中药对视神经损伤(详细)
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中药对视神经损伤修复的影响
项目简介
• • • • • • • • 实验背景 目前的治疗手段 实验目的 研究内容和拟解决的问题 实验步骤 实验结果预测 实验意义 本实验创新之处
实验背景
• 自1982年已有报道视神经切断的再生实验，将青 蛙的视神经切断，3个月内，视神经再生，视力恢 复。以及1985年Aguago动物实验和1987年Vidal 等动物实验均证实视神经具有再生功能。可是由 于视神经损伤的病理过程复杂，再生过程受到诸 多因素的影响。近10年已从起解剖、生理、生物 化学等方面进行研究，并已经得到一些明确的结 论。 • 有实验表明，复明中药可能通过其扩张血管增血 流动功能，促进组织的新陈代谢，从而改善是神 经组织的内环境，加强神经细胞的合成，促进视 神经的再生。
1、动物分组
• 1、选取条件相似的小 鼠设为对照组及实验 组1、2、3 组 对照组 实验组1 实验组2 实验组3
指标 视神经纤维 视神经髓鞘 视神经胶 积光密度 积光密度 质细胞
2、视神经损伤鼠模型的建立
视神经横断伤法建立视神经损伤动物模型 概念： 此法是将视神经沿眶上切迹切断，使视网膜神 经节细胞（RGC）和中枢神经系统完全断离。
实验意义
• 通过测定某些药物对视神经损伤修复的影 响，筛选出最有效的中药，并为临床治疗 视神经损伤拓宽道路。这个实验有助于了 解中药的作用机制，为中药的临床应用提 供现代理论基础，还给视神经患者一个光 明的未来。
本实验创新之处
区别于其他实验者给予神经营养因子、 周围神经移植、靶组织共培养、移植纯化 的 PN S 髓鞘细胞、运用胶质细胞抑制剂和 上调RGC bcl22 表达等已试用于增强轴突 损伤RGC 的存活的方法，本实验通过使用 新的中药单体改变RGC生存的微环境，并 筛选出具有促进视神经再生功能的中药， 来治愈视神经损伤。
来自百度文库
实验可行性
• 1 、昆明医学院实验室拥有进行实验所必须 的仪器装备，可以减少不必要的经费。
•
2、指导老师有丰富的研究经验和知识储 备。
• 通过测定某些药物对视神经损伤修复的作 用，筛选出来的具有促进作用的药物。并 且通过这个实验有助于了解中药的作用机 制，为中药的临床应用提供现代理论依据。
视神经损伤修复的重要性
视神经损伤导致： 1、视力下降甚至是失明 2、直接光反射消失、间接光反射正常现象 3、双眼的视力受损和视野缺损症状 所以，视神经损伤有效的治疗就显得急需 和迫切。
4、记录在案，并进行整理、统计、分析各指 标的检测结果
• 分别比较视神经纤维积光密度、视神经髓鞘积光 密度、视神经胶质细胞三项指标。 • 视神经损伤后应有视神经纤维减少、视神经纤维 脱髓鞘和神经胶质细胞增生等病理改变。 • 通过比较三项指标可以确认哪种中药对视神经的 再生影响最大。
5．年度研究计划和预期进展 2011年11月—2011年1月：查文献、资料，预实验。 2012年2月—2012年4月： 1、制备动物模型 2、使用免疫荧光法检测三种中药 3、分析数据并记录在案 2012年5月—2012年6月： 1、制备动物模型 2、使用F-VEP检测三种中药 3、分析数据并记录在案 2012年7月—2012年8月 1、制备动物模型 2、使用病理形态学检查三种中药 3、分析数据并记录在案 2012年9月—2012年11月： 补充整理资料，撰写论文，提交总结报告，请专家组验收。 （上述安排可根据实际情况适当调整和总体安排）
优点：
各实验动物致伤量一致，观察再生时不会受残 留未受损的轴突影响，并且试验具有可重复性， 各组间可进行对照，期间，药物可进行平行筛选。
视神经损伤鼠模型的建立
