肿瘤免疫生物治疗的临床试验设计

肿瘤免疫细胞治疗常用检测指标
4. MHC多肽四聚体法 T细胞的定量、定性分析
• MHC Ⅰ类分子四聚体检测CD8 + 细胞 • MHC Ⅱ类分子四聚体检测CD4 + 细胞
肿瘤免疫细胞治疗常用检测指标
5.免疫细胞因子检测
ELISA ELISPOT FCM Gene PCR
肿瘤免疫细胞治疗常用检测指标
肿瘤免疫细胞生物治疗的 临床试验设计及疗效评价
李磊 第三军医大学 赵明 中南大学深圳生物医药研究院 leili1214@gmail.com
肿瘤的发病机制
基因突变与 基因表达异常
信号通路调 控异常
环境不协调发展
肿瘤发病的免疫机制
肿瘤治疗策略
机械性的手术切除 指标不治本的方法 负荷较大的实体瘤
手术首选
肿瘤生ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ治疗与化学治疗各期临床 试验设计对比
化学治疗
研究目的
生物治疗
I期
药物剂量 观察终点 研究目的
最大耐受剂量，毒性，药代 最佳生物剂量，毒性。 动力学 剂量爬升 剂量爬升 毒性 抗瘤谱 <最大耐受剂量 肿瘤缩小（周期短） 临床获益 <最大耐受剂量 生存情况 靶点抑制 靶点依赖的抗瘤谱 最佳生物剂量 肿瘤进展时间（周期长） 临床获益 最佳生物剂量 生存情况
肿瘤的免疫生物治疗策略
基于肿瘤发生发展过程中免疫监 视异常和肿瘤免疫逃逸的原理， 利用免疫学技术制备的各种生物 制剂，通过激发或增强机体免疫 功能的方式，针对肿瘤细胞演变 的关键环节实施靶向性治疗。
肿瘤的免疫生物治疗分类
• 免疫因子：
IFN, ILs，TNF，TGF-β，CSF，chemokines，thymosine etc.
实体瘤疗效评价
• 注意事项：
国际计量单位（mm），使用直尺或测量器； 所有基线评价应尽可能接近治疗的开始； 检查手段和评价方法前后一致； 图片留档； 终点指标为客观的有效率时，一般不能用超声作 为评价疗效的手段； 肿瘤标记物单独不能评价疗效
实体瘤疗效评价
• 病灶选择
1. 至少有1个可精确测量的径线的病灶，在常规CT 下，其最大直径≥20mm，或螺旋CT下，其最大直 径需≥10mm； 2. 如果只有1个可测量的孤立的病灶，则必须由细 胞学/组织学证实具为肿瘤； 3. 所有观察病灶最长径的总和记录为基线最长径。
II期
药物剂量 观察终点 研究目的
III期
药物剂量 观察终点
肿瘤免疫细胞治疗试验要点
• I 期临床试验
寻找最佳生物学剂量为其主要目的； 是否诱发免疫相关性疾病为主要观察指标； 个性化的治疗为其主要特点； 标准化的生产为其主要保障； 受试患者选择以疾病终末期为宜； 受试病例以30例为佳。
肿瘤免疫细胞治疗试验要点
• II期临床试验
确定治疗肿瘤的谱系和适应证为其主要目的； 确定临床有效性为试验终点指标 瘤体大小、肿瘤进展、无进展生存、 总生存率、临床获益 确定是否进行III期试验及其病例数量 病例筛选不局限于终末期肿瘤患者 病例数量以100例左右为佳
肿瘤免疫细胞治疗试验要点
• III期临床试验 试验目的： 通过大宗病例对比研究，最终验证临床获 益是否具有统计学差异 病例要求：1000例以上
实体瘤疗效评价
• 疗效确认
1. 评价有效的确认： 在首次评价有效后，需至少4周后复验确证； 2. 肿瘤稳定的确认： 通常至少6-8周，肿瘤测量仍符合稳定的标准；
