核酸提取试剂盒介绍
核酸试剂盒 组成
核酸试剂盒组成
核酸试剂盒是用于核酸提取、纯化、放大或检测的一种化学试剂盒。
核酸试剂盒通常包括以下常见组成部分:
1. 缓冲液:用于维持试剂盒中的化学环境稳定,在DNA 或RNA提取纯化过程中起到调节pH值、维持离子平衡等作用。
2. 蛋白酶及其抑制剂:蛋白酶是DNA或RNA提取过程中的一种常见污染源,因此调理酶在核酸提取试剂盒中起到去除蛋白质的功能。
3. 离心柱:核酸提纯通常需要离心柱来分离核酸。
4. 硅胶磁珠:用于吸附DNA或RNA,帮助其在提取纯化过程中得以分离。
5. 洗涤液:用于清洗离心柱或硅胶磁珠,去除携带的其他杂质。
6. Elution Buffer:用于溶解和纯化后的DNA或RNA,
使其易于收集和保存。
7. 反应混合液:用于核酸的扩增、检测等过程中所需的反应试剂。
包括PCR试剂、RT-PCR试剂、核酸检测酶切酶等。
这些是核酸试剂盒中可能包含的一些基本组成部分,不同类型的核酸试剂盒可能还包括其他特定组分,具体组成会因商家、产品和应用而有所不同。
因此,在使用核酸试剂盒时应严格按照产品说明书进行操作。
Roche病毒核酸提取
Roche病毒核酸提取试剂盒当使用全血提取核酸时,提取物中将包括细胞和病毒基因组。
1.样品准备200μl样品✧血清✧血浆✧全血样品存在沉淀物时需通过离心去除。
2.试剂盒准备✧蛋白酶K:使用5ml Elution Buffer溶解、混匀,置于-20℃保存(12m)。
✧Poly[A]:使用0.5ml Elution Buffer溶解,分装成50μl等份,置于-20℃保存(12m)。
每次使用时,每50μl与2.5ml Binding Buffer混匀。
✧Inhibitor Removal Buffer:加入20ml 纯乙醇,混匀,常温储存。
✧Wash Buffer:加入40ml 纯乙醇,混匀,常温储存。
3.提取方法(1)200μl经预处理的样本使用1.5ml无核酸EP管装载,加入200μl Binding Buffer(已加入poly[A])和50μl蛋白酶K,混匀。
(2)72℃孵育10min,再加入100μl Binding Buffer。
(3)装好纯化株和收集管,将上述处理样品加入纯化柱。
(3)8000g×1min,弃收集管中的液体。
(4)每管加入500μl Inhibitor removal buffer,8000g×1min,弃收集管中的液体。
(5)每管加入450μl Wash buffer,8000g×1min,弃收集管中的液体。
(6)每管加入450μl Wash buffer,8000g×1min+13000g×10s,弃收集管中的液体。
(7)使用无核酸EP管替代收集管,每只纯化柱加入50μl Elution buffer,8000g×1min。
*如果起始样本量为300μl,每步的缓冲液也适当增加使用体积。
*从全血中提取核酸,洗脱缓冲液提前余热至70℃。
*进行PCR试验时,使用10μl~20μl反应;RT-PCR时3.5μl。
核酸检测试剂盒原理
核酸检测试剂盒原理首先是核酸提取试剂。
核酸通常嵌入在细胞或病毒颗粒中,因此需要使用核酸提取试剂将核酸从样本中提取出来。
核酸提取试剂通常包含一个蛋白酶,它能够分解蛋白质,使得核酸从蛋白质的包裹中释放出来。
此外,核酸提取试剂还包含一些溶剂,如盐和酒精,用于使细胞或病毒颗粒破裂和沉淀,从而获得含有核酸的上清液。
接下来是核酸扩增试剂。
核酸检测通常需要扩增核酸的数量,以达到检测的灵敏度。
核酸扩增试剂通常包含一个DNA聚合酶,它能够在一定的温度下,将核酸模板作为引物,合成新的DNA链。
核酸扩增试剂还包含了核酸模板的引物和适当的缓冲液,以调节反应的条件。
在核酸扩增的过程中,还需要考虑PCR(聚合酶链式反应)或RT-PCR (逆转录聚合酶链式反应)的选择。
PCR是一种将DNA扩增到指数级别的技术,它利用DNA聚合酶在高温下对DNA模板进行连续扩增。
而RT-PCR则是先将RNA逆转录成DNA,再进行扩增。
RT-PCR广泛应用于病毒检测和基因表达分析等领域。
最后是核酸标记试剂。
核酸检测通常需要通过标记物来检测核酸的存在和数量。
核酸标记试剂通常包含了一种标记物,如荧光染料或放射性同位素。
对于荧光染料标记,核酸标记试剂中通常含有可与核酸结合的一对引物,其中一对引物上带有荧光染料,另一对引物标记有Quencher。
引物与核酸结合后,荧光染料和Quencher之间的距离很近,因此无荧光信号。
在核酸扩增的过程中,当核酸扩增到引物位点时,荧光染料和Quencher被分离,发出荧光信号。
对于放射性同位素标记,核酸标记试剂中通常含有一种放射性同位素,如32P或35S,它能够与核酸结合。
标记的核酸通过放射性示踪仪来检测。
最后,核酸检测的结果可以通过聚合酶链式反应仪(PCR仪)或放射性示踪仪来记录和测量。
PCR仪可以记录PCR反应的温度变化和荧光信号,从而得到核酸的扩增曲线和定量结果。
放射性示踪仪可以测量核酸标记物的辐射量,从而得到核酸的数量。
新冠核酸检测试剂盒产品说明书
新冠核酸检测试剂盒产品说明书1. 引言新冠病毒(COVID-19)自2019年末在全球范围内爆发以来,已经造成了严重的公共卫生危机。
为了及时、准确地检测新冠病毒的感染情况,本公司开发了新冠核酸检测试剂盒产品,并特此出具本产品说明书。
2. 产品概述新冠核酸检测试剂盒是一种用于检测新冠病毒感染的重要工具。
该产品基于核酸检测技术,通过检测样本中的病毒核酸片段来确定是否感染了新冠病毒。
该产品具有以下特点: - 高灵敏度:能够在感染初期及时发现新冠病毒感染。
- 高特异性:能够准确识别新冠病毒并排除其他相关病毒感染。
- 快速检测:样本处理简便,检测时间短,结果快速可靠。
3. 适用范围本产品适用于医疗机构、公共卫生部门以及相关科研机构等场所进行新冠病毒感染的检测。
它可以用于急诊筛查、病例诊断、流行病学调查等用途。
