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化学发光ppt课件
47
标记技术
• 标记技术 将化学发光剂的分子与某些分子 结合，直接或间接地测定待测组分。通过 分析被标记物来完成对待测组分的测定。 一些大分子化合物可直接进行标记测定。 分组量较小的组分则常通过与被标记的抗 原抗体特异性结合得到分析。
6
2.化学发光效率和发光强度
化学发光效率：
发射光子的分子数 cl r f 参加反应的分子数
激发态分子数 r 参加反应的分子数 发射光子的分子数 f 激发态分子数
化学效率：
发光效率：
化学效率主要取决于发光所依赖的化学反应本 身；而发光效率则取决于发光体本身的结构和性质， 也受环境的影响。
27
酸性高锰酸钾体系
四价铈 可直接与多 种还原性无机物或者有 机物放生氧化还原反应， 是强氧化性化学发光剂 之一。发光体系虽然简 单，但由于不收Cl-的 影响，更合适水样中有 机物污染的检测。
28
四价铈体系
（1）铈-待测物体系 可用于检测对乙酰氨基酚、色氨 酸。 （2）铈-联苯三酚-氧体系 可检测环境水样中的溶解氧。 （3）Ce4+-SO32--体系 利用某鞋荧光性有机物对其的 增敏作用，可以测定奎宁、奎宁丁、辛可丁、胆汁酸和 多种皮质类固醇、甾族化合物。 （4）Ce4+-RhB（罗丹明B）-还原性待测物体系 用于 测定叶酸、巯嘌呤、维生素C（盐）和噻唑类席夫碱。 （5）Ce4+-Ru（phen）32+（二价钌-邻菲啰啉配合物） 体系 可用于草酸、丙酮酸、维生素C、枸橼酸、酒石酸、 戊二醛和部分氟代喹诺酮衍生物的测定。
25
酸性高锰酸钾 具有很强 的氧化能力，可以与多种 无机物和有机物进行氧化 还原反应，但由于其反应 的发光强度较弱，所以知 道20世纪70年代以后， 伴随着微弱光检测技术的 发展才得到广泛的研究和 应用。
标记技术
• 标记技术 将化学发光剂的分子与某些分子 结合，直接或间接地测定待测组分。通过 分析被标记物来完成对待测组分的测定。 一些大分子化合物可直接进行标记测定。 分组量较小的组分则常通过与被标记的抗 原抗体特异性结合得到分析。
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2.化学发光效率和发光强度
化学发光效率：
发射光子的分子数 cl r f 参加反应的分子数
激发态分子数 r 参加反应的分子数 发射光子的分子数 f 激发态分子数
化学效率：
发光效率：
化学效率主要取决于发光所依赖的化学反应本 身；而发光效率则取决于发光体本身的结构和性质， 也受环境的影响。
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酸性高锰酸钾体系
四价铈 可直接与多 种还原性无机物或者有 机物放生氧化还原反应， 是强氧化性化学发光剂 之一。发光体系虽然简 单，但由于不收Cl-的 影响，更合适水样中有 机物污染的检测。
28
四价铈体系
（1）铈-待测物体系 可用于检测对乙酰氨基酚、色氨 酸。 （2）铈-联苯三酚-氧体系 可检测环境水样中的溶解氧。 （3）Ce4+-SO32--体系 利用某鞋荧光性有机物对其的 增敏作用，可以测定奎宁、奎宁丁、辛可丁、胆汁酸和 多种皮质类固醇、甾族化合物。 （4）Ce4+-RhB（罗丹明B）-还原性待测物体系 用于 测定叶酸、巯嘌呤、维生素C（盐）和噻唑类席夫碱。 （5）Ce4+-Ru（phen）32+（二价钌-邻菲啰啉配合物） 体系 可用于草酸、丙酮酸、维生素C、枸橼酸、酒石酸、 戊二醛和部分氟代喹诺酮衍生物的测定。
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酸性高锰酸钾 具有很强 的氧化能力，可以与多种 无机物和有机物进行氧化 还原反应，但由于其反应 的发光强度较弱，所以知 道20世纪70年代以后， 伴随着微弱光检测技术的 发展才得到广泛的研究和 应用。
化学发光原理及应用ppt课件
Part III. 化学发光法的临床应用
甲状腺功能的免疫分析 糖代谢紊乱的免疫分析 常见肿瘤标志物及其免疫分析 常见传染性疾病的免疫检测
– – –
病毒性肝炎 HIV感染 严重急性呼吸综合征（SARS)
其他免疫检测项目
甲状腺功能的免疫分析
• 甲状腺机能的常见评价指标及其临床
意义 1.甲状腺机能亢进 2.甲状腺功能减退 3.低T3和低T3、T4综合征
C肽
C肽测定用于了解II型糖尿病人是否需要胰岛素治疗，如 果C肽水平较低，葡萄糖刺激反应差，则表示表明立即或 最终需要胰岛素治疗，也可用于评价糖尿病酮症酸中毒病 人的胰岛功能。C肽的另一个重要的临床用途是各种低血 糖病因的鉴别。C肽水平升高科见于轻型糖尿病患者，常 见空腹血糖升高不多者C肽大多高于正常。胰岛素瘤患者， 如血中存在胰岛素抗体，血清C肽大都增高。胰腺肿瘤患 者行胰腺切除后，如血清C肽仍可测出，提示手术未能全 部切除胰腺组织。如果手术后一度阴性，后又称为阳性， 提示肿瘤复发或转移。 在肝硬化时，血浆胰岛素有升高趋势，其原因在于肝脏摄 取和降解胰岛素减少；但空腹血糖正常。
癌胚铁蛋白 糖蛋白 肝 癌胚抗原 糖蛋白 结肠、直肠、胰 腺、肺、乳腺
胰癌胚抗原 糖蛋白 胰腺
鳞状细胞抗 糖蛋白 肺、皮肤、头和 原 颈部
组织多肽抗 细胞角 乳腺、结肠 原 蛋白
CEA
• 原发性结肠癌，患者CEA升高者占45-90%. • 胰腺癌、胆管癌、胃癌、食道癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系 •
三、低T3和低T3、T4综合征
• 低T3综合征是一种由于非甲状腺疾病 造成的甲状
