密度梯度法

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密度梯度离心法名词解释

密度梯度离心法名词解释

密度梯度离心法名词解释密度梯度离心法,简称DGGE,是分子生物学中常用的一种分析DNA序列变异、基因分型、菌群多样性等的方法。

这种方法以PCR扩增的DNA片段作为目标,通过DGGE电泳技术将不同样品的DNA条带分离,进而分析不同样品中的DNA变异、基因型或者菌群结构。

DGGE原理基于DNA的双链分子在电场作用下会断裂成单链,然后是交替出现的分子器极吸附和交错序列的碱基浸润作用,最终排序各种DNA片段。

DGGE和传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳不同,是基于DNA 片段移动到含有梯度的聚丙烯酰胺凝胶电泳板表面或者介质中(如聚合物链等)的不同位置,从而实现不同样品中 DNA 片段的分离。

因为在含有不同梯度的聚丙烯酰胺凝胶中,DNA片段会在某种梯度电场下保留在特定区域,形成明显的DNA 条带,样品与样品之间差异不大的DNA 条带在聚丙烯酰胺凝胶板上合并形成了带状图。

这些线条被称为DNA条带,代表了DGGE样本中的每个扩增片段。

DGGE方法最大的优点在于它可以等比例、标准化地比较基因片段的有无、变异类型和程度等信息,而且对于那些较短的DNA 片段而言,它在分析能力方面要高于Sanger定序。

DGGE的应用逐渐从基因型分析扩大到生态学及其它应用,比如在菌群生态学、变异鉴定、致病菌及病毒检测、种群学研究以及气叶互作与林木营养学研究等领域有广泛的应用。

总之,DGGE的主要特点在于其高效性、快速性和准确性,成为分子生物学和生态学分析技术的重要手段之一,其在微生物层面的应用更是颇有潜力。

同时,由于其对于样本的提纯和扩增要求较高,还需在实验上精益求精。

DGGE方法的优点、实验步骤和要求、应用场景等方面,建议科研学者进行深入研究和探索,为其在不同社会和环境背景下的发展做出更多的贡献。

密度梯度离心法的原理解析

密度梯度离心法的原理解析

密度梯度离心法的原理解析密度梯度离心法是一种广泛应用于生物化学、分子生物学和医学领域的实验技术,用于分离和纯化生物大分子、细胞和次细胞结构。

该方法基于样品中不同组分的密度差异,利用离心力和密度梯度分离的原理来实现。

密度梯度离心法的原理可以简单概括为以下几个步骤:1. 密度梯度制备:制备一个由多个密度层构成的梯度液体。

这些密度层是根据密度逐渐增加或减少排列的,通常由离心管或离心管中的夹层形成。

常用的密度梯度制备物质包括蔗糖、葡萄糖或碘化物等。

2. 样品处理:将待分离的样品加入到密度梯度中。

样品可以是生物大分子如蛋白质、核酸或多肽,也可以是细胞或次细胞结构如细胞核或线粒体等。

3. 离心分离:通过高速离心设备,施加离心力将密度梯度中的样品分离。

离心过程中,样品中的各个组分受到的离心力不同,根据其密度的差异在密度梯度中上下移动。

离心力越大,移动距离越远。

4. 提取和分析:离心分离后,不同密度层中的组分被提取出来,然后进一步进行分析。

这可以是采用分光光度法、蛋白质电泳、质谱分析或核酸杂交等技术。

通过分析不同密度层中的组分,可以获取样品中各种生物大分子或细胞结构的纯度和数量信息。

密度梯度离心法的优点是可以实现高分辨率和高效率的分离和纯化。

这是因为,不同密度的组分在离心力的作用下可以根据其密度差异均匀地分布在梯度液体中,从而实现准确分离。

该方法对样品体积和细胞大小没有特别严格的要求,适用于分离和研究多种不同类型的生物样品。

密度梯度离心法还可以用于研究细胞功能和结构的多个方面。

它可以用于分离不同亚细胞器如线粒体、内质网和高尔基体等,进一步研究它们的功能和组成。

该方法还可用于分离和纯化蛋白质复合物、染色体和病毒等,为进一步研究它们的生理和生化特性提供有力的工具。

总结和回顾上述内容,密度梯度离心法是一种基于样品中不同组分密度差异的分离和纯化技术。

它可以通过制备密度梯度、施加离心力和分析不同密度层中的组分来实现。

该方法具有高分辨率、高效率和广泛适用性的优点,可用于研究多种生物样品的分离和纯化,以及细胞和亚细胞结构的功能和组成研究。

实验 密度梯度管法测定聚合物的密度和结晶度

实验 密度梯度管法测定聚合物的密度和结晶度

实验 密度梯度管法测定聚合物的密度和结晶度密度梯度法是测定聚合物密度的方法之一。

聚合物的密度是聚合物的重要参数。

聚合物结晶过程中密度变化的测定,可研究结晶度和结晶速率;拉伸、退火可以改变取向度和结晶度,也可通过密度来进行研究;对许多结晶性聚合物其结晶度的大小对聚合物的性能、加工条件选择及应用都有很大影响。