术前准备：术眼结膜囊冲洗，手 术部位剃毛消毒铺巾。 结扎剪断上直肌：于结膜穹窿部9~3 点钟位剪开结膜，向上分离暴露上直 肌，用5-缝线结扎上直肌肌止端，剪 断上直肌。 暴露视神经：用眼脸拉钩牵拉上脸， 向框外和下方牵拉上直肌残端的缝 线，同时用斜视钩伸向球后，向框 外球下方轻拉眼球，以暴露视神经。 横断视神经：用手术剪将暴露出的视神 经剪断 术后处理：缝合结膜，同时注射庆大霉 1千U，涂金霉素眼膏。
实验结果预测
某些中药对视神经损伤修复有促进作用； 某些药物对视神经损伤修复有抑制作用;某 些药物对视神经损伤修复没有作用。
预期研究成果与提交成果方式 （1） 为视神经损伤后的再生提供科 学的药物治疗。 （2）争取在省级以上期刊发表论文 （3）向学院提交总结报告，请专家 鉴定验收 （4）参加相关的学术交流会，推广 成果；为临床上更好地推广该药物提 供依据。
研究内容和拟解决的问题
• 研究内容： • 拟解决的问题 1、明确视交叉的解剖位置， • 1、用视神经横断伤法将 为断离视神经节细胞轴突， 老鼠的视神经自视交叉前 制备动物模型提供解剖学 任一部位切断，以至所有 依据。 视网膜神经节细胞（RGC） 轴突完全断离。 • 2、熟悉各种直接或间接 检测老鼠视力情况的科学 • 2、分别给各组老鼠注射 方法。 几种不同的中药，分3—5 期进行观察记录各组老鼠 的视神经节细胞的再生情 况，以及视力恢复情况。
目前主要治疗手段
• 早期药物治疗：
脱水剂、糖皮质激素、血管扩张剂、钙 离子通道阻滞剂以及维生素C、E、B等药 物，以及维生素B1、ATP以及辅酶A，地巴 唑、菸酸、维生素E、复方丹参、维脑路通 等等。
实验目的
• 探究并测定哪些中药单体对视神经损伤具 有修复作用，以及筛选出对视神经节细胞 再生最具促进作用的新药。为正处在视神 经损伤造成的视力下降，甚至丧失视力的 患者带来福音。
3、注入各种中药
实验组在角膜缘后睫状体部位用性注射 器向眼球内垂直刺入，注入中药，同时前 房水放出等量的房水，以保证眼球内压不 变，对照组不做处理注入放回笼中。
分别于3、7、14天，取实验鼠1、2、3 组的小鼠的视网膜作免疫荧光，以及取出 视神经，送至病理科检查， 染色检查以下 指标：视神经纤维积光密度、视神经髓鞘 积光密度、视神经胶质细胞。
项目简介
• • • • • • • • 实验背景 目前的治疗手段 实验目的 研究内容和拟解决的问题 实验步骤 实验结果预测 实验意义 本实验创新之处
实验背景
• 自1982年已有报道视神经切断的再生实验，将青 蛙的视神经切断，3个月内，视神经再生，视力恢 复。以及1985年Aguago动物实验和1987年Vidal 等动物实验均证实视神经具有再生功能。可是由 于视神经损伤的病理过程复杂，再生过程受到诸 多因素的影响。近10年已从起解剖、生理、生物 化学等方面进行研究，并已经得到一些明确的结 论。 • 有实验表明，复明中药可能通过其扩张血管增血 流动功能，促进组织的新陈代谢，从而改善是神 经组织的内环境，加强神经细胞的合成，促进视 神经的再生。
1、动物分组
• 1、选取条件相似的小 鼠设为对照组及实验 组1、2、3 组 对照组 实验组1 实验组2 实验组3
指标 视神经纤维 视神经髓鞘 视神经胶 积光密度 积光密度 质细胞
2、视神经损伤鼠模型的建立
视神经横断伤法建立视神经损伤动物模型 概念： 此法是将视神经沿眶上切迹切断，使视网膜神 经节细胞（RGC）和中枢神经系统完全断离。
实验意义
• 通过测定某些药物对视神经损伤修复的影 响，筛选出最有效的中药，并为临床治疗 视神经损伤拓宽道路。这个实验有助于了 解中药的作用机制，为中药的临床应用提 供现代理论基础，还给视神经患者一个光 明的未来。
本实验创新之处
区别于其他实验者给予神经营养因子、 周围神经移植、靶组织共培养、移植纯化 的 PN S 髓鞘细胞、运用胶质细胞抑制剂和 上调RGC bcl22 表达等已试用于增强轴突 损伤RGC 的存活的方法，本实验通过使用 新的中药单体改变RGC生存的微环境，并 筛选出具有促进视神经再生功能的中药， 来治愈视神经损伤。
来自百度文库
实验可行性
• 1 、昆明医学院实验室拥有进行实验所必须 的仪器装备，可以减少不必要的经费。