4. 产品组成新冠核酸检测试剂盒由以下组成部分组成: 1. 核酸提取试剂盒:用于从样本中提取病毒核酸。
2. 核酸扩增试剂盒:用于扩增提取到的病毒核酸片段。
3. 荧光染料:用于标记扩增产物,并进行荧光信号检测。
4. 标准控制品:用于质控和检测结果的验证。
5. 检测步骤5.1 样本采集:采集患者咽拭子、鼻拭子或痰液样本,并将样本置于采集管中。
5.2 核酸提取:使用核酸提取试剂盒,按照说明书中的步骤进行核酸提取。
5.3 核酸扩增:将提取到的核酸样本加入核酸扩增试剂盒中,放入PCR仪中进行扩增反应。
5.4 荧光信号检测:将扩增产物与荧光染料混合,放入荧光检测仪中,测量样品中的荧光信号。
5.5 结果分析:根据荧光信号的强度判断样品中是否存在新冠病毒。
6. 结果解读本产品根据荧光信号的强度来判断样品中是否存在新冠病毒,具体结果如下: - 阳性结果:荧光信号强烈,说明样品中存在新冠病毒感染。
- 阴性结果:荧光信号弱或未检测到,说明样品中不存在新冠病毒感染。
- 无效结果:无论荧光信号强弱,均无法判断样品中是否存在新冠病毒感染,需重新检测。
核酸提取试剂盒国标
核酸提取试剂盒国标1. 简介核酸提取试剂盒是一种用于从生物样本中提取核酸(包括DNA和RNA)的试剂盒。
它在医学、生命科学研究、法医学等领域具有广泛的应用,可以用于分析基因组、检测病原体、进行遗传性疾病筛查等。
核酸提取试剂盒国标是对核酸提取试剂盒的相关技术规范和质量要求进行统一制定的标准。
它旨在确保核酸提取试剂盒的质量稳定,使不同厂家生产的产品能够具有相同的标准,以便用户能够获得可靠、准确和重复性好的实验结果。
2. 国标制定背景核酸提取试剂盒作为一种常见的实验工具,在实验室中被广泛使用。
然而,由于不同厂家生产的产品存在差异,导致实验结果可能会出现偏差。
为了解决这个问题,制定核酸提取试剂盒国标成为必要。
制定国标可以统一各个厂家的产品质量要求,规范产品的生产工艺和质量控制流程,提高核酸提取试剂盒的质量稳定性和可靠性。
此外,国标还可以帮助用户选择合适的试剂盒,并提供标准操作流程,以确保实验结果的准确性和可重复性。
3. 国标内容核酸提取试剂盒国标主要包括以下内容:3.1 产品分类与命名根据不同的核酸提取方法和应用领域,将核酸提取试剂盒分为不同的分类,并对每个分类进行命名规范。
例如,可以根据核酸来源将其分为DNA提取试剂盒和RNA提取试剂盒;或者根据应用领域将其分为医学用途和科研用途等。
3.2 技术规范对核酸提取试剂盒的技术规范进行详细说明,包括但不限于以下方面: - 样本处理:要求对不同类型的样本(如血液、组织、细胞等)进行适当处理,以保证样本中核酸的完整性和纯度。
- 提取原理:介绍核酸提取的基本原理和方法,以及各个步骤的操作要点。
- 试剂配方:对试剂盒中各种试剂的成分和浓度进行规定,确保产品质量的稳定性和一致性。
- 实验步骤:提供标准的实验操作步骤,包括样本处理、溶解、洗涤、洗脱等过程,并给出相应的注意事项和操作要点。
3.3 质量控制对核酸提取试剂盒的质量控制要求进行明确,包括但不限于以下方面: - 质量检测方法:规定核酸提取试剂盒的质量检测方法,如纯度检测、完整性检测等。
核酸提取试剂说明书
说明书【产品名称】【预期用途】本产品主要原理如下:1.使用裂解液实现细胞裂解、DNA 的释放。
2.磁珠可以特异地吸附DNA ,通过洗涤,去除DNA 以外的杂质。
3.洗脱液解离吸附在磁珠上的DNA ,得到纯度和浓度均很高的DNA 。
【检验原理】100次/盒; 400次/盒【包装规格】核酸提取或纯化试剂版本号:12/2021用于核酸的提取、富集、纯化等步骤。
其处理后的产物用于临床体外检测使用。
核酸提取或纯化试剂【主要组成成分】100次/盒400次/盒试剂名称规格数量规格数量裂解缓冲液24ml/瓶1瓶96ml/瓶1瓶漂洗缓冲液1(浓缩液)80ml/瓶1瓶80ml/瓶4瓶漂洗缓冲液2(浓缩液)50ml/瓶1瓶50ml/瓶4瓶漂洗缓冲液396 ml/瓶1瓶192ml/瓶2瓶洗脱缓冲液30ml/瓶1瓶96ml/瓶1瓶蛋白酶K25mg/支2支180mg/瓶1瓶蛋白酶K保存液 1.25 ml/支2支5ml/支2支磁珠悬浮液1ml/瓶2瓶8ml/瓶1瓶【自备仪器、试剂】1.手动单管提取:1)恒温混匀仪——货号:CW25932)2/15 ml磁力架——货号:CW25943)异丙醇、无水乙醇2.手动96孔深孔板提取:1)恒温混匀仪——货号:CW25932)废液抽吸系统——推荐品牌台湾洛科3)手动连续分液器——推荐品牌Eppendorf4)电动连续分液器——推荐品牌Eppendorf5)手动连续分液器分液管(25 ml)——推荐品牌Eppendorf6)96孔板磁力架——货号:CW25957)异丙醇、无水乙醇3.磁棒法磁珠自动提取系统:1)磁棒法磁珠自动提取系统——建议品牌Thermo Fisher2)异丙醇、无水乙醇【储存条件及有效期】4-30℃保存,有效期12个月。
可在4-37℃运输,运输时间建议不超过7天。
【样本要求】1.适用样本类型:抗凝全血、唾液、细胞。
2.样本处理与保存:新鲜样本应尽快处理或-70℃冻存,避免反复冻融。
莫纳(武汉)生物科技核酸提取试剂盒说明书
Version 1.0核酸提取试剂磁珠法病毒核酸提取试剂盒操作手册货号:MI30301S(50次/盒) MI30301M(100次/盒)MI35301S(32次/盒) MI35301M(96次/盒)莫纳(武汉)生物科技有限公司400-928-3698核酸提取试剂说明书【产品名称】通用名称:核酸提取试剂商品名称:磁珠法病毒核酸提取试剂盒【包装规格及适配仪器】预封装:32次/盒、96次/盒(适配Auto-Ex 32全自动核酸提取仪)非预封装:50次/盒、100次/盒(手工提取和其他自动核酸提取仪)【预期用途】用于核酸的提取、富集、纯化等步骤。
其处理后的产物用于临床体外检测使用。
