用薄层层析法检查石榴皮的鞣质
五味石榴皮散(成品)检验操作规程
GMP管理文件
一、目的：为规定五味石榴皮散生产过程中的质量控制和检验操作要求，特制定此操作规程。
二、适用范围：适用于五味石榴皮散成品的检验。
三、责任者：生产部经理、检验员、生产人员
四、正文：
【质量标准】见五味石榴皮散成品内控质量标准
【检验内容】
性状本品为棕褐色的粉末；气香，味辛、微酸。
鉴别（1）取本品，置显微镜下观察：花粉粒类圆形或椭圆形，直径43-66um，外壁具短刺和点状雕纹，有3个萌发孔，石细胞类圆形或类方形，壁一面菲薄，种皮细胞红棕色或黄棕色，长多角形，壁略做波状或连珠状增厚。
石细胞无色，椭圆形或类圆形，壁厚，孔沟细密。
（2）取本品2g，加水20ml，置60℃水浴中加热10分钟，滤过，取滤液1ml，加1%三氯化铁乙醇溶液1滴，显污绿色。
（3）取本品1.5g，加80%丙酮溶液5ml，密塞，振摇15分钟，滤
过，滤液作为供试品溶液，另取红花对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。
照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液10ul、对照药材溶液5ul，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7：2：3：0.4）为展开剂，展开，取出，晾干。
供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
检查均匀度取本品适量，平铺于光滑纸上，成5cm2，将表面压平，在亮的背景下观察，呈均匀色泽，无花纹与色斑。
水分不得过9.0%。
粒度应通过二号筛。
石榴皮中鞣花酸的提取工艺研究
石榴皮中鞣花酸的提取工艺研究作者：李海霞王彩芳张红岭方晓燕董保国来源：《中国医药导报》2008年第24期[摘要] 目的：考察石榴皮中鞣花酸的提取工艺。
方法：选用4因素3水平正交表L9(34)，以薄层扫描法测定鞣花酸含量，考察4个因素（溶剂类型，提取时间，提取次数，溶剂用量）、3个水平对鞣花酸提取率的影响。
结果：鞣花酸的最佳提取工艺为用1 mol/L的盐酸水溶液、8倍量、回流提取60 min、提取2次；结论：溶剂类型对鞣花酸的提取率影响最大，本研究确定的鞣花酸提取工艺合理、可行。
[关键词] 石榴皮；鞣花酸；提取工艺；正交试验[中图分类号] R927[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）08（c）-050-02Study on extract technology of ellagic acid in the peels of Punica granatumLI Hai-xia1,WANG Cai-fang1, ZHANG Hong-ling1, FANG Xiao-yan2,DONG Bao-guo3(1. College of Pharmacy, Zhengzhou University, Zhengzhou450051，China;2. Henan College of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou450003，China;3.Technology Limited Company of Zhengzhou Times Flagship, Zhengzhou450008，China)[Abstract] Objective:To investigate the extract technology of ellagic acid in the peels of Punica granatum. Methods:The thin layer scanning method was used to determine the content of ellagic acid. The orthogonal design with three levels of four factors (the solvent, the extracting time, the extracting times and the amount of solvent) was adopted, using ellagic acid as index to evaluate the results. Results: The best extracting condition for ellagic acid was to add 8 times amounts of the water solution of 1 mol/L hydrochloric acid, and to reflux for 60 min and extract twice. Conclusion: The solvent has the maximal influence to the dissolutions of ellagic acid. The extract technology of ellagic acid was feasible and reasonable.[Key words] Peels of Punica granatum.;Ellagic acid;Extract technology;Orthogonal test石榴皮为石榴科植物石榴（Punica granatum.L）的干燥果皮，在传统中药及临床上较为常用。
RP-HPLC法测定石榴汁中鞣花酸的含量
granatum L.): a review. Altern Med Rev,2008,13(2):128 [2] 齐典 , 金哲雄 . 植物多酚在保健食品方面的应用 [J]. 黑龙 江医药,2006,(2):120-123 [3] 徐静,韦京豫,郭继芬,等.石榴汁中部分多酚类物质的分 离鉴定[J].中国食品学报,2010,10(1):190-199 [4] 田树革,魏玉龙,刘宏炳.Folin-Ciocalteu比色法测定石榴 不同部位总多酚的含量[J].光谱实验室,2009,26(2):341344 [5] 胡淳淳,邵建柱,徐继忠,等.不同石榴品种及器官多酚含 量的比较研究[J].河北农业大学学报,2010,33(2):17-20 [6] 李海霞,张红玲,刘延泽,等.RP-HPLC法测定石榴皮中安 石榴苷[J].中草药,2006,37(5):780 [7] Honghao Zhou, Jiao Lv, Qipeng Yuan. Preparative isolation and puri cation of punicalin from pomegranate husk by high-speed countercurrent chromatography. Separation and Purication Technology,2010,72:225 [8] Jingjing Lu, Yun Wei, Qipeng Yuan. Preparative separation of punicalagin from pomegranate husk by high-speed counter current chromatography. Science Direct, Journal of ChromatoraphyB,2007,857:175
HPLC法测定石榴皮提取物中鞣花酸的含量
基金项目：新疆维吾尔自治区科技计划项目（２０１２３３１３５）作者简介：丁 楠（１９８８－），女，硕士，研究方向：新疆地产资源新药开发研究。
通信作者：高晓黎，女，教授，博士生导师，研究方向：药物传递系统研究与新药开发，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｌｉ＿ｇ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。
ＨＰＬＣ法测定石榴皮提取物中鞣花酸的含量丁 楠，高晓黎（新疆医科大学药学院药剂／物化教研室，乌鲁木齐 ８３００１１）摘要：目的 建立石榴皮提取物中鞣花酸含量的ＨＰＬＣ测定方法。
方法 色谱条件：色谱柱为Ａｇｉｌｅｎｔ ＴＣ－Ｃ１８（２）（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相为乙酸乙酯∶磷酸（０．０１ｍｏｌ／Ｌ）∶磷酸二氢钾（０．０１ｍｏｌ／Ｌ）∶甲醇（０．０５∶２０∶２０∶６０）；流速１ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长为２５４ｎｍ；柱温２５℃。
