相色谱方法。 • C18 和 C8 在反相色谱中应用得最为广泛。
检测器
• 紫外检测器（包括二极 管阵列检测器） • 荧光检测器 功能： 检测组分浓度 目标：
• 示差折光检测器
• 电导检测器
• 蒸发光散射检测器
重要指标：
噪声、漂移、线性、检出限
准确
检出限低
紫外检测器
技术指标： • 波长范围：190～650nm • 波长精度: ±2nm • 波长重复性:优于2nm • 基线噪声：±1×10-4AU • 基线漂移：±5×10-4AU/h • 光谱带宽：8nm • 流通池体积：5ul • 最小检测浓度：＜4×10-8g/mL (萘的甲醇溶液)
LC-5500紫外-可见光检测器
蒸发漂移管
工作站
数据采集系统 功能： 采集处理数据 目标： 使用便捷 功能完善
梯度洗脱
●HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient) 洗脱两种方式 等度洗脱是在同一分析周期内流动相组 成保持恒定，适合于组分数目较少，性质 差别不大的样品 梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制 流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度 和pH值等，用于分析组分数目多、性质差 异较大的复杂样品
LC-5500高压输液泵
技术指标
• 工作压力：0～40MPa
• 流量范围：0.01～5.0mL/min
• 流量准确性：≤1％
• 流量精密度： ≤0.5％
• 压力脉动： ≤1％
LC-5500高压输液泵
主要特点 • 采用双柱塞交替输液吸液，特殊设计的非圆凸轮运 动曲线，保证输出液体流速稳定 • 精密电机及电路设计，实现流量控制和流速的稳定 性 • 压力传感器避免了过压对色谱柱和泵的意外损害 • 性能良好的阻尼器有效消除了输液脉冲 • 采用LCD带背光的显示屏来显示泵的设置参数和运 行参数。 • 梯度洗脱流量程序智能化，流量准确
• 常配的进样器规格为10、25、50、100 μL • 最常使用的为50 μL和100 μL的进样器
LC-5500和LC-5510 高效液相色谱仪介绍
LC-5500高效液相色谱仪
LC-5500高压输液泵
• P-101型高压液 相平流泵由泵 体、过滤器、 缓冲器、步进 电机、步进电 机驱动器、控 制电路板、键 盘以及液晶显 示器等部件构 成
流速范围
调节精度
0.001 RSD 0.1% ±1.0% 4000 Psi
0.001
0.01
0.01
流量精密度
0.15% （<0.3 0.3% %） ±1.0% 40 MPa ±2.0% 39.2 MPa
0.5%
0.5%
1.5% ±2.0 %
流量准确度 最高压力
±5.0% 40.0 MPa
±1.0% 40MPa
荧光检测器
原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测
优点： 1）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一 2）选择性好 3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱 缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质 可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸 、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）
示差折光检测器
进样器
• 隔膜进样
• 停留进样
• 阀进样
• 自动进样
进样器
• 对进样器的要求
密封性好 死体积小 重复性好 保证中心进样 进样时对色谱系统的压力、流量影响小
进样器原理－六通阀
手动进样器－六通阀
• 一般HPLC分析常用六 通进样阀（以美国 Rheodyne公司的7725 和7725i型最常见），其 关键部件由圆形密封垫 （转子）和固定底座 （定子）组成。耐高压 （35~40MPa），进样 量准确，重复性好，操 作方便
缺点：对温度变化敏感（每升高1度，电导率 增加2%-2.5%) 主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机离子
蒸发激光光散射检测器（ELSD）
• 通用型检测器（适合
于挥发性比流动相低 的任何组分）；响应 值与组分质量有关； 可用于梯度洗脱
激光光源 光二极管检测器 散射室 样品液滴 HPLC柱 喷雾气体
梯度洗脱注意的问题
• 注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能 用作梯度洗脱的流动相 • 所用的溶剂纯度要求高 • 所用的溶剂要彻底脱气，防止混合时产生 气泡 • 混合溶剂的黏度常随组成而变化，因而在 梯度洗脱时常出现压力变化 • 每次梯度洗脱后必须对色谱柱进行再生处 理，使其恢复初始状态
高效液相色谱的配件
二极管阵列检测器的优点
1）采集三维谱图
2）峰纯度检验
3）光谱库检索
4）可以发现单波长检测时未测到的峰
紫外-可见检测器