【样本要求】拭子、组织匀浆液、血浆、血清、细胞培养上清液或各种病毒保存液等。
【检验原理】独特分离作用的磁珠和优化的试剂配方保证磁珠在一定条件下与核酸高效结合,而当条件改变时,磁珠释放吸附的核酸,能够达到快速分离纯化核酸的目的。
【主要组成成分】序号组分预封装非预封装列位32次/盒96次/盒50次/盒100次/盒1裂解液VPL第2、8列600μL/孔600μL/孔30 mL60 mL2洗涤液VPA第3、9列700μL/孔700μL/孔18 mL36 mL3磁珠MB1第4、10列30μL/孔30μL/孔2*1 mL3*1 mL475%乙醇700μL/孔700μL/孔// 575%乙醇第5、11列700μL/孔700μL/孔6无核酸酶水第6、12列100μL/孔100μL/孔 5 mL10 mL 组件数量96孔预封装板/2*16T6*16T/8连磁棒套2*2T6*2T【储存条件及有效期】室温(15~25℃)保存,非预封装试剂盒中磁珠MB1建议于2~8℃保存。
试剂盒有效期12个月。
【检验方法】方法一:自动法1. 试剂板准备1)预封装板:取出深孔板,颠倒数次使磁珠重悬,孔板离心机500 rpm离心1 min,使试剂及磁珠集中在孔板底部,使用前小心撕去铝箔封口膜,避免液体溅出。
核酸提取试剂盒说明书
核酸提取试剂盒说明书标题:核酸提取试剂盒说明书一、产品概述本产品是一款适用于各种生物样本的核酸提取试剂盒,能够高效、快速地从各种类型的样本中提取出高质量的DNA/RNA。
广泛应用于基因检测、分子生物学研究、疾病诊断等领域。
二、产品组成1. 核酸提取液A:用于裂解细胞和溶解核酸。
2. 核酸提取液B:用于去除蛋白质等杂质。
3. 洗涤液:用于洗涤核酸。
4. 乙醇溶液:用于沉淀核酸。
5. RNA酶抑制剂:防止RNA降解。
6. DNA/RNA分离柱:用于核酸的吸附和洗脱。
三、操作步骤1. 样本处理:根据样本类型进行相应的前处理。
2. 核酸提取:将处理后的样本加入到核酸提取液A中,涡旋混合后静置,然后加入核酸提取液B,再次涡旋混合并静置。
3. 细胞破碎与核酸释放:将混合液离心,取上清液转移到新的离心管中。
4. 去除杂质:向上述上清液中加入洗涤液,涡旋混合后离心。
5. 核酸吸附:将上清液转移到DNA/RNA分离柱中,离心吸附核酸。
6. 洗涤核酸:使用洗涤液对DNA/RNA分离柱进行洗涤,以去除剩余的杂质。
7. 核酸洗脱:加入适量的无菌水或TE缓冲液到DNA/RNA分离柱中,离心洗脱核酸。
8. 核酸保存:将提取出的核酸立即使用或-20℃保存。
四、注意事项1. 所有操作应严格遵守实验室生物安全规定。
2. 核酸提取过程中应避免产生气溶胶,以防交叉污染。
3. 提取后的核酸应尽快使用,长期保存时要避免反复冻融。
4. 试剂盒中的所有成分都应在室温下回温至室温后再使用。
五、质量保证我们承诺该产品经过严格的质量控制,如有任何质量问题,请联系我们的客户服务部。
六、联系方式感谢您选择我们的产品,如有任何问题或需要进一步的信息,请随时联系我们。
大圣宠医核酸提取试剂盒说明书
大圣宠医核酸提取试剂盒说明书大圣宠医核酸提取试剂盒说明书尊敬的用户,感谢您选择使用大圣宠医核酸提取试剂盒。
本说明书将为您提供详细的使用指导,以确保您能正确操作并获得最佳的实验结果!一、产品简介大圣宠医核酸提取试剂盒是一种高效、可靠的实验工具,用于从样本中提取宠物体内的核酸!该试剂盒采用先进的技术和优质的材料制造而成,能够快速、准确地提取出高质量的核酸样品,为后续的分析和研究提供坚实的基础。
二、试剂盒组成本试剂盒包含以下几个部分:1.核酸提取缓冲液:含有特定的试剂和缓冲剂,可有效溶解细胞膜并保护核酸的完整性。
2.溶解液:用于溶解样本中的蛋白质和其他杂质,从而纯化核酸。
3.洗涤缓冲液:用于去除样本中的杂质和残留的试剂。
4.纯化溶液:用于纯化提取出的核酸,去除残留的污染物。
5.稀释缓冲液:用于将纯化后的核酸溶解并稀释至适当的浓度。
三、使用步骤1.准备样本:根据实验需求,选择合适的样本并收集。
确保样本的新鲜度和完整性,避免受到外界污染。
2.样本裂解:将样本加入核酸提取缓冲液中,充分混合并裂解细胞膜。
3.溶解:加入适量的溶解液,使样本中的蛋白质和其他杂质溶解。
4.洗涤:将样本溶液经过洗涤缓冲液的处理,去除杂质和残留的试剂。
5.纯化:加入纯化溶液,将提取出的核酸纯化并去除残留的污染物。
6.稀释:使用稀释缓冲液将纯化后的核酸溶解并稀释至适当的浓度。
四、注意事项1.请按照说明书中的步骤和比例操作,确保实验的准确性和可重复性。
2.在操作过程中,请注意个人的安全防护,避免接触到试剂的皮肤和眼睛。
3.请妥善保存试剂盒,避免暴露在高温、潮湿或阳光直射的环境中。
4.本试剂盒仅限于科研用途,不得用于临床诊断或治疗。
五、技术支持如果在使用过程中遇到任何问题或需要进一步的技术支持,请随时与我们联系。
我们的专业团队将竭诚为您提供帮助和解答。
感谢您选择大圣宠医核酸提取试剂盒,我们将持续不断地努力提供更优质的产品和服务,为您的研究工作提供有力支持。
核酸提取试剂盒评判标准
核酸提取试剂盒评判标准一、核酸提取试剂盒概述核酸提取试剂盒是应用于分子生物学实验中的一种重要试剂,主要用于从各种样本(如血液、唾液、组织等)中提取核酸。
核酸提取质量直接影响到后续的基因检测、基因编辑等实验,因此选择一款性能优越的核酸提取试剂盒至关重要。
二、评判标准概述1.提取效率提取效率是衡量核酸提取试剂盒性能的关键指标。
高效的核酸提取试剂盒能够在短时间内从样本中提取到大量的核酸,为后续实验提供充足的模板。
评判时可对比不同品牌试剂盒的提取效率,选择提取效果最佳的试剂盒。
2.提取纯度提取纯度是指提取到的核酸中杂质的含量。
高纯度的核酸有利于减少实验误差,保证实验结果的准确性。
评判时可通过电泳检测提取到的核酸纯度,选择纯度较高的试剂盒。
3.样本交叉污染风险核酸提取过程中,试剂盒应具备较低的交叉污染风险,确保实验结果的可靠性。