聚合物的结晶度的测定方法虽有X 射线衍射法、红外吸收光谱法、核磁共振法、差热分析、反相色谱等等,但都要使用复杂的仪器设备。

而用密度梯度管法从测得的密度换算到结晶度,既简单易行又较为准确。

而且它能同时测定一定范围内多个不同密度的样品,尤其对很小的样品或是密度改变极小的一组样品,需要高灵敏的测定方法来观察其密度改变,此法既方便又灵敏。

一、实验目的:1.掌握用密度梯度法测定聚合物密度、结晶度的基本原理和方法。

2.利用文献上某些结晶性聚合物PE 和PP 晶区和非晶区的密度数据,计算结晶度。

二、基本原理:由于高分子结构的不均一性,大分子内摩擦的阻碍等原因,聚合物的结晶总是不完善的,而是晶相与非晶相共存的两相结构,结晶度f w 即表征聚合物样品中晶区部分重量占全部重量的百分数:在结晶聚合物中(如PP 、PE 等),晶相结构排列规则,堆砌紧密,因而密度大;而非晶结构排列无序,堆砌松散,密度小。

所以,晶区与非晶区以不同比例两相共存的聚合物,结晶度的差别反映了密度的差别。

测定聚合物样品的密度,便可求出聚合物的结晶度。

密度梯度法测定结晶度的原理就是在此基础上,利用聚合物比容的线性加和关 系,即聚合物的比容是晶区部分比容与无定形部分比容之和。

聚合物的比容V 和结晶度w f 有如下关系:()1c w a w V V f V f =+- --------------------------------- (2) 式中c V 为样品中结晶区比容,可以从X 光衍射分析所得的晶胞参数计算求得;a V 为样品中无定形区的比容,可以用膨胀计测定不同温度时该聚合物熔体的比容,然后外推得到该温度时非晶区的比容a V 的数值。

ficoll-hypaque密度梯度离心法

ficoll-hypaque密度梯度离心法

ficoll-hypaque密度梯度离心法Ficoll-Hypaque密度梯度离心法是一种常用的细胞分离方法,也被广泛应用于血液细胞分离和分离淋巴细胞亚群的研究。

该技术可通过采用不同密度的Ficoll-Hypaque梯度来离心,从而实现不同种类的细胞分离。

本文将详细介绍Ficoll-Hypaque密度梯度离心法的原理、步骤和应用。

一、原理Ficoll-Hypaque密度梯度离心法是基于溶液密度不同细胞可以在不同密度的溶液中沉降的原理。

该方法使用粘度较高的Ficoll和密度较高的Hypaque进行制备梯度。

当未经处理的全血加入到梯度上时,不同密度和尺寸的细胞会向下移动并在不同梯度上形成堆积。

淋巴细胞通常以低至中等浓度的Ficoll层的形式分离,而单核细胞和中性粒细胞则可以沉淀在Ficoll-Hypaque缓冲层和红细胞沉淀层之间。

二、步骤1、采集血液样品并制备样本:采样前应将患者或志愿者告知采血目的并得到其同意。

血液样本应采集在无抗凝剂的试管中,并在室温下保存不超过2小时。

之后,将样本离心5-10分钟,收集上清液制成细胞悬液。

2、准备Ficoll-Hypaque密度梯度:取出Ficoll-Hypaque复合物,并按协议中的指示加入PBS缓冲液,混合均匀后放置于离心管中,注意避免产生气泡。

3、样本加入密度梯度:慢慢将细胞悬液滴加入到密度梯度上方,并轻轻振荡离心管以使细胞悬液均匀地分布在密度梯度上。

加样后,轻轻放置离心管至离心机,设置适当的离心参数进行离心。

4、收集细胞:离心结束后,可以从离心管顶部收集上清液,其中含有分离出的淋巴细胞。

此外,可以通过离心管底部获得中性粒细胞和单核细胞。

三、应用综上所述,通过合理选择离心参数和密度梯度,Ficoll-Hypaque密度梯度离心法可以分离出各种类型的淋巴细胞和血液细胞,并被广泛应用于临床和研究领域。