腺激素异常，其发生与机体的代谢状态，基础疾 病的性质和严重程度以及外来因素，如用药等有 关。代谢状态差、基础病情加重时其发生率随之 增高；当病情好转、机体健康状况趋于正常时， 低T3状态可自行消失。
常见化学发光技术PPT课件
02
它利用化学反应过程中释放的能 量激发发光物质，使其发出特定 波长的光，从而实现物质的检测 。
化学发光技术的原理
当某些物质被某种能量激发时，这些 物质会吸收能量并跃迁至激发态。
在化学发光反应中，通常需要加入特 殊的化学物质作为发光物质，这些物 质在反应过程中被激发并发出光辐射 。
当这些物质从激发态回到基态时，会 以光子的形式释放能量，从而产生光 辐射。
化学发光反应通常比较简单，所需的仪器 设备相对不复杂，操作简便，检测快速。
缺点
背景光干扰
化学发光反应中可能伴随有背景光的产生 ，对检测结果造成干扰，影响检测的准确
性。
特定性不强
某些化学发光反应可能不仅仅与目标物质 发生反应，也可能与其他类似物质发生反
应，导致检测的特异性不够强。
试剂昂贵且不稳定
某些化学发光试剂比较昂贵且容易分解变 质，需要妥善保存，增加了实验成本和难 度。
03
CATALOGUE
化学发光技术的优缺点
优点
高灵敏度
宽线性范围
化学发光技术具有很高的灵敏度，能够检 测到极低浓度的物质，因此在生物医学、 环境监测和食品安全等领域有广泛应用。
该技术线性范围较宽，可以适应不同浓度 的样品检测，减少了样品稀释和浓缩的繁 琐步骤。
非放射性
简单快捷
化学发光反应产生的光子不带电荷，因此 没有放射性污染，对实验人员和环境安全 。
在生物医学研究中的应用
蛋白质组学研究
利用化学发光技术对蛋白 质进行标记和检测，有助 于蛋白质相互作用、定位 和功能研究。
基因表达分析
通过化学发光技术检测基 因表达水平，研究基因调 控和疾病发生机制。
细胞成像与定位
利用化学发光技术对细胞 内分子进行标记和成像， 研究细胞结构和功能。
它利用化学反应过程中释放的能 量激发发光物质，使其发出特定 波长的光，从而实现物质的检测 。
化学发光技术的原理
当某些物质被某种能量激发时，这些 物质会吸收能量并跃迁至激发态。
在化学发光反应中，通常需要加入特 殊的化学物质作为发光物质，这些物 质在反应过程中被激发并发出光辐射 。
当这些物质从激发态回到基态时，会 以光子的形式释放能量，从而产生光 辐射。
化学发光反应通常比较简单，所需的仪器 设备相对不复杂，操作简便，检测快速。
缺点
背景光干扰
化学发光反应中可能伴随有背景光的产生 ，对检测结果造成干扰，影响检测的准确
性。
特定性不强
某些化学发光反应可能不仅仅与目标物质 发生反应，也可能与其他类似物质发生反
应，导致检测的特异性不够强。
试剂昂贵且不稳定
某些化学发光试剂比较昂贵且容易分解变 质，需要妥善保存，增加了实验成本和难 度。
03
CATALOGUE
化学发光技术的优缺点
优点
高灵敏度
宽线性范围
化学发光技术具有很高的灵敏度，能够检 测到极低浓度的物质，因此在生物医学、 环境监测和食品安全等领域有广泛应用。
该技术线性范围较宽，可以适应不同浓度 的样品检测，减少了样品稀释和浓缩的繁 琐步骤。
非放射性
简单快捷
化学发光反应产生的光子不带电荷，因此 没有放射性污染，对实验人员和环境安全 。
在生物医学研究中的应用
蛋白质组学研究
利用化学发光技术对蛋白 质进行标记和检测，有助 于蛋白质相互作用、定位 和功能研究。
基因表达分析
通过化学发光技术检测基 因表达水平，研究基因调 控和疾病发生机制。
细胞成像与定位
利用化学发光技术对细胞 内分子进行标记和成像， 研究细胞结构和功能。
【优秀资料】化学发光法技术概要PPT
化学发光法反应模式
一步法 （15min反应+15min显色）
➢ 夹心法 ➢ 竞争法
两步法 （15min+15min反应+15min显色）
➢ 间接法 ➢ 捕获法
一步法：夹心法
一步法：竞争法
两步法：间接法
样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37℃孵育5－30分钟； 样品加量10µl~200 µl，试剂加量50µl~200 µl，随检测项目不同而有所增减。 加入发光底物， 5-15分钟检测。 全自动仪器实验流程要求（2） 主要实验流程（3）——两步法 Architect系列：基于磁分离的化学发光检测。 样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37℃孵育5－30分钟； 样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37℃孵育5－30分钟； Architect ci8200 Elecsys系列：基于磁分离的电化学发光检测技术。 Dimension Xpand 主要实验流程（1）——一步法 优选化学发光法技术概要 全自动仪器实验流程要求（1） 板式发光范围1,000-20,000,000RLUs Immulite系列：基于粒子离心分离技术的化学发光检测。
碱性磷酸酶（AP）及发光底物
RLUs值范围
板式发光范围1,000-20,000,000RLUs 管式发光范围0-10,000,000RLUs
分辨率要求
对于测定不同浓度的标本，至少在试剂盒标准曲 线范围内能明显区分两者的RLUs。
市场上主要全自动仪器机型及应用（1 ）
雅培公司
Axsystem: 基于粒子的荧光偏振技术。
第一个结果报告时间（min ） 10 15.6 <15.6 18 15 15 30 16 16 15 35 24 9 9
化学发光法的原理技术要点及评价应用 PPT
• 按分离方法不同分 1.微粒子化学发光免疫测定 2.磁颗粒化学发光免疫测定
第一节 发光与化学发光剂
一、发光 一种物质由电子激发态回复到基态时， 释放出的能量表现为光的发射。
