蛋黄卵磷脂的提取方法研究

2011 年第 23 期
◇高教论述◇
蛋黄卵磷脂的提取方法研究
曲怀坤 (临沂市技术学院 山东 临沂 276000）
【摘 要】为探讨从蛋黄中提取蛋黄卵磷脂的方法。试验以蛋黄为原料，采用有机溶剂和酶解法从蛋黄中提取卵磷脂粗品，然后分别经柱硅 胶层析和金属离子沉淀法纯化获得卵磷脂精品 ，通过测定卵磷脂的含磷量 ，判断其纯度高低。 结果显示：采用有机溶剂法获得蛋黄卵磷脂粗品 ， 然后经柱硅胶层析纯化可获得高纯度蛋黄卵磷脂精品，总得率为 8.38%，卵磷脂的含磷量为 15.33%。 是一种高效、经济的蛋黄卵磷脂提取方法。
3.3 高校宽松的管理体制，缺乏必要的网络文明教育 目前，关于规范文明使用网络的法律法规并不完善。 网络法律法 规并不健全，即使现有的法律法规也比较陈旧，不能适应迅速发展的 网络环境，这给高校网络文明环境带来了极大的挑战。 高校还未形成 网络教育和辅导队伍，缺乏实效性的管理机制。 思政教育不能与网络 文明教育很好的结合起来， 高校网络文明教育缺乏实效性和正对性。 在此次调查发现，各系（院）在学生思政教育比较少涉及到大学生的网 络文明建设，学校开展诸多活动也很少涉及到有关学生网络文明。 高 校作为大学生网络文明建设主要场所，并未占领网络文明系统建设的 主阵地，基本没有形成良好的校园网络文化氛围。 学生群体中的学生 权益保障委员会也没有专门针对网络文明成立相对的“网络文明督导 小组”。 大学社团里也没有形成相应的“网络文明”协会。 4.提 升 大 学 生 文 明 使 用 互 联 网 的 对 策 4.1 加强对互联网的监控，净化网络环境 网络作为现代信息传播的媒介，具有方便、快捷、信息量大等诸多 优点，对当代大学生的学习生活起了良好的辅助作用。 但是，受市场经 济过分追逐利益的不良社会风气的影响， 网络经营者以及软件开发 者，利用大学生的猎奇心理以及对互联网的过分依赖，肆意传播与文 明相悖的信息。 首先政府及其相关部门要认真贯彻《中共中央关于加 强和改进思想政治工作的若干意见》，加强对互联网的监控，加大打击 力度。 做好网络文明宣传工作，督促厂商自觉遵守行业道德与职业道 德，从源头上净化网络环境。 其次作为网络游戏的开发商、网站及网吧 的经营商身上要流有道德的血液，自觉遵守相应的法律法规，净化大 学生使用网络的环境。 再次，学校有关部门要规范网络使用的管理办 法。 采取多种手段来加强对网络的监控和管理，对大学生进行网络道 德 教 育 ， 制 定 大 学 生 网 络 网 络 行 为 准 则 [2]。 4.2 拉近心灵距离，建立和谐的亲子关系 首先，要建立良好的家庭环境。 大学生的行为方式可以从其家庭 环境、家庭氛围中找到依据[3]。 在与部分同学访谈后 ，基本可以得出这 样一个结论，那些在缺乏关爱和理解的家庭中长大的孩子相对比较孤 僻，性格比较怪异。 容易出现无聊、空虚等情况，相应的也就比较容易 沉迷于网络，他们认为网络可以使自己得到认可和尊重；因此，作为家 长要认真关注的孩子的心理成长历程， 父母亲应主动加强与子女沟 通，尽量不要给孩子心理负担，营造良好的家庭气氛，为在校大学生提 供一个和谐的家庭环境。 其次，运用人性化的关怀来对待孩子的网络行为。 许多家长发现 自己的孩子沉迷于网络之后，采取粗暴的方式来解决问题，而没有从 学生的角度出发。 大学生处于世界观人生观和价值观形成的重要时 期，还未形成理性思维，容易受到不良思想和行为的影响。 当大学生不
