Agilent1200型高效液相色谱仪操作手册
Agilent-1200HPLC
仪器名称：Agilent-1200高效液相色谱仪自动主要组成：Agilent1200四元泵+UV检测器+自动进样器简单操作规程(一)、开机：1、启动计算机，进入Windows画面，Bootp Server程序自动运行。
2、打开 1200 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击“仪器1（2）联机”图标，化学工作站自动与1200LC通讯，进入工作站画面。
4、把已超声脱气的流动相及水、甲醇等放入溶剂瓶中，打开Purge阀。
5、单击泵图标，出现参数设定菜单，单击设置参数选项，进入泵编辑画面。
6、设流速：5ml/min，单击“确定”。
7、单击泵图标，出现参数设定菜单，单击“控制”选项，选中打开，单击“确定”，则系统开始Purge，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续Purge，直到所有要用通道无气泡为止。
8、单击泵图标，出现参数设定菜单，单击“控制”选项，选中“停泵”，单击“确定”，关闭Purge阀。
9、单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，单击“确定”。
（二）数据采集方法编辑：1、开始编辑完整方法：从“方法”菜单中选择“方法编辑” 项，如上图所示选中除“数据分析”外的三项，单击“确定”，进入下一画面，依次设置以下参数：泵参数设定、自动进样器参数设定、柱温箱参数设定、VWD检测器参数设定等，单击“确定”进入下一画面。
2、单击“方法”菜单，选中“方法另存为”，输入一方法名单击“确定”。
3、从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项，输入操作者名称等信息。
4、单击“方法”菜单，选中“方法调用”，调入一方法，单击“确定”。
5、从“仪器控制”菜单选择“运行”。
6、从“序列”菜单，选中“序列编辑”，编辑完所需序列后，单击“确定”。
7、等仪器Ready，基线平稳，单击“开始”，进样。
(三)、关机:1、关机前，用 90%的水冲洗系统40分钟，然后用甲醇或乙腈冲洗系统40分钟，在冲洗时关闭检测器和柱温箱。
Agilent1200高效液相色谱仪操作程序
1 目的：建立Agilent1200高效液相色谱仪标准操作程序，规范Agilent1200高效液相色谱仪的使用和操作。
2 范围：Agilent1200高效液相色谱仪。
3 责任者：QC仪器分析人员。
4 程序：4.1 仪器组成本套仪器由脱气机、低压四元梯度泵、柱温箱、可变波长紫外检测器和Agilent 1200色谱工作站组成。
4.2 基本操作4.2.1 准备工作4.2.1.1 按照SOP操作标准配置相应的流动相，用0.45µm的膜过滤并冷却至室温待用，流动相名称和容器序号必须对应，以及在流动过程中检查是否有气泡。
4.2.1.2 色谱柱准备：选择与被测物质匹配的色谱柱，并安装好。
4.2.1.3 预热分析天平5～10分钟，调节水平，确保称量准确。
调节操作环境的温湿度使其达到规定的要求。
4.2.1.4 测试液、对照液的准备：使用品种项下规定的测试液、对照液并按操作规程临用前配置。
4.2.2 接通电源并打开Agilent1200仪器和与之配套的计算机。
4.2.3 双击电脑桌面上的Agilent1200在线工作站（Instrument 1 online）4.2.4 参数设置测试条件和显示条件一致，则无需重新设置。
否则按检测条件设置操作参数。
（如：进样量、柱温箱温度、流量、波长、流动相比例、分析时间等），启动仪器测绘基线并观其状态。
4.2.5 分析操作当以上所有设置参数达到相应的设定值并且基线处于稳定状态时，窗口状态显绿，此时系统显示Ready，放采样瓶于相应位置，按Start键开始采样分析，工作站自动进行数据采集，采样完毕，自动进行数据处理并存盘。
分析前填写被测样品以及工作人员的详细资料，以便查阅。
4.2.6 报告的预览与打印等采样结束直接预览并打印或者双击桌面上的离线工作站（Instrument 1 offline）。
选择“打开”项，按进样信息打开需要的谱图，单击“预览”按钮，显示预览报告，有必要时可以对谱图进行修改，确认无误后，单击“打印”按钮，即可进行报告打印并保存图谱。
Agilent1200操作规程
Agilent1200操作规程一、1200/化学工作站开机顺序(LAN卡联接)1 打开计算机；2 打开主机各模块电源（自上而下打开色谱仪组件电源），双击INSTRUMENT 1 ONLINE 图标,进入化学工作站；3 调出一个分析方法，检查各参数的设置；4 旋开泵上的排气阀，将工作站中的泵流量设到5ml/min，溶剂A设到100%；5 在工作站中打开泵，排出管线中的气体数分钟；6 依此切换到B、C、D溶剂分别排气；7 将工作站中的泵流量设到1ml/min，多元泵则再设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；8 关闭排气阀，检查柱前压力；9 待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯，观察基线情况；二、数据采集方法编辑1 由运行控制进入样品信息…设定操作者姓名，样品数据文件名等。
2 泵参数设定：（以二元泵为例）1）在流量处输入流量,如1ml/min，在溶剂B处输入70.0,(A=100-B) ,也可插入一行时间列表,编辑梯度。
在最大压力极限处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。
2）单击确定进入下一画面。
3 柱温箱参数设定:1）在柱温下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击更多>>键,选中与左侧一致，使柱温箱的温度左右一致。
2）点击确定进入下一画面。
4 VWD检测器参数设定:1）在波长下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在峰宽(响应时间)下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如>0.1min(2s)。
2）在时间列表中可以插入一行，输入随时间切换的波长，如1min，波长=300nm。
3）点击确定进入下一画面。
5 单击方法菜单，选中保存方法，输入一方法名，如“test”，单击确定。
6 等仪器就绪，基线平稳，从方法菜单中选择运行方法，进样。
三、数据处理操作步骤1 由主菜单上的视图进入数据分析，到数据处理界面；2 由主菜单上的文件进入调用信号，调出要分析的数据文件色谱图；3 由主菜单上的图形进入信号选项，调整谱图坐标:1)点自定义量程，在时间范围中输入横坐标(时间）(例如0到10)；2)在响应范围:中输入纵坐标(响应值）(例如-50到800)；3)在量程框中，调到全部使用相同量程；4)点击确定退出。