1.光照发光:发光剂经短波长入射光照射后进入激 发态，当回复至基态时发出较长波长的可见光。
2.生物发光:反应底物在荧光素酶的催化下利用 ATP产能，生成激发态的氧化荧光素，后者在回 复到基态时多余的能量以光子形式放出。
技术要点
1.抗原抗体结合反应 将包被McAb的磁颗粒和待 测标本加入到反应管中，标本中待测Ag与磁珠 上Ab结合，再加上AE标记Ab，经过温育，形成 磁珠Ab-Ag-AE标记Ab复合物。
2.分离技术 在电磁场中进行2-3次洗涤后，很快 地将未结合的多余Ag和标记Ab洗去。
3.化学发光反应 经洗涤的磁珠中，加入H2O2和 pH纠正液NaOH，这时AE不需要催化剂即分解并 发光，由集光器接收，经光电倍增管放大，记 录1S内所产生的光子能，其积分与被测物含量
体料是通包微 利过被珠 光用酶强度对标 记 的发抗 光测体 定底而物样抗 本原催直接化进作A M行用P P定而D 量直。接发光，
电化学发光原理图
• 这一过程可在电极表面周而复始地进行 • 产生许多光子，使光信号增强
TPA+●
电极
●
TPA
R u ( b p y )33 +
R u ( b p y )32 +
常用试剂：吖啶酯（acridinium，AE）
CH 3
N+
- HO 2
CO
O
R
CH 3 N
O CO O
R
CH 3 N
O CO O
+ CO2+ 光
第一节 发光与化学发光剂
一、发光 一种物质由电子激发态回复到基态时， 释放出的能量表现为光的发射。
1.光照发光:发光剂经短波长入射光照射后进入激 发态，当回复至基态时发出较长波长的可见光。
2.生物发光:反应底物在荧光素酶的催化下利用 ATP产能，生成激发态的氧化荧光素，后者在回 复到基态时多余的能量以光子形式放出。
技术要点
1.抗原抗体结合反应 将包被McAb的磁颗粒和待 测标本加入到反应管中，标本中待测Ag与磁珠 上Ab结合，再加上AE标记Ab，经过温育，形成 磁珠Ab-Ag-AE标记Ab复合物。
2.分离技术 在电磁场中进行2-3次洗涤后，很快 地将未结合的多余Ag和标记Ab洗去。
3.化学发光反应 经洗涤的磁珠中，加入H2O2和 pH纠正液NaOH，这时AE不需要催化剂即分解并 发光，由集光器接收，经光电倍增管放大，记 录1S内所产生的光子能，其积分与被测物含量
体料是通包微 利过被珠 光用酶强度对标 记 的发抗 光测体 定底而物样抗 本原催直接化进作A M行用P P定而D 量直。接发光，
电化学发光原理图
• 这一过程可在电极表面周而复始地进行 • 产生许多光子，使光信号增强
TPA+●
电极
●
TPA
R u ( b p y )33 +
R u ( b p y )32 +
常用试剂：吖啶酯（acridinium，AE）
CH 3
N+
- HO 2
CO
O
R
CH 3 N
O CO O
R
CH 3 N
O CO O
+ CO2+ 光
化学发光ppt
概念
• 化学发光免疫技术：集灵敏的化学 发光分析和特异的抗原抗体免疫测 定于一体的检测技术。
• 特点： 特异性高、敏感性高、分离简便、 快速、试剂无毒、安全稳定、 可自动化。
化学发光免疫技术的类型
• 按发光剂不同分为 1.发光酶免疫测定（CLEIA） chemiluminescence enzymeimmunoasssay 2.化学发光免疫测定技术(CLIA) chemiluminescence immunoassay 3.电化学发光免疫测定技术(ECLI) electrochemiluminescence immunoassay
三联毗啶钌 分子结构图
N
N
N
Ru
N
N
N
O O
N O
O
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第二节 发光酶免疫测定（CLEIA）
一、原理 属于酶免疫测定的一种。只是最后一 步酶反应所用底物为发光剂，通过发光反应 发出的光在特定的仪器上进行测定。
二、技术类型 根据酶促反应底物不同可分为： 1.荧光酶免疫测定技术 2.化学发光酶免疫测定技术
2.分离技术 将复合物转移到玻璃纤维上，用缓 冲液洗涤，没结合的抗原被洗脱，酶标抗体-抗 原-胶乳微粒抗体复合物则被保留在纤维膜上。
3.酶促发光反应 加入4-MUP，酶标抗体上AP将 4-MUP分解，形成4-MU，它在360nm激发光的照 射下，发出448nm的荧光，经荧光仪记录，放大， 根据标准曲线由电脑计算出所测物质的含量
E
Байду номын сангаасE E
洗涤
E
弃上清
E
E
E
A M P P D 发 光
E
碱性磷酸酶
抗 塑
体料是通包微 利过被珠 光用酶强度对标记的发抗光测体 定底而物样抗 本原催直接化进作A M行用P P定而D 量直。接发光，
新产业全自动化学发光
MAGLUMI®硬件介绍
MAGLUMI®硬件介绍
反应杯
加样 温育
测量 清洗
废弃物
项目菜单细则
Fertility 生育
FSH
促卵泡激素
LH
黄体生成素
PRL
催乳素
E2，Estradiol 雌二醇
PRG
孕酮
TEST
睾酮
F-TEST
游离睾酮
HCG/β-HCG 绒毛膜促性腺激素
150家用户
深圳新产业
弓形虫IgG 弓形虫IgM 风疹病毒IgG 风疹病毒IgM 巨细胞病毒IgG 巨细胞病毒IgM 单纯疱疹病毒- 1/2 IgG 单纯疱疹病毒- 1/2 IgM 单纯疱疹病毒- 2 IgG
项目菜单细则
EBV 病毒
EBV EA IgA EBV EA IgG EBV NA IgG EBV VCA IgA EBV VCA IgG EBV VCA IgM
β2-MG H-ALB
β2微球蛋白 人尿微量白蛋白
项目菜单细则
Glycometabolism 糖代谢
C-Peptide C-肽