慎失足，坠入网络的深渊无法自拔时，作为家长不应该采取简单粗暴 的方式来教育孩子，使孩子产生逆反心理。 而应该认真分析失足孩子 情况，并根据孩子的实际情况，从人性化的的角度入手，突出人性意 识，关爱学生，理解学生，使他们改变心理，文明、合理、科学有序的使 用网络。
4.3 加强高校网络教育和管理队伍和体制建设 加强高校校园网络教育和管理工作队伍建设，发挥思政教育工作 者在高校网络网络文明教育中的作用，对大学生文明使用网络有着举 足轻重的影响。 高校应该将网络文明建设作为“文明修身”工程的重要 组成部分，成立校园网络文明工作组，由学院主要领导担任组长。 成员 组成包括文明办、思政部、学生工作处、校团委、现代教育中心等单位 的成员。 各成员必须明确并认真落实自己的责任，成员必须要要深厚 的政治理论素养，熟悉学生思政理论工作，并且是能够很好掌握和运 用网络技术，将网络文明思政教育工作主阵地转移到网络上，形成网 络文明思政教育进网络的良好格局。 部分系（院）已经开始着手这方面 实践，如有的系对学生公寓经行社区化管理，成立管委会和公寓服务 联络机制等。 管委会作为学生自我管理，自我教育和自我服务的学生 管理机构。 通过管委会这个平台，使网络文明思政教育工作更好的融 入的学生当中。 公寓社区联络机制由各班级和系部主要学生干部组 成，联络员拥有较高的政治素养和自我管理自我教育能力。 联络员分 布在宿舍楼层的学生当中，能够很好了解同学们的第一手资料，及时 发现学生在使用网络的存在的问题，实现网络文明教育的管理育人和 服务育人的人文关怀。 4.4 坚持自律与他律相结合，积极引导其正确处理好与网络的关系 规范大学生的网络行为，必须坚持自律与他律相结合，积极引导 其正确处理好与网络的关系。 大学生支配自己的闲暇时间的能力比较 差，缺乏对时间的管理和规划，而大学相对宽松的环境又大学生提供 了比较富裕的闲暇时间，尤其是晚上，除了周二的晚上的选修之外，基 本上的时间是由学生自我掌控， 部分学生会充分利用晚上是时间，进 行晚自修 。 但是绝大多数的同学还是会呆在宿舍 ，漫无目的地网游 。 宿 舍成了学生的“网吧”，于是便出现了学生宿舍联网 CS、CF 疯 狂 局 面 。 学生可以以订立宿舍公约、宿舍文明使用网络协议等书面代替口头形 式，监督其文明使用网络，宿舍成员之间要杜绝互相谅解不文明使用 网络的行为，并对舍友互相监督。 学生还可以自发组织成立“网络文 明”协会并将“网络文明”协会建设作为“文明修身”工程的一个重要组 成部分，使学生自发的、分散的网络文明行为凝聚成自觉的、有组织的 共建网络文明的行动，将更有效地在校园内培育起文明使用网络的的
脂的总得率为 8.66%，卵 磷 脂 的 含 磷 量 为 13.77%；经 酶 解 法 粗 提 和 柱
硅 胶 层 析 法 纯 化 后 卵 磷 脂 的 总 得 率 为 10.95%， 卵 磷 脂 的 含 磷 量 为
14.57%；经 酶 解 法 粗 提 后 再 经 金 属 离 子 复 合 沉 淀 法 纯 化 卵 磷 脂 总 得 率
【关键词】蛋黄卵磷脂；提取；纯化