Agilent 1200 型高效液相色谱仪操作规程
Agilent 1200型高效液相色谱仪操作规程1 开机1.1 从上至下依次打开 1200 LC 各模块电源，打开电脑主机。
1.2 待各模块自检完成后双击桌面上的“仪器1（联机）”图标，化学工作站自动与1200LC工作站连接。
1.3 从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面, 单击“视图”菜单中的“系统视图”、“样品视图”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
2 脱气2.1 把流动相放入溶剂瓶中2.2 打开冲洗阀2.3 单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“设定泵”选项进入泵编辑画面。
2.4 设“流量”为 5mL/min ，单击“确定”。
2.5 单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“控制”选项，选中“启动”，单击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内由溶剂瓶到泵入口无气泡为止, 切换通道继续冲洗直到所有要用通道无气泡为止。
2.6 单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“控制”选项，选中“关闭”，单击“确定”关泵，关闭冲洗阀。
2.7 单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“设置泵”选项，进入参数编辑画面，设流速为1.0mL/min。
2.8 单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，也可输入停泵的体积，单击确定。
3 数据采集方法编辑3.1 从”方法”菜单中选择“编辑完整方法”项，点击除“数据分析”外的三项，单击“确定”。
3.2 样品信息从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项，在对话框中输入“操作者名称”。
“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”（区别: “手动”每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。
“前缀/计数器”在“前缀”框中输入前缀,在“计数器”框中输入计数器的起始位,仪器会自动命名。
3.3 方法信息在方法菜单中选择“方法信息”选项，在“方法注释”中加入方法的信息（如测试方法等），单击“确定”。
3.4 泵参数设定在桌面上点击泵图标，从选项菜单中点击“泵设置”，在对话框中“流速”处输入流量,如1mL/min ，在各通道“溶剂”处输入需要的比例 ,也可“插入”一行“时间表”，编辑梯度,在“压力限”处输入柱子的最大耐高压以保护柱子 ,单击“确定”。
Agilent 1200液相色谱仪操作规程
Agilent 1200液相色谱仪操作规程一、准备工作：1、开启计算机系统电源进入Windows XP界面。
1、依次开启在线脱气机、泵、检测器电源开关，等待自检完毕。
2、待网络连接成功后，双击桌面上仪器1（联机） ,启动化学工作站，显示主机各单元图标画面。
3、单击泵图标→Setup Pump（1）设置泵参数：5ml/min（2）打开Purge阀（逆时针2—3圈）排气泡，平时常用此仪器需2—3分钟，不常用时需时间稍长些。
（3）开泵：单击泵图标，在图标上选Control→Pump→On，击OK，观察无气泡止。
（4）降流量=1ml/min（5）关闭Purge阀（顺时针）二、方法编辑：1、在Method and Run Control界面下，单击Method→Edit Entire Method,在该界面下四项都选中，击OK。
（1）在Method Comments下面方框中输入方法描述（如：This Method is for trainning）,击OK。
（2）在泵参数设置（Setup Pump）界面输入泵参数，单击OK。
（3）在检测器参数设置（VWD Signal）界面输入波长及响应时间。
2、在Signal Details: Instrument 1编辑界面击OK。
3、在积分参数设置（Edit Integration Events）界面击OK。
4、在Specify Report界面击OK。
5、在Instrument Curves界面击OK。
6、在Run Time Checklist 编辑界面选Data Acquisition和Standard Data Analysis 击OK。
7、方法保存：击Method→Save Method As 输入存盘方法文件名（扩展名为“ .m”）→确定→OK。
三、运行样品：1、打开Purge阀。
2、运行Instrument菜单下的System On。
3、待废液管中无气泡流出，关闭Purge阀。
液相1200
Agilent1200高效液相色谱仪操作规程1 仪器组成及开机1.1 仪器组成由真空在线脱气机、四元梯度泵、柱温箱、二极管阵列检测器组成。
1.2 开机1.2.1 接通UPS总电源，按下power键，显示为绿灯。
1.2.2 启动电脑（先开显示器，再开主机），进入WINDOWS界面。
1.2.3 依次打开脱气机、四元泵、柱温箱、二极管阵列检测器等主机电源，待全部灯变为黄色；2 实验条件的设定2.1 打开Agilent1200在线工作站，启动1200工作站中四元泵、检测器、控温箱。
2.2 排气泡：逆时针旋转排气阀，把流速调为5ml/min，依次进行各通道的气泡排空，然后关闭排气阀。
2.3 样品信息输入，选择方法控制下拉菜单的样品信息，填写上操作者姓名，样品名。
2.4 调用已设置好方法，在方法选择选择方法，选定文件名，单击确定。
或编辑新方法，在方法下选择新建方法，按提示逐项进行参数设定，完成后，在方法下选择保存方法，保存新方法。
3 仪器的运行3.1 进样：待基线平稳后，单击运行序列，仪器开始记录，采集样品色谱数据。
3.2 停止样品采集：按停止序列可停止采集样品色谱数据，记下样品采集记录号。
3.3 冲洗色谱柱：必需认真冲洗色谱柱。
在工作站上启动泵，调用预设好的冲洗色谱柱的方法“wash”，把检测器的灯关闭，进样阀扳到进样位置，让仪器按预设的程序彻底冲洗柱子。
4 关机4.1 在工作站上单击OFF键，关闭所有工作单元，再关闭在线工作站，然后关闭电脑。
4.2 依次关上真空脱气机、四元泵、检测器等主机的电源，4.3 关闭UPS总电源。
4.4检查并登记使用记录，搞好实验室清洁卫生。
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Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明-2ppt.
Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明第二章
Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明
4.2.3 进样序列的保存
在命令栏“Sequence”下，单击“Save Sequence”或单击快捷操作的 “Save Current Sequence”图标（左边一软盘，右边三个小瓶）；在 path下选择保存路径，在此路径下选择subdiectory输入新文件名，单击 “OK”，即完成。
8.5.1 流动相使用前请必须脱气、过滤。
8.5.2 使用缓冲盐时，要加在线Seal-wash选项。
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Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明
8.5.3 关机前，用 100%的乙腈冲洗系统20分钟，然后关泵，（适于反 相色谱柱，正相色谱柱用适当的溶剂冲洗）。 8.5.4 及时更换Purge Valve内的过滤芯。（当打开Purge Valve时，压 力高于10bar，表明过滤芯已堵）。 8.5.5 使用合适的密封圈。 8.6 使用梯度比例时要注意事项：
8.6.2 当使用缓冲盐溶液和有机溶剂时，推荐将缓冲盐通道接在A通道上， 有机溶剂通道直接接在A通道的上方D通道上；定期用水冲洗所有的通道， 以除去阀口上可能出现的盐沉淀。
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Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明
8.7 在线真空脱气机使用注意事项： 8.7.1 第一次使用，要用随仪器附带的注射器抽满脱气机腔体；更换不 同类型的溶剂时，要先抽空，再抽满。 8.7.2 不用的通道要充满溶剂或密闭起来。 8.8 更换色谱柱时要注意事项：
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Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明
仪器的流动相管路连接非常重要，一般Agilent 1200LC 在第 一次安装时，均有受过专业培训的安装工程师负责安装，各 种接头会处理的非常完美。客户只需在更换色谱柱时注意接 头处理就可以了，一般柱子入口接头为不锈钢卡套接头，柱 子出口为不锈钢卡套接头或PEEK管线手拧街头，当完成第 一次安装后，不锈钢卡套已固定死，当接不同的柱子时，要 注意柱子接头处的形状和长度，否则会产生一个非常大的死 体积。
Agilent 1200高效液相色谱仪(四原泵)操作规程
Agilent 1200高效液相色谱仪（四原泵）操作规程1.目的建立高效液相色谱仪（四原泵）使用维护保养标准操作规程，确保测量结果准确、可靠。
2.适用范围本SOP适用于Agilent 1200高效液相色谱仪（四原泵）的使用。
3.责任者化验员应严格遵照该操作规程，管理方负责监督本规程的实施。
4.定义无5.规程5.1准备在开机之前，根据所做样品的方法要求，准备好所用流动相、供试品及对照品。
流动相装入溶剂储液瓶，确认吸滤头已置于液面以下，供试品溶液和对照品溶液均用0.45μm的膜过滤。
5.2开机5.2.1打开电脑；5.2.2打开1200各模块电源；5.2.3等待各模块就绪后，双击桌面上的工作站图标，进入化学工作站；5.2.4旋开泵上的purge阀（逆时针转动，旋松即可，不要转动太多。
），将流速设置为5.0ml/min，将准备排气的管道的流量设置为100%（如：流路A比例则是100%-B-C-D），在工作站中打开泵，则开始排除管路中的气泡（时间约为5min）；其他通道同理操作。
5.2.5排气完成后，关闭purge阀（顺时针旋转，旋紧即可，不必旋的太紧。
）。
5.2.6连接色谱柱，用适宜的流动相冲洗色谱柱。
如果使用有盐的流动相，要先用80%的水过渡。
5.2.7更换方法规定的流动相。
冲洗约30分钟。
5.3设置方法5.3.1设置新方法5.3.1.1（自动进样器参数设定：单击工作站中“进样针”图标，选择“设置进样器”（一般选择洗针进样，清洗瓶位置一般为100位），单击“确定”按钮即可；5.3.1.2泵参数设定（四元泵）：单击工作站中“泵”图标，选择“设置泵”。
①在“流速”处输入流速（如1.0ml/min）；②在“停止时间”处设定所需采集时间；③在时间表中插入时间列表，编辑梯度；④在压力限处可设定最大耐高压，以保护色谱柱，单击“确定”按钮即可；5.3.1.3检测器参数的设定：在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长，如280nm，在“峰宽（响应时间）”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，如>0.1min（2s）。
Agilent 1200型自动进样高效液相色谱仪操作规程
Agilent 1200型高效液相色谱仪操作规程1目的规范Agilent 1200型高效液相色谱仪的操作，确保使用本仪器的检验结果准确可靠。
2实验步骤2.1开机2.1.1准备好流动相并安装色谱柱。
2.1.2依次打开仪器各部件电源开关(在线脱气机、输液泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器或荧光检测器等)，约5 min后，仪器进入待机状态，此时仪器各部件指示灯应无色或呈黄色。
2.1.3打开电脑，点击亿【Instrument 1 online】，约30s后，计算机进入工作站2.2色谱条件的设定2.2.1直接设定在操作页面的右下部——色谱工作参数中设定。
将鼠标移至要设定的参数，如进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等，单击一下，即可显示该参数的设置页面，键入设定值后，单击【OK】，即完成。
2.2.2调用已设置好的文件在命令栏【Method】下，选择【Load Method】，或直接单击快捷操作的【Load Method】图标，选定文件名，单击【OK】，此时，工作站即调用所选用文件中设定的参数。
如欲进行修改，则可同“4.2.1”项下，在色谱工作参数中做修改；也可以在命令栏【Method】选择【Edit Entire Method】，随后工作站即按顺序出现一系列参数设置页面，在每个页面中键人设定值，单击【OK】，即完成。