差速离心法和密度梯度离心法的区别

差速离心法和密度梯度离心法的区别

差速离心法和密度梯度离心法的区别教学问题:高中生物必修1中研究细胞器的分离方法是差速离心法,必修2中研究DNA复制方式——半保留复制的方法是密度梯度离心法,两者之间有什么区别?一、差速离心法差速离心法是交替使用低速和高速离心,用不同强度的离心力使具有不同质量的物质分级分离的方法。

此法适用于混合样品中各沉降系数差别较大组分的分离。

1.工作原理通常两个组分的沉降系数差在10倍以上时可以用此法分离。

例如某样品中有大、中、小三个组分,用差速离心法分离时,把样品放在离心管内,先按大组分的沉降系数选择离心转速和离心时间,当离心结束时正好使大组分全部沉降到离心管底部,这时中小组分中的一部分也会沉降到底部。

若原始样品液中三个组分的含量相等,则在原始样品液中大组分占总组分量的三分之一。

通过一次离心后分离出的大组分沉淀占总组分量约90%。

如要进一步提纯可以把此沉淀物再溶解,再按大组分的沉降条件离心,得到大组分的第二次离心沉淀。

通过多次对沉淀和上清液差速离心,可以把三个沉降系数有差别的组份分离提纯,所以这个方法又称为分步离心法。

2.差速离心法的优缺点差速离心法的优点是样品的处理量较大,可用于大量样品的初分离。

其缺点是分离复杂样品和要求分离纯度较高时,离心次数多,操作繁杂。

由于沉淀的多次清洗、溶解、再沉淀,容易引起中间损失,所以离心分辨力差。

实际分离时由于离心时的对流、扩散和收取沉淀时的污染,对于一些沉降系数相差不大的组分无法进行完全的分离提纯。

产品的纯度和回收率都达不到上述理论值。

因此差速离心法主要用于大量样品的初步分离提纯。

二、密度梯度离心法密度梯度离心法又称为区带离心法,可以同时使样品中几个或全部组分分离,具有良好的分辨率。

离心时先将样品溶液置于一个由梯度材料形成的密度梯度液体柱中,离心后被分离组分以区带层分布于梯度柱中。

1.工作原理不同颗粒之间存在沉降系数差时,在一定离心力作用下,颗粒各自以一定速度沉降,在密度梯度不同区域上形成区带的方法。

密度梯度管法测定高聚物的密度和结晶度

密度梯度管法测定高聚物的密度和结晶度

实验1 密度梯度管法测定高聚物的密度和结晶度高聚物的密度是高聚物的重要物理参数之一,它对于指导高聚物的合成、成型工艺以及探索结构与性能之间的关系等方面都是不可缺少的数据。

而对于结晶高聚物来说,结晶度反映了物质内部结构规则程度,影响着其许多物理、化学性能和应用性能,密度和结晶度之间有着密切的关系。

因此,测定高聚物的密度和结晶度,对研究其结构状态进而控制材料的性能有着很大的实用意义。

测定高聚物结晶度的方法很多,有X-射线衍射法、红外吸收光谱法、核磁共振法、差热分析法、反相色谱法、化学方法(水解法、甲酰化法、氘交换法)、密度法等等。

其中前几种方法都需要使用复杂的仪器设备,而密度法是从较容易测定的高聚物密度换算成结晶度,既简单易行,又较为准确。

凡是能测定出高聚物试样密度的方法都属于密度法。

本实验采用密度法中的一种方法 ── 密度梯度管法测定高聚物的结晶度。

一、实验目的1. 了解用密度梯度管法测定高聚物的密度和结晶度的基本原理和方法。

2. 学会用连续灌注法制备密度梯度管的技术及密度梯度管的标定方法。

3. 用密度梯度管测定结晶高聚物试样的密度,并计算其结晶度。

二、实验原理将两种密度不同且又能互溶的液体配制成一系列等差密度的混合液,并按照低密度液体(轻液)位于高密度液体(重液)之上的层次,把不同密度的混合液置于带有刻度的玻璃管中,由于液体分子的扩散作用,管中的液体密度将会从下到上呈连续的线性分布,这就是密度梯度管。