卵磷脂是由甘油、胆碱、磷酸、饱和及不饱和脂肪酸组成的一种磷 脂类物质，它是构成细胞膜、核膜、质体膜等生物膜的基本成份。 研究 发现卵磷脂具有延缓衰老、促进神经传导、提高大脑活动、增强记忆 力 ，促 进 脂 肪 代 谢 、防 止 出 现 脂 肪 肝 、降 低 血 清 胆 固 醇 等 方 面 的 作 用 [1]。 被英国科学家喻为“健脑的黄金、养心的极品”。 在西方国家卵磷脂被 誉为与蛋白质、维生素并列的“第三营养素”。 卵磷脂在动植物体内分 布广泛，其中以蛋黄中含量最为丰富。
化法
13.77
酶解法粗提+柱硅 胶层析纯化法
12.73
10.59
14.57
酶解法粗提+金属 离子复合沉淀纯化
法
12.73
10.95
13.09
由表 3 可以看出：各用 300g 蛋黄进行提取和纯化试验，经有机溶
剂粗提和柱硅胶层析法纯化后卵磷脂的总得率为 8.38%，卵磷脂的 含
磷量为 15.33%； 经有机溶剂粗提和金属离子复合沉淀法纯化 后 卵 磷
1.1.2 试验仪器 三角瓶、容量瓶、微量移液器、真空干燥箱、旋转蒸发器、玻璃棒、 分光光度计、电子分析天平、真空干燥器、冷冻干燥器、循环式真空泵、 电动搅拌器、离心机、微量进样器、电炉、坩埚。 1.2 试验方法 1.2.1 蛋黄卵磷脂的粗提 （1） 有 机 溶 剂 提 取 法 首先将鸡蛋打破，分离蛋黄，将蛋黄放入洁净的带塞的三角瓶中， 加入 92%乙醇（用量 12ml/g）浸取 ，搅 拌 60min 后 ，静 置 15min，然 后 加 入 乙 醚 （用 量 为 乙 醇 用 量 的 1/3），搅 拌 15min 后 静 置 15min，过 滤 ，将 滤液收集放入旋转蒸发器中低温、减压浓缩，加入一定量的丙酮除杂， 卵磷脂即沉淀出来，过滤，用丙酮冲洗几次，至冲洗液无色，即得蛋黄 卵磷脂粗品。 在真空干燥箱中干燥后，充入氮气低温保存。 （2） 酶 解 法 首先将鸡蛋清洗、杀菌、打蛋去壳，分离蛋黄，将蛋黄放入洁净的 带塞的三角瓶中，加入 0.06%的蛋白酶，在温度 25℃的环境下实验，加 90%的乙醇搅拌，然后用离心机离心、提取(反复 3 次)，合并上清液、蒸 发回收、冷冻干燥，最后得到卵磷脂粗品。 1.2.2 蛋黄卵磷脂的纯化 （1） 柱 硅 胶 层 析 法 将适量的柱硅胶（60～100 目）用氯仿打成浆状、湿法装柱。 用不同 浓度的氯仿/甲醇混合液连续冲洗(氯仿:甲醇的体积比分别为 40:1、35: 1、30:1、25:1、20:1、15:1、10:1、5:1、1:1、2:3、1:2)，每个浓度以 100ml 总量 加入，当 加 入 氯 仿/甲 醇 浓 度 为 1:1 时 ，以 后 的 溶 液 加 入 量 根 据 需 要 变 大。 收集氯仿/甲醇比例为 1:2 洗脱液，然后放入旋转蒸发器浓缩成膏 状，再在冷冻干燥器中干燥，即得卵磷脂精品，放入密封瓶内充入氮气 低温保存。 （2） 金 属 离 子 复 合 沉 淀 法 把卵磷脂粗品溶于无水乙醇中，加入 金 属 沉 淀 剂 40%的 ZnCl2 水 溶液，待生成沉淀后，分离出沉淀物，而后加入丙醇洗涤，然后放于真 空中干燥，最终得到精制的卵磷脂。 1.2.3 蛋黄卵磷脂含磷量的测定 分 光 光 度 法(GB/T 5009.87-2003)测 定 蛋 黄 卵 磷 脂 中 的 含 磷 量[2]， 以含磷量的高低，判别其纯度的高低。 2.结 果 与 分 析 2.1 蛋黄卵磷脂含磷量的测定标准曲线
