饲料中粗蛋白的测定教学课件
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• NaOH：40% 水溶液，化学纯； • 硼酸：2% 水溶液，化学纯； • 混合指示剂； • 0.1mol/LHCl标准溶液； • 0.02mol/LHCl标准溶液； • 蔗糖：分析纯； • 硫酸铵：分析纯，干燥； • 硼酸吸收液。
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仪器
• 实验用样品粉碎机或研钵； • 40目分析筛； • 分析天平； • 电炉； • 酸式滴定管； • 凯氏蒸馏装置； • 凯氏定氮装置
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• 空白测定
• 称取蔗糖0.5g，代替试样，按照前面的消 化蒸馏方法进行空白测定，消耗0.1mol/L盐 酸标准溶液的体积不得超过 0.2mL，消耗 0.2mol/L 的盐酸标准溶液不得超过0.3mL。
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9
• 滴定
蒸馏后的吸收液立即用 0.1mol/L 或 0.2mol/L标准盐酸溶液滴定，溶液由蓝绿色 变成灰红色。同样滴定试剂空白消化液。
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• 氮的蒸馏
采用定氮仪，将带消化液的管子插在蒸馏 装置上，以 25mL 硼酸为吸收液，加入两 滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要 浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化 管中加入 50mL 氢氧化钠溶液进行蒸馏。 蒸馏时间以流出的液体呈中性为宜，可用 pH试纸测试。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗 冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。
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7
• 氨的蒸馏 试样消煮液冷却后加入20mL蒸馏水，转入 100mL 容量瓶内，冷却后用水稀释至刻度，摇匀， 作为试样分解液。将蒸馏装置的冷凝管末端浸入 装有 20mL 硼酸吸收液和 2 滴混合指示剂的锥形 瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数 滴、硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色， 否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL 注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进 样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL氢氧化钠 溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃 塞塞好，且在入口处加水密封，以防漏气。蒸馏 4min后降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面， 再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均 流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。
释放出来，直接蒸馏到硼酸中，再用盐酸 溶液来滴定，根据盐酸消耗量来计算 DD 法所测得的表观含氮量。但是，由于 DD 法测定过程中的氨量的释放是不定量进行
的，因此必须根据经典的凯氏定氮法所标
定的校正数值，用一定的回归方程来计算 样品中的粗蛋白质的含量。
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试验步骤
• 消化 称量5.000g样品，粉碎经40目筛后放 500mL 凯氏烧瓶中，加 50mL 蒸馏水（边 加边摇），使充分混合。
饲料中粗蛋白的测定
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常用方法
• 国标法 • 凯氏定氮仪法 • 强碱直接蒸馏法 • 双氧水法
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样品的采集、制备
• 生产单位有代表性的原料检样：鱼粉、玉 米蛋白粉、豆粕
• 采用四分法将检样缩至500g，粉碎后通过 40目筛，装于密闭容器中，防止试样成分 变化或变质
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0.014—氮的毫克当量数；
M—样品的质量（g）；
N—盐酸标准溶液当量浓度
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凯氏定氮仪法
试剂 同凯氏定氮测粗蛋白法 仪器 自动或半自动定氮仪
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操作步骤
• 试样的消化
称取试样 0.5 ～ 1g（含氮量5 ～ 80mg）， 准确至0.0002g，放入消化管中，加两片消 化片（仪器自备）或6.4g混合指示剂、 12mL硫酸，于420℃在消煮炉上消化1h， 取出放凉后加入30mL蒸馏水。
3
国标法
实验原理 国标法测定试样中含氮量，即在催化剂作 用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化 为硫酸铵，加入碱进行蒸馏使NH3 逸出， 用硼酸吸收后，再用盐酸滴定，测出含氮 量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋 白的含量。
