方药实验设计-方药药理篇

1、何为方药药理研究？试述其研究内容及其特点，研究目的方药药理研究属于实验科学范畴，指以实验为基础，按一定的方案，用相关的实验方法或模型进行实验，得到实验结果，以说明某一方药(中药\方剂)的作用特点或作用规律。

研究内容包括药理学研究、毒理学研究和临床药理学研究。

特点：①以中医药理论为指导原则；②以方药为研究对象；③以证为基础研究方药药效学；④以现代药理学方法研究方药。

研究目的意义：①预测开发前景；②提供科学实验依据；③验证疗效、确保安全；④促进产品国际化。

2、实验药理学研究内容和特点是什么？药理学实验常用方法有哪些？实验药理学解决药理学问题的实验技术，阐明药理学原理的实验方法和药理学实验中的共性问题。

特点：①药理学与生命科学的各个学科在共同发展的实践过程中，实现了相互促进、共同发展的现代科学研究新模式；②药理学实验研究是应用其他各个学科的技术和方法，来解决药理学问题。

药理学实验采用方法种类繁多，涉及学科广泛：①物理学方法；②化学方法；③数学方法；④实验动物学方法；⑤细胞生物学和分子生物学方法；⑥基础医学和临床医学方法。

3、药理学实验设计首先要的三个基本原则是什么?随机方法、对照类型有哪些？如何理解其含义。

三个基本原则：随机原则；重复原则；对照原则。

随机的方法有：①原始抽签法；②投硬币法；③随机数字表法；④随机数字法。

将随机原则应用于药理学实验设计和实验过程中，以求最大限度地降低各种客观因素产生的影响。

对照类型有：①自身对照；②组间对照。

设立对照是为了准确表现出特定因素产生的作用，排除各种无关因素可能产生的影响。

设立对照应符合齐同可比的原则。

4、重复具有哪两方面含义，实验例数如何确定？在实验中要求一定的重复数的意义？重复是保证实验结果可靠的重要措施之一。

重复具有两方面含义：①重现性；②重复数。

确定实验的重复数首要考虑的是获得可靠的结论，其次是使用最少例数，即最大效果和最小成本。

确定药理实验的重复数（例数）主要有两种方法：①经验估计法：即在已有资料和经验的基础上，根据实验的类型和特点，估计实验所需要的重复数，在应用估计法确定实验的重复数时，需要留有一定的余地，以保证实验的成功。

②计算法：a.经验估计法选取的样本例数；b.计算法（包括用于计数资料的公式和用于计量资料的公式）。

意义：①消除个体差异和实验误差，提高实验结果的可靠性；②对实验结果的重现性验证。

在实验中设置一定的重复数，是药理学实验的基本要求。

5、药理研究有哪些基本要求？①试验人员：学历，资历，能力，经验；②研究单位：技术力量，实验条件；③实验动物；④试验样品：受试样品—剂型，处方，工艺，质量标准基本稳定；对照药品—主治功效，剂型，给药途径与受试药基本相似；⑤给药途经（与临床一致）、剂量（低剂量不少于临床的2~5倍，高剂量一般低于长期毒性试验的中剂量或低剂量）、方式（治疗性及预防性给药）；⑥试验方法（国内外公认成熟的方法，适当改进的文献方法，自己建立的方法）与观察指标（特异性好，重现性好，敏感性高，客观性强）；⑦试验记录（详尽如实）、结果处理（统计学处理）与报告。

6、实验方案的设计内容有哪些，其中分组实验设计有哪些方法？内容：确定实验方法、项目和指标；确定实验对象的数量；资料整理和统计。

包括：分组实验设计，正交设计，拉丁方设计。

分组实验设计方法：单纯平行对照、平行分批对照、平行分层对照、交叉对照。

7、试述药理研究中最适剂量的探索、多剂量实验中剂量间距、剂量的换算最佳剂量的探索一般有两种途径：①由动物实验中该药与已知药物的效价比值来推算；②由剂量折算系数法计算出最大耐受量的等效剂量。