结果 鞣花酸在５．３６～１７１．４０μｇ／ｍＬ范围内与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为９７．８２％，ＲＳＤ为１．４１％（ｎ＝９）。
结论 ＨＰＬＣ法简便，准确，重复性好，可用于石榴皮提取物中鞣花酸的含量测定。
关键词：石榴皮；鞣花酸；ＨＰＬＣ中图分类号：Ｒ９１４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００９－５５５１（２０１２）０６－０７７０－０３Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ Ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ Ｐｅｅｌ ｂｙ ＨＰＬＣＤＩＮＧ Ｎａｎ，ＧＡＯ Ｘｉａｏ－ｌｉ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｕｒｕｍｑｉ ８３００１１，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａｎ ｈｉｇｈ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒ－ｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｗａｓ ｃａｒｒｉｅｄ ｏｕｔ ｏｎａｎ Ａｇｉｌｅｎｔ ＴＣ－Ｃ１８（２）ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｗｉｔｈ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ ｏｆ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ，０．０１ｍｏｌ／Ｌ ＫＨ２ＰＯ４－Ｈ３ＰＯ４，ｍｅｔｈａｎｏｌ（０．０５∶２０∶２０∶６０）ａｔ ａ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ １．０ｍＬ／ｍｉｎ．Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅ ｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２５４ｎｍ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｌｕｍｎ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｗａｓ ａｔ ２５℃．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄｗａｓ ５．３６～１７１．４０μｇ／ｍＬ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ９７．８２％ａｎｄ ＲＳＤ ｗａｓ １．４１％（ｎ＝９）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ ｐｏｍｅ－ｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｐｏｍｅｇｒａｎａｔｅ ｐｅｅｌ；ｅｌｌａｇｉｃ ａｃｉｄ；ｈｉｇｈ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ） 石榴皮为石榴科植物石榴（Ｐｕｎｉｃａ ｇｒａｎａｔｕｍＬ．）的果皮，性温，味酸、涩，归大肠经，具有涩肠止泻、杀虫、收敛止血的功效。
新疆不同产地石榴花中总鞣质、没食子酸和鞣花酸的含量测定
h t t p ://X B Y Z ．c b pt ．c n k i ．n e t 新疆不同产地石榴花中总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量测定李建梅１,李㊀颖２,希尔艾力 吐尔逊１∗(１．新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所维吾尔医方剂学重点实验室,乌鲁木齐㊀８３００４９;２．中国科学院大学,北京㊀１０００３９)摘要:目的㊀测定新疆不同产地石榴花中总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量.方法㊀采用紫外Ｇ可见分光光度法测定总鞣质的含量,H P L C 法测定没食子酸和鞣花酸的含量.结果㊀不同产地石榴花中总鞣质(３８．４４~１１３．９８m g g －１)㊁没食子酸(２．３９~３ ８１m g g －１)和鞣花酸(２．３７~５．３４m gg －１)含量差别均较大,和田皮山县石榴花中３种成分含量相对较高.结论㊀该方法准确㊁专属性强,可用于石榴花药材的质量控制.关键词:石榴花;总鞣质;没食子酸;鞣花酸D O I :１０．３９６９/j．i s s n ．１００４Ｇ２４０７．２０１９．０３．００４中图分类号:R ２８２㊀㊀㊀文献标志码:A㊀㊀㊀文章编号:１００４Ｇ２４０７(２０１９)０３Ｇ０２９８Ｇ０４D e t e r m i n a t i o no f t o t a l t a n n i n s ,g a l l i ca c i da n de l l a g i ca c i d i n p o m e g r a n a t e f l o w e r s f r o m X i n j i a n g di f f e r e n t a r e a s L I J i a n m e i １,L IY i n g ２,X i r a l iT U R S U N １∗(１．K e y L a b o r a t o r y o fT r a d i t i o n a lU y g h u rM e d i c i n eP r e s c r i p t i o no f I n s t i t u t eo fX i n j i a n gT r a d i t i o n a lU y g h u rM e d i c i n e o fX i n j i a n g U y g u rA u t o n o m o u sR e g i o n ,U r u m q i ８３００４９,C h i n a ;２．U n i v e r s i t y o f C h i n e s eA c a d e m y of S c i e n c e s ,B e i j i ng １０００３９,C h i n a )A b s t r a c t :O b j e c t i v e T o c o m p a r e t h e c o n t e n t s o f t o t a l t a n n i n ,g a l l i c a c i d a n d e l l a g i c a c i d i n p o m e g r a n a t e f l o w e r s f r o mX i n j i a n g di f f e r Ｇe n t a r e a s ．M e t h o d s U l t r a v i o l e t a n dv i s i b l e s p e c t r o p h o t o m e t r y m e t h o dw a su s e df o rd e t e r m i n i n g th ec o n t e n t so f t o t a l t a n n i n s ,a n d H P L C m e t h o dw a su s e d f o r d e t e r m i n i n g t h e c o n t e n t o f g a l l i c a c i da n de l l a gi c a c i d ．R e s u l t s T h e c o n t e n t so f t o t a l t a n n i n s (３８．４４Ｇ１１３．