评判时可关注试剂盒的设计和生产工艺,选择具有较低交叉污染风险的试剂盒。
4.操作简便性操作简便性是衡量核酸提取试剂盒实用性的重要指标。
评判时应关注试剂盒的操作步骤、所需实验器材和实验时间等方面,选择操作简便、实验效率高的试剂盒。
5.试剂盒稳定性试剂盒稳定性是指试剂盒在储存和运输过程中的稳定性。
评判时可关注试剂盒的生产工艺、储存条件要求等方面,选择稳定性较好的试剂盒。
三、具体评判方法1.实验设计在进行评判实验时,应设计合理的实验方案,包括实验分组、样本选择、提取试剂盒品牌等。
确保实验的公正性和可比性。
2.实验操作按照实验方案进行实验操作,严格控制实验条件,确保实验过程的无菌性和准确性。
3.数据处理与分析实验结束后,对数据进行处理和分析,计算各组实验的提取效率、纯度等指标,对比各核酸提取试剂盒的性能。
四、总结与建议根据实验结果,总结各核酸提取试剂盒的优缺点,为实验室选择合适的核酸提取试剂盒提供参考建议。
核酸试剂盒使用方法
核酸试剂盒使用方法核酸试剂盒是现代分子生物学特别是分子病毒学研究中不可缺少的仪器和耗材,其中最常用的是核酸提取试剂盒,以用于提取RNA 和DNA等核酸进行RT-PCR等实验。
它可以方便地帮助生物学家从细胞中提取所需要的核酸物质,从而为分子病毒研究实验提供重要的帮助。
本文将详细介绍核酸试剂盒的使用方法,以期使更多的生物学家在进行病毒研究时能得心应手。
一、核酸提取试剂盒的原理核酸提取试剂盒采用了多种技术,以提取和分离完整的核酸,其中最常用的是脉冲电泳(PE)技术。
PE技术是指将核酸放入一种特殊的试剂盒中,经过高压条件下的脉冲电流作用,就可以分离出单个dNTPs组成的高分子量链,脉冲电泳能够有效地将核酸从混合物中分离出来,这对于提取RNA和DNA有非常重要的意义。
二、核酸提取试剂盒的用途核酸提取试剂盒可用于提取核酸,是病毒研究中经常使用的试剂盒。
其主要应用包括:1.于核酸诊断:核酸提取试剂盒可以检测病毒或其他微生物,从而更准确地诊断某种疾病。
2.于生物测序:经过核酸提取,可以将核酸序列提取出来,进行基因测序分析。
3.于分子病毒学实验:核酸提取试剂盒可以用于分子病毒学实验,为病毒研究提供样品。
三、核酸提取试剂盒的使用方法1.备样品:将要提取的样品(如血液、唾液、尿液、细胞)放入容器中,搅拌均匀,加入适量的提取液,振荡均匀,再加入总液以预处理样品。
2.接管路:将样品预处理装置的出口管路连接核酸提取试剂盒的入口,调节管路压力,使提取液能够顺利进入试剂盒。
3.放电脉冲:将按照试剂盒上的指示进行脉冲设置,释放电脉冲,以将样品中的核酸分离出来。
4.却及脱水:提取试剂盒进行冷却和脱水,以终止试剂盒内的反应,使样品中的核酸得到充分提取。
5.离:将提取试剂盒内的核酸用分离清洗液冲洗,用超声波器将提取的核酸分离出来,然后完成核酸提取。
四、核酸提取试剂盒的注意事项1. 使用前,请务必仔细阅读说明书,按照说明操作,以免造成不必要的错误。
磁珠法核酸提取试剂盒说明书
磁珠法核酸提取试剂盒说明书
一、磁珠法核酸提取概述
磁珠法核酸提取是一种快速、高效、便捷的核酸提取方法。
通过采用磁珠作为吸附介质,可实现对样品中核酸的高效提取,减少实验操作步骤,提高实验效率。
二、核酸提取试剂盒的组成及作用
核酸提取试剂盒主要包括以下组件:磁珠、核酸酶抑制剂、缓冲液等。
其中,磁珠用于吸附样品中的核酸,核酸酶抑制剂可有效抑制核酸降解,缓冲液则用于调节实验体系的酸碱度,保证核酸提取效果。
三、核酸提取流程
1.准备样品:收集待检测样本,如血液、唾液、组织等。
2.裂解细胞:将样品进行充分裂解,释放核酸。
3.磁珠吸附:将磁珠与裂解液混合,磁珠吸附核酸。
4.洗涤磁珠:加入洗涤液,去除磁珠上非核酸物质。
5.核酸释放:加入核酸释放液,使吸附在磁珠上的核酸溶解。
6.检测核酸:将释放后的核酸进行实时荧光定量PCR等检测。
四、产品优势与特点
1.高效:磁珠法核酸提取具有较高的提取效率,可节省实验时间。
2.便捷:试剂盒内成分齐全,实验操作简单,易于上手。
3.稳定:核酸酶抑制剂有效保护核酸完整性,确保实验结果可靠。
4.安全:避免液氮、酒精等危险物质的使用,降低实验风险。
五、注意事项与储存方法
1.实验过程中需严格遵循操作步骤,避免实验误差。
2.试剂盒应在-20℃储存,避免反复冻融。
3.核酸提取过程中避免剧烈振荡,以免破坏磁珠结构。
4.使用时应注意个人防护,避免核酸污染。
综上,磁珠法核酸提取试剂盒为实验人员提供了一种高效、便捷、可靠的核酸提取方法。
核酸提取试剂盒国标
核酸提取试剂盒国标
核酸提取试剂盒是一种用于提取样本中的核酸(DNA或RNA)的化学试剂盒。
从样本中提取出纯净、高质量的核酸是许多分子生物学实验的前提,如PCR、DNA测序、基因克隆等。
为加强产品监管,维护市场秩序,中国于去年发布了《核酸提取试剂盒国家标准》(GB/T 34522-2017),该标准规定了核酸提取试剂盒的分类、术语、要求、试验方法、标志、包装、运输与储存等方面的内容,旨在规范国内核酸提取试剂盒市场。
该国家标准明确了核酸提取试剂盒的三个分类:按提取方式分为磁珠法、硅胶膜法和膜柱法;按提取对象分为微生物、植物和动物;按产品形态分为试剂盒、前处理板和磁珠等三种。
此外,该标准还规定了核酸提取试剂盒的术语、要求等方面的内容。
例如,标准规定核酸提取试剂盒应当具有提取效率高、提取质量高、品质稳定等特点,并应当符合安全环保要求以及国家相关法律法规的规定。
标准的推行对核酸提取试剂盒市场具有重大意义。
一方面,标准的征求和实施使得更多的试剂盒生产企业在设计和制造产品时遵循着同一
个标准,提高了产品质量和性能;另一方面,标准的实施也增强了消费者对核酸提取试剂盒产品的信任度和消费体验,促进了市场的稳定和健康发展。
总的来说,核酸提取试剂盒的国家标准的推广将有助于规范核酸提取试剂盒市场,提高产品的质量和性能,促进市场的健康发展。