Insulin
胰岛素
Pro Insulin 胰岛素原
IAA
抗人胰岛素抗体
GAD 65
谷氨酸脱羧酶抗体
IGF-1
胰岛素样生长因子-I
项目菜单细则
检测要求：准确、定量
免疫标记技术发展历程
放射免疫
优点：准确、定量，项目齐全
缺点：放射性污染， 试剂有效期短（一个月）、
c操作繁琐、时间2小时左右
免疫标记技术发展历程
磁酶免、半自动化学发光、时间分辨
优点：没有放射性污染，试剂有效期长（6个月以上） 缺点：操作繁琐，2小时有结果
电化学发光分析项目及临床意义 ppt课件
ppt课件 23
全自动电化学发光免疫分析 临床意义
HCG+β 妊娠后一周HCG浓度就可以判定妊 娠。现妊娠无关的HCG浓度升高见于其 它疾病患者，如生殖细胞肿瘤、卵巢肿 瘤、膀胱肿瘤、胰腺肿瘤、胃肿瘤、肺 肿瘤和肝肿瘤。
ppt课件
24
全自动电化学发光免疫分析 临床意义
• • • • • 促甲状腺素（TSH） 三碘甲状腺原氨酸（T3） 游离三碘甲状腺原氨酸（FT3） 甲状腺素（T4） 游离甲状腺素（FT4）
ppt课件 26
全自动电化学发光免疫分析 临床意义
三碘甲状腺原氨酸（T3） T3是甲状腺激素对各种靶器官作 用的重要激素，主要在甲状腺以外，大 部分在肝脏由T经脱碘生成。因此，T3 浓度反应甲状腺对周边组织的功能甚于 反映甲状腺的分泌状态。T3是查明早 期甲亢、监控复发性甲亢的重要依据。
ppt课件 27
ppt课件
ห้องสมุดไป่ตู้
25
全自动电化学发光免疫分析 临床意义
促甲状腺素（TSH）： TSH在垂体前叶的特异性嗜碱性细胞内 生成，垂体释放TSH是机体发挥甲状腺素生 理作用的中枢调节机制，可剌激甲状腺素的 生成和分泌，并有增生效应。TSH检测是查 明甲状腺功能的初筛试验，游离甲状腺激素 的微小变化就会带来TSH浓度向反方向的显 著调整。因此，TSH是检测甲状腺功能非常 敏感的特异性指标，特别适合于早期检测或 排除下丘脑-垂体-甲状腺调节系统功能紊乱。
ppt课件
非小细胞肺癌相关抗原 21-1 （Cyfra21-1） 神经元特异性烯醇化酶 （NSE） 总前列腺特异性抗原 （Total PSA） 游离前列腺特异性抗原 （Free PSA） S100蛋白 人绒毛膜促性腺激素+β 亚单位（HCG+β ）
全自动电化学发光免疫分析 临床意义
HCG+β 妊娠后一周HCG浓度就可以判定妊 娠。现妊娠无关的HCG浓度升高见于其 它疾病患者，如生殖细胞肿瘤、卵巢肿 瘤、膀胱肿瘤、胰腺肿瘤、胃肿瘤、肺 肿瘤和肝肿瘤。
ppt课件
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全自动电化学发光免疫分析 临床意义
• • • • • 促甲状腺素（TSH） 三碘甲状腺原氨酸（T3） 游离三碘甲状腺原氨酸（FT3） 甲状腺素（T4） 游离甲状腺素（FT4）
ppt课件 26
全自动电化学发光免疫分析 临床意义
三碘甲状腺原氨酸（T3） T3是甲状腺激素对各种靶器官作 用的重要激素，主要在甲状腺以外，大 部分在肝脏由T经脱碘生成。因此，T3 浓度反应甲状腺对周边组织的功能甚于 反映甲状腺的分泌状态。T3是查明早 期甲亢、监控复发性甲亢的重要依据。
ppt课件 27
ppt课件
ห้องสมุดไป่ตู้
25
全自动电化学发光免疫分析 临床意义
促甲状腺素（TSH）： TSH在垂体前叶的特异性嗜碱性细胞内 生成，垂体释放TSH是机体发挥甲状腺素生 理作用的中枢调节机制，可剌激甲状腺素的 生成和分泌，并有增生效应。TSH检测是查 明甲状腺功能的初筛试验，游离甲状腺激素 的微小变化就会带来TSH浓度向反方向的显 著调整。因此，TSH是检测甲状腺功能非常 敏感的特异性指标，特别适合于早期检测或 排除下丘脑-垂体-甲状腺调节系统功能紊乱。
ppt课件
非小细胞肺癌相关抗原 21-1 （Cyfra21-1） 神经元特异性烯醇化酶 （NSE） 总前列腺特异性抗原 （Total PSA） 游离前列腺特异性抗原 （Free PSA） S100蛋白 人绒毛膜促性腺激素+β 亚单位（HCG+β ）
化学发光PPT课件
第2页/共56页
教学目标及任务
一、掌握化学发光免疫技术的概念 二、掌握化学发光免疫分析基本原理 三、熟悉化学发光免疫分析的类型 四、了解临床应用 五、了解发展与展望
第3页/共56页
第九章 化学发光免疫 分析技术
第一节 慨 述 一、化学发光 二、化学发光效率
第二节 化学发光剂和标记技术 一、化学发光剂 二、发光剂的标记技术
第41页/共56页
电化学发光免疫分析示意图
第42页/共56页
电化学发光免疫测定示意图
第43页/共56页
标记磁颗粒在电场中发光工作示意图
第44页/共56页
第45页/共56页
第46页/共56页
第47页/共56页
第48页/共56页
第49页/共56页
第50页/共56页
第51页/共56页
四、临床应用
第9页/共56页
光照发光（photoluminescence）是指发光剂（荧 光素）经短波长的入射光照射后，电子吸收能量跃迁 到激发态，在其回复至基态时，发射出较长波长的可 见光（荧光）。
生物发光（bioluminescence）是指发生在生物体内 的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧 光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP能，生成激发 态氧化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子 的形式释放出来。
第17页/共56页