９８m g g －１),g a l l i c a c i d (２．３９Ｇ３．８１m g g －１)a n de l l a g i c a c i d (２．３７Ｇ５．３４m g g －１)i n p o m e gr a n a t e f l o w e r s f r o md i f f e r e n t a r e a sw e r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t ,a n d t h e c o n t e n t s o f t h e ３c o m p o n e n t s i n s a m p l e s f r o mP i s h a n i nH e t i a nw e r e t h e h i gh e s t ．C o n c l u Ｇs i o n T h em e t h o d i s a c c u r a t e a n d r e l i a b l e ．I t c a nb eu s e da s t h e q u a l i t y c o n t r o lm e t h o do f p o m e gr a n a t e f l o w e r s ．K e y wo r d s :p o m e g r a n a t e f l o w e r s ;t o t a l t a n n i n s ;g a l l i c a c i d ;e l l a g i c a c i d 基金项目:新疆维吾尔自治区中医民族医药科技人才培养项目(编号:２０１６Ｇ０３Ｇ０５);新疆地产中药民族药新药研发培育项目(编号:Q ２０１５Ｇ０２Ｇ０４)作者简介:李建梅,女,副研究员∗通信作者:希尔艾力 吐尔逊,男,主任药师㊀㊀石榴花为石榴科植物石榴P i n i c a g r a n a t u m L ．的干燥花瓣,含有多酚类㊁黄酮类和三萜类等多种成分[１],在«中华人民共和国卫生部药品标准»(维吾尔药分册)中有记载[２],具有止泻收敛和止血止汗等功效,主治腹泻日久,外用治疗出血不止㊁口舌生疮㊁脱肛痔疮㊁口臭牙痛和皮肤瘙痒等,还可用于治疗中耳炎和糖尿病等[３].我国新疆和田㊁喀什和阿图什等地石榴品质较好,是新疆特产[４].石榴花资源丰富,含有丰富的活性物质,具有很高的保健及药用价值.文献报道,石榴整株植物活性物质的研究和开发多集中于石榴籽㊁叶和果皮,相对而言石榴花的研究内容较少,主要集中在黄酮类或多酚类物质的研究[５Ｇ１０],其资源开发也受到局限.本文采用紫外Ｇ可见分光光度法和H P L C法,首次测定了９个新疆不同产地的石榴花药材中的总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量,对其质量控制提供了数据支持,以期为开发利用石榴花资源提供科学依据.１㊀仪器与试药１．１㊀仪器㊀W a t e r s e ２６９５高效液相色谱仪,W a t e r s２４８９紫外检测器(美国沃特斯公司);C i n t r a ２０紫外Ｇ可见分光光度计(澳大利亚G B C 科学仪器公司);S E C U R A １２４Ｇ１C N 电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司);R U P T Ｇ１０ＧW 超纯水机(滕州新瑞分析仪器有限公司);D F T Ｇ２００手提式高速万能粉碎机(温岭市林大机械有限公司);P T HW 调温电热套(巩义市予华仪器有限责任公司);S K ８２１０H P 超声波清洗仪(上海科导超声仪器有限公司).１．２㊀试药㊀没食子酸对照品(中国食品药品检定研究院提供,供含量测定用,批号１１０８３１Ｇ２００３０２);鞣花酸对照品(北京世纪奥科生物技术有限公司提供,供含量测定用,批号４７６Ｇ６６Ｇ４);甲醇㊁乙腈均为色谱纯[西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司];水为超纯水;磷酸㊁乙酸均为分析纯[赛默飞世尔科技(中国)有限公司];磷钼钨酸㊁碳酸钠和干酪素,均为分析纯(天津市大茂化学试剂厂);药材分别来自新疆和田皮山县㊁和田县㊁和田于田县㊁喀什叶城县㊁喀什疏附县和阿图什市等９个产地当年产的石榴花,并经希尔艾力 吐尔逊主任药师鉴定为石榴科植物石榴P i n i c a gr a n a t u m L ．的干燥花瓣.２㊀方法与结果２．１㊀总鞣质的测定２．１．１㊀对照品溶液的制备㊀精密称取没食子酸对照品１２．６m g,置于２５m L 棕色量瓶中,加水定容至刻度,使完全溶解,精密量取５．０m L,置于５０m L棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,制成质量浓度为０ ０５０４m g m L－１的没食子酸对照品溶液.２．１．２㊀供试品溶液的制备㊀精密称取石榴花药材粉末(过６０目筛)０．４g,置于２５０m L棕色量瓶中,加水１５０m L,室温下放置２４h,超声处理１０m i n,冷却至室温,用水稀释至刻度,摇匀后滤过,弃初滤液,精密量取续滤液２０m L,置于１００m L棕色量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀,即得[１１Ｇ１５].２．１．３㊀检测波长的确定㊀取２．１．１项下制备的对照品溶液和２．１．２项下制备的供试品溶液各２．０m L,分别置于２５m L棕色量瓶中,加入磷钼钨酸试液１．０m L,再加水１０m L,以质量浓度为２９０g L－１的碳酸钠溶液定容,摇匀,室温下放置３０m i n,同法制备空白对照溶液,全波长扫描４００~９００n m.结果对照品溶液和供试品溶液均在７６０n m波长处有最大吸收,因此选择样品的检测波长为７６０n m.２．１．４㊀样品的测定㊀总酚的检测:精密吸取２．１．２项下制备的供试品溶液２．０m L,置于２５m L棕色量瓶中,加入磷钼钨酸试液１．０m L,摇匀,再加水１０m L,摇匀,用质量浓度为２９０g L－１的碳酸钠溶液稀释至刻度,摇匀,室温下放置３０m i n,同时设置空白对照溶液,测定各溶液吸光度值并计算含量.未被吸附多酚的检测:称取０．６g干酪素,置于１００m L具塞锥形瓶中,精密加入２．１．２项下制备的供试品溶液２５m L,密塞,３０ħ水浴中保温１h,期间时时振摇,取出放冷至室温,摇匀,滤过,弃初滤液,精密量取续滤液２．０m L,按照总酚检测方法中自 加入磷钼钨酸试液１．０m L 起,制备样品,依法测定吸光度值,计算总鞣质含量,公式:总鞣质含量＝总酚含量－未被吸附的多酚含量.２．１．５㊀方法学考察２．１．５．１㊀线性关系考察㊀精密量取２．１．１项下制备的对照品溶液０．５,１．０,２．０,３．０,４．０和５．０m L,分别置于６个２５m L棕色量瓶中,先分别加入磷钼钨酸试液１．０m L,再加水定容至１３m L,以质量浓度为２９０g L－１体积分数为２９％的碳酸钠溶液定容,摇匀,室温下放置３０m i n,同时设置空白对照溶液,依法测定吸光度值A.以对照品质量浓度为横坐标(x)㊁吸光度值A为纵坐标(y),绘制标准曲线,计算回归方程为y１＝０．１００２x１－０．００３３,r１＝０．９９９６(n ＝６).说明没食子酸质量浓度在１．０００８~１０．０８００μg m L－１范围内与吸光度值的线性关系良好.２．１．５．２㊀精密度实验㊀精密吸取２．１．２项下制备的供试品溶液２．０m L,按照２．１．４项下方法测定供试品溶液的吸光度值,连续测定６次.结果６次吸光度R S D值为０．７７％(n＝６),表明该仪器精密度良好.２．１．５．３㊀重复性实验㊀精密称取同一批石榴花药材粉末６份,按照２．１．２项下方法制备供试品溶液,按照２．１．４项下方法检测总酚与未被吸附的多酚,计算样品中总鞣质的含量.结果６份样品的平均总鞣质含量为４９．６７m g g－１,R S D值为２．４３％(n＝６),说明该检测方法重复性良好.２．１．５．４㊀稳定性实验㊀取２．１．２项下制备的供试品溶液,在显色后的０,１５,３０,４０,５０和６０m i n测定吸光度值A.结果溶液在１h内吸光度R S D值为２．８６％(n ＝６),表明供试品溶液在配制后１h内稳定性良好.２．１．５．５㊀加样回收实验㊀精密称取石榴花药材粉末０．４g,置于２５０m L棕色量瓶中,加水１５０m L,室温下放置２４h后,超声处理１０m i n,冷却至室温,用水稀释至刻度,摇匀后滤过,弃初滤液,精密量取续滤液５．