常规_石蜡切片法
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石蜡切片法
一、材料处理
1、取材
2、固定
FAA(福尔马林):70%或50%酒精90CC
冰醋酸5CC
福尔马林5CC
卡诺:纯酒精(或95%)3份
冰醋酸1份
经卡诺固定过夜后,须换入70%酒精长期保存。
3、脱水
50—70%酒精(30分钟)——70%酒精浸洗2小时——70%酒精保存过夜——85%酒精2小时
4.17下午15:30——16:00——18:00(过夜)——4.18上午6:30(85%)—上午8:30(95%)
——95%酒精2小时、过滤纸(无水酒精润洗)——无水酒精2次,2小时/次,吸干
上午10:30(无水)——中午12:30(第一次结束)——下午15:45(第二次结束)
4、透明
1/2酒精+1/2二甲苯2小时(加番红1滴显示)——二甲苯2小时——二甲苯1小时(量一致)
4.18下午15:45——下午17:45——晚19:45——晚8:45
5、渗蜡
—12.5%蜡1小时—25%蜡1小时—37.5%蜡1小时—50%蜡过夜(40-42℃,塞盖)
4.18晚8:45(第一次12.5%)—9:30—10:30—11:30(第四次)—(过夜)—
逐渐加蜡溶了再加——饱和蜡1天(40-42℃,塞盖)——(逐渐升温3℃)饱和蜡2小时(50℃,塞盖)4.19上午10:00(逐渐加豆粒大小蜡,溶了再加,单次约10分钟)—4.20上午10:30—中午12:30
—饱和蜡2小时(60℃,开盖)——纯蜡2小时/次,2~3次(60℃,开盖)
—下午14:30(纯蜡第一次)—下午16:30(纯蜡第二次)
6、包埋
7、切片
8、烘片40~42℃
二、染片
二甲苯20分钟——二甲苯20分钟——1/2纯酒精+1/2二甲苯2~3分钟——100%酒精两次,2~3分钟/次
——95%、85%、70%、50%、30%酒精2~3分钟——蒸馏水2次,2~3分钟/次——4%铁矾媒染半小时——水洗10分钟——蒸馏水2次,2~3分钟/次——0.5%苏木精染色2小时——蒸馏水换洗数次,5分钟——2%铁矾(半分至数分钟)——水洗30分钟——蒸馏水数分钟——30%、50%、70%、85%、95%酒精,每个脱水2~3分钟——固绿复染2~3分钟——100%酒精,脱水2~3分钟——100%酒精,2~3分钟
——1/2纯酒精+1/2二甲苯透明2~5分钟——二甲苯透明2~5分钟——二甲苯透明2~5分钟
——加拿大树胶封片——贴标签
试验一:两材料在5个盐浓度下的叶片和根系;