希望未来能够有更多的关于生命科学领域的国家标准得到制订和实施,为生化技术的发展打下更加坚实的基础。
天隆NP968核酸提取试剂盒使用说明书
核酸提取或纯化试剂使用说明书【产品名称】核酸提取或纯化试剂【通用名称】病毒DNA/RNA提取试剂盒【规格】96T/盒(预封装)16T/板×6板【预期用途】可从拭子洗液等多种液体样品中快速提取病毒DNA和病毒RNA,提取的病毒DNA和病毒RNA纯度高、质量稳定,可广泛应用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
本产品仅供科研使用,请勿用于医药、临床治疗等用途。
【检测原理】核酸提取过程中,配合天隆NP968系列仪器,利用磁珠吸附原理,通过特制的磁棒吸附、转移和释放磁珠,实现磁珠/核酸的转移,自动完成核酸的提取。
【试剂盒组成】组件名称96T/盒(预封装)组件规格组件数量预封装试剂16T/板6蛋白酶K 1.1ml/支2【储存条件及有效期】室温保存;有效期一年。
【适用仪器】天隆NP968系列核酸提取仪及同类型仪器。
【样本要求】1.适用样本类型:拭子洗液等。
2.样本保存:可立即进行提取,也可于4℃保存待测,保存期不超过24小时,长期保存需置于-20℃。
【使用方法】1.预封装试剂准备从试剂盒中取出预封装试剂,慢慢颠倒混匀数次使磁珠重悬,去掉真空包装,轻甩孔板,使试剂及磁珠均集中到孔板底部(也可使用孔板离心机,500rpm×1min行离心),使用前小心撕去铝箔封口膜,避免孔板振动,防止液体溅出。
2.自动化仪器提取步骤2.1在预封装试剂的第1或7列(注意有效孔位)中加入200µl样品、20μl蛋白酶K。
2.2按以下程序进行自动化提取;2.2.1快速版(适合口腔拭子、鼻腔拭子、新型冠状病毒)步骤槽位名称等待时间(min)混合时间(min)磁吸时间(sec)混合速率体积(µl)温度状态温度(℃)12转移磁珠0030快300裂解加热90 21结合0590中720裂解加热90 34洗涤0160快600洗脱加热90 46洗脱1290中80洗脱加热90 54弃磁010快600关闭02.2标准程序(适合血清血浆中病毒HBV\HCV等)步骤槽位名称等待时间(min)混合时间(min)磁吸时间(sec)混合速率体积(µl)温度状态温度(℃)12转移磁珠0030块600裂解加热90 21裂解结合01090中720裂解加热90 32洗涤10260快600洗脱加热75 43洗涤20160快600洗脱加热75 54洗涤30160快600洗脱加热90 66洗脱1590中80洗脱加热90 74弃磁010快600关闭02.3自动化程序结束后,将第6、12列的洗脱液转移至干净的无核酸酶离心管中。
真菌核酸提取试剂
真菌核酸提取试剂真菌核酸提取试剂是一种用于从真菌样本中提取核酸的试剂盒。
真菌核酸提取是研究真菌遗传多样性、鉴定真菌物种以及分析真菌感染等领域中必不可少的步骤。
本文将讨论真菌核酸提取试剂盒的基本原理、通用方法和一些常见的商业产品。
真菌核酸提取试剂盒的基本原理是通过破坏真菌细胞壁和细胞膜,释放其中的核酸。
一般而言,真菌细胞壁都比较坚固,其主要成分是纤维素和几丁质。
因此,在核酸提取过程中,需要使用一系列化学物质或酶来完成细胞壁和细胞膜的溶解和破坏。
在提取过程中,还需要去除一些可能干扰核酸纯净度和浓度测定的杂质,如蛋白质、酶、多糖等。
真菌核酸提取的通用方法包括以下几个步骤:样品的收集和保存、细胞破壁和溶解、核酸的沉淀和洗涤、溶解和保存。
首先,样品的收集可以是真菌菌丝体、孢子、根或子实体等,必须注意严格遵守无菌操作规范以防止外源性污染。
其次,为了将真菌细胞破壁和溶解,可以使用一些缓冲液、溶剂和蛋白酶等。
其中的溶剂可以破坏细胞膜,蛋白酶可以降解细胞膜上的蛋白质。
细胞破壁后,可以选择有机溶剂进行核酸的沉淀,如醇类、盐类等。
然后,可以通过洗涤去除一些蛋白质、酶和其他杂质。
最后,可以使用一些缓冲液溶解核酸并保存以备后续实验使用。
在市场上,有许多公司提供真菌核酸提取试剂盒。
例如,Invitrogen公司的PureLink® PCR Purification Kit提供了一种高效的方法来使真菌DNA破碎,其中的试剂盒使用硅膜以便从真菌中提取高质量的DNA。
Qiagen公司的DNeasy Plant MiniKit可以快速、容易地从真菌样本中提取纯化的DNA,其中的试剂盒使用特殊的核酸结合纤维素膜技术。
总之,真菌核酸提取试剂是一个重要的研究工具,它可以为真菌遗传多样性、物种鉴定、感染分析等领域提供有用的信息。
通过一系列步骤和使用适当的试剂盒,可以从真菌样本中提取高质量的核酸。
这些试剂盒的原理和方法为真菌研究提供了重要的技术支持。
济凡核酸提取试剂盒-FineMag Quick Viral DNA RNA 提取试剂盒说明书
核酸提取试剂使用说明书[产品名称]FineMag快速磁珠法病毒DNA/RNA提取试剂盒1.通用名称:核酸提取试剂2.英文名称:FineMag Quick Viral DNA/RNA提取试剂盒[包装规格]96次/盒[预期用途]用于全血、唾液、拭子、血清、血浆、淋巴液、无细胞体液、细胞培养上清液、组织匀浆液或各种病毒保存液中纯化高质量病毒核酸。
[检验原理]本试剂盒以超顺磁性的纳米磁性粒子为基质,这种磁性粒子在高浓度离液剂的条件下可通过氢键和静电特异的吸附核酸,而蛋白质或其它非特异吸附的少量杂质经洗涤被去除,最后用低盐缓冲液或RNase Free ddH2O洗脱核酸。
纯化的核酸可适用于各种常规操作,包括RT-PCR、qRT-PCR、荧光定量PCR等各种下游实验。
[主要组成成分]本试剂盒包含以下组分:[储存条件及有效期]本试剂盒置于室温(15℃~25℃)干燥条件下可保存12个月。
[适用仪器]济凡Purifier HT[样本要求]1.适用样本类型:肺泡灌洗液、咽拭子、全血、血清、血浆、淋巴液等。
2.样本采集:用无菌容器采集样本,样本量应不少于1mL。
