白掌组织培养

一、实验目的
了解植物组织培养的方法，并掌握组织培养技术。

二、实验原理
植物组织培养技术是指在含有营养物质及植物生长物质的培养液中，培养离体植物组织（器官或细胞）并诱导使其长成完整植株的技术。

所用的材料可采取根、茎、叶、花、芽和种子的子叶，有时也利用花粉粒和花药，但根尖不易灭菌，一般很少采用。

对于木本花卉来说，阔叶树可在一、二年生的枝条上采集，针叶树种多采种子内的子叶或胚轴，草本植物多采集茎尖。

白掌是多年生常绿草本观叶植物。

三、实验用品
1、仪器设备
培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，组培瓶，组培盖或封口膜，棉线，接种箱或超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸。

2、试剂
70％的酒精、吲哚乙酸（IAA）或 2 ，4 –D （生长素类似物）、氯化汞（升汞）或次氯酸钠、6- 苄基氨基腺嘌呤（6-BA ）、MS 培养基、0.1 mol/L NaOH与0.1 mol/L HCL
3、材料
白掌的幼嫩花序和侧芽
四、实验步骤
1．配制培养基
（1）愈伤组织诱导培养基：在MS 培养基中加入10毫克/升6－苄氨基腺嘌呤和2毫克/升吲哚乙酸。

吲哚乙酸（IAA)先用少量0.1 mol/L NaOH溶解，6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1 mol/LHCL溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。

（2）生根培养基：在MS培养基上添加2毫克/升吲哚乙酸
2．培养基灭菌
将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH 5.8 ，趁热分装于100mL组培瓶中，每瓶约20mL。

待培养基冷却凝固后，盖上组培盖，或盖上封口膜并用棉线扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃（1 kg/cm 2 ）下灭菌20 min 。

取出组培瓶放在台子上，冷却后备用。

接种操作所需的一切用具（如长镊子、解剖刀、剪刀等）及灭菌水，需同时灭菌。

3.制备外植体
将已消毒的材料，用无菌刀、镊等，在无菌的环境下，剥去嫩枝的外皮，然后切成0.2－0.5厘米厚的小片，这就是外植体。

操作中严禁用手触动材料。

五、接种和培养
1．将初步洗涤及切割的材料放入烧杯，带入超净台上，用消毒剂灭菌，再用无菌水冲洗，最后沥去水分，取出放置在灭过菌的纱布上或滤纸上。

2．材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切割。

如叶片切成0.5cm平方的小块；茎切成含有一个节的小段。

微茎尖要剥成只含1-2片幼叶的茎尖大小等。

接种过程中经常灼烧接种器械，防止交叉污染。

3．用灼烧消毒过的器械将切割好的外植体插植或放置到培养基上，每瓶接种4到10个。

接种后，用无菌药棉封口。

4.将接种过的愈伤组织诱导培养基放在保持在25℃左右培养室里培养40~45天，使其长出愈伤组织和不定芽；然后将其转入诱导生根的培养基中，也在无菌条件下操作，并在培养室里培养30~40天，成为完整植株。

六、组培苗的练苗移栽
试管苗从无菌到光、温、湿稳定的环境进入自然环境，必须进行炼苗。

一般移植前，先将培养容器打开，于室内自然光照下放3天，然后取出小苗，用自来水把根系上的营养基冲洗干净，再栽入已准备好的基质中，基质使用前最好消毒。

移栽前要适当遮荫，加强水分管理，保持较高的空气湿度（相对湿度98％左右），但基质不宜过湿，以防烂苗。