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实验试剂
• 硫酸：化学纯，含量为98%，无氮； • 混均合为催化化 学剂 纯： ，磨0.4碎gC混u匀SO；4，6gK2SO4 或 Na2SO4
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结果计算
• 粗 蛋 白 质 含 量（%）= （V-V0 ）×N ×0.014×6.25×100 [M×(V 2／V 1)]
式中： V—滴定样品吸收液时所消耗的盐酸标准溶（mL)；
V0
—空白测定吸收液所消耗的盐酸标准溶液（mL) V1 — 样品消化液总的体积（mL）；
；
V2 —从100mL消化分解液中吸取的消化液体积（mL)；
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滴定 空白测定 计算
（同国标法）
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强碱直接蒸馏法
强碱直接蒸馏法 (Direct Distillation， 俗称DD法)是间接测定饲料中粗蛋白质的一 种简便的方法。
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Hale Waihona Puke Baidu16
实验原理
其原理是将粉碎的饲料样品在强碱中消煮，
使饲料中的 α- 氨基、酰氨基以及某些特殊 基团上的氮素在强碱的作用下以氨的形式
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滴定
用0.1mol/L的盐酸标准溶液进行滴定。
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结果计算
• 粗蛋白质含量（%）=
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蒸馏
向凯氏烧瓶中加入 25mL 10% 氯化钡溶液， 振荡摇匀，再加120mL 40% 的氢氧化钠溶 液，立即连接蒸馏装置进行蒸馏。把蒸馏 装置冷凝管的末端浸入盛有 50mL 2% 的硼 酸溶液和 2 滴混合指示剂的锥形瓶中，轻 轻摇动凯氏烧瓶使溶液混匀，然后加热进 行蒸馏，待蒸馏出的液体体积达到100mL （总体积达到150mL）时停止蒸馏。
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操作步骤
• 试样的消化 称取试样 0.5 ～ 1g（含氮量5 ～ 80mg），准确至0.0002g， 小心无损的将样本放入 100mL洗净烘干的凯氏烧瓶中。 加入 6.4g 混合催化剂与试样混合均匀，再加入 12mL 硫 酸和两粒玻璃珠。将凯氏烧瓶置于通风厨里的电炉上加热， 开始加热时，先用小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加 强火力，消化时经常转动消化瓶，使全部样本浸入硫酸内， 如有黑色油在瓶壁，应待烧瓶冷却后加少量蒸馏水冲洗， 再继续加热消化。如有黑炭粒不能全部消化，则待烧瓶冷 却后，补加少量硫酸加热，直至呈透明的蓝绿色，然后再 继续加热至消化完毕。
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仪器
• 实验用样品粉碎机或研钵； • 40目分析筛； • 分析天平； • 电炉； • 酸式滴定管； • 凯氏蒸馏装置； • 凯氏定氮装置
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• 空白测定
• 称取蔗糖0.5g，代替试样，按照前面的消 化蒸馏方法进行空白测定，消耗0.1mol/L盐 酸标准溶液的体积不得超过 0.2mL，消耗 0.2mol/L 的盐酸标准溶液不得超过0.3mL。
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• 滴定
蒸馏后的吸收液立即用 0.1mol/L 或 0.2mol/L标准盐酸溶液滴定，溶液由蓝绿色 变成灰红色。同样滴定试剂空白消化液。
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• 氮的蒸馏
采用定氮仪，将带消化液的管子插在蒸馏 装置上，以 25mL 硼酸为吸收液，加入两 滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要 浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化 管中加入 50mL 氢氧化钠溶液进行蒸馏。 蒸馏时间以流出的液体呈中性为宜，可用 pH试纸测试。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗 冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。
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• 氨的蒸馏 试样消煮液冷却后加入20mL蒸馏水，转入 100mL 容量瓶内，冷却后用水稀释至刻度，摇匀， 作为试样分解液。将蒸馏装置的冷凝管末端浸入 装有 20mL 硼酸吸收液和 2 滴混合指示剂的锥形 瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数 滴、硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色， 否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL 注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进 样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL氢氧化钠 溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃 塞塞好，且在入口处加水密封，以防漏气。蒸馏 4min后降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面， 再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均 流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。