2.2.3编辑新文件先在命令栏【Method】下，选择【New Method】，然后再在命令栏【Method】下，选择【Edit Entire Method】，在每个参数设置页面下输入设定值，完成后，在命令栏【Method】下，选择【Save Method】，给新文件命名，单击【OK】，即完成。
2.3 仪器的运行当色谱参数设置完成后，单击工作站流程图右下角的【ON】，仪器开始运行。
此时，画面颜色由灰色转变成黄色或绿色，当各部件都达到所设参数时，画面均变为绿色，左上角红色的Not Ready变为绿色的Ready，表明可以进行分析。
Agilent1200高效液相色谱仪标准操作程序
Agilent 1200高效液相色谱仪标准操作程序1.目的使操作人员的操作步骤规范化。
2.适用范围适用于仪器安装、调试、校准后正常状态下进行的操作。
3.责任者质控科仪器分析员对此规程负责。
4.规程4.1清洗液、流动相、封柱液预处理4.1.1所有清洗液、流动相、封柱液在使用前均需过滤、脱气以及混合均匀。
4.1.2甲醇-水（10：90）、乙腈-水（10：90）、超净水、乙腈均需存放在棕色溶剂瓶中。
4.1.3含有乙腈的溶液以及不含乙腈但含有较高比例的其他有机溶剂的溶液在过滤时需使用有机相微孔滤膜，其它溶液在过滤时需使用水相微孔滤膜。
4.1.4存放清洗液、流动相、封柱液的溶剂瓶在每次装入溶液前需用少量过滤好的该溶液清洗数次。
4.2接通电源,开启连机电脑,再接通仪器电源,仪器自检完毕，处于准备进行状态。
双击桌面图标“仪器1联机”，打开Agilent 1200化学工作站，在左上角下拉框中选择“方法与运行控制”界面。
显示如下图标：注意：一定要先双击“仪器1联机”图标，进入联机状态，方可双击“仪器1脱机”图标，同时进入脱机界面。
否则，将无法联机。
4.2泵4.2.1 准备清洗液并装入溶剂瓶中，将吸滤器放入瓶内。
安装所需用柱子。
4.2.3 将吹扫阀（即“Purge”阀）打开，单击泵图标，选择“设置泵”，将“流速”设置为3.00ml/min。
选择清洗液所在通道（建议为A通道），单击“确定”，在“系统视图”中单击“启动”运行泵，泵运行10分钟后，观察压力，应小于10bar，若大于此压力，应更换purge阀滤芯，调节流速1.00ml/min。
4.2.4关闭purge阀，观察柱压是否正常。
4.2.5选择“控制”，在“用于泵密封垫清洗的泵”（Seal Wash）中选择“定期清洗”，“周期”设置为5min，“持续”设置为0.1min，同时观察试剂架中10%异丙醇是否充足，相应的废液瓶是否有充足空间。
4.2.6 根据“柱使用记录中所规定的方法”清洗柱子约30分钟后，在“控制”组中的“泵”选项中选择“待机”，待系统压力降到10bar 以下后，更换流动相，在“控制”组中的“泵”选项中选择“启动”改用流动相平衡柱子，约30分钟后柱子处于平衡状态。
Agilent 1200高效液相色谱仪操作规程(四元泵)
Agilent 1200(四元泵)高效液相色谱仪的标准操作规程（美国安捷伦公司）一、准备工作1．更换纯净水，冲洗色谱柱的纯净水需每天更换，以免长菌。
各溶剂瓶需明确标明瓶内所装液体。
2．打开液相色谱仪柱温箱，按照色谱柱上标示的方向，连接试验所需色谱柱，连接色谱柱时切勿装反。
3．依次打开色谱仪各模块电源，待各模块自检完成后，双击“HPLC联机”图标，化学工作站自动与1200 LC通讯，进入工作站。
4．将要使用的各通道上的滤头放入已经0.45um滤膜过滤、脱气（约10分钟）的水相或流动相中，点击“Methood and Run Control”界面中的“启动”图标，操作界面被激活，由灰色变为绿色；同时调出检测样品所需的方法。
5．打开Purge阀，点击泵图标，在Setup pump选项中设置流速和比例来排气泡。
若使用A、B两通道，则应分别以5ml/min的流速、100%的比例各排液5min。
（脱气机的内腔体积一般为12ml，故排液时间要长，以便能保证各通道管路中充满检测样品所需的水相和有机相）purge结束后，将泵的流速调为0，旋紧purge阀（切勿在5ml/min流速时旋紧purge阀）。
将流速设为1ml/min，以10%的甲醇水（或乙腈水），冲洗色谱柱30min。
6．点击泵的图标，改变所需通道（已purge完）的比例，已达到检测样品所需的流动相条件，平衡色谱柱。
同时按各溶剂瓶中液体的真实体积，设定溶剂瓶体积。
二、数据采集1．点击左上角样品瓶图标，选择样品信息，更改文件保存路径、样品名称、样品位置等信息按要求填写，确认无误后点击确定。
2．点击自动进样器图标，选择设置进样器，设定进样体积。
选择进样方式，一般选择洗针进样方式，洗针瓶位置一般设为样品托盘的第91位，洗针液体一般为50%的甲醇水溶液。
3．点击检测器图标，更改自己所需的检测波长，参比波长（如无需参比波长请关闭），打开紫外灯。
如为DAD检测器时，光谱信息储存请选择全部，以便为图谱处理时提供所需依据。
Agilent 1200制备 液相培训手册(操作手册)
Agilent 1200 制备液相色谱 现场培训手册捷伦科技有限公司生命科学与化学分析仪器部培训目的•基本了解1200制备液相色谱硬件构成•了解制备液相色谱原理•掌握化学工作站中关于制备液相色谱部分的参数设定，馏分收集，数据分析等操作培训准备一．仪器设备：Agilent 1200制备液相色谱•分析级制备液相色谱G1322A（脱气机）；G1379B（微池脱气机）G1310A（单元泵）；G1312A，G1312B（二元泵）；G1311A（四元泵）G1329A（标准型自动进样器）；G1367A（微盘自动进样器）G1316A，G1316B（柱温箱）G1314B，G1314C（可变波长紫外检测器）G1315C，G1315D（二极管阵列检测器）G1365C，G1365D（多波长检测器）G1364C（分析级馏分收集器）•制备级制备液相色谱G1361A（制备泵）；G1391A（双制备泵，供梯度进样用）G2260A（标准制备型自动进样器）G2258A（双环自动进样器，可兼作分析/制备使用）G1383A（制备柱挂架）G1315C，G1315D（二极管阵列检测器，配合制备级流通池使用）G1365C，G1365D（多波长检测器，配合制备级流通池使用）G1364B（制备级型馏分收集器）二．色谱柱：•分析级制备液相色谱Zorbax Eclipse XDB-C18 150X4.6, 5um column) or equivalentP/N 993967-902 / 5063-6600•制备级制备液相色谱ZORBAX SB-C18, 50 mm x 9.46mm (846975-202) or equivalent三．溶剂及调试用样品准备：•色谱级纯度乙腈或者甲醇•二次蒸馏纯水•延迟体积校正用染料样品（G1946-85020）•LC用调试样品(01080-68704)注：本手册内涵盖的内容为制备液相模块的内容，其他模块如分析级泵，分析级自动进样器，柱温箱等，请参看安捷伦1200液相色谱现场培训手册等制备液相色谱原理一．什么是制备液相色谱？制备液相这一术语通常是和大容量色谱柱、高流速联系在一起的。