０m L,６份,分别置于５０m L棕色量瓶中,精密加入２．１．１项下制备的没食子酸对照品溶液８．０m L,用水稀释至刻度,摇匀.按照２．１．４项下样品检测方法测定吸光度值,计算总鞣质含量及回收率.结果６份样品的平均回收率为９９．１０％,R S D值为２．００％.２．２㊀没食子酸和鞣花酸的含量测定２．２．１㊀对照品溶液的制备㊀精密称取没食子酸与鞣花酸对照品适量,分别置于２５m L棕色量瓶中,加甲醇溶解并制成质量浓度分别为０．４５２和０．２４２m g m L－１的没食子酸对照品储备液和鞣花酸对照品储备液.精密吸取上述没食子酸对照品储备液２ ０和５．０m L,加甲醇分别定容至２５m L量瓶中,制成质量浓度为０ ０３６１６和０．０９０４m g m L－１的没食子酸对照品溶液;精密吸取鞣花酸对照品储备液１．０m L,置于１０m L量瓶中,用甲醇稀释至刻度,制成质量浓度为０ ０２４２m g m L－１的鞣花酸对照品溶液.２．２．２㊀供试品溶液的制备㊀没食子酸测定样品的制备:精密称取石榴花药材粉末０．３g,加水４０m L,回流提取４５m i n,定容至５０m L量瓶中,用０．４５μm微孔滤膜过滤,即得[１６Ｇ１７].鞣花酸测定样品的制备:精密称取石榴花药材粉末０．１g,加甲醇４０m L,回流提取１５m i n,定容至５０m L量瓶中,用０．４５u m微孔滤膜过滤,即得[１８Ｇ１９].２．３㊀色谱条件㊀色谱柱:W a t e r sX B r i d g eC１８(２５０m mˑ４．６m m,５μm);没食子酸测定流动相:乙腈Ｇ２m L L－１甲酸水溶液(１ʒ９９);鞣花酸测定流动相:乙腈Ｇ２m L L－１甲酸水溶液(２４ʒ７６);检测波长:２５４n m;流速:１．０m L m i n－１;进样量:１０μL;柱温:３０ħ[１５Ｇ２０].色谱图见图１.h t t p://X B Y Z．c b p t．c n k i．n e th t t p ://X B Y Z ．c b pt ．c n k i ．n et 图１㊀H P L C 图A．没食子酸对照品;B ．没食子酸样品;C ．鞣花酸对照品;D．鞣花酸样品;１．没食子酸;２．鞣花酸.F i g ．１H P L Cc h r o m a t o g r a m s A．r e f e r e n c e s u b s t a n c eo f g a l l i ca c i d ;B ．s a m pl eo f g a l l i ca c i d ;C ．r e f e r e n c e s u b s t a n c e o f e l l a g i c a c i d ;D．s a m p l e o f e l l a gi c a c i d ;１．g a l l i c a c i d ;２．e l l a gi c a c i d ．２．４㊀标准曲线的绘制与线性关系考察㊀精密吸取２．２．１项下制备的没食子酸对照品溶液２．０,５．０,８ ０,１１．０和１４．０μL ,鞣花酸对照品溶液１．０,３．０,５．０,７．０和９．０μL ,分别按照２．３项下色谱条件进样分析,以对照品峰面积为纵坐标(y )㊁进样量为横坐标(x )进行线性回归,得没食子酸和鞣花酸的回归方程分别为:y２＝３８８６３１１．６３x ２－２５１６．４４(r ２＝０ ９９９９)和y ３＝１０５４５５７０．２５x ３－４６２２４．００,(r ３＝０ ９９９９).结果表明,没食子酸与鞣花酸含量分别在０．０７２３２~０．５０６２０和０．０２４２０~０．２１７８０μg 范围内,进样量与峰面积线性关系良好.`２．５㊀精密度实验㊀精密吸取２．２．１项下制备的没食子酸和鞣花酸对照品溶液,按照２．３项下色谱条件注入液相色谱仪,重复进样６次,记录各自峰面积,没食子酸峰面积的R S D 值为０．５８％,鞣花酸峰面积的R S D 值为０．５３％.２．６㊀重复性实验㊀精密称取石榴花药材粉末(和田皮山县),按照２．２．２项下方法平行制备６份供试品溶液,按照２．３项下色谱条件分别测定没食子酸和鞣花酸的含量,结果６份样品中没食子酸和鞣花酸的平均含量分别为２．５１和３．３７m gg －１,R S D 值分别为２．０６％和１．７９％(n ＝６).２．７㊀稳定性实验㊀精密称取石榴花药材细粉(和田皮山县),按照２．２．２项下方法制备供试品溶液,分别在相应色谱条件下于０,２,４,６,８,１２和２４h 进样１０μL ,测定没食子酸和鞣花酸峰面积R S D 值分别为１ ０２％和１ ８７％(n ＝６).２．８㊀回收率测定㊀结果见表１.２．８．１㊀没食子酸㊀精密称取石榴花(和田皮山县)药材细粉６份,每份０．２５g ,加入２．２．１项下制备的质量浓度为０．０９０４m gm L －１的没食子酸对照品溶液３．５m L ,置于圆底烧瓶中,加１５m L 水回流提取４５m i n ,放冷至室温,定容至２５m L 量瓶中,平行制备６份供试品溶液,按照２ ３项下色谱条件进样测定,结果没食子酸的平均回收率为１００．９２％,R S D 值为１ ８５％.２．８．２㊀鞣花酸㊀精密称取石榴花(和田皮山县)药材细粉６份,每份０．０６g ,加入质量浓度为０ ２４２m gm L －１的鞣花酸对照品储备液０．８m L ,置于圆底烧瓶中,加入４０m L 甲醇回流提取１５m i n ,放冷至室温,定容至５０m L ,平行制备６份供试品溶液,按照２．３项下色谱条件进样测定,鞣花酸的平均回收率为１０１．３０％,R S D 值为１．７８％.表１㊀回收率测定结果T a b ．１R e s u l t s o f r e c o v e r y t e s t (n ＝６)成分样品量/μg 加入量/μg 测得量/μg 回收率/％平均回收率/％R S D/％没食子酸６４１．５６３１６．４０９７０．６７１０１．９８１００．９２１．８５６３８．０４３１６．４０９８０．８２１０４．１３６２８．００３１６．４０９３８．１８９９．０１６３４．７８３１６．４０９５３．２１１００．３２６４７．８３３１６．４０９６１．８２９９．６３６５０．５９３１６．４０９６９．７３１００．４２鞣花酸１７６．９３１９３．６０３６８．９７９９．１２１０１．３０１．７８１７３．２２１９３．６０３６９．２８１０１．４２１８６．３６１９３．６０３８６．４７１０３．４９１７３．８９１９３．６０３７３．３１１０３．３５１９１．７５１９３．６０３８６．３７１００．５３１８２．３２１９３．６０３７５．７１９９．８９２．９㊀样品的含量测定㊀按照２．２．２项下方法分别制备没食子酸和鞣花酸含量测定用供试品溶液,分别测定总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量,结果见表２.表２㊀不同产地石榴花含量测定结果T a b．２D e t e r m i n a t i o no f t h ec o n t e n t so f p o m e g r a n a t e f l o w e r s f r o md i f f e r e n t a r e a s产地总鞣质含量/m g g－１没食子酸含量/m g g－１鞣花酸含量/m g g－１库车县６２．７９２．３９５．３４和田于田县８５．６２２．６３３．０９喀什叶城县５８．３７３．８１２．３７和田洛浦县４５．４５２．６３３．２９和田皮山县１１３．９８３．１８５．２２和田墨玉县４２．６２２．５５４．４５和田县３８．４４２．５１３．２３喀什疏附县６０．４３３．４１３．０４阿图什市６０．９８３．６３４．３２３㊀讨论石榴花药材收载于«中华人民共和国卫生部药品标准(维吾尔药分册)»１９９９年版中,原标准仅有药材的显微鉴别项,未对其含量进行说明.本研究通过收集新疆不同产地的石榴花,检测其总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量,为新疆石榴花的质量控制提供理论依据.本研究采用梯度洗脱同时测定没食子酸与鞣花酸的含量,但由于石榴花中没食子酸与鞣花酸含量差异较大,同时检测峰面积差异较大,为了尽可能减小２种成分相互间含量的误差,且２种成分的样品制备条件亦不同,故选择以不同色谱条件㊁分别制备样品进行检测.所得各峰的分离度与拖尾因子均符合«中国药典»２０１５年版要求,峰形更好㊁干扰较小.该方法灵敏度高㊁分离度好㊁测定迅速㊁结果准确,为石榴花的质量控制提供了实验依据.