㈠直接化学发光剂 直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需 酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在 化学结构上有产生发光的特有基团，可直接 标记抗原或抗体。
第18页/共56页
1. 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化 时,发出波长为470nm的光，具有很高的 发光效率，其激发态产物 N-甲基吖啶 酮是该发光反应体系的发光体。
教学目标及任务
一、掌握化学发光免疫技术的概念 二、掌握化学发光免疫分析基本原理 三、熟悉化学发光免疫分析的类型 四、了解临床应用 五、了解发展与展望
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第九章 化学发光免疫 分析技术
第一节 慨 述 一、化学发光 二、化学发光效率
第二节 化学发光剂和标记技术 一、化学发光剂 二、发光剂的标记技术
第41页/共56页
电化学发光免疫分析示意图
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电化学发光免疫测定示意图
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标记磁颗粒在电场中发光工作示意图
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四、临床应用
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光照发光（photoluminescence）是指发光剂（荧 光素）经短波长的入射光照射后，电子吸收能量跃迁 到激发态，在其回复至基态时，发射出较长波长的可 见光（荧光）。
生物发光（bioluminescence）是指发生在生物体内 的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧 光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP能，生成激发 态氧化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子 的形式释放出来。
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㈠直接化学发光剂 直接化学发光剂在发光免疫分析过程中不需 酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在 化学结构上有产生发光的特有基团，可直接 标记抗原或抗体。
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1. 吖啶酯 在碱性条件下被H2O2氧化 时,发出波长为470nm的光，具有很高的 发光效率，其激发态产物 N-甲基吖啶 酮是该发光反应体系的发光体。
新产业全自动化学发光
01
新产业全自动化学发光的特点
全自动化的优势
提高生产效率：减少人工操作提高生产速度 降低成本：减少人工成本降低生产成本 提高产品质量：自动化设备可以保证产品质量的稳定性和一致性 提高安全性：自动化设备可以减少人为错误提高生产安全性
化学发光技术的改进
提高了灵敏度：通过改进化学发光技术提高了检测灵敏度使得检测结果更加准确。 降低了背景噪音：改进后的化学发光技术降低了背景噪音使得检测结果更加清晰。 提高了稳定性：改进后的化学发光技术提高了检测结果的稳定性使得检测结果更加可靠。 简化了操作流程：改进后的化学发光技术简化了操作流程使得检测过程更加简便。
新产业全自动化学发光的市场前景
市场需求：随着 医疗技术的发展 全自动化学发光 技术在临床诊断 中的应用越来越
广泛
技术优势：全自 动化学发光技术 具有灵敏度高、 特异性强、检测 速度快等优点能 够满足临床诊断
的需求
政策支持：政府 对医疗产业的支 持力度加大全自 动化学发光技术 作为医疗产业的 重要组成部分将 得到更多的政策
新产业全自动化学发光的挑战与展 望
技术挑战及解决方案
技术挑战：自动化程度低需要人工操作 解决方案：提高自动化程度实现全自动化操作 技术挑战：检测灵敏度低容易产生误差 解决方案：提高检测灵敏度减少误差 技术挑战：设备维护成本高需要定期维护 解决方案：降低设备维护成本延长设备使用寿命
市场挑战及拓展策略
化学发光技术包 括酶促反应、化 学发光免疫分析、 化学发光酶免疫 分析等。
化学发光技术具 有灵敏度高、特 异性强、检测速 度快等优点。
化学发光技术广 泛应用于生物医 学、环境监测、 食品安全等领域。
化学发光技术的原理
化学发光：通 过化学反应产
化学发光介绍ppt课件
9
主要内容
免疫学检测方法介绍 感染性疾病检测 肿瘤标志物检测 甲状腺及甲状旁腺功能检测 肝纤维化检测 肾功能检测 激素检测 自身抗体检测 优生优育
唐氏筛查 心血管及心肌标志物 高血压辅助诊断 糖代谢 骨代谢 贫血类 炎症 药物浓度
10
感染性疾病检测
甲型肝炎病毒（HAV）免疫检测 HAV属于小RNA病毒科中的肝RNA病毒属 HAV-IgM 人感染HAV后，血液中首先出现anti-HAV-IgM,于发病
优点：特异性好
缺点：灵敏度较差，结果判断主观，只能定性检测
6
免疫学检测方法介绍
时间分辨荧光分析法：用3价稀土离子及螯合物为示踪物代替荧 光物质、酶、同位素化学发光物质，标记抗体、抗原、激素、多 肽、蛋白质、核酸及生物细胞，待反应体系发生后，用时间分辨 检测仪测定反应产物中的荧光强度。根据产物荧光强度和相对荧 光强度的比值，判断反应体系中分析物的浓度，从而达到定量分 析。