Agilent 1200高效液相色谱仪使用操作规程
Agilent 1200高效液相色谱仪使用操作规程一、目的：建立高效液相色谱仪的标准操作规程，确保标准操作。
二、范围：适用于Agilent 1200高效液相色谱仪的操作过程。
三、责任者：质保部Agilent 1200高效液相色谱仪检验人员对本标准的实施负责。
四、程序：1、开机前的准备工作：熟悉检验标准操作规程，按要求配制流动相，并以0.45μm的微孔滤膜滤过，并经超声机超声脱气10～15分钟，备用。
2、开机测样：2.1打开计算机，进入“Windows XP”画面，并自动运行“Bootp Server”程序。
2.2打开1200LC液相仪各模块电源。
2.3待各模块自检完成后，双击联机图标，化学工作站自动与1200LC 通讯，进入工作站画面。
2.4从视图菜单中选择“方法和运行控制”画面，单击“系统视图”、“命令行”、使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
2.5把流动相放入溶剂瓶中。
2.6打开Purge阀。
2.7单击“泵”图标，单击“设置泵”选项，进入泵编辑画面。
2.8设置流速:3-5ml/min，单击“确定”。
2.9单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“控制”选项，选中“启动”，单击“确定”，则系统开始清洗，直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止。
2.10单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“控制”选项，选中“关闭”，单击“确定”关泵，关闭Purge Valve阀。
2.11单击“泵”图标，出现参数设定菜单，单击“设置泵”选项，设流速:1.5ml/min。
单击“确定”。
2.12单击泵下面的瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积，也可输入停泵的体积，单击“确定”，泵开始运行。
2.13单击检测器图标，单击“设置VWD”选项，在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长，如254nm，点击“确定”。
单击检测器图标，单击“控制”选项，在“灯”下方选“开”，点击“确定”。
2.14待仪器就绪，基线平稳，点击“运行控制”，点击“样品信息”选项，在“操作者姓名”后输入操作者姓名，在子目录中输入样品名，在前缀框中输入计数器起始位，仪器会自动命名，如VWD001、VWD002……)。
Agilent1200型高效液相色谱仪标准操作规程
1.目的（Purpose）：规范Agilent1200型高效液相色谱仪的使用和维护，确保仪器正常运转。
2.范围（Scope）：适用于公司QC部Agilent1200型高效液相色谱仪的使用和维护。
3.职责（Responsibility）：QC仪器操作人员对本仪器的使用和维护负责。
4.定义（Definition）4.1高效液相色谱仪：用高效液相色谱法对物质进行定性、定量分析的仪器。
4.2紫外检测器是基于溶质分子吸收紫外光的原理设计的检测器，其工作原理是Lambert-Beer定律，即当一束单色光透过流动池时，若流动性不吸收光，则吸光度A与吸光组分的浓度C和流动池的光径长度L成正比。
物理上测得物质的透光率，然后取负对数得到吸光度。
4.3示差折光检测器（RID）利用纯流动相和含有组分的洗脱液二者折光率之间的差别进行检验。
由于折光率随温度变化，检测器要求有一恒温小空间，使温度稳定，最好能控制在±0.001℃以内。
依据反射定律，在玻璃-液体界面，反射光的程度与入射角和玻璃与液体的折光率有关。
折光率改变时，反射光的强度也发生变化，在光电管中产生的信号被放大和记录下来。
5.安全注意事项（Safety Precaution）5.1流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
5.2在流动相配制好后，一定要进行脱气，除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质。
5.3如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相，应在实验完毕柱子冲洗干净，并保存于甲醇/乙腈中。
6.程序（Procedure）：6.1仪器组成及电源6.1.1仪器组成本仪器由四元泵（G1311A）、标准自动进样器（G1329A）、柱温箱（G1316A）、VWD检测器（G1314B）、示差检测器（G1362A）、脱气系统（G1322A），各部件电源插头。
Agilent 1200系列高效液相色谱仪操作规程
Agilent 1200系列高效液相色谱仪操作规程一、开机1.按顺序开启显示器、计算机主机，依次打开仪器各部件电源开关，仪器进入待机状态，此时仪器各部件指示灯应呈黄色；2.双击桌面“仪器1联机”，约30s后，进入工作站操作界面；3.调出一个分析方法，检查各参数的设置；4.用100%分析纯甲醇冲洗柱子和系统30min后，再用95%水冲0.5-1h，待换成流动相且柱前压力基本稳定后，打开检测器灯，观察基线情况。
二、数据采集方法编辑（一）直接设定：1 由“运行控制”进入样品信息。
设定操作者姓名，样品数据文件名等。
2 泵参数设定：（以二元泵为例）（1）在流量处输入流量,如1ml/min，在溶剂B处输入70.0,(A=100-B) ,也可插入一行时间列表,编辑梯度。
在最大压力极限处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。
（2）单击确定进入下一画面。
3 柱温箱参数设定:（1）在柱温下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击更多>>键,选中与左侧一致，使柱温箱的温度左右一致。
（2）点击确定进入下一画面。