本研究对新疆维吾尔自治区内不同产地石榴花进行检测发现,石榴花中总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量各有差异,和田皮山县石榴花的３种成分含量均显著高于其他产区石榴花,这一研究结果可能与新疆皮山县的 皮亚曼石榴 的久负盛名有关.同时对于开发利用石榴花提供了一定的参考依据.若利用这部分资源开发新制剂,可增加石榴的附加值,提高经济效益.参考文献:[１]㊀吴立军．天然药物化学[M]．５版．北京:人民卫生出版社,１９８８:３Ｇ１６．[２]㊀中华人民共和国卫生部药典委员会．中华人民共和国卫生部药品标准:维吾尔药分册[M]．乌鲁木齐:新疆人民卫生出版社,２０１４:１６．[３]㊀H u a n g T H W,P e n g G,K o t aB P,e ta l．P o m e g r a n a t ef l o w e r i m p r o v e s c a r d i a c l i p i dm e t a b o l i s m i n a d i a b e t i c r a tm o d e l:r o l e o f l o w e r i n g c i r c u l a t i n g l i p i d s[J]．B r i t J P h a r m,２００５,１４５:７６７Ｇ７７４．[４]㊀陈孝娟,顾正一,徐芳,等．不同产地的石榴皮总多酚的含量测定[J]．时珍国医国药,２０１１,２２(３):５４１Ｇ５４３．[５]㊀陈志伟,程鹏,王如刚,等．石榴花挥发油化学成分的G CＧM S分析及体外抗氧化活性测定[J]．中国医院药学杂志,２０１３,３３(４):２８０Ｇ２８２．[６]㊀钱世兵,开伟华,金家宏,等．不同产地石榴皮总黄酮含量及抗氧化活性比较研究[J]．首都医药,２０１４,(１２):８７Ｇ８８．[７]㊀张立华,张元湖,孙蕾,等．鞣花酸和三萜类物质在石榴不同器官中的分布[J]．食品科学,２０１５,３６(６):１３６Ｇ１３９．[８]㊀崔园园,陈志敏,张美,等．石榴皮炮制前后总鞣质及鞣花酸㊁安石榴苷含量变化研究[J]．亚太传统医药,２０１５,１１(２１):３８Ｇ４０．[９]㊀楚红英,罗晓,李瑜．石榴花中黄酮类成分的提取与含量测定[J]．中国酿造,２０１６,３５(２):１２７Ｇ１３０．[１０]杨彦霞,闫福林,王翔．石榴花化学成分研究[J]．中药材,２０１４,３７(５):８０４Ｇ８０７．[１１]张媛媛,刘福雪,乾康,等．正交试验优选诃子中总鞣质提取工艺研究[J]．江西中医药,２０１６,４７(４):６７Ｇ７０．[１２]周本宏,易慧兰,王耀华,等．地榆中总鞣质超声提取工艺研究[J]．中国民族民间医药,２０１５,(１):２７Ｇ２９．[１３]娄华勇,刘亚洲,张文芳,等．拳参中没食子酸和总鞣质的含量测定[J]．广西植物,２０１６,３６(６):７５２Ｇ７５７．[１４]朱林燕,孔子铭,谢建峰,等．藏药二十一味寒水石丸中的总鞣质㊁没食子酸和鞣花酸的含量测定[J]．西南民族大学学报:自然科学版,２０１４,４０(３):３８８Ｇ３９３．[１５]黄耀广,陈小雪,陈秀英．诃子㊁西青果和毛诃子的含量比较研究[J]．西北药学杂志,２０１７,３２(２):１５４Ｇ１５７．[１６]周小雅,梁光毅,刘雪梅．高效液相色谱法测定草龙中没食子酸的含量[J]．西北药学杂志,２０１４,２９(３):２３５Ｇ２３７．[１７]王奉悦,李汝卓,汪敏,等．西青果总鞣质中没食子酸和没食子酸乙酯含量测定及抗菌作用研究[J]．吉林医药学院学报,２０１７,３８(４):２４３Ｇ２４６．[１８]盛达成,陈凌,王文茂,等．高效液相色谱法同时分析五倍子提取物中的没食子酸和鞣花酸[J]．中国农学通报,２０１３,２９(４):１４８Ｇ１５４．[１９]杨小玲,刘地发,刘伟,等．山香圆叶药材中鞣花酸的提取分离与含量测定[J]．中国实验方剂学杂志,２０１４,２０(１０):５４Ｇ５７．[２０]李建梅,吐鲁洪 卡地尔,希尔艾力 吐尔逊．高效液相色谱法测定伊提日非力３种剂型中没食子酸和鞣花酸的含量[J]．医药导报,２０１８,３７(１):９１Ｇ９４．(收稿日期:２０１８Ｇ０６Ｇ３０)h t t p://X B Y Z．c b p t．c n k i．n e t。
新疆石榴皮化学成分研究
石榴皮为石榴科植物石榴 Punica grana tum L1 的干燥果皮, 在我国传统 医药中主要用于 久泻、出 血、蛔虫等病症。现代药理研究表明, 石榴皮中的总 鞣质具有抗菌、抗病毒、杀灭精子、防治性病传播等 活性。为寻找活性单体化合物, 本研究报道了新疆 石榴的干燥果皮粗粉的 95% 乙醇提取物经各种色 谱技术分离纯化, 得到的 10个化合物, 并利用化学 方法及波谱分析确定其结构分别为: 没食子酸 ( 1) 、 没食子甲酯 ( 2) 、鞣花酸 ( 3)、( + )-儿茶素 ( 4)、异 槲皮苷 ( 5) 、D-甘露醇 ( 6)、熊果 酸 ( 7) 、齐 墩果酸 ( 8) 、B-谷甾醇 ( 9)、胡萝卜苷 ( 10) 。它们均为首次 从新疆甜石榴品种中分离得到。 1 仪器与试剂
关键词 新疆石榴 皮; 化学成分 中图分类号: R 28411 /R 28412 文献标识码: A
文章编号: 1001-4454( 2009) 03-0363-03
S tudies on the Ch em ical Constituen ts from X in jiang Pun ica granatum
# 364#
Journa l o f Ch inese M ed icina lM a teria ls 第 32卷第 3期 2009年 3月
化合物 2( 15 m g) 。 3 结构鉴定
化合 物 1: 白 色针 晶 ( 甲 醇 ) , m p 237 ~ 238e 。 1H-NMR ( 600MH z, DM SO-d6 ) D: 7111 ( 2H, s, H-2, 6) , 是没食子酰基中两个芳氢的特征信号; 13 C-NMR
( 1H, d, J = 814H z) , 示 B 环为 ABX系统, 根据 H-6c 与 H-2c和 H-5c均 有, 故 将 7162 ( 1H, dd, J = 214, 811H z) , 归为 H-6c, H-5c与 H-2c相比, 同 H-6c间隔化 学键较少, 偶合常数大, 将 6189 ( 1H, d, J = 814H z) 归为 H-5c, D: 7174( 1H, d, J = 214H z) 则为 H-2c; 6142 ( 1H, d, J = 115H z), 6123 ( 1H, d, J = 115H z), 6123 ( 1H, d, J = 115H z) 为 A 环上两个 H, 因相互偶合分 裂成两重峰, 构成 AB系统, 两个氢信号均向低磁场 方向位移, 表明该黄酮为 A 环间位取代的 5, 7-二羟 基黄酮类化合物, 根据 5, 7-二羟基黄酮化合物氢谱 中 H-6信号总是比 H-8 信号位于较高磁场区的特 征, 故将 D: 6123( 1H, d, J = 115H z) 归为 A 环上的 H6, D: 6142 ( 1H, d, J = 115H z) 归为 A 环 上的 H-8。 3133~ 3175( 5H, m, H-2Ê-6d)为糖上质子的信号峰, 5129( 1H, d, J = 712H z, H-1d) 为糖的端基质子信号, 根据端基质子的偶合常数为 J = 712H z, 推测糖苷键 为 B-D-葡萄糖构型, 由此推断化合物是在 3位连有 B-D-葡萄糖的黄酮类化合物。谱学数据与文献 152一 致, 最后鉴定其结构式为槲皮素-3-O-B-D-葡萄糖, 故 鉴定为异槲皮苷。
五倍子、桂皮、石榴皮中总鞣质的提取和氨基酸含量测定
过 氧化作 用 。⑧抑 制 由肾上腺 素 引起 的脂肪 细胞 的 脂质 分解 作用 。 ④ 降低 由于肝损 伤 引起 的肝和 血清
脂质 过氧 化物 的浓 度 以及 用过 氧化 油喂养 的大 鼠的 胆 固醇 、 谷 丙 转 氨酶 和谷 草 转 氨酶 的浓度 。⑤ 降低 多种诱 变 剂的诱 变性 并 有抗 病毒 活性 。 ⑥ 降低 血 中 尿 素氮 浓度 。 ⑦ 抑制 纤 维蛋 白溶 酶 的活性 。 ⑧ 抗 肿
２ ０ １ ４ 年第 ６ 期
内蒙 古 石 油化 工
１ １
五倍子、 桂皮、 石榴皮中总鞣质的提取和氨基酸含量测定
格根塔娜 ， 罗素琴 ， 塔
（ 内蒙古医科 大学药学院 ， 内蒙古 呼和浩特
娜
０ １ ０ １ １ ０ ）
摘
要： 目的 ： 从 五 倍子 、 桂皮、 石榴 皮 中提 取 总鞣质 并鉴 定其 氨基 酸含 量 。 方法： 热 回流 法提取 五倍