14
感染性疾病检测
乙肝五项标志物的定量检测
4、HBcAb
阳性：表示既往感染乙肝病毒，如高抗体水平持续存在提示乙肝 病毒可能还在复制，乙肝病毒感染后，此抗体是最早出现的标志 性抗体，持续时间长，并且几乎所有患者均产生抗体，所以此抗 体是流行病学调查指标。
优点：灵敏度高、特异性好、可实现自动化 缺点：成本较高
7
免疫学检测方法介绍
化学发光检测技术：免疫反应系统和化学发光分析系统。 化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和 氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态 中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用 发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发 光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在 抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。
主要内容
免疫学检测方法介绍 感染性疾病检测 肿瘤标志物检测 甲状腺及甲状旁腺功能检测 肝纤维化检测 肾功能检测 激素检测 自身抗体检测 优生优育
唐氏筛查 心血管及心肌标志物 高血压辅助诊断 糖代谢 骨代谢 贫血类 炎症 药物浓度
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感染性疾病检测
甲型肝炎病毒（HAV）免疫检测 HAV属于小RNA病毒科中的肝RNA病毒属 HAV-IgM 人感染HAV后，血液中首先出现anti-HAV-IgM,于发病
优点：特异性好
缺点：灵敏度较差，结果判断主观，只能定性检测
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免疫学检测方法介绍
时间分辨荧光分析法：用3价稀土离子及螯合物为示踪物代替荧 光物质、酶、同位素化学发光物质，标记抗体、抗原、激素、多 肽、蛋白质、核酸及生物细胞，待反应体系发生后，用时间分辨 检测仪测定反应产物中的荧光强度。根据产物荧光强度和相对荧 光强度的比值，判断反应体系中分析物的浓度，从而达到定量分 析。
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感染性疾病检测
乙肝五项标志物的定量检测
4、HBcAb
阳性：表示既往感染乙肝病毒，如高抗体水平持续存在提示乙肝 病毒可能还在复制，乙肝病毒感染后，此抗体是最早出现的标志 性抗体，持续时间长，并且几乎所有患者均产生抗体，所以此抗 体是流行病学调查指标。
优点：灵敏度高、特异性好、可实现自动化 缺点：成本较高
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免疫学检测方法介绍
化学发光检测技术：免疫反应系统和化学发光分析系统。 化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和 氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态 中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用 发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发 光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在 抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。
化学发光介绍ppt课件
3
免疫比浊技术：在免疫反应沉淀检测法的 基础上建立起来的，是用透射比浊仪或散 射比浊仪检测可溶性抗原抗体复合物在液 相中形成的浊度从而测定抗原（抗体）的 含量 优点：快速简便 缺点：受“前带现象”影响较大，灵敏度 和特异性较差 放射免疫分析技术：用同位素标记纯化的 抗原（抗体）与待测的抗体（抗原）结合，
•化学发光免疫检 测介绍
1
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
主要内容
免疫学检测方法介绍 筛查 感染性疾病检测 管及心肌标志物 肿瘤标志物检测 压辅助诊断 甲状腺及甲状旁腺功能检测 谢 肝纤维化检测 谢
唐氏 心血 高血
糖代 骨代
2
免疫学检测方法介绍
免疫学检测是基于抗原和抗体的特 异性反应进行检测的一种手段；
免疫标记技术是将一些既易测定又 具有高度敏感性的物质标记到特异 性抗原或抗体分子上，通过这些标 记物的增强放大效应来显示反应系 统中抗原或抗体的性质与含量。
5
金标记免疫（胶体金）分析技术：简便、 快速、不需要特殊仪器，适用于单人份操 作，可用于较紧急和实验条件较差场合。 但是灵敏度、特异性较差，无法实现自动 化，结果判断主观，受环境影响较大，成 本高。 免疫荧光技术：先将已知的抗原（抗体） 标记上荧光素，再用这种荧光抗原（抗体） 作为分子探针检查细胞或组织内的相应抗 原（或抗体）。在细胞或组织中形成的抗
唐氏 心血 高血
糖代 骨代
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感染性疾病检测