3.样本保存和运送:待测样本可在2℃~8℃放置24小时,长期保存应置于≤-20℃条件下或专业的病毒保存液内,避免反复冻融。
标本运送采用冰壶加冰或泡沫箱加冰密封进行运输。
[检验方法]1.从试剂盒中取出预封装96孔板。
2.用涡旋振荡器震荡板位3的96孔板4角,使磁珠悬浮。
3.小心撕去96孔板铝箔封口膜,避免孔板振动,防止液体溅出。
4.在板位1(Buffer MVN)的96孔位中加入20μl ProteinaseK和200μl样品(样品需平衡至室温)。
注:请在加样后1h内上机运行程序。
5.将磁力套放入板位2(Buffer DW1P)中。
6.按照提示将4块预封装板放入机器正确位置。
7.选择程序“GF_FM502T5_P96”/“GF_FM502T5K S”(快速版)并运行。
通用型核酸快速提取试剂盒说明书
通用型核酸快速提取试剂盒说明书简介:本试剂盒采用异硫氰酸胍及表面活性剂联合裂解细胞技术,添加独特的病毒凝集剂,不需要进行酚氯仿抽提,可从细胞培养物、血浆、血清、分泌液、腹水、拭子等的样本中快速提取痕量的病毒或细胞的核酸(DNA和RNA)。
有效去除酶抑制剂,提取的核酸可用于PCR、RT-PCR、定量PCR、杂交等各种分子生物学实验,对于临床基因诊断尤其适用。
特点:1、经济实惠,使用耗材少,DNA和RNA都能提取;2、快速,不需要进行酚氯仿抽提,有效去除各种酶抑制物,方便后续实验操作;3、提取效率高,痕量病毒或细胞仍能有效提取到核酸。
试剂盒组成(50次):1、抽提A液(1瓶,10ml)2、抽提B液(1瓶,12.5ml)3、抽提C液(1瓶,10ml)4、样本稀释液(1支,1ml)储存及有效期:-20℃储存,开封后可放置于4℃,有效期两年。
操作步骤(以血清、分泌液和腹水为例):1、取待抽提的血清50μl置于微型离心管中,加入200μl抽提A液,颠倒数次充分混匀;(混匀后室温放置5分钟可达到最佳效果)2、加入250μl抽提B液,颠倒数次充分混匀(混匀后室温放置10min可达最佳效果),13000rpm离心10min,倒去上清;3、加入200μl抽提C液,颠倒数次混匀,13000rpm离心5min,吸弃上清(尽量去掉上清);4、室温放置或50℃加热5min晾干,加入25μl样本稀释液混悬沉淀物,短暂离心使液体落于管底部,上清液即为提取得到的核酸。
注:对于分泌物或棉拭子,先用适量无菌生理盐水把拭子上的分泌物洗入离心管中,或者把拭子泡在无菌生理盐水中,捻动使分泌物分散于液体中,然后高速离心5min后,去除大部分上清,余下的样本即应用上述步骤抽提核酸。
注意事项:1、如果抽提的是病毒RNA,最好即提即用,保存请置于-80℃。
2、抽提A液及抽提B液可根据所用的提取物的量等倍加大用量。
3、抽提A液低温保存会有絮状物析出或凝结是正常现象,使用前置于50℃使融化,颠倒混匀,不影响使用。
用于从样本中提取核酸的方法和试剂盒与流程
核酸提取是分子生物学研究中非常重要的步骤,其影响着后续实验的结果。
目前,有许多不同的方法和试剂盒可以用于从样本中提取核酸,但每种方法都有其优缺点。
本文将介绍常见的核酸提取方法和试剂盒,并详细说明其使用流程。
希望能帮助读者更好地理解核酸提取的原理和操作步骤。
一、常见的核酸提取方法1.酚-氯仿提取法酚-氯仿提取法是最经典的核酸提取方法之一。
其原理是利用酚和氯仿两种有机溶剂与水相不相溶的特性,将核酸从样本中分离出来。
虽然酚-氯仿提取法具有成本低、操作简单等优点,但由于酚和氯仿均具有毒性,对实验人员的健康造成潜在风险,且提取效率较低。
2.硅基离子交换法硅基离子交换法是一种通过硅胶基质固相吸附核酸分离纯化的方法。
其原理是利用硅胶质地的吸附能力,将核酸固定在硅胶表面,然后通过洗涤和洗脱的方式得到纯化的核酸。
硅基离子交换法具有提取效率高、纯度好等优点,但需要使用硅基离子交换柱和大量有机溶剂,成本较高。
3.磁珠法磁珠法是近年来发展起来的一种核酸提取方法,其原理是将在不同条件下具有不同亲和性的磁珠与核酸结合,然后通过磁力分离的方式将核酸提取出来。
磁珠法具有操作简便、提取效率高、易于自动化等优点,目前被广泛应用于临床诊断和科研领域。
二、常见的核酸提取试剂盒1.常规核酸提取试剂盒常规核酸提取试剂盒是市面上最常见的一种提取试剂盒,适用于各种类型的样本。
其操作流程一般包括细胞破碎、蛋白酶处理、核酸结合、洗脱等步骤,提供了一整套的实验操作说明。
常规核酸提取试剂盒通常包括硅基离子交换柱、试剂液、配套的离心管等。
2.血浆/血清核酸提取试剂盒血浆/血清核酸提取试剂盒是专门用于提取血浆或血清中的核酸的试剂盒。
由于血浆/血清中的核酸含量较低,且受到抗凝剂和其他成分的干扰,因此需要专门设计的提取试剂盒。
血浆/血清核酸提取试剂盒一般包括了特殊的蛋白酶和离心管。
3.病毒核酸提取试剂盒病毒核酸提取试剂盒是专门用于提取病毒中的核酸的试剂盒,适用于临床病毒检测和科研领域。
粪便核酸提取试剂盒说明书
磁珠法粪便核酸提取试剂盒(常规版)Faeces DNA Extraction Kit (Regular Version)【目录号】FDE-5005、FDE-5030【运输条件】2~25℃;【保留条件】磁珠分散液、裂解液②2~8℃, 其它组分室温;【试剂盒组成】【注意事项】1. 在使用本试剂盒钱, 请用户自备80%乙醇;2. 使用前请检验裂解液①、②是否出现结晶或者沉淀, 如有结晶或者沉淀, 请将裂解液置于378℃水浴重新溶解;3. 本操作指南经本企业反复验证, 使用前请仔细阅读, 而且根据操作指南提议操作。
【产品介绍】本试剂盒采取含有独特分离作用磁珠和独特缓冲液系统, 从多种固态或液态粪便样品中分离纯化高质量基因组DNA。
特殊技术包埋磁珠在特定条件下对核酸含有极强亲和力, 而当条件改变时, 磁珠会释放吸附核酸, 从而达成快速分离纯化核酸目。
提取基因组DNA 片段打, 纯度高, 质量稳定可靠, 尤其适合高通量工作站自动化提取, 尤其是本企业各型号自动化核酸提取仪。