２ 材 料 ２ ． １ 材料 （ 药品） ‘
榴 的果皮 。秋 季石 榴 果实 成熟 ， 顶 端 开裂 时采 摘 ， 除
去 种子 及隔瓤 ， 切瓣 晒 干 ， 或 微火 烘 干 。干燥 的果皮
呈 不规 则形或 半 圆形 的碎 片状 ， 厚２ ～３毫 米 。外表
面暗 红色 或棕 红 色 ， 粗糙 ， 具 白色小 凸点 ； 顶 端 具残 存 的宿萼 ； 基 部有果 柄 。 内面鲜 黄色 或棕 黄色 ， 并有
子、 桂皮 、 石榴 皮 的总鞣 质 ， 用络合 滴定 法测 定其 总鞣质 的含 量。结 果 ： 五 倍子 、 桂皮、 石榴 皮 中总鞣 质的 含 量各 为３ ４ ． ５ ７ ％， ２ ８ ． ７ ５ ， １ １ ． ８ ５ 。 结论 ： 热 回流提 取 法提 取 效 率较 高 ， 方法 简便 ， 易操 作 ， 但 受熟 易破
不同提取方法对石榴皮鞣花酸提取率的影响
不同提取方法对石榴皮鞣花酸提取率的影响邓小莉;董翠月;吴羽晨;刘静;张凯;赵华丽【摘要】中国具有丰富的石榴资源.石榴皮中鞣花酸是天然多酚物质的有效成分.目前中国石榴皮被大量废弃而造成严重的浪费.本研究选用3种不同石榴皮鞣花酸提取工艺,即1 mol盐酸60℃酸水解提取2次、无水乙醇—硫酸铵双水相微波萃取—酸水解、40％乙醇60℃超声萃取—酸水解,对相同重量的石榴皮粉进行鞣花酸提取.通过对粗品提纯、紫外检测、计算含量和提取率等比较分析.结果表明:40％乙醇60℃超声萃取—酸水解后鞣花酸提取率最高达18.07％.且有良好的稳定性,是石榴皮鞣花酸规模化生产的一种实用技术.【期刊名称】《云南农业大学学报》【年(卷),期】2015(030)006【总页数】5页(P969-973)【关键词】石榴皮;鞣花酸;微波辅助提取;提取工艺;超声提取【作者】邓小莉;董翠月;吴羽晨;刘静;张凯;赵华丽【作者单位】新乡学院生命科学技术学院,河南新乡453003;新乡学院生命科学技术学院,河南新乡453003;新乡学院生命科学技术学院,河南新乡453003;新乡学院生命科学技术学院,河南新乡453003;新乡学院生命科学技术学院,河南新乡453003;新乡学院生命科学技术学院,河南新乡453003【正文语种】中文【中图分类】R284.2;S665.4鞣花酸(ellagic acid，EA)是众多水果和蔬菜中天然多酚物质的有效成分，如石榴、红树莓、葡萄、甜茶、五倍子、山核桃、枸杞等[1-3]。
鞣花酸具有抗氧化、抗癌、抗基因突变，抑制人体免疫缺陷病毒( HIV) 增生[4-6]等多种生物活性功能；同时还是一种有效的凝血剂，对多种细菌、病毒都有很好的抑制作用，能防止感染，抑制溃疡[7-8]，并具有降压、镇静、预防骨质疏松等多种生理作用[3]。
中国是石榴资源最丰富的国家之一，但大量的石榴皮以废料弃之，造成了浪费。
因此，通过石榴皮鞣花酸分离纯化工艺的研究，可以充分利用中国的天然资源，为工业提供可靠的天然抗氧化剂。
GC-YL-21050石榴皮检验操作规程
杂质不得过6%（通则2301）。
仪器：分析天平、药筛。
方法：取本品适量,挑拣杂质、药屑合并称中: M0
M0-------供试品重(g)
M1-------杂质重(g)
水分不得过17.0%（通则0832第二法）。
仪器：电热鼓风干燥箱、分析天平、粉碎机、药筛等。
方法：取本品粉末1g，加水10ml，置60℃水浴中加热10分钟，趁热滤过。取滤液1ml，加1%三氯化铁乙醇溶液1滴，即显墨绿色。
（3）薄层鉴别
仪器与试剂：分析天平、硅胶G薄层板、层析缸、没食子酸对照品等。
方法：取本品3g，加无水乙醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，滤过，滤液用石油醚（60～90℃）振摇提取2次，每次20ml，弃去石油醚液，水液再用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取没食子酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10：1：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
计算公式：
W样+W0－W1
样品含水量% =×100%
式中：
W0----------------------------称量瓶的重量（g）。
W1---------------------------称量瓶与样品的重量（g）。
W样---------------------------样品的重量（g）。
总灰分不得过7.0％（通则2302）。
【浸出物】照醇溶性浸出物测定法（通则2201）项下的热浸法测定，用乙醇作溶剂，不得少于15.0%。
石榴皮、石榴子质量标准提高研究
石榴 皮 、 石榴 子质 量 标 准提 高研 究六
蔡 霞， 李聪 颖 ， 张 雨欣 ， 李 艳， 范 刚， 张 艺， 邝婷婷
（ 成都 中医药大学 民族 医药学院 成都 ６ １ １ １ ３ ７ ）
摘 要 ： 目的： 提 高石榴 皮、 石榴子的质 量标 准。方法 ： 采 用显微鉴 别法、 薄层 色谱 法鉴 别石榴子 药材 ；
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． １ １ ８ ４ ２ ／ ｗ ｓ ｔ ． ２ ０ １ ５ ． ０ ５ ． ０ １ ６
石 榴（ Ｐ ｕ ｎ ｉ ｃ ａ ｇ ｒ ａ ｎ ａ ｔ ｕ ｍ Ｌ ． ） 为 石 榴 科 石 榴 属 落 叶灌 木 或 小 乔 木 ， 别 名 安 石榴 【 ｌ 】 ， 在 中国 已经 有 ２ ０ ０ ０
则。 同时 ， 选 择 了更 能 代 表石 榴 皮 药 效 的 有 效 成 分 一 鞣花 酸 ， 作 为 石 榴 皮 质 量 标 准 中含 量 测 定 的指 标 成 分， 对 原有 石榴 皮质 量标 准进 行 了修 订 ， 提 高 了 石
抗病 毒等药理作用 的鞣花酸为对 照 ， 进行石榴子 、 石
版社， ２ ０ １ ０ ： ８ ７ ． ３ 帝 玛尔 ・ 丹增彭措． 晶珠本草 ． 上 海： 上海科 学 出版社， １ ９ ８ ６ ： ６ ５ ．
６ ６ （ ３ ） ： ２ ３ ５ — ２ ４ ２ ．
９ Ｃｏ ｌ ｏ ｍｂ ｏ Ｅ，Ｓ ａ ｎ ｇ ｉ ｏ ｖ ａ ｎｎ ｉ Ｅ，Ｄｅ ｌ ｌ Ａｇ ｌ ｉ Ｍ ．Ａ ｒ ｅ ｖ ｉ ｅ ｗ ｏ ｎ ｔ ｈ ｅ ａｎ ｔ ｉ － Ｉ ｎ ｌａ ｆ ｍｍａ ｔ ｏ ｒ ｙ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｏ ｆ ｐ ｏ ｍｅ ｇ ｒ ａ ｎ ａ ｔ ｅ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｇ ａ ｓ ｔ ｒ ｏ ｉ ｎ ｔ ｅ ｓ ｔ ｉ ｎ ａ ｌ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ． Ｅｖ ｉ ｄ Ｂａ ｓ ｅ ｄ Ｃｏ ｍｐｌ ｅ ｍｅ ｎ ｔ Ａｌ ｔ ｅ ｒ ｎ ａｔ Ｍｅ ｄ ，２ ０１ ３ ． ２ ０１ ３ ： １ —１ １ ．
和田石榴皮中单宁的提取及其含量测定
新疆农业大学专业文献综述题目: 和田石榴皮中单宁的提取及其含量测定姓名: 古丽尼沙汗.艾山学院: 化学工程学院专业: 应用化学班级: 081班学号: 095131115指导教师: 阿不都热依木职称: 副教授2012年10月15日新疆农业大学教务处制和田石榴皮中单宁的提取及其含量测定作者：古丽尼沙汗.艾山指导老师：阿不都热依木摘要：单宁是多酚中高度聚合的化合物，广泛存在于自然界中，主要应用于日化，食品，医药，制革等领域。
本文综述分别介绍了石榴皮，单宁，及其提取和测定方法。
还综述了单宁含量的经典测定方法以及现代测定方法，并对其发展前景进行了展望。
关键词：石榴皮；单宁；提取；含量测定；前言：石榴是落叶灌木或小乔木，在热带则变为常绿树。
树冠丛状自然圆头形。
树根黄褐色,生长强健，根际易生根蘖。
石榴皮为石榴科植物石榴的果皮，秋季石榴果实成熟，顶端开裂时采摘，除去种子及隔瓤，切瓣晒干，或微火烘干。
干燥的果皮呈不规则形或半圆形的碎片状，厚2～3毫米。
外表面暗红色或棕红色，粗糙，具白色小凸点，顶端具残存的宿萼，基部有果柄。
石榴果实各部位( 包括石榴皮、汁、籽) 均有含有丰富的单宁类物质，含量达10% ～ 21%，可以作为单宁提取的天然资源加以开发。
