凝血四项原理及测定

影响凝血四项测定结果的几种常见因素
1 光源稳定性，试剂复溶有效期及是否更换新批号， 反应杯是否光滑无毛刺，冰箱温度是否符合要求， OVB是否放置常温或常温放置时间过长，试剂杯是 否定期清洗等。
2 定期清洁蒸馏水桶。如果长时间不清洁，水桶内 壁会长菌、会有异物沉淀等，进而堵塞仪器管道， 影响检验结果。
3 标本的采集
采集时间：常规要求上午空腹采集，急诊随时采集。 采血顺利，止血带不应扎得过紧、时间过长，针头必须采用21号以上，并且采血
后迅速与抗凝剂混匀，避免用力振荡。 要遵循严格的标本采集顺序： 1.如果一次要求采血多管样本时，应按以下顺序采血：血培养→蓝帽管(凝血测定)或 黑帽管（血沉）→红帽管、橘黄帽管（促凝管）→绿帽管（肝素钠管或肝素锂管）→ 紫帽管（血常规）。 2.无血培养时，蓝帽管(凝血测定)必须 放在第二管采集，按照原有顺序选择第一管标 本采集。 3.只有蓝帽管(凝血测定)或黑帽管（血沉）时，应先用黄帽管采集少许血液，然后再 采集蓝帽管(凝血测定)或黑帽管（血沉）。
原理：待测血浆加入凝血活酶，在钙离子的参与下纤维蛋白原 转化为不溶性的纤维蛋白而凝固，测定凝固所需要的时间即为 活化部分凝血酶时间。
用途：是内源性凝血系统Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ因子较为理想的筛选 试验，亦可用于内源性凝血因子定量，凝血因子Ⅶ和其他凝血 因子测定，特别是Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ因子和释放酶测定，肝素治 疗的监控等。
1 小于仪器可报最小时间即PT<7s APTT<15s,此时仪器测 得数值是不可靠的，需要手工复查。（主要常见原因）
2 混有肝素无法测量值。
选择适合自己医院的检验项目，提高检验质量。
文献报道，临床检验的全过程中，这三个过程占总分析误差 的比例如下 ➢ 分析前的误差占总误差的46%~68.2% ➢ 分析中的误差占总误差的＜15% ➢ 分析后的误差占总误差的18.5%~47%
PT、APTT结果偏低时，一般是病人处于高凝状态比如 DIC， 但要注意标本有无小的凝块（当有小凝块的时候，由于 凝血因子的激活结果一般偏低）。
结果带星号的时候，要注意查看曲线和标本状态。 用药过量或者是重症患者，有时一项或几项全都是星号， 查看反应曲线，如果反应曲线是一条直线，并且与临床沟通、 复查后，报告结果PT/APTT/TT大于多少秒，注意纤维蛋白原 不能报告不凝，PT活动度和INR删除不报。
手工法测定：（1）在试管中加入待检血浆和APTT试剂各 100uL，混匀和100uL氯化钙同时置于37°温育箱中温育3min。 （2）加氯化钙溶液计时：在试管中加入氯化钙溶液100uL，立 即混匀并开始计时，不时缓慢倾斜试管，观察试管流动状态， 当液体不流动停止计时，记录时间。
APTT试剂应于2-8℃的冰箱保存，长期保存后可能会形成黄色 沉淀，用前需振摇均匀。
透射比浊法，是根据待测样品在凝固过程中吸光度变化来确 定凝固终点的，采用50%这点作为检测值，是因为在50%这 一点光透射时间变化最大，纤维蛋白单体聚合反应率最高 （CS系列采用透射比浊法）。两者曲线相反
光学法和磁珠法用于血凝检测，就方法论而言各有千秋，光 学法的优点在于结构简单、灵敏度高。易于自动化等。缺点 在于易受特异血浆干扰，对此各厂家已采取不同措施予以弥 补。磁路法优点不受特异血浆的干扰（黄疸、溶血、乳糜）， 试剂量少，缺点，磁珠的质量、杯壁的光滑程度等，均会对 测量结果造成影响。
目前可开展的血栓/止血成份检测方法主要有凝固法、底物显 色法、免疫法、乳胶凝集法等。
测定方法
光学法（比浊法）
光学法血凝仪是根据血浆凝固过程中浊度的变化来测定凝血 功能。根据仪器不同的光学测量原理，又可分为散射比浊法 和透射比浊法两类。
散射比浊法是根据待验样品在凝固过程中散射光的变化来确 定检测终点的。在该方法中检测通道的单色光源与光探测器 呈90度直角，当向样品中加入凝血激活剂后，随样品中纤维 蛋白凝块的形成过程，样品的散射光强度逐步增加。当样品 完全凝固以后，散射光的强度不再变化，通常是把凝固的起 始点作为0%，凝固终点作为100%，把50%作为凝固时间。 光探测器接收这一光学的变化，将其转化为电信号，经过放 大再被传送到监测器上进行处理，描出凝固曲线（CA系列 散射光百分比终点法）。
凝血四项原理及测定
邢台市第三医院检验科 刘晓彬
目录
1.凝血四项的测定与临床意义。 2.影响凝血四项测定结果的几种常见因素。
凝血四项的测定与临床意义