4 VWD检测器参数设定:（1）在波长下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在峰宽(响应时间)下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如>0.1min(2s)。
（2）在时间列表中可以插入一行，输入随时间切换的波长，如1min，波长=300nm。
（3）点击确定进入下一画面。
5 单击方法菜单，选中保存方法，输入一方法名，如“test”，单击确定。
（二）调用已设置好的方法文件：在命令栏“方法”下选择“调用方法”，选定“方法文件”，单击确定即完成。
（三）编辑新方法：在命令栏选择“编辑完整方法”，然后在每个参数设置页界面下输入设定值，完成后在命令栏“方法”下选择“另存为”进行保存。
三、数据采集1.由主菜单上的序列进入序列参数，设定操作者姓名、数据文件路径等。
2.由主菜单上的序列进入序列表，设定样品瓶位置、样品名、方法名称、进样次数等，设置好后点击确定。
Agilent 1200高效液相色谱仪(四原泵)操作规程
Agilent 1200高效液相色谱仪（四原泵）操作规程1.目的建立高效液相色谱仪（四原泵）使用维护保养标准操作规程，确保测量结果准确、可靠。
2.适用范围本SOP适用于Agilent 1200高效液相色谱仪（四原泵）的使用。
3.责任者化验员应严格遵照该操作规程，管理方负责监督本规程的实施。
4.定义无5.规程5.1准备在开机之前，根据所做样品的方法要求，准备好所用流动相、供试品及对照品。
流动相装入溶剂储液瓶，确认吸滤头已置于液面以下，供试品溶液和对照品溶液均用0.45μm的膜过滤。
5.2开机5.2.1打开电脑；5.2.2打开1200各模块电源；5.2.3等待各模块就绪后，双击桌面上的工作站图标，进入化学工作站；5.2.4旋开泵上的purge阀（逆时针转动，旋松即可，不要转动太多。
），将流速设置为5.0ml/min，将准备排气的管道的流量设置为100%（如：流路A比例则是100%-B-C-D），在工作站中打开泵，则开始排除管路中的气泡（时间约为5min）；其他通道同理操作。
5.2.5排气完成后，关闭purge阀（顺时针旋转，旋紧即可，不必旋的太紧。
）。
5.2.6连接色谱柱，用适宜的流动相冲洗色谱柱。
如果使用有盐的流动相，要先用80%的水过渡。
5.2.7更换方法规定的流动相。
冲洗约30分钟。
5.3设置方法5.3.1设置新方法5.3.1.1（自动进样器参数设定：单击工作站中“进样针”图标，选择“设置进样器”（一般选择洗针进样，清洗瓶位置一般为100位），单击“确定”按钮即可；5.3.1.2泵参数设定（四元泵）：单击工作站中“泵”图标，选择“设置泵”。
①在“流速”处输入流速（如1.0ml/min）；②在“停止时间”处设定所需采集时间；③在时间表中插入时间列表，编辑梯度；④在压力限处可设定最大耐高压，以保护色谱柱，单击“确定”按钮即可；5.3.1.3检测器参数的设定：在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长，如280nm，在“峰宽（响应时间）”下方点击下拉式三角框，选择合适的响应时间，如>0.1min（2s）。
Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明-1ppt.
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● 进入时间编辑，在data acquisition 和standard data analy。。
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Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明
● 在method and run control 状态下，单击method，选择save method as 选项，编辑方法名存储。 4.2 进样操作 4.2.1 调用方法 进入method and run control 状态下，单击选择method 选项，单击 load method 选择所要使用的方法。此时系统将根据所选择的方法进行 相应的设置。开始前请根据方法对相应的参数例如：泵参数、自动进样 器参数、自动进样器恒温器参数设定、柱温箱参数设定、检测波长设定 等进行验证是否与方法设置中的一致。
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Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明
● 进入column thermostatted method 编辑状态，选择柱温箱温度， 设置完毕单击OK。 ● 进入VWD编辑状态，选择方法中所需波长、峰宽、响应时间等， 参数设置好单击OK。 ● 进入signal details 编辑画面，选择下拉菜单中的VWDIA 进行参 数设定，点击“DAD”图标，点击“Setup DAD Signals”，在 “Signals”下方的空白处输入所需的检测波长，并在前面的方框里 画“√”设置完毕单击OK。
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Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明
画面如下所示。
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Agilent-1200型高效液相色谱仪操作说明
4 色谱条件的设定 4.1 方法的编辑
Agilent 1200型自动进样高效液相色谱仪操作规程
Agilent 1200型高效液相色谱仪操作规程1目的规范Agilent 1200型高效液相色谱仪的操作，确保使用本仪器的检验结果准确可靠。
2实验步骤2.1开机2.1.1准备好流动相并安装色谱柱。
2.1.2依次打开仪器各部件电源开关(在线脱气机、输液泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器或荧光检测器等)，约5 min后，仪器进入待机状态，此时仪器各部件指示灯应无色或呈黄色。
2.1.3打开电脑，点击亿【Instrument 1 online】，约30s后，计算机进入工作站2.2色谱条件的设定2.2.1直接设定在操作页面的右下部——色谱工作参数中设定。