试用剂量首先考虑安全，其次才考虑是否有效。

随着剂量的递增，每次增加的比例要逐步减少到30％～35％。

多剂量实验中剂量间距:多剂量实验中各组剂量应取“等比数列”。

分组组数视实验性质而定。

①整体动物药效实验：按新药申报资料规定应分3组，通常取1：3：9或1：2：4：8。

间距太小，易出现相邻组药效倒置现象。

间距太大，药效易处于S形曲线平坦处，不利于对比分析。

②离体器官药效实验：通常按1：10比例安排剂量，即1：10：100：1000……。

如要在其间再插中间剂量，可用相邻剂量的比例中项（M，M＝（A*B）1/2），取3.16或其近似值3，即1：3：10：30：100。

③计算LD50或ED50的实验：要求0％及100%之间有3～6个剂量组；质反应的计数资料一般取1：0.6～1：0.85的组间比值；量反应的测量资料则根据数据性质取1：0.1～1：0.5的组间比值。

剂量的换算：（1）同种动物的剂量换算：一般动物的用药剂量均以mg/kg值来表达。

根据体重和动物体型近似地推算体表面积（A=R*W2/3），式中A是动物体表面积（m2），W是体重（kg），R是动物的体型系数。

同种动物之间折算，可取以下比例式：D1：D2=A1：A2= W12/3：W22/3。

（2）不同动物间的剂量换算：标准动物的等效剂量折算系数法（Bios氏原法）8、何谓一般药理研究，其研究目的、动物和主要观察指标有哪些？一般药理研究是指新药主要药效作用以外的广泛药理作用的研究。

研究目的：①对药物的全面作用有一个基本认识；②有助于对新药药理机制的了解；③利于新的药理作用的发现；④为长期毒性试验的实验设计是重要参考。

动物：常用小鼠、大鼠、猫、狗等，性别不限，在观察循环和呼吸系统时一般不宜用小鼠和兔，尽量采用清醒动物，也可以在麻醉动物上进行。

观察指标：①精神神经系统；②心血管系统；③呼吸系统；④其他指标。

9、试述药理学实验中选择实验动物的基本原则①选用与人的机能，代谢，机构和疾病特点相似的动物；②选用解剖、生理特点符合实验目的的实验动物、充分利用不同品种品系实验动物存在的某些特殊反应；③根据课题研究目的内容选用相匹配的标准化动物；④选用与实验要求相适应的实验动物规格；⑤选用人兽共患疾病的实验动物和传统应用的实验动物；⑥实验动物的选择和应用需注意符合相应的国际规范。

10、如何设计活血化瘀方药药理研究指标？试按方剂功能主治设计以下方药药理研究指标：补阳还五汤、血府逐淤汤。

根据活血化瘀方药的功能主治可以得出研究指标的选取范围：活血化瘀复方与血小板功能、与血管平滑肌细胞（VSMC）、与内皮细胞、与血管的生成、与离子通道、与抗纤维化。

从这些方面设计建立考察指标。

补阳还五汤可治疗AS，抑制病变内膜增厚，管腔狭窄明显改善。

其机制除降血脂，减轻高血脂对内皮细胞的氧化损伤外，也与其促进内皮细胞合成与分泌。

磷酸葡萄糖异构酶2和一氧化氮（NO）等生物活性物质，进而促进中层VSMC调亡。

血府逐淤汤可降低血小板聚集率、粘附率，并可改善微循环。

抑制血管平滑肌细胞（VSMC）由收缩型向合成型转变而抑制血管平滑肌细胞（VSMC）和内膜增生。

11、何为长期毒性研究，长期毒性研究的主要目的，在进行长期毒性研究时，应遵循什么原则，长期毒性研究内容是什么？长期毒性研究（重复给药毒性研究）是反复多次给药的毒性试验的总称，描述动物重复给予受试物后的毒性特征，它是非临床安全性评价的重要内容。