基本原理
目前国内外各生产厂家生产的全自动血凝仪都是基于凝固法 对血液凝固过程进行测量的。血液凝固是一系列凝血因子连 锁性酶反应的结果。血液中的凝血因子以无活性酶原形式存 在，当某一凝血因子被激活后，可使许多凝血因子按一定的 次序先后被激活，彼此之间有复杂的催化作用，被称为“瀑 布样学说”。这种“瀑布样学说”产生的激变在血液的生物 物理特性上表现为，电阻增大（电流法）粘度增强（磁珠 法），浊度上升（光学法）。由于电流法测量可靠性差，因 此为磁珠法和光学法所替代。
手工法测定：用加样枪吸取50uL血浆到小塑料试管37℃孵 育1分钟，加Thromborel S 试剂（已预温到37℃）100uL并 同时开启秒表计时，不断轻轻倾斜试管，记录至液体停止流 动所需要的时间，记录时间。
测定温度36.5—38.5℃,过低或过高均使PT延长（温育箱中 进行）。
（2）活化部分凝血酶时间测定（APTT）：
为什么要遵循严格的标本采集顺序？
采血不顺利、第一管抽凝血的标本，都可能引 起标本中混入组织液使凝血活酶受到污染， 凝血因子激活而导致 PT和APTT结果延长
第一管抽凝血的标本，可由于采血针连接管导 致抽血量不足。
抗凝剂的选择 根据WS/T359-2011《血浆凝固实验血液标本的采集及处理指
异常结果的判断与案例分析
当凝血结果有异常时，首先确认标本状
态（包括血浆量的多少、HCT是否异常、有
无小的凝集、是否有溶血乳糜等），查看标
本的编号、姓名与仪器的数据是否对应，然
后考虑病人的年龄、所在病区、可能的诊断、
有无前回值、及时与临床沟通（采血是否顺
利、了解病人的相关变异因素），必要时复 查标本。
标本准备
离心前查看标本（标本的采集量，有无凝块），保证以 1500～2500g，离心10分钟，以取得乏血小板血浆，离心后还必 须查看标本有无溶血、凝块（注意观察交界面是否平整）、乳 糜等。
根据 CNAS-CL02-A001:2018 拒收标准： 1 溶血、有凝块标本 2 采检量不准确，采集量+-10%的标本 3 红细胞压积大于55%时应调整抗凝剂量重新采集。
HCT结果异常增高（大于55%）也会导致凝血结 果异常，常见于一些心脏病病人、慢阻肺病人、新生 儿、血液病的病人。这些异常结果复查后大多正常。
处理步骤如下：
发现HCT异常（离完心后标本血浆少、பைடு நூலகம்胞多）→查 看血常规HCT结果→根据前面的公式或表格得出需要 抽血的量→电话通知临床（指导护士采用粗针头注射 器抽取相应量的静脉血取下针头，将血顺管壁缓慢注 射到凝血采血管中，立即充分混匀后即刻送检）。
（3）凝血酶时间测定（TT）： 原理：待测血浆加入适量凝血酶，纤维蛋白原转化为不溶性的纤 维蛋白而凝固，测定所需时间即为凝血酶时间。 用途：是检测受试者纤维蛋白原转化为不溶性的纤维蛋白能力常 用的筛选试验。增高见于DIC纤溶亢进期，血中纤维蛋白（原） 降解产物（FDPs）增高；降低无临床意义。
（4）纤维蛋白原浓度测定（FBG）： 原理：高浓度的凝血酶存在时，待测稀释血浆的凝固时间与其纤 维蛋白原（FIB）含量成反比关系。测量该稀释血浆凝固时间， 换算即得纤维蛋白原浓度。OVB要放置常温状态下才可进行检 测。 用途：用于纤维蛋白定量测定。
常见的几种报警信息分析
No coagulation（无凝集）
1 重度乳糜标本，吸光度变化很小，假性不凝集。 2 有大凝块，消耗大量的纤维蛋白原变为纤维蛋白，假性不
凝集。 3 曲线为一条直线，APTT>180s TT>150s。 4 从留置针中采血混有肝素。
Ranger over (超出线性范围）
（1）凝血酶原时间测定（PT）
原理：待测血浆加入过量的含钙组织凝血活酶，重新钙化的 血浆在组织因子存在时通过外原性激活途径激活因子X成Xa, Xa使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原转化为纤 维蛋白而凝固，测定凝固所需时间即为凝血酶原时间。
用途：是外源性凝血糸统障碍较为理想的筛选试验，亦可用 于内、外凝血共同途径凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的定量，口 服抗凝剂的监控等。
南》的要求，选用抗凝剂为0.109mol/L的枸橼酸钠，它能有效 地阻止因子Ⅴ和Ⅷ的活化，严格按1:9的比例抗凝。 注意： 当HCT>55%或<25%时，应按如下公式重新核算抗凝 剂的用量:
抗凝剂量(ml)=0.00185×全血量(ml) × [100-HCT(%)]。 采血体积(ml)=0.2/0.00185×[100-HCT(%)]