将鼠标移至要设定的参数，如进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等，单击一下，即可显示该参数的设置页面，键入设定值后，单击【OK】，即完成。
2.2.2调用已设置好的文件在命令栏【Method】下，选择【Load Method】，或直接单击快捷操作的【Load Method】图标，选定文件名，单击【OK】，此时，工作站即调用所选用文件中设定的参数。
如欲进行修改，则可同“4.2.1”项下，在色谱工作参数中做修改；也可以在命令栏【Method】选择【Edit Entire Method】，随后工作站即按顺序出现一系列参数设置页面，在每个页面中键人设定值，单击【OK】，即完成。
2.2.3编辑新文件先在命令栏【Method】下，选择【New Method】，然后再在命令栏【Method】下，选择【Edit Entire Method】，在每个参数设置页面下输入设定值，完成后，在命令栏【Method】下，选择【Save Method】，给新文件命名，单击【OK】，即完成。
2.3 仪器的运行当色谱参数设置完成后，单击工作站流程图右下角的【ON】，仪器开始运行。
此时，画面颜色由灰色转变成黄色或绿色，当各部件都达到所设参数时，画面均变为绿色，左上角红色的Not Ready变为绿色的Ready，表明可以进行分析。
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Agilent 1200 LC（中文版 B01.01）现场培训教材安捷伦科技有限公司生命科学与化学分析仪器部一、培训目的：●基本了解1200LC硬件操作。
●掌握化学工作站的开机，关机，参数设定,学会数据采集,数据分析的基本操作。
二、培训准备：1、仪器设备：Agilent 1200LC●G1310A :(单元泵)；G1312A(二元泵)；G1311A(四元泵)。
● G1313A（标准型自动进样器）。
● G1316A（柱温箱）。
● G1314A（VWD检测器）。
● G1362A（示差检测器）。
●色谱柱: Eclipse XDB-C18 150 x 4.6 mm, 5um column P/N 993967-9022、溶剂准备：●色谱级纯或优级纯乙腈或甲醇。
●二次蒸馏水基本操作步骤:(一)、开机：1、打开计算机,进入中文Windows XP画面,并运行CAG Bootp Server程序。
2、打开 1200 LC 各模块电源。
3、待各模块自检完成后，双击“Instrument 1 Online”图标，化学工作站自动与1200LC通讯，进入的工作站画面如下所示。
4、从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面, 点击“视图”菜单中的“显示顶部工具栏”，“显示状态工具栏”，“系统视图”,“样品视图”，使其命令前有“√”标志，来调用所需的界面。
5、把流动相放入溶剂瓶中。
6、打开冲洗阀。
7、点击“泵”图标，点击“设置泵…”选项，进入泵编辑画面。
8 、设流速：5ml/min，点击“确定”。
9、点击“泵”图标，点击“控制…”选项，选中“启动”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止,切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。
10、点击“泵”图标，点击“控制…”选项，选中“关闭”，点击“确定”关泵，关闭冲洗阀。
11、点击“泵”图标，点击“设置泵…选项”，设流速：1.0ml/min。
12、点击泵下面的瓶图标，如下图所示（以单元泵为例），输入溶剂的实际体积和瓶体积。
也可输入停泵的体积，点击“确定”。
（二）数据采集方法编辑：1、开始编辑完整方法：●从“方法”菜单中选择“编辑完整方法…”项，如下图所示选中除“数据分析”外的三项，点击“确定”，进入下一画面。
2、方法信息：●在“方法注释”中加入方法的信息（如：测试方法）。
●点击“确定”，进入下一画面。
3、泵参数设定：（以四元泵为例）●在“流速”处输入流量,如1ml/min，在“溶剂 B”处输入80.0,(A=100-B-C-D) ,也可“插入”一行“时间表” ,编辑梯度。
在“压力限”处输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。
●点击“确定”，进入下一画面。
4、自动进样器参数设定:（以标准G1313为例）●选择合适的进样方式, 如图所示，进样体积 5.0ul ,洗瓶位置为6号。
“标准进样”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。
“洗针进样”----可以输入进样体积和洗瓶位置，此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。
“使用进样器程序”---可以点击“编辑”按钮进行进样程序编辑。
●点击进“确定”，进入下一画面。
5、柱温箱参数设定:●在“温度”下面的空白方框内输入所需温度,如：40度。
并选中它,点击“更多>>”键,如图所示,选中“与左侧相同”，使柱温箱的温度左右一致。
●点击“确定”，进入下一画面。
6、VWD检测器参数设定:●在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm, 在“峰宽 (响应时间)”下方点击下拉式箭头,选择合适的响应时间, 如>0.1min (2s)。
●在“时间表”中可以“插入”一行，输入随时间切换的波长，如1min ，波长=300nm。
点击“确定”，进入下一画面。
7、RID检测器参数设定:●色谱条件:进样体积: 20ul 。
光学单元温度: “关闭”。
极性: “正极性”。
峰宽(响应时间) : 4s 。
●如图所示: “光学部件温度”---若环境温度控制在±2℃,设定为“关闭”, 若环境温度不稳定,则设定光学单元温度为高于环境温度5度,以防样品在池中沉淀。
“峰宽 (响应时间)”---大多数分析设为“4s”，只有在高速分析下设为更短。
“分析后自动循环”---在不进行分析时可以让流动相循环，节省流动相，检测器连续运行，可随时投入使用。
● ***** 点击RID图标，选择RID Control ：Heater 设为On，若要循环流动相，必须将“Recycling Valve”设为ON。
手动purge 参比池，将其设为On，并输入Purge 时间。
8、在“运行时选项表”中选中“数据采集”，点击“确定”。
9、点击“方法”菜单，选中“方法另存为…”，输入一方法名，如“测试”，点击“确定”。