石榴皮是维吾尔医的重要天然药材，它具有对急慢性菌痢，胃肠炎，内痔，复泻，烧虫病，烧烫伤，牛皮癣，稻田性皮炎等疾病的治疗功效。
石榴在我国各地尤其是在新疆资源非常丰富，因此，本石榴的营养特别丰富，含有多种人体所需的营养成分，果实中含有维生素C及B族维生素，有机酸，糖类，蛋白质，脂肪，以及钙，磷，钾等矿物质。
据分析，石榴果实中含碳水化合物17％，水份79％，糖13～17％，其中维生素C的含量比苹果高1～2倍，而脂肪，蛋白质的含量较少，果实以鲜吃为主。
石榴可谓全身是宝，果皮，根，花皆可入药。
其果皮中含有苹果酸，鞣质，生物碱等成分，据有关实验表明，石榴皮有明显的抑菌和收敛功能，能使肠黏膜收敛，使肠黏腊的分泌物减少，所以能有效地治疗腹泻，痢疾等症，对痢疾杆菌，大肠杆菌有较好的抑制作用。
HPLC测定石榴皮提取物颗粒剂中不同时期鞣花酸含量的变化
中国兽药杂志2012，46（2）：30 32/任杰，等HPLC 测定石榴皮提取物颗粒剂中不同时期鞣花酸含量的变化任杰，姚敬明，武果桃，樊振华，赵娟，吴忻，刘文俊，孟冬霞（山西省农科院畜牧兽医研究所，太原030032）［收稿日期］2011－09－20［文献标识码］A ［文章编号］1002－1280（2012）02－0030－03［中图分类号］R284［摘要］采用高效液相色谱法测定了石榴皮提取物颗粒剂在不同时期的有效成分鞣花酸含量的变化。
色谱柱PT －230A Colume heater Apollo C 18柱（150mm ˑ4．6mm ，5μm ），柱温30ħ；流动相为乙腈－1．2%磷酸溶液（20ʒ80）；检测波长254nm ；流速1．0mL /min 。
结果显示，鞣花酸含量测定的线性范围0．52 5．20μg （R 2=0．99786），平均加样回收率为97．8%，RSD 为1．6%。
样品于2008年3月25日测定的颗粒剂鞣花酸含量为0．495mg /g ，2011年3月25日测定的含量为0．439mg /g 。
表明该石榴皮提取物颗粒剂稳定性良好，有效期可达到三年以上。
该方法简便、准确，可用于中药石榴皮的质量控制。
［关键词］HPLC ；石榴皮提取物颗粒剂；鞣花酸；含量变化；稳定性作者简介：任杰，硕士，助理研究员，从事中兽医研究。
E －mail ：xmsrenjie@163．comDetection of Ellagic Acid in the Granules of Extracts ofPunica granatum L．Pericarp in Different Periods by HPLCREN Jie ，YAO Jing －ming ，WU Guo －tao ，FAN Zhen －hua ，ZHAO Juan ，WU Xin ，LIU Wen －jun ，MENG Dong －xia（Institute of Animal Husbandry and Veterinary Science ，Shanxi Academy of Agricultural Science ，Taiyuan 030032，China ）Abstract ：The ellagic acid in the granules of extracts of Punica granatum L．pericarp in different periods was detected by HPLC．Chromatography was performed on a PT －230A Colume heater Apollo C 18column （150mm ˑ4．6mm ，5μm ）at 254nm and 30ħ．The mobile phase consisted of a mixture of acetonitrile －1．2%phosphoric acid （20ʒ80）at a flow rate of 1．0mL /min．The linear range of ellagic acid was 0．52 5．20μg with （R 2=0．99786）．The average recovery was 97．8%and RSD was 1．6%．The samples of March 25，2008and March 25，2011were 0．495mg /g ，0．439mg /g．The results showed that the granules of extracts of Punica granatum L．pericarp was stable within three years．The method is simple and accurate and reproducibe for quality control of Punica granatum L．pericarp．Key words ：HPLC ；pomegranate rind extract ；granules ellagic acid ；content changes ；stability 石榴皮为石榴科植物石榴的干燥果皮，气微，味苦涩。
石榴皮、石榴皮炭质量标准及检验操作规程
甘肃亚兰药业有限公司成品质量标准及检验操作规程1 品名：1.1 中文名：石榴皮石榴皮炭1.2 汉语拼音：Shi liu pi Shi liu pi tan2 代码：石榴皮石榴皮炭3 取样文件编号：4 检验方法文件编号：5 依据：《中国药典》（2015年版一部）。
6 质量标准：7 检验操作规程：7.1 试药与试剂：1%三氯化铁乙醇溶液、无水乙醇、甲酸、乙酸乙酯、甲醇、石油醚、丁酮、氢氧化钠滴定液、甲基红乙醇溶液指示剂、没食子酸对照品。
7.2 仪器与用具：电子天平、聚酰胺薄膜、紫外灯、烘箱、马弗炉、超声波清洗器、二氧化硫测定仪。
7.3 性状：取本品适量，自然光下目测色泽，嗅闻气味。
7.4 鉴别：石榴皮7.4.1取本品制片置10×10显微镜下做显微观察。
7.4.2取本品粉末lg，加水10ml，置60℃水浴中加热10分钟，趁热滤过。
取滤液lml ，加1%三氯化铁乙醇溶液1滴，即显墨绿色。
7.4.3 取本品3g，加无水乙醇30ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，滤过，滤液用石油醚（60~90℃）振摇提取2次，每次20ml，弃去石油瞇液，水液再用乙酸乙酯振摇提取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。
另取没食子酸对照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法（附录7）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水（10：1:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
7.5 检查：石榴皮7.5.1水分不得过15.0％（附录15第二法）。
7.5.2总灰分不得过7.0％（附录17）。
7.5.3二氧化硫残留量照二氧化硫残留量测定法（附录58）测定，不得过150mg/kg。
7.6 浸出物：石榴皮照醇溶性浸出物测定法（附录19）项下的热浸法测定，用乙醇作溶剂，不得少于15.0%。
石榴皮中丹宁类成分的薄层色谱鉴别
石榴皮中丹宁类成分的薄层色谱鉴别
刘延泽;李海霞
【期刊名称】《时珍国医国药》
【年(卷),期】2003(14)8
【摘要】目的 :用薄层色谱建立石榴皮的鉴别方法。
方法 :采用预制硅胶板 ,以石榴皮亭 B为对照品 ,醋酸乙酯 -甲酸 -水(9∶2∶ 2 )展开 ,喷以 1%三氯化铁 -铁氰化钾显色。
结果 :石榴皮色谱中 ,在与 Granatin B相应位置上 ,斑点颜色相同 ,清晰 ,无干扰。
结论 :该方法简便 ,可行。
【总页数】1页(P481-481)
【关键词】石榴皮;丹宁类成分;石榴皮亭B;薄层色谱鉴别
【作者】刘延泽;李海霞
【作者单位】河南中医学院;郑州大学药学院
【正文语种】中文
【中图分类】R282.5
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用薄层层析法检测石榴皮的鞣质Ξ
龙云惠,黄兆龙,郭亚力,郭俊明
(红河学院理学院,云南蒙自661100)
摘 要: 硅胶薄层层析法分离石榴皮的鞣质成份,斑点清晰,重现性好,灵敏度高.薄层结果证实,石榴皮鞣质含没食子酸成分,为石榴皮药用价值的研究提供科学依据.