•
2、指导老师有丰富的研究经验和知识储 备。
• 通过测定某些药物对视神经损伤修复的作 用，筛选出来的具有促进作用的药物。并 且通过这个实验有助于了解中药的作用机 制，为中药的临床应用提供现代理论依据。
视神经损伤修复的重要性
视神经损伤导致： 1、视力下降甚至是失明 2、直接光反射消失、间接光反射正常现象 3、双眼的视力受损和视野缺损症状 所以，视神经损伤有效的治疗就显得急需 和迫切。
4、记录在案，并进行整理、统计、分析各指 标的检测结果
• 分别比较视神经纤维积光密度、视神经髓鞘积光 密度、视神经胶质细胞三项指标。 • 视神经损伤后应有视神经纤维减少、视神经纤维 脱髓鞘和神经胶质细胞增生等病理改变。 • 通过比较三项指标可以确认哪种中药对视神经的 再生影响最大。
5．年度研究计划和预期进展 2011年11月—2011年1月：查文献、资料，预实验。 2012年2月—2012年4月： 1、制备动物模型 2、使用免疫荧光法检测三种中药 3、分析数据并记录在案 2012年5月—2012年6月： 1、制备动物模型 2、使用F-VEP检测三种中药 3、分析数据并记录在案 2012年7月—2012年8月 1、制备动物模型 2、使用病理形态学检查三种中药 3、分析数据并记录在案 2012年9月—2012年11月： 补充整理资料，撰写论文，提交总结报告，请专家组验收。 （上述安排可根据实际情况适当调整和总体安排）
优点：
各实验动物致伤量一致，观察再生时不会受残 留未受损的轴突影响，并且试验具有可重复性， 各组间可进行对照，期间，药物可进行平行筛选。
视神经损伤鼠模型的建立
术前准备：术眼结膜囊冲洗，手 术部位剃毛消毒铺巾。 结扎剪断上直肌：于结膜穹窿部9~3 点钟位剪开结膜，向上分离暴露上直 肌，用5-缝线结扎上直肌肌止端，剪 断上直肌。 暴露视神经：用眼脸拉钩牵拉上脸， 向框外和下方牵拉上直肌残端的缝 线，同时用斜视钩伸向球后，向框 外球下方轻拉眼球，以暴露视神经。 横断视神经：用手术剪将暴露出的视神 经剪断 术后处理：缝合结膜，同时注射庆大霉 1千U，涂金霉素眼膏。
实验结果预测
某些中药对视神经损伤修复有促进作用； 某些药物对视神经损伤修复有抑制作用;某 些药物对视神经损伤修复没有作用。
预期研究成果与提交成果方式 （1） 为视神经损伤后的再生提供科 学的药物治疗。 （2）争取在省级以上期刊发表论文 （3）向学院提交总结报告，请专家 鉴定验收 （4）参加相关的学术交流会，推广 成果；为临床上更好地推广该药物提 供依据。
研究内容和拟解决的问题
• 研究内容： • 拟解决的问题 1、明确视交叉的解剖位置， • 1、用视神经横断伤法将 为断离视神经节细胞轴突， 老鼠的视神经自视交叉前 制备动物模型提供解剖学 任一部位切断，以至所有 依据。 视网膜神经节细胞（RGC） 轴突完全断离。 • 2、熟悉各种直接或间接 检测老鼠视力情况的科学 • 2、分别给各组老鼠注射 方法。 几种不同的中药，分3—5 期进行观察记录各组老鼠 的视神经节细胞的再生情 况，以及视力恢复情况。
目前主要治疗手段
• 早期药物治疗：
脱水剂、糖皮质激素、血管扩张剂、钙 离子通道阻滞剂以及维生素C、E、B等药 物，以及维生素B1、ATP以及辅酶A，地巴 唑、菸酸、维生素E、复方丹参、维脑路通 等等。
实验目的
• 探究并测定哪些中药单体对视神经损伤具 有修复作用，以及筛选出对视神经节细胞 再生最具促进作用的新药。为正处在视神 经损伤造成的视力下降，甚至丧失视力的 患者带来福音。
3、注入各种中药
实验组在角膜缘后睫状体部位用性注射 器向眼球内垂直刺入，注入中药，同时前 房水放出等量的房水，以保证眼球内压不 变，对照组不做处理注入放回笼中。
分别于3、7、14天，取实验鼠1、2、3 组的小鼠的视网膜作免疫荧光，以及取出 视神经，送至病理科检查， 染色检查以下 指标：视神经纤维积光密度、视神经髓鞘 积光密度、视神经胶质细胞。