大多数有机化合物有一定程度的吸光度，所以紫 外-可见检测器可以测定大多数的化合物，是目 前实验室中使用最多的检测器
--多数公司售出的检测器中75%以上是吸 光度检测器（其中50%以上是紫外-可见检 测器，25%是PDA）
• 脱气装置：在线脱气机或超声波清洗器
• 过滤器：溶剂过滤器和针筒式过滤器• 进样器：平头进样器
不同材质的管路
• 不锈钢管：耐腐蚀性好，有精密的同轴度， 一般用于高压部分 • 聚合物管：用在液相色谱系统中从储液瓶 到泵、检测器出口以后和进样器排液口等 低压部分 • PEEK（聚醚醚酮）管：是一种耐高温、高 性能的工程塑料，具有良好的惰性，适宜 于生物样品的分离分析
梯度洗脱
低 压 梯 度
B A D
比例阀
C
高压输 液泵
阻尼器 混合器
色谱柱 进样器 检测器
高 压 梯 度
高压输 液泵
色谱柱 进样器 检测器
高压输 液泵
梯度混合器
梯度洗脱的特点
• 优点
– 缩短分析时间 – 增加分离能力 – 提高检测灵敏度
• 缺点
– 仪器设备要求高 – 不适合某些检测方式(RI) – 柱需再生平衡 – 定量分析的重复性较低
功能特点：
• 使用波长范围宽
• 波长精度准确 • 能够实现多波长测定
LC-5500工作站
功能特点： • 具有仪器控制系统、数据采集和处理系统； • 可进行波长程序控制 • 可设定柱温 • 可对两台泵进行程序控制，进行梯度洗脱
LC-5510
高效 液相 色谱 仪
LC-5510 在线脱气机
• 在线脱气机主要由真空泵、脱气膜管、传感器、 控制电路、真空腔等组成 • 在线脱气机的主要目的是脱除流动相中的气泡
高效液相色谱系统
——液相色谱培训（二）
液相色谱流程图
色谱柱 储液瓶 高压泵 检测器 色谱工作站
进样器
高压输液泵
柱
输液系统功能： 溶剂输送 目标： 稳定 准确
双柱塞往复式串联泵
双柱塞往复式并联泵
重要指标： 耐压能力
压力脉动
流量精密度
柱
流量准确性
各品牌输液泵的基本参数
项目 Waters 515型 0.001~10 Agilent 1100 型 0.001~10 LC-10ATvp 型 0.001~9.99 9 0.001 Elite P200 II型 0.01~4.99 LC-5500 型 0.01～ 4.99 检定 要 求
原理：基于被分析组分对特定波长紫外光 的选择性吸收 定量基础：朗伯-比耳定律，A＝KCL
优点： 1）灵敏度高
2）对温度和流速不敏感
3）可用于梯度洗提
缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质
二极管阵列检测器
样品池 光栅
D2 / W 灯
每一组分可在每一波 长处得到一吸光度值
二极管阵列
二极管阵列检测器
色谱柱
分离系统 功能：
组分分离 目标： 分辨力强 效率高
液相色谱柱是高效液相 色谱仪的核心部分，是 分析好坏、成败的关键
键合相色谱柱
• 键合相: – 反相: 70%; C18, 65%; C8, 15%; 苯基柱 <5%, – 正相: 20%; 硅胶、 -NH2、 -CN、-OH
– 其它 (手性柱, 离子交换柱): 10%
LC-5510紫外-可见光检测器
功能特点： • 使用波长范围宽 • 波长精度高 • 噪声低漂移小 • 可用汞灯自动校正波长 • 采用LCD带背光的显示屏来显示波长的设 置参数和运行参数
LC-5510工作站
功能特点： • 具有色谱仪控制系统、数据采集和处理系 统； • 可进行波长程序控制 • 可对两台泵进行程序控制，进行梯度洗脱 • 功能健全，操作便捷
LC-5510紫外-可见光检测器
技术指标： • 波长范围：190～650nm • 波长精度: ±0.2nm • 波长重复性:优于0.2nm • 基线噪声：±6×10-5AU（动态，254nm） • 基线漂移：±2.5×10-4AU/h（动态，254nm） • 光谱带宽：8nm • 流通池体积：5ul • 最小检测浓度：＜1×10-8g/mL (萘的甲醇溶液)
LC-5500高效液相色谱仪主机
主机包括两部分：
• 柱温箱
• 紫外-可见光检测器
LC-5500柱温箱
技术指标： • 温度控制范围：室温＋10～80℃ • 温度控制精度：±1℃ 功能特点： • 控温精度准确 • 更换色谱柱方便 • 分析结果重现性好 • 保证检测稳定性
LC-5500紫外-可见光检测器
原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试 样中各组分浓度。 优点：通用型检测器，
缺点：
1）对温度变化敏感
2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测
3）属于中等灵敏度的检测器
电导检测器
原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的 电导变化来测定电离物质含量。广泛应用于离 子色谱法 优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可 用于梯度洗脱
• 反相色谱是目前应用得最为广泛的高效液相色谱方法。 • C18 和 C8 在反相色谱中应用得最为广泛。
检测器
• 紫外检测器（包括二极 管阵列检测器） • 荧光检测器 功能： 检测组分浓度 目标：
• 示差折光检测器