主要目的：①发现受试物可能引起的临床不良反应，包括不良反应的性质、程度、量效和时效关系、可逆性等；②推测受试物重复给药的临床毒性靶器官或靶组织；③预测临床试验的起始剂量和重复用药的安全范围；④提示临床试验中需重点监测的安全性指标；⑤对毒性作用强、毒性症状发生迅速、安全范围小的受试物，长期毒性研究还可以为临床试验中的解毒或解救措施提供参考信息。

原则：①长性毒性研究应遵循“具体问题具体分析”的原则；②长期毒性研究的试验设计应符合随机、对照、重复的原则。

内容：①试验管理：长期毒性研究必须执行《药物非临床研究质量管理规范》（GLP）；②受试物：应采用制备工艺稳定、符合临床试用质量标准规定的样品；③试验动物：啮齿动物（大鼠）与非啮齿动物（犬，猴）；④给药途径：应与临床拟用药途径相同；⑤给药频率：原则上应每天给药，每天给药时间应相同；⑥给药期限：应充分考虑预期临床的实际疗程；⑦给药剂量：至少应设3个剂量组和对照组；⑧观察指标原则上，除常规观察指标外，还应根据受试物的特点、在其他试验中已观察到的某些改变，或其他的相关信息，增加相应的观测指标。

12、经验估计法选取的样本例数？①小动物（如小鼠、大鼠、鱼、蛙）：每组应为10~30例。

获取计量资料进行两组对比时，每组应≥10例；获取计数资料时，每组应≥30例；②中等动物（如兔、豚鼠）：每组8~ 12例。

获取计量资料时，每组应≥6例；获取计数资料时，每组应≥20例；③大动物（如犬，猫。

猴。

羊）：每组一般5~ 10例。

13、配对资料数据处理？一. 质反应：①单率述描：泊松分布或二项分布法（可信限区间）；①有配对关系：关联χ2法＋优势χ2法；二. 量反应：配对t值法14、非配对资料数据处理？一. 质反应（两率对比) ：1.构成比同：a.样本数大(例数≥3)：χ2（2×2）法；b.样本数小（例数<3）：机率法（简化机率法和确切机率法）；2.构成比不同：χ2权重法；二.量反应(两均数对比) ：1.正态分布①方差齐：a.例数不同：t值法；b.例数相同：t值简法；①方差不齐：t’检验。

2.偏态分布：秩和检验或序值法。

15、确定实验中药物剂量方法？（1）通过预实验确定使用的剂量：本法确定剂量比较可靠，剂量选择准确，但需要消耗时间和一定的材料；（2）根据以往经验和已有资料确定使用剂量：根据经验和资料确定剂量，过程简单，但难免具有一定的盲目性，在实际工作中需要根据具体情况，综合已有的资料信息，做出合理的判断。

16、确定实验中药物剂量中的预备实验着重解决的问题？①修正实验样本的种类和例数；②检查实验的观察指标是否客观、灵敏和可靠；③改进实验方法和熟悉实验技术；④探索药物剂量大小和反应关系，确定最适用药剂量；⑤发现值得进一步研究的线索；⑥完善实验方案。

17、如何提高药理实验的稳定性？①从实践和理论上认识待试药物对所用实验动物的生物反应差异性的规律：考虑实验的专属性，即反应指标在多大程度上体现药物的作用强度。

研究剂量与效应的关系，选择那些剂量与效应的直线关系范围宽，剂量增减一定程度后效应增减幅度较明显，相同剂量各次反应之间差异较小的实验方法、模型或指标；②调整样本数：生物差异大的实验，用较多的动物，可以提高实验的准确性；生物差异小的实验，用较少的动物，以节省人力物力。

③加强实验条件的控制：如限制动物年龄、体重、性别和窝别等，使动物条件基本一致；在实验安排上采用能使条件因素的影响在统计分析时分离开来的实验设计方法，以减少实验误差。

④实验方法的反应类型：量反应或直接测定最小数量的方法，使每一动物都能在计算结果时提供的每一信息得到采用。