当把一个颗粒状试样放入密度梯度管中时,根据悬浮原理,试样会在与其密度相等的液位上悬浮不动。

配制密度梯度管所选用的轻液和重液种类不同时,密度梯度管的密度梯度范围就会不同。

在本实验后面的附表1-1中列出了一些常用的密度梯度管溶液体系。

高度图 1-1 密度梯度管的标定曲线将若干个已知其准确密度的标准玻璃小球放入密度梯度管中,读出各个小球在密度梯度管中的高度值,再以玻璃小球的密度值对小球的高度值作图,就可得到该密度梯度管的标定曲线。

密度梯度离心实验报告

密度梯度离心实验报告

实验一密度梯度离心法提取叶绿体[实验项目]密度梯度离心法提取叶绿体[实验目的]掌握手工制作密度梯度技术,了解蔗糖密度梯度离心的原理及优缺点。

[实验原理]不同颗粒之间存在沉降系数差时,在一定离心力作用下,颗粒各自以一定速度沉降,在密度梯度不同区域上形成区带。

用不同浓度的蔗糖制成浓度梯度,在离心条件下,叶绿体和比他沉降系数小的细胞组分会聚集中到梯度交界处,而沉降系数较大的细胞组分则沉淀到离心管底部,这样可粗略的分离叶绿体。

[实验仪器设备]超速冷冻离心机(BECKMAN L8-60MR)一台荧光显微镜((Olympus,FX-35WA,Japan))一台组织捣碎机一台[实验材料]新鲜菠菜叶片[实验药品]匀浆介质(0.25mol/L蔗糖,0.05mol/L Tris-HCl缓冲液 pH 7.4);称取88.55g 蔗糖,6.05g Tris,溶解在近800ml蒸馏水中,加入约4.25ml 0.1mol/L HCl,最后定容至1000ml。

60%蔗糖溶液,50%蔗糖溶液,40%蔗糖溶液,20%蔗糖溶液,15%蔗糖溶液。

[实验内容]1、洗净菠菜叶片,沥干水分,去除叶柄、主脉,称取50g,剪碎。

2、加入预冷到0℃的匀浆介质200ml,用组织捣碎机高档捣碎2min。

3、捣碎液双层纱布过滤到烧杯中。

4、滤液500r/min离心5min,轻取上清液。

5、在Polyallomer离心管内一次加入50%和15%蔗糖溶液(或依次加入60%,40%,20%,15%蔗糖溶液),注意要用滴管吸取15%蔗糖液沿离心管壁缓缓注入,不能搅动50%蔗糖液面,一般两种溶液各加12ml(四个梯度各加6ml),加液完成后,可见两种溶液接口处折光稍有不同,这样密度梯度便制好了。

6、在制好的密度梯度上小心的沿着管壁加入3ml粗离心过的上清液。

7、严格平衡离心管,分量不足加入少许上清液。

8、用甩平转头离心(18000r/min)90min。

9、取出离心管,可见叶绿体在密度梯度液中间形成带,用滴管轻轻吸出滴于载玻片,盖上盖玻片,荧光显微镜下观察。

密度梯度离心法方法

密度梯度离心法方法

密度梯度离心法方法嘿,咱今儿来聊聊密度梯度离心法!这可是个厉害的手段呢!你想啊,就好比我们要在一堆混杂的东西里找出特别的那一部分。

密度梯度离心法就像是个神奇的魔法棒,能帮我们把不同密度的东西分离开来。

想象一下,有一堆大大小小、轻重不一的东西混在一起,我们要怎么把它们区分开呢?这时候密度梯度离心法就闪亮登场啦!它会弄出一个像楼梯一样的密度变化,从低到高。

然后把那堆东西放进去,哇塞,就看着它们根据自己的密度乖乖地跑到该去的地方啦。

这可不像随便乱分哦!它特别精准,就像一个经验老到的分拣员,绝不会把该分开的弄混。

而且啊,这个方法用途可广啦!在生物学里,能帮我们分离细胞、细胞器啥的。

比如那些小小的细胞,它们有着不同的密度,通过这个方法,就能把它们一个一个地挑出来,是不是很神奇?咱再打个比方,这就像是在一个大混乱的舞池里,根据每个人的体重和身材,把他们分到不同的区域跳舞,让一切都变得井井有条。