本试剂盒纯化DNA可适适用于多种常规操作, 包含酶切、PCR、荧光定量PCR、文库构建、Sputhem杂交、芯片检测和高通量测序等试验。
【试剂盒说明】1. 磁珠分散液严禁反复冻融和离心, 磁珠使用前务必充足混匀, 可涡旋振荡10秒左右;2. 试验中使用我先混合仪目是为使磁珠能够充足吸附核酸、将磁珠表面杂质充足去除或核酸从磁珠表面充足洗脱;3. 使用前检验裂解液①、②是否出现结晶或者沉淀, 如有结晶或者沉淀, 请将裂解①、②于37℃水浴重新溶解。
【试剂盒说明】【自备仪器、耗材和试剂】仪器自动版涡旋混合仪、高速离心机、水浴锅或金属浴、 96孔方孔圆底板、无水乙醇、异丙醇、英芮诚ETP-300核酸提取仪。
手动版涡旋混合仪、高速离心机、金属浴或水浴锅; EP管、 EP管用磁力架、无水乙醇、异丙醇。
【仪器自动版操作步骤】以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例, 可同时完成32个样本提取工作。
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步骤详解
操作步骤(植物)
1.裂解 取新鲜植物组织xxxmg,与研钵中稍加研磨。加入xxxµl Buffer A、xxx µl Buffer B、xxxµl Buffer C,研磨均匀, 然后转移至1.5ml EP管中,混合均匀(可用漩涡振荡器,xxxrpm)。然后把EP管置于恒温水箱中xxx℃温育 xxxmin。
DNA到离心管中。为了得到更多的DNA,可以再加100‐200µl洗脱液EB,室温放置2分钟后, 再次洗脱DNA。 15. 取10µlDNA进行0.8%琼脂糖电泳检测提取DNA的完整性和质量。
离心柱注意事项
1.起始菌量对DNA提取的产量和质量有很大影响。起始菌量过多会引起细菌裂解不充分,导致堵塞离心 柱。一般情况下,LB液体培养基培养的大肠杆菌细菌在对数生长期中后期时的细菌浓度约为107~108 个/ml 之间。OD600在1.0时,大肠杆菌浓度大致为109个/ml。过夜(12‐16小时)培养细菌OD600值
DNA提取方法
5.水抽提法:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于 水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体 积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ,80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥 ,即得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取 过程中加入SDS。 6.阴离子去污剂法:用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA . 由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所 以常用阴离子去污剂提取DNA。
核酸提取试剂盒
DNA提取试剂盒 RNA提取试剂盒
DNA提取方法
DNA提取方法
1.碱裂解法:碱裂解法是基于DNA的变性与复性差异而达到分离目的。 2.煮沸法:煮沸时将样品中的DNA通过核酸裂解液的作用释放出来,离心沉淀后将杂质去 除,上清液即可用作pcr扩增。 3.浓盐法:利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M 氯 化纳提取,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时 蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将 DNA 钠盐沉淀出来。
2.结合 将EP管从温育设备中取出,xxxr离心xxxmin。取xxx µl上清,加入振荡混匀的磁珠xxxµl、xxxµl结合液(也可加入 xxxµl异丙醇,产量高于加结合液;但是提取双子叶植物种子的核酸时,异丙醇的量为上清体积的xxx倍为宜),颠倒混 匀xxxmin。将EP管置于磁力架上进行磁分离,吸弃废液,(吸净管盖及管底残液)。
长裂解时间。
• 组成成分: • 裂解液 • 结合液 • 洗涤液 • 洗脱液 • 生物磁珠 • 说明书
磁珠法试剂盒
• 裂解 • 结合 • 洗涤 • 洗脱
实验步骤
四步操作,简单快速
• 裂解 • 破坏细胞,把DNA释放到溶液中 • 结合 • 把释放出的DNA吸附到磁珠上 • 洗涤 • 把结合过程中吸附的杂质除去 • 洗脱 • 把纯净的DNA从磁珠上解离下来
离心柱注意事项
3. 革兰氏阳性细菌主要包含细菌中的厚壁菌门(Firmicutes)(低G+C革兰氏阳性细菌)和放线菌门 (Actinobacteria)(高G+C革兰氏阳性细菌)。厚壁菌门包括的常见菌属:归类于芽孢杆菌纲 (Bacilli)的芽孢杆菌(Bacillus)、李斯特氏菌(Listeria)、葡萄球菌(Staphylococcus)、链球菌 (Streptococcus)和肠球菌(Enterococcus);归类于梭菌纲(Clostridia)的常见属梭菌(Clostridium) 和归类于柔膜菌(Mollicutes) 的支原体(Mycoplasma)。放线菌门常见菌属如放线菌 (Actinobacteria)和双歧杆菌 (Bifidobacterium)。
大约为2.0。不同细菌因菌株特性和培养条件差异会有很大差异,为了获得准确的计数,可以通过 测定OD600值和稀释法测定克隆形成单位(CFU)相结合的方法来确定。