• 电导检测器
• 蒸发光散射检测器
重要指标：
噪声、漂移、线性、检出限
准确
检出限低
紫外检测器
技术指标： • 波长范围：190～650nm • 波长精度: ±2nm • 波长重复性:优于2nm • 基线噪声：±1×10-4AU • 基线漂移：±5×10-4AU/h • 光谱带宽：8nm • 流通池体积：5ul • 最小检测浓度：＜4×10-8g/mL (萘的甲醇溶液)
LC-5500紫外-可见光检测器
蒸发漂移管
工作站
数据采集系统 功能： 采集处理数据 目标： 使用便捷 功能完善
梯度洗脱
●HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient) 洗脱两种方式 等度洗脱是在同一分析周期内流动相组 成保持恒定，适合于组分数目较少，性质 差别不大的样品 梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制 流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度 和pH值等，用于分析组分数目多、性质差 异较大的复杂样品
LC-5500高压输液泵
技术指标
• 工作压力：0～40MPa
• 流量范围：0.01～5.0mL/min
• 流量准确性：≤1％
• 流量精密度： ≤0.5％
• 压力脉动： ≤1％
LC-5500高压输液泵
主要特点 • 采用双柱塞交替输液吸液，特殊设计的非圆凸轮运 动曲线，保证输出液体流速稳定 • 精密电机及电路设计，实现流量控制和流速的稳定 性 • 压力传感器避免了过压对色谱柱和泵的意外损害 • 性能良好的阻尼器有效消除了输液脉冲 • 采用LCD带背光的显示屏来显示泵的设置参数和运 行参数。 • 梯度洗脱流量程序智能化，流量准确
• 常配的进样器规格为10、25、50、100 μL • 最常使用的为50 μL和100 μL的进样器
LC-5500和LC-5510 高效液相色谱仪介绍
LC-5500高效液相色谱仪
LC-5500高压输液泵
• P-101型高压液 相平流泵由泵 体、过滤器、 缓冲器、步进 电机、步进电 机驱动器、控 制电路板、键 盘以及液晶显 示器等部件构 成
流速范围
调节精度
0.001 RSD 0.1% ±1.0% 4000 Psi
0.001
0.01
0.01
流量精密度
0.15% （<0.3 0.3% %） ±1.0% 40 MPa ±2.0% 39.2 MPa
0.5%
0.5%
1.5% ±2.0 %
流量准确度 最高压力
±5.0% 40.0 MPa
±1.0% 40MPa
荧光检测器
原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测
优点： 1）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一 2）选择性好 3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱 缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质 可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸 、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）
示差折光检测器
进样器
• 隔膜进样
• 停留进样
• 阀进样
• 自动进样
进样器
• 对进样器的要求
密封性好 死体积小 重复性好 保证中心进样 进样时对色谱系统的压力、流量影响小
进样器原理－六通阀
手动进样器－六通阀
• 一般HPLC分析常用六 通进样阀（以美国 Rheodyne公司的7725 和7725i型最常见），其 关键部件由圆形密封垫 （转子）和固定底座 （定子）组成。耐高压 （35~40MPa），进样 量准确，重复性好，操 作方便
缺点：对温度变化敏感（每升高1度，电导率 增加2%-2.5%) 主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机离子
蒸发激光光散射检测器（ELSD）
• 通用型检测器（适合
于挥发性比流动相低 的任何组分）；响应 值与组分质量有关； 可用于梯度洗脱
激光光源 光二极管检测器 散射室 样品液滴 HPLC柱 喷雾气体
梯度洗脱注意的问题
• 注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能 用作梯度洗脱的流动相 • 所用的溶剂纯度要求高 • 所用的溶剂要彻底脱气，防止混合时产生 气泡 • 混合溶剂的黏度常随组成而变化，因而在 梯度洗脱时常出现压力变化 • 每次梯度洗脱后必须对色谱柱进行再生处 理，使其恢复初始状态
高效液相色谱的配件
二极管阵列检测器的优点
1）采集三维谱图
2）峰纯度检验
3）光谱库检索
4）可以发现单波长检测时未测到的峰
紫外-可见检测器
大多数有机化合物有一定程度的吸光度，所以紫 外-可见检测器可以测定大多数的化合物，是目 前实验室中使用最多的检测器
--多数公司售出的检测器中75%以上是吸 光度检测器（其中50%以上是紫外-可见检 测器，25%是PDA）