关键词: 石榴皮;鞣质;没食子酸;薄层层析;显色剂
中图分类号: O658 文献标识码: A 文章编号: 1008-9128(2005)06-0025-02
石榴为石榴科,石榴属落叶灌木,原产于伊朗,我
国南北均有种植.石榴皮为石榴的果皮,中医认为,石
榴皮具有解毒止泻、止血、驱虫等作用.石榴皮含有的
化学成分主要有鞣质、树脂等,其中鞣质为石榴皮药
用的有效成分类型.现代医学研究证明[1]273-274,鞣质
还具有抑菌、抗病毒、抗氧化、抗肿瘤抗癌变、调节血
脂[2]等作用.鞣质的结构和化学性质复杂,常分为可
水解鞣质、缩合鞣质和新型鞣质,不同结构的鞣质具
有不同的生物活性.
近年来,对石榴皮鞣质提取[3]、药理的临床研
究[4]报道甚多,但对石榴皮鞣质结构的研究却少见报道.笔者认为,确定石榴皮鞣质的类型是其医学临床研究的基本依据.常用的化学方法无法分离石榴皮的复杂成分,而纸色谱层析法[5]则有分离效果差,斑点重叠等现象.本实验采用硅胶薄层层析法,分离石榴皮鞣质,并检测到石榴皮含有可水解鞣质没食子酸,方法简便可靠,可为研究石榴皮的药用价值和其它含鞣质的中药材的有效成分提取分离提供科学依据.
1 实验部分
1.1材料与试剂
石榴皮(产地:蒙自),鞣酸(分析纯,遵义第二化工厂生产),没食子酸(分析纯,遵义第二化工厂生产),G F
254
(青岛海洋化工厂生产),无水乙醇、甲苯、甲酸乙酯、甲酸、三氯化铁、亚硝酸钠、醋酸、氢氧化钠等试剂均为分析纯.
新鲜石榴皮洗净,晾干或低温烘干,粉碎,过80目筛,称取2克石榴皮粉,用无水乙醇常温浸提24h
,过滤,得澄清提取液.对照品鞣酸配制成0.1%乙醇溶液,没食子酸配制成0.05%乙醇溶液.
1.2层析方法
提取液和对照品点样量各为5ul,以甲苯-甲酸乙酯-甲酸(1∶5∶1)为展开剂,卧式上行.经薄层展开后,日光下观察,鞣酸的分解产物没食子酸斑点显蓝灰色,置于紫外灯下检视,显粉红色荧光斑;喷1%三氯化铁溶液显色剂,各斑点呈深蓝色;喷亚硝酸钠-醋酸-氢氧化钠显色剂[6],没食子酸斑点显橙红色,其余斑点显黄色或灰黄色.
1.3层析结果
石榴皮提取液、没食子酸、鞣酸的层析
其T LC图见图1.
1.石榴皮提取液
2.鞣酸
3.没食子酸 a.深蓝色斑
图1 石榴皮提取液的T LC图
由图1可见,石榴皮提取液和鞣酸,在与没食子酸色谱相应的位置显相同颜色的色斑,说明石榴皮提取液中有可水解鞣质没食子酸.
2 小结与讨论
(1)硅胶薄层层析检测石榴皮鞣质,未见报道.层析
第3卷 第6期 红河学院学报 V ol.3 N o.6 2005年12月 Journal of H onghe University Dec.2005Ξ收稿日期:2005-10-11
作者简介:龙云惠(1974-),女,云南个旧人,讲师,主要从事分析化学教学及科研工作.
后,得石榴皮有效成分的5个斑点,斑点清晰,无拖尾,重现性好,灵敏度高.
(2)从薄层结果可知,石榴皮鞣质含没食子酸成分.文献介绍[1]274,鞣质的驱虫作用,与分子中含四个以没食子酰基的可水解鞣质的协同作用有关.石榴皮具有的抗病毒[8]、抑菌等作用,是否仅与此没食子酸成分有关,或是石榴皮中还含有其它类型的鞣质成分,这些都需进一步的研究.
(3)鞣质结构不稳定,容易受温度等因素影响.由于石榴皮中含有糖、树胶等成分,高温回流时会产生凝胶,影响鞣质的提取分离.要使用石榴皮鞣质中没食子酸的药效,应使用乙醇、丙酮等有机溶剂在常温下浸提.
(4)常用的鞣质显色剂1%三氯化铁、三氯化铁-铁氰化钾等,样品的有效成分与没食子酸显示相似的斑点.本法采用36%醋酸-0.1m olΠL亚硝酸钠混匀,喷湿层析板,待干透后,用10%氢氧化钠喷至碱性色.亚硝酸钠使没食子酸斑点独显橙红色,其它斑点呈现黄色或灰黄色,无干扰,专属性强.
(5)由资料可知[1]258,本文使用甲苯-甲酸乙酯-甲酸(1∶5∶1)进行层析,近似于分离鞣花酸鞣质的比例,石榴皮的水解鞣质有可能既含有没食子酰基,又含鞣花酰基.虽然水解鞣质分为没食子鞣质和鞣花酸鞣质在化学上并无重要意义,但在制革工业中,鞣花酸可使皮革坚固而美观.笔者将对石榴皮鞣质的结构做进一步研究.
参考文献:
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[责任编辑 自正发]
Determination of the T annis in G ranatum by T LC
LONG Yun-hui,HUANG zhao-long,G UO Ya-li,G UO Jun-ming
(Chenistry Department,Science C ollege,H onghe University,Mengzi,661100,China) Abstract: The tannis,which is separated by T LC(silic gel),leads to clear spots,high recurrence,and g ood sensi2 tivty.The result show that the tannis in granatum contains gallic acid.It gives scientific testim ony for study on medical value of granatum.
K ey w ords: granatum;tannis;T LC;gallic acid;color-develop in agent
62红河学院学报 2005.6Π科学技术与应用。