2.确定所提细菌的归属关系也是一个重要的影响因素。革兰氏染色(Gram stain)是细菌分类和鉴定的 重要性状。它不仅能观察到细菌的形态,而且还可将所有细菌区分为两大类:染色反应呈蓝紫色的称 为革兰氏阳性细菌,用G+表示;染色反应呈红色的称为革兰氏阴性细菌,用G‐表示。细胞壁成分和结 构的差异造成两类细菌对革兰氏染色的不同反应。G+菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成 的,在染色过程中,当用乙醇处理时,由于脱水而引起网状结构中的孔径变小,通透性降低,使结晶 紫‐碘复合物被保留在细胞内而不易脱色,故呈蓝紫色;G‐细菌的细胞壁中肽聚糖含量低,而脂类物质 含量高,当用乙醇处理时,脂类物质溶解,细胞壁的通透性增加,使结晶紫‐碘复合物易被乙醇抽出而 脱色,然后又被染上了复染液(番红)的颜色,故呈红色。
核酸提取试剂盒
洛阳惠尔纳米科技有限公司 狄光辉
试剂盒
试剂盒分类
核酸提取
磁珠法,离心柱法,DNA和RNA,不同样本
蛋白检测
elisa试剂盒,免疫共沉淀试剂盒,化学发光试剂盒,免疫组化试剂盒,放射免疫试剂盒,免疫荧光试剂盒
重金属检测
不同重金属离子检测,不同样本中重金属离子检测
其他
PH检测,污染气体检测等等
DNA提取方法
4.苯酚抽提法: 苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液 时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。 蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并 含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的 物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态 。
磁珠法试剂盒概述
磁珠法核酸提取试剂盒采用具有独特分离作用的磁珠和缓冲液系统,从样品中分离纯 化高质量基因组DNA,特殊包被的磁珠,在一定条件下对目的DNA具有很强的亲和力 ,而当条件改变时,磁珠释放吸附的DNA,能够达到快速分离纯化DNA的目的。整个 过程不涉及有毒试剂,安全、便捷、提取的DNA纯度高。使用本试剂盒纯化的基因组 DNA (OD260-OD320)/(OD280-OD320)均在1.7~2.0之间,可以应用到各类下游分子 生物学实验。
DNA提取方法
磁珠法:生物磁珠是一种新型的功能化固体载体,其表面包被有活性基团,可以与多 种生物活性物质发生偶联,兼具有液体的流动性和固体磁性材料等特点,在外磁场的 作用下可以定向移动和集中,当撤去外磁场后,稍加振荡或抽吸又可均匀分散于液体 中,从而使固液相的分离变的十分快捷方便,通过简单的洗脱可以得到纯度很高的靶 向物质。
离心柱及收集管 溶菌酶缓冲液 ELB 裂解液 GDL 缓冲液 GDB 蛋白洗涤液 PWB 洗涤液 WB 蛋白酶 K 洗脱液 EB
离心柱试剂盒组成
各 xxx个 xxxml xxxml xxxml xxxml xxxml xxxml xxxml
离心柱操作步骤
所有离心步骤皆使用台式离心机,为室温下操作。 第一次使用前请先参考试剂瓶上的标签,在洗涤液WB中加入无水乙醇。 1.取适量的细菌培养液(最多提取的细菌数量为2×109个),10,000rpm离心1分钟,弃上清,留细菌沉淀备用。 2.提取的细菌为革兰氏阴性菌,可以在菌体沉淀中加入200µl裂解液GDL。用吸头吹打几下,充分混匀。然后进入步骤4 3.提取的细菌为革兰氏阳性菌,必须要进行溶菌酶破壁处理(如不确定为何种菌属,请按处理革兰氏阳性菌的方法进行
)。具体操作如下:称20mg溶菌酶,置于1.5ml离心管中,取1ml溶菌酶缓冲液ELB,反复吹打几次将溶菌酶完全 溶解,配制成溶菌酶裂解液。向细菌沉淀中加入200µl溶菌酶裂解液(未用完的溶菌酶裂解液可保存于‐20℃,以备 下次使用),吹打重悬细菌沉淀。37℃破壁处理30分钟以上,一些较难处理的细菌可以延长处理时间。破壁处理完 成后便可以将水浴温度调至70℃备用。 4.RNA清除处理,补加5µlRNase A溶液,充分混匀。 5.加入15µl蛋白酶K,充分混匀。 6.加入220µl缓冲液GDB充分混匀。加入缓冲液GDB可能会出现白色沉淀,放置于70℃水浴时便会消失。
• 离心柱子法
•
柱子
• 磁珠法
•
生物磁珠
核酸提取试剂盒
离心柱试剂盒(细菌)概述
本试剂盒用于极大部分革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌细胞基因组DNA的提取。该试剂 盒提供的方法简单易行,通过去垢剂处理和特殊的液体系统将裂解细胞后产生的DNA 结合在柱材上,避免酚仿抽提。所获的基因组DNA具有完整性好、产量大、纯度高和 稳定性好离心柱操作步骤
7.对于革兰氏阴性菌70℃保温15分钟(革兰氏阳性菌需70℃保温30分钟)。等溶液变成清亮后,离心数秒去除管壁上的 水珠。如果溶液未变清凉,说明细菌裂解不充分,起始菌量太大,需要适当调整。
8.加入220µl的无水乙醇,剧烈振荡,充分混匀,此时可能会出现絮状沉淀。 9.将离心柱装在收集管上,然后将所得的溶液及沉淀都转移入离心柱中。12,000rpm离心1分钟,倒掉收集管中的滤液。 10. 加入500µl蛋白清洗液PWB,12,000rpm离心1分钟。倒掉收集管中的滤液。并将离心柱放回收集管中。 11. 加入500µl洗涤液WB,12,000rpm离心30秒。(使用前请检查是否已经加入无水乙醇) 12. 重复步骤11的操作一次。 13. 12,000离心1分钟,去掉离心柱中的所有液体。将离心柱放在一个干净的新的1.5ml离心管中,置于37℃ 烘箱放置5‐10分钟,待管中的乙醇全部挥发为止。 14. 往离心柱中央悬空滴加经70℃水浴预热的100-200µl洗脱液EB。室温放置2分钟后,12,000rpm离心30秒,洗脱