2.4 交叉组合试验结果比较 蛋黄卵磷脂提取与纯化交叉组合试验结果比较见表 3。
表 3 蛋黄卵磷脂提取与纯化交叉组合试验结果比较
项目
粗提得率(%) 纯化回 收总 得率(%) 卵磷脂含磷量(%)
有机溶剂粗提+柱 硅胶层析纯化法
10.07
8.38
15.33
有机溶剂粗提+金
属离子复合沉淀纯
10.07
8.66
300
10.07
7.13
12.73
6.78
由表 1 可以看出：利用有机溶剂提取法粗提的卵磷加样回收率为 10.07%，卵 磷 脂 的 含 磷 量 为 7.13%；酶 解 法 粗 提 的 卵 磷 脂 加 样 回 收 率 为 12.73%，卵磷脂的含磷量为 6.78% 。 从两种方法对比可知，酶解法 得率比有机溶剂提取法的加样回收率高， 但是卵磷脂的含磷量低，说 明利用酶解法虽然加样回收率高，但所得的卵磷脂纯度较有机溶剂提 取法低。
为 10.95%，卵磷脂的含磷量为 13.09%。 四种组合方法对比可知，以有
机溶剂粗提+柱硅胶层析纯化法进行蛋黄卵磷的提取和纯化效果最
好，获得的蛋黄卵磷脂的纯度较高。
3.讨 论
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强的学生对网络产生强烈的神秘感。 二是家长与学生缺乏必要的沟 通，如孩子上网与学习时间的合理搭配，以及必要的网络知识等。 这些 缺乏人性化的教育方式容易造成不解、使学生与家长产生代沟甚至升 级为争执。 并最终导致子女觉得无法在家长身上找寻到家的温暖，体 会不到人性的关怀和伟大。 从而更多地把注意力转投向可以给他们带 来慰藉的网络上面。
根 测 定 结 果 绘 制 磷 标 准 曲 线 ， 其 磷 标 准 曲 线 为 w (p)=0.0812x+ 0.0072，式中 x 为吸光度，w 为含磷量（ug）。
2.2 蛋黄卵磷脂粗提试验结果 蛋黄卵磷脂粗提试验结果见表 1。
表 1 蛋黄卵磷脂粗提试验结果
有机溶剂提取法
酶解法
原 料 (g)
加样回 收率(%) 卵磷脂 含磷 量(%) 加样回 收率(%) 卵磷脂 含磷 量(%)
2.3 蛋黄卵磷脂纯化试验结果 蛋黄卵磷脂纯源自文库试验结果见表 2。
表 2 蛋黄卵磷脂纯化试验结果
原
柱硅胶层析法
金属离子复合沉淀法
料
（g） 卵磷脂 回收 率(%) 卵磷脂含磷量(%) 卵磷脂回收率(%) 卵磷脂含磷量(%)
300
83.21
15.33
85.98
13.77
由表 2 可以看出：通过有机溶剂粗提后经柱硅胶层析法纯化卵磷 脂的加样回收率为 83.21%，其中卵磷脂的含磷量为 15.33%；经金属离 子复合沉淀法纯化卵磷脂的加样回收率为 85.98%， 其中卵磷 脂 含 磷 量为 13.77%。 说明经柱硅胶层析法提纯卵磷脂粗品比金属离子 复 合 沉淀法所获得的纯度高。
近年来，由于卵磷脂的用量不断增长，对它的提取研究得到很大 发展，以形成了许多方便、有效的提取方法。 本试验采用不同的方法提 取，并纯化蛋黄卵磷脂，以探讨不同方法提取和纯化蛋黄卵磷脂的效 果。
1．材 料 与 方 法 1.1 试验材料 1.1.1 材料与试剂
新鲜鸡蛋、无水乙醇、乙醚、丙酮、甲醇、氯仿、蛋白酶、氯化镉、抗坏血 酸 、金 属 沉 淀 剂 (ZnCl2) 、丙 醇 、钒 钼 酸 铵 。