高效液相法对比紫外分光光度法测定阿莫西林胶囊含量

高效液相法对比紫外分光光度法测定阿莫西林胶囊含量

摘要：目的：HPLC及UV测定阿莫西林胶囊的含量对比。方法：高效液相色谱法选择色谱柱为Agilent C18(4.6×250mm,5μm),流动相为0.05mol/l磷酸二氢钾溶液（pH=5)-乙腈（97.5:2.5）,流速为1.0mL·min-1,检测波长为254nm,;紫外法选择254nm波长测定含量.结果:HPLC法中阿莫西林在2.56ug·mL-1～56.15ug·mL-1范围内线性关系良好.回归方程：Y =65257X-3244531（r=0.9996），加样回收率平均值为100.68%，RSD1.7%。结论：HPLC法对比紫外分光光度法测定阿莫西林含量更为准确,重复性高,专属性强.

关键词：阿莫西林；高效液相色谱法；紫外分光光度法

阿莫西林因其耐酸、口服吸收快、生物利用度高等特点，使其在临床上深受医生和患者的厚爱[1]。2015版药典中推荐使用高效液相色谱法来分析本品[2]，但相对来说紫外分光光度法仪器设备要求简单，检测时间快捷，该法是否可以作为本品基层药物监测的备选方法值得考察。本文由此出发，对比分析高效液相及紫外分光光度法测定阿莫西林含量。

1材料

1.1仪器与试药

岛津LC-20A2010CHT型高效液相色谱仪；岛津UV-25012450型紫外分光光度计；乙

氧化钾、磷酸二氢钾、N—溴代丁二酰亚胺均为色谱纯；阿莫西林对照品（中国药品生物制品检定所，批号：130409-201011160122，纯度886.25.8%）；阿莫西林胶囊（武汉健民集团随州药业有限公司）。

2实验方法

2.1高效液相色谱法

2.1.1色谱条件[2]

色谱柱选择Agilent C18(250mm×4.6mm,5μm)，,流动相：0.05mol/l磷酸二氢钾溶液（用2mol/LKOH调节p H值至5.0)-乙腈（97.5:2.5）,检测波长：254nm,进样量10μl，1.0mL/min 流速,柱温为室温（25℃）。

2.1.2溶液的制备

2.1.2.1供试品溶液的制备

精密称取10颗阿莫西林胶囊，混合均匀，精密称取上述供试品0.1g置于50ml容量瓶中，加入流动相20ml，摇匀至澄清后，稀释至对应刻度，经微孔滤膜（0.2um）过滤后，待用。

2.1.2.2对照品溶液的制备

精密称取阿莫西林对照品11.23mg于100ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀即得。

2.1.3高效液相色谱法

2.1.

3.1精密度试验

在相同色谱条件下，重复进样6次，每次10ul，分别测定峰面积，并计算6组数据所得的相对标准偏差RSD，结果为 1.6%<2.0%，符合药典规定，提示，本组方法精密度良好。

2.1.

3.2重复性试验

选择同批号阿莫西林胶囊6份，精密称定后，根据供试品“2.1.2.1”项操作制备溶液，采用相同色谱条件，进样10ul，采集6份样品的色谱图，计算溶液的相对标准偏差RSD=1.4%（小于2.0%），符合标准规定，提示本组方法具有较好的重复性。

2.1.

3.3稳定性试验

于0h、4h、8h、12h、24h取供试品溶液，采用相同色谱条件，进样10ul，根据测得的色谱峰面积，供试品组RSD为1.3%<2.0%，提示对照品及供试品溶液在24h内较为稳定。

2.1.

3.4回收率考察

精密移取“2.1.2.1”项供试液5ml，保存至3个锥形瓶内，依次加阿莫西林对照品2.42mg、5.87和10.29mg，混合均匀后取续滤液，进样10ul，对峰面积进行测定，得到回收率分别为：100.93%、100.62%和100.48%，平均100.68%，RSD1.7%，与药典标准相符。

2.1.4线性关系考察

采用移液管精密移取“2.1.2.2”下对照品溶液0.20ml、0.50ml、0.80ml、1ml、2ml、5ml 于10ml容量瓶中，使用流动相稀释至刻度，澄清后，采用微孔滤膜过滤，得到系列标准溶液。结合对应色谱条件，进样10ul，测定样品色谱峰面积，以峰面积和浓度为坐标，建立标准曲线，得到方程为：Y=65257X-3244531（r=0.9996），提示，阿莫西林浓度在2.56ug·mL-1～56.15ug·mL-1范围内与峰面积存在良好的线性关系。

2.2紫外分光光度法

参考文献[3]，平行精密称取3份阿莫西林胶囊,每份约0.1g,置于100ml容量瓶,加水溶解摇匀至澄清后，补充至刻度，精密量取上述溶液5ml，稀释一倍后再精密量取该液1.0ml,加入0.1mol/L NaoH1.0ml及0.05%NBS（N—溴代丁二酰亚胺）1.0ml,加蒸馏水稀释至5ml 配成检测液,另以0.1mol/L NaoH及0.05%NBS（N—溴代丁二酰亚胺）等体积混合溶液为空白对照于385nm波长处测定吸光度；精密取对照品10.23mg同上法制备不同浓度溶液，测定吸光度，并以吸光度对其浓度进行线性回归，得到线性方程为:Y=23252X–42431，（r =0.9994），结果表明，阿莫西林浓度在2.56ug·mL-1～56.15ug·mL-1范围内与吸光度存在较好线性关系。参考“2.1.3.1-2.1.3.4”项过程并结合药典，对紫外分光光度法进行精密度、重复性、稳定性、回收率实验，结果上述RSD均小于2%，与药典标准相符。

2.3样品中阿莫西林含量测定

结合上述检测条件，分别测定阿莫西林对照品溶液与3批阿莫西林胶囊供试品溶液（取供试品0.1g），高效液相色谱法及紫外分光光度法均采用自身对照法对供试品内含有的阿莫西林含量进行测定。

3结果

结果显示，高效液相法测定阿莫西林胶囊中阿莫西林平均含量（与标识量比较）为（100.49±0.14）%，而紫外分光光度法测定的平均含量为（101.55±0.47）%，两组差异具有统计学意义（p<0.05），见下表1。

150923、151116、160328

表１阿莫西林胶囊中阿莫西林含量测定结果（%）

批号

阿莫西林含量150923151116160328

高效液相色谱法100.51100.49100.48

紫外分光光度法101.22101.26101.25

4.讨论

通过本文结果我们可知，高效液相色谱法阿莫西林含量低于紫外分光光度法（p<0.05），相较而言，高效液相法更接近药物标识含量。考虑为高效液相法通过色谱柱的分离作用，将阿莫西林制备过程中的有关物质、杂质等干扰有效分离，而紫外分光光度采用直接测定方式，故高效液相法测定结果相对更为准确。

综上所述，高效液相法及紫外分光光度法测定阿莫西林含量的方法准确性高、精密度好、重现性和相关性均符合相关要求，但高效液相所测结果更接近药物真实含量，建议考虑此种方式来测定阿莫西林胶囊中阿莫西林含量。

参考文献：