10、从菜单“视图”中选中“在线信号”,选中“信号窗口1”,然后点击“改变…”钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点击“确定”。
(如同时检测二个信号,则重复10,选中“信号窗口2”。
单击“改变”键，即可弹出右侧的“编辑信号图谱”窗口，进而选择所需的谱图信号。
11、从“运行控制”菜单中选择“样品信息”选项，如下图所示，输入操作者名称，如“安装工程师”；在“数据文件”中选择“手动”或“前缀/计数器”。
区别: 手动--每次做样之前必须给出新名字,否则仪器会将上次的数据覆盖掉。
Pr—在前缀/计数器----“前缀”框中输入前缀，在“计数器”框中输入计数器的起始位，仪器会自动命名，如vwd数据0001，vwd数据0002……。
12、点击“确定” ,从“仪器”菜单选择“系统开启”。
13、等仪器准备好，基线平稳，从“运行控制”菜单中选择“运行方法”，进样。
(若无自动进样器，则基线平稳后，进样并搬动手动进样阀，启动运行。
)（DAD, VWD色谱图如下所示：）（三）、数据分析方法编辑:1、从“视图”菜单中，点击“数据分析”进入数据分析画面。
2、从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件名，如下图所示。
点击“确定”，则数据被调出。
3、做谱图优化：从“图形”菜单中选择“信号选项”，如下图所示。
从“范围”中选择“满量程”或“自动量程”及合适的时间范围或选择“自定义量程”调整。
反复进行，直到图的比例合适为止。
点击“确定”。
4、积分:●从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，如下图所示。
选择合适的“斜率灵敏度”，“峰宽”，“最小峰面积”，“最小峰高”。
●从“积分”菜单中选择“积分”选项，则数据被积分。
●如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。
●点击左边“√”图标，将积分参数存入方法。
5、打印报告:●从“报告”菜单中选择“设定报告”选项，进入如下图所示画面。
●点击“定量结果”框中“计算”右侧的黑三角，选中“面积百分比”，其它选项不变。
●点击“确定”。
●从“报告”菜单中选择“打印报告”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则点击“报告”底部的“打印”钮。
(四)、关机:●关机前，先关灯，用相应的溶剂充分冲洗系统。
●退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机。
●关闭Agilent 1200各模块电源开关。
(五)、Agilent 1200 LC维护保养：1、色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死（如乙腈/甲醇适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）。
2、手动进样器，当使用缓冲溶液时，要用水冲洗进样口。
3、流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。
4、带seal-wash的 1200，要配制90%水+10%异丙醇，开启seal-wash清洗泵，溶剂不能干涸。
5、注意事项见说明书，或由现场工程师介绍。
****注意：1、本教材仅适用于现场工程师培训讲解参考之用，内容为工作站现场培训的一般要求，请根据用户的仪器配置及现场用户的需求进行相应的培训内容增删。
2、安捷伦公司对本教材可能存在的错误及其后果不承担任何法律责任，我们适时推出新版本的培训教材，恕不另行通知。
维护知识问答1、为什么溶剂和样品要过滤?溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除由于污染对分析结果的影响。
色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。
仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。
2、为什么HPLC用缓冲盐时要加在线Seal-wash选项？HPLC用缓冲盐时,由于泵头内的缓冲盐溶液存在高压析盐现象,析出的细小盐粒非常坚硬,它附着在蓝宝石活塞杆上,随着蓝宝石活塞杆的往复运动,容易产生划痕,并磨损密封垫,造成漏液等故障现象。
在线Seal-wash选项能有效的带走可能存在的缓冲盐结晶。
缓冲盐的浓度在0.1mol或大于0.1mol时,必须使用该在线冲洗选项.清洗液配制: 90%水+10%异丙醇.该混合液可抑制菌类生长和减小水的表面张力，不能干涸。
3、为什么Agilent 1200LC的流动相管路非常细?在使用HPLC时,应特别注意”柱外效应”对分析结果的影响，由于样品分子在液体流动相中的扩散系数比在气体中小4~5个数量级，液体流动相的流速也比气相慢1-2个数量级。
因此，样品进入色谱柱后，在柱子以外的任何死体积（进样器、柱接头、连接管、检测器）中，样品分子的扩散和滞留，都会引起色谱峰的展宽，而使柱效降低。
为使柱外效应减之最小，获得理想的分析结果，Agilent 1200LC 使用加工工艺难度高的毛细管线作为流动相管路。
毛细管线分类：0.17mm内径 ------绿色 ;0.12mm内径-------红色。
PEEK 管线：内径 -----0.13mm;0.18mm;0.25mm;0.5mm。
毛细管线优点: 柔韧性好.***Agilent 公司同时备有1/16in 的粗外径毛细管线,适用于不同习惯的用户 ,优点是刚性好,但柔韧性差一些。
4、流动相使用前为什么要脱气？流动相使用前必须进行脱气处理，以除去其中溶解的气体（如O2），以防止在洗脱过程中当流动相由色谱柱流至检测器时，因压力降低而产生气泡。
气泡会增加基线的噪音，造成灵敏度下降，甚至无法分析。
溶解的氧气还会导致样品中某些组份被氧化，柱中固定相发生降解而改变柱的分离性能。
若用FLD，可能会造成荧光猝灭。
常用的脱气方法比较：氦气脱气法：利用液体中氦气的溶解度比空气低，连续吹氦脱气，效果较好，但成本高。
加热回流法：效果较好，但操作复杂，且有毒性挥发污染。
抽真空脱气法：易抽走有机相。
超声脱气法：流动相放在超声波容器中，用超声波振荡10-15min，此法效果最差。
在线真空脱气法：Agilent1200LC真空脱机利用膜渗透技术，在线脱气，智能控制，无需额外操作，成本低，脱气效果明显优于以上几种方法，并适用于多元溶剂体系。