甲型肝炎病毒（HAV）免疫检测 HAV属于小RNA病毒科中的肝RNA病毒属 HAV-IgM 人感染HAV后，血液中首先出现 anti-HAV-IgM,于发病后2～3周达峰值， 1～2月后迅速下降，3个月后基本消失。因 此，anti-HAV-IgM是诊断甲型肝炎早期感 染的指标。 HAV-IgG Anti-HAV-IgM一般在急性感染 后3～12周出现，滴度缓慢上升，6个月后 达到峰值，然后逐渐下降，但维持时间较
化学发光介绍 ppt课件
2、定量测定HBeAg和HBeAb浓度的变化，可以反映病情变化和治疗效果。明确测定 HbeAg向抗-Hbe转换的时期，即表现为HbeAg浓度下降和抗-Hbe浓度升高的过程。高浓 度的HbeAg还可间接提示病毒处于高复制状态，具有较高的传染性。高浓度的抗-Hbe一方 面提示病情的好转，而在某些时候（如肝功能指标很差）可能与肝坏死、肝硬化、肝癌有 关。
缺点
化学发光 放射免疫 酶联免疫 时间分辨 电化学发光
操作简单，成本较低，灵 进口试剂成本较高，国产 敏度较高，试剂较稳定 试剂合理
试剂成本低，灵敏度较高 操作复杂操作简单
灵敏度低，适用于定性和 半定量
灵敏度较高，试剂较稳定 操作复杂，反应时间长， 试剂成本较高
灵敏度较高，试剂较稳定 试剂成本高，仪器维护费 用较高，有本底干扰
收费标准 每月标本量 每年毛收入 每年成本
(元)
(万元)
(万元)
乙肝两对半
180
15*22天
71.28
化学发光免疫仅乙肝五项年净收入总计47.52万元
23.76 每人份60元
年净收入/ 万元(保守
估计)
47.52
乙肝两对半
25
15*22天
9.90
1.19
8.71
每人份3元
酶法试剂乙肝五项年净收入总计 8.71万元
3、性激素系列
（LH,FSH,TSH,E2,PRO,PRL,TES,HC G,B-HCG…）
8、优生优育类
（TOX,CMV,HSVI,HSVII,RUB）
4、甲状腺功能
9、其他类
（T3,T4,FT3,FT4,TSH,TM,TG,TPO…） （ALB,一些药物测试等）
5、糖尿病系列
化学发光法的原理技术要点及评价应用 PPT
二、上技发术出类的型光强度对待测的Ag或Ab进行定量/定性。 1.分离方法 常用磁颗粒分离技术 2.免疫学反应模式 同酶发光免疫测定技术 3.相应标记物是三联吡啶钌而不是酶
技术要点
1.三联吡啶钌标记抗体和生物素标记抗体与待测标本 同时加入一个反应杯中孵育反应
2.将链霉亲和素（SA）包被磁珠加入反应杯中，再次 孵育，使生物素（B）通过与亲和素（A）的结合， 将磁珠、Ab连接为一体，形成双Ab夹心法。
技术要点
1.抗原抗体结合反应 将包被McAb的磁颗粒和待 测标本加入到反应管中，标本中待测Ag与磁珠 上Ab结合，再加上AE标记Ab，经过温育，形成 磁珠Ab-Ag-AE标记Ab复合物。
2.分离技术 在电磁场中进行2-3次洗涤后，很快 地将未结合的多余Ag和标记Ab洗去。
3.化学发光反应 经洗涤的磁珠中，加入H2O2和 pH纠正液NaOH，这时AE不需要催化剂即分解并 发光，由集光器接收，经光电倍增管放大，记 录1S内所产生的光子能，其积分与被测物含量
荧光酶免疫测定技术反应原理图
E
E E
洗涤
Байду номын сангаас
E
弃上清
E
E
E
4MU
E
激发荧光
碱性磷酸酶
是抗 体利包 用被 理想标 的记 酶抗 体荧光样底本 物，生成的产物稳定并有
塑料微珠
抗原
强的荧光强度，通过测定荧光强度进行定量。
化学发光酶免疫测定技术反应原理图
E
E E
洗涤
E
弃上清
E
E
E
AMPPD发 光
E
碱性磷酸酶
抗 塑
2.微粒子捕获法：所用颗粒是无磁性微粒子作为 抗体或抗原的包被载体, 然后用纤维膜柱子进 行酶标记物的结合状态和游离状态的分离。
技术要点
1.三联吡啶钌标记抗体和生物素标记抗体与待测标本 同时加入一个反应杯中孵育反应
2.将链霉亲和素（SA）包被磁珠加入反应杯中，再次 孵育，使生物素（B）通过与亲和素（A）的结合， 将磁珠、Ab连接为一体，形成双Ab夹心法。
技术要点
1.抗原抗体结合反应 将包被McAb的磁颗粒和待 测标本加入到反应管中，标本中待测Ag与磁珠 上Ab结合，再加上AE标记Ab，经过温育，形成 磁珠Ab-Ag-AE标记Ab复合物。
2.分离技术 在电磁场中进行2-3次洗涤后，很快 地将未结合的多余Ag和标记Ab洗去。
3.化学发光反应 经洗涤的磁珠中，加入H2O2和 pH纠正液NaOH，这时AE不需要催化剂即分解并 发光，由集光器接收，经光电倍增管放大，记 录1S内所产生的光子能，其积分与被测物含量
荧光酶免疫测定技术反应原理图
E
E E
洗涤
Байду номын сангаас
E
弃上清
E
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4MU
E
激发荧光
碱性磷酸酶
是抗 体利包 用被 理想标 的记 酶抗 体荧光样底本 物，生成的产物稳定并有
塑料微珠
抗原
强的荧光强度，通过测定荧光强度进行定量。
化学发光酶免疫测定技术反应原理图
E
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洗涤
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弃上清
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AMPPD发 光
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碱性磷酸酶
抗 塑
2.微粒子捕获法：所用颗粒是无磁性微粒子作为 抗体或抗原的包被载体, 然后用纤维膜柱子进 行酶标记物的结合状态和游离状态的分离。
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化学发光主要技术
包被技术：