释放出来，直接蒸馏到硼酸中，再用盐酸 溶液来滴定，根据盐酸消耗量来计算 DD 法所测得的表观含氮量。但是，由于 DD 法测定过程中的氨量的释放是不定量进行
的，因此必须根据经典的凯氏定氮法所标
定的校正数值，用一定的回归方程来计算 样品中的粗蛋白质的含量。
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试验步骤
• 消化 称量5.000g样品，粉碎经40目筛后放 500mL 凯氏烧瓶中，加 50mL 蒸馏水（边 加边摇），使充分混合。
饲料中粗蛋白的测定
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常用方法
• 国标法 • 凯氏定氮仪法 • 强碱直接蒸馏法 • 双氧水法
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样品的采集、制备
• 生产单位有代表性的原料检样：鱼粉、玉 米蛋白粉、豆粕
• 采用四分法将检样缩至500g，粉碎后通过 40目筛，装于密闭容器中，防止试样成分 变化或变质
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0.014—氮的毫克当量数；
M—样品的质量（g）；
N—盐酸标准溶液当量浓度
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凯氏定氮仪法
试剂 同凯氏定氮测粗蛋白法 仪器 自动或半自动定氮仪
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操作步骤
• 试样的消化
称取试样 0.5 ～ 1g（含氮量5 ～ 80mg）， 准确至0.0002g，放入消化管中，加两片消 化片（仪器自备）或6.4g混合指示剂、 12mL硫酸，于420℃在消煮炉上消化1h， 取出放凉后加入30mL蒸馏水。
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国标法
实验原理 国标法测定试样中含氮量，即在催化剂作 用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化 为硫酸铵，加入碱进行蒸馏使NH3 逸出， 用硼酸吸收后，再用盐酸滴定，测出含氮 量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋 白的含量。
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实验试剂
• 硫酸：化学纯，含量为98%，无氮； • 混均合为催化化 学剂 纯： ，磨0.4碎gC混u匀SO；4，6gK2SO4 或 Na2SO4
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结果计算
• 粗 蛋 白 质 含 量（%）= （V-V0 ）×N ×0.014×6.25×100 [M×(V 2／V 1)]
式中： V—滴定样品吸收液时所消耗的盐酸标准溶（mL)；
V0
—空白测定吸收液所消耗的盐酸标准溶液（mL) V1 — 样品消化液总的体积（mL）；
；
V2 —从100mL消化分解液中吸取的消化液体积（mL)；
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滴定 空白测定 计算
（同国标法）
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强碱直接蒸馏法
强碱直接蒸馏法 (Direct Distillation， 俗称DD法)是间接测定饲料中粗蛋白质的一 种简便的方法。
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Hale Waihona Puke Baidu16
实验原理
其原理是将粉碎的饲料样品在强碱中消煮，
使饲料中的 α- 氨基、酰氨基以及某些特殊 基团上的氮素在强碱的作用下以氨的形式
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滴定
用0.1mol/L的盐酸标准溶液进行滴定。
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结果计算
• 粗蛋白质含量（%）=
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蒸馏
向凯氏烧瓶中加入 25mL 10% 氯化钡溶液， 振荡摇匀，再加120mL 40% 的氢氧化钠溶 液，立即连接蒸馏装置进行蒸馏。把蒸馏 装置冷凝管的末端浸入盛有 50mL 2% 的硼 酸溶液和 2 滴混合指示剂的锥形瓶中，轻 轻摇动凯氏烧瓶使溶液混匀，然后加热进 行蒸馏，待蒸馏出的液体体积达到100mL （总体积达到150mL）时停止蒸馏。
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操作步骤
• 试样的消化 称取试样 0.5 ～ 1g（含氮量5 ～ 80mg），准确至0.0002g， 小心无损的将样本放入 100mL洗净烘干的凯氏烧瓶中。 加入 6.4g 混合催化剂与试样混合均匀，再加入 12mL 硫 酸和两粒玻璃珠。将凯氏烧瓶置于通风厨里的电炉上加热， 开始加热时，先用小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加 强火力，消化时经常转动消化瓶，使全部样本浸入硫酸内， 如有黑色油在瓶壁，应待烧瓶冷却后加少量蒸馏水冲洗， 再继续加热消化。如有黑炭粒不能全部消化，则待烧瓶冷 却后，补加少量硫酸加热，直至呈透明的蓝绿色，然后再 继续加热至消化完毕。