实体瘤疗效评价
• 疗效持续时间
1. 缓解期 从上次评价有效开始到客观记录到的出现复发的 时间 2.稳定持续时间 由治疗开始到出现进展的时间 （研究开始后至少6-8周，肿瘤测量仍符合稳定的 标准才能评价为稳定）
• 特异性的靶点
肿瘤免疫生物治疗特点
• 个性化的治疗
肿瘤过继免疫细胞生物治疗流程
药物的临床试验研究
意义：确定治疗价值的临床研究
目的：是否有效？是否安全？
策略： 前瞻性研究
要求： Good Clinical Practice (GCP）
肿瘤免疫细胞治疗临床试验
• 根本要求
掌握法规，符合伦理，设计科学， 明确指标，客观统计，临床可行。
肿瘤治疗策略
物理性的放射治疗
针对DNA变异的通杀性策略
化学性的细胞毒性药物
细胞内各种代谢酶的覆盖 性治疗策略
肿瘤治疗策略
肿瘤的生物治疗 新兴的第四种抗肿瘤策略
细胞因子 单克隆抗体 免疫 刺激剂 作用于基因的免疫毒素 作用于特定分子靶点的非细胞毒性小分子 免疫效应细胞：LAK, TIL,CTL,CIK
• 肿瘤疫苗：
DNA疫苗，多肽疫苗，蛋白质疫苗，HSP蛋白疫苗，抗 独特型抗体疫苗，DC疫苗
• 基因修饰的T淋巴细胞 • 过继性免疫效应细胞：
NK, LAK, CIK，TIL
肿瘤免疫生物治疗机理
• 调节机体抗肿瘤免疫能力 • 干扰肿瘤细胞增殖、分化、凋亡、转移等 生物学行为。
肿瘤免疫生物治疗特点
肿瘤免疫细胞治疗常用检测指标
1. 迟发型超敏反应
• 定性不定量
• 假阳性与假阴性
肿瘤免疫细胞治疗常用检测指标
2. 细胞毒性T淋巴细胞杀伤实验 Cytotoxic T lymphocyte (CTLs) 是T 细胞在体内或体 外经抗原刺激后产生的一种效应细胞，可特异性 裂解靶细胞，这种能力可以反映机体的抗肿瘤活 性。
• 铬释放法被认为是评价抗原特异性CTL 反应的金标准，但 该法无法检测不具增殖潜能的T 细胞前体； • ELISPOT能更准确地反映T 细胞在体内的情况，但仍依赖 一定时间的肽诱导以产生细胞因子,会低估总的特异性CTL 数量,不过敏感度远高于铬释放法； • MHC肽复合物多聚体染色法，是目前最新的直接检测特异 性CTLs 的方法，可以直接对T 细胞染色，还可结合FCM 计数细胞，敏感性大大增强，又不受基因型的限制。 • 关于tumor marker检测： 下降50%，改善; 下降90% 有效 但干扰因素多，拟慎用
肿瘤免疫细胞治疗常用检测指标
CD8+ 细胞毒性T淋巴细胞杀伤实验
同位素法
LDH
肿瘤免疫细胞治疗常用检测指标
3. 淋巴细胞增殖实验 T细胞前体没有任何效应功能，但在遇到抗 原时可以增殖，这是抗原特异性Th 细胞存 在的标志。 • 3H2TdR 掺入法 • MTT （琥珀酸脱氢酶法） • 流式细胞术
实体瘤疗效评价
• 完全缓解 complete response： 所有观察病变完全消失。 • 部分缓解 partial response： 与基线总最长径相比，观察病灶的总最长径减少至 少30%。 • 进展 progressive disease： 与基线总最长径相比，观察病灶的总最长径增加 20%以上，或治疗开始后出现1个或更多的新病灶。 • 稳定 stable disease： 与基线总最长径相比，观察病灶的总最长径减少不 到30%，增加不到20%。