板式化学发光 固液相 5%参加反应 磁颗粒化学发光 准均相 95%参加反应
化学发光主要技术
发光原理
直接化学发光
标记物在碱性（酸性）条件下，加强氧化剂，瞬间发光
厂家由12个点做成标准曲线，用户只要高低两点 定标修正曲线即可，节省试剂，结果稳定、准确
酶促化学发光
标记物在酶催化下，缓慢发光
肿瘤标志物
糖类抗原153 糖类抗原199 糖类抗原50 糖类抗原242 糖类抗原724 细胞角蛋白十九片段 神经元特异性烯醇化酶 Stangec-100蛋白质 鳞状细胞癌相关抗原 胃蛋白酶Ⅰ 胃蛋白酶Ⅱ
CA153 CA199 CA50 CA242 CA724 CYFRA211 NSE Stangtec-100 SCCA Pepsinogen Ⅰ Pepsinogen Ⅱ
新产业全自动化学发光
深圳新产业
国家高新技术企业 国家高科技企业示范工程单位 国际最大的红杉资本看中并投资的企业
公司计划两年内上市
新产业化学发光优点
多
试剂项目多，68个已注册项目，rT3、TRab、肝纤、 CA50、CA242、CA724、211、NSE、S-100 IAA、GAD65、 IGF-1、醛固酮、血管紧张素、PCT等等。另外37个项目正 在注册中，即将批准
快 180个测试/小时，第一个测试17分钟 好 故障率低，不停机 可连续装载反应杯、样本、试剂盒 省 试剂价格低、标准品免费
免疫标记技术发展历程
检测对象： 血液（尿液）中有很多含量非常低 （ng/ml 、 mg/ml），但非常灵敏，其浓度 变化能准确反应人体疾病的发生、发展状况。 如： T3、T4、AFP、肌钙等等 检测要求：准确、定量
免疫标记技术发展历程
放射免疫
优点：准确、定量，项目齐全 缺点：放射性污染， 试剂有效期短（一个月）、 操作繁琐、时间2小时左右
c
免疫标记技术发展历程
磁酶免、半自动化学发光、时间分辨
优点：没有放射性污染，试剂有效期长（6个月以上） 缺点：操作繁琐，2小时有结果
免疫标记技术发展历程
全自动化学发光
优点： 没有放射性污染 试剂有效期长（6个月以上） 操作全自动 速度快，半小时出结果 结果最准确 缺点：试剂价格贵？
Fertility 生育
FSH LH PRL E2，Estradiol PRG TEST F-TEST HCG/β-HCG B-HCG FE3 PAPP-A DHEA-S
促卵泡激素 黄体生成素 催乳素 雌二醇 孕酮 睾酮 游离睾酮 绒毛膜促性腺激素 绒毛膜促性腺激素B亚单位 游离雌三醇 妊娠相关血浆蛋白 脱氢表雄酮
由于酶不稳定，每次都必须用6-12个点做标准曲线， 浪费试剂
全自动化学发光主要品牌
罗氏 雅培 西门子 贝克曼
新产业
新产业 MAGLUMI2000
磁颗粒管式化学发光 直接化学发光
最大速度： 180个测试/小时 第一个测试： 17分钟
样本仓
144个标本位，可随时添加，急诊优先（可以插队） 抽血管、放免管等都可，条形码识别 样本稀释比例任意设定，自动稀释高滴度样本
项目菜单细则
Hepatic
肝纤维化
透明质酸 III型前胶原N肽 IV型胶原蛋白 层粘连蛋白 甘胆酸
HA，Hyaluronic Acid PIIIP N-P CIV，Collagen IV LN，Laminin CG，Glycocholic Acid
项目菜单细则
Thyroid
射频识别技术，试剂的所有信息储存在高频电子 标签上 更新、增加新项目无需对软件升级，方便快捷
软件系统
中英文界面、报告软件
真正实现人机对话 智能报警
ABEI直接化学发光
发光信号产生及测量
NaOH
激发底物1 delay 2.5s
+
ABEI
+
H2O2
delay 0.1s 发光 (持续测量3秒)
项目菜单细则
Tumor Makers
肿瘤标志物
甲胎蛋白 癌胚抗原 铁蛋白 组织多肽抗原 前列腺酸性磷酸酶 前列腺特异性抗原 游离前列腺特异性抗原 糖类抗原125
AFP CEA Ferritin TPA PAP PSA F-PSA CA125
项目菜单细则
Tumor Makers
项目菜单细则
Prenatal Screening 产前筛查
AFP Free-B-HCG PAPP-A
甲胎蛋白 游离绒毛膜促性腺激素B亚单位 妊娠相关蛋白
项目菜单细则
Kidney Function肾功能
β2-MG H-ALB
激发底物2
ABEI直接化学发光
发光动力学曲线
纳米免疫磁性微珠
磁珠在外加磁场中迅速被磁化，快 速聚集、分离。 外部磁场消失后迅速恢复到初始状 态，没有剩磁，可以重新分散开,利 于清洗。
精美，简练的外观
MAGLUMI®硬件介绍
MAGLUMI®硬件介绍
测量 加样 反应杯 温育 清洗 废弃物
项目菜单细则
试剂区
1.15/25个试剂位，可随时连续装载、调换试剂盒 2.采用射频识别技术读取试剂盒信息，读取速度3.试剂区冷藏（8-12℃）源自独立供电4.带磁球自动悬浮系统
采样针
双针，分别加试剂和样本
内外壁清洗，针尖特氟龙包被，杜绝交叉污 双针采用钛合金材料，具有良好的防撞功能 液面探测、凝块检测功能
甲状腺 三碘甲状腺原氨酸 四碘甲状腺原氨酸 游离三碘甲状腺原氨酸 游离四碘甲状腺原氨酸 反三碘甲状腺原氨酸 促甲状腺受体抗体 甲状腺球蛋白抗体 甲状腺微粒体抗体 甲状腺球蛋白 促甲状腺激素(第三代超敏)
T3 T4 FT3 FT4 RT3 TRAB TGA TMA TG TSH (3rd Gen)
反应杯加载存储器
一次可装载720个反应杯 检测过程中，可随时连续装载
样本编辑模式：
正常模式：病人ID号从条形码上读取,项目手动输入；
快速模式：软件自动生成病人ID号，项目手动输入；
联网模式：病人ID号条形码读取，项目从Lis系统获取。
试剂盒
试剂盒自带标准品，两点定标修正主曲线
集成试剂盒设计，无需试剂预处理，即开即用