密度梯度离心法就是这么厉害,能在微观世界里把那些我们需要的东西精准地分离出来。

你说这得有多牛?它能让我们看到那些平时看不到的细微之处,为科学研究打开一扇扇新的大门。

它就像是一把钥匙,能解开那些复杂谜题的关键一环。

在实验室里,科学家们可喜欢用这个方法啦!他们精心地准备好各种条件,让密度梯度离心法发挥出最大的作用。

就像一个大厨精心烹饪一道美味佳肴一样,每一个步骤都不能马虎。

而且哦,它还不断在发展和进步呢!随着科技的不断进步,密度梯度离心法也变得越来越厉害,能分离的东西也越来越多,越来越精细。

哎呀呀,这密度梯度离心法可真是个宝贝呀!它让我们能更好地了解这个世界,探索那些未知的领域。

难道你不觉得它超级厉害吗?反正我是觉得它厉害得不得了呢!希望以后它能给我们带来更多的惊喜和发现呀!。

细胞组分的分级分离方法

细胞组分的分级分离方法

细胞组分的分级分离方法
细胞组分的分级分离方法包括密度梯度离心法、贴壁培养法、超速离心法、层析法和电泳法。

密度梯度离心法是根据细胞密度的不同,在高速离心机中经过长时间离心,使细胞分层沉淀,形成密度梯度。

根据密度梯度的不同,可以将不同密度的细胞分开。

这种方法分离效果好,可以获得较为纯的细胞,适用于大多数细胞类型的分离。

但这种方法需要使用大型设备,操作也比较复杂,需要专业人员操作。

贴壁培养法是根据细胞贴壁生长速度的不同,将不同种类的细胞分离。

这种方法需要在培养皿中加入适量的培养液,然后将待分离的细胞悬液加入培养皿中,让其在培养液中贴壁生长。

由于不同种类的细胞贴壁生长速度不同,因此经过一定时间的培养,可以观察到不同种类的细胞在培养皿中形成的“岛屿”状分布。

根据不同种类的细胞形成的“岛屿”状分布的不同,可以将它们分离出来。

此外还有超速离心法、层析法和电泳法等方法。

这些方法各有特点,可以根据实验需求选择合适的方法进行细胞组分的分级分离。

实验 密度梯度管法测定聚合物的密度和结晶度

实验 密度梯度管法测定聚合物的密度和结晶度

实验 密度梯度管法测定聚合物的密度和结晶度密度梯度法是测定聚合物密度的方法之一。

聚合物的密度是聚合物的重要参数。

聚合物结晶过程中密度变化的测定,可研究结晶度和结晶速率;拉伸、退火可以改变取向度和结晶度,也可通过密度来进行研究;对许多结晶性聚合物其结晶度的大小对聚合物的性能、加工条件选择及应用都有很大影响。

聚合物的结晶度的测定方法虽有X 射线衍射法、红外吸收光谱法、核磁共振法、差热分析、反相色谱等等,但都要使用复杂的仪器设备。

而用密度梯度管法从测得的密度换算到结晶度,既简单易行又较为准确。

而且它能同时测定一定范围内多个不同密度的样品,尤其对很小的样品或是密度改变极小的一组样品,需要高灵敏的测定方法来观察其密度改变,此法既方便又灵敏。

一、实验目的:1.掌握用密度梯度法测定聚合物密度、结晶度的基本原理和方法。

2.利用文献上某些结晶性聚合物PE 和PP 晶区和非晶区的密度数据,计算结晶度。

二、基本原理:由于高分子结构的不均一性,大分子内摩擦的阻碍等原因,聚合物的结晶总是不完善的,而是晶相与非晶相共存的两相结构,结晶度f w 即表征聚合物样品中晶区部分重量占全部重量的百分数:在结晶聚合物中(如PP 、PE 等),晶相结构排列规则,堆砌紧密,因而密度大;而非晶结构排列无序,堆砌松散,密度小。

所以,晶区与非晶区以不同比例两相共存的聚合物,结晶度的差别反映了密度的差别。

测定聚合物样品的密度,便可求出聚合物的结晶度。

密度梯度法测定结晶度的原理就是在此基础上,利用聚合物比容的线性加和关 系,即聚合物的比容是晶区部分比容与无定形部分比容之和。

聚合物的比容V 和结晶度w f 有如下关系:()1c w a w V V f V f =+- --------------------------------- (2) 式中c V 为样品中结晶区比容,可以从X 光衍射分析所得的晶胞参数计算求得;a V 为样品中无定形区的比容,可以用膨胀计测定不同温度时该聚合物熔体的比容,然后外推得到该温度时非晶区的比容a V 的数值。

密度梯度法原理

密度梯度法原理

密度梯度法原理密度梯度法是一种用于测量流体密度变化的方法。

它基于流体在重力场中的行为,利用密度差异来推断流体的性质和特征。

该方法在地球科学领域广泛应用于地下水和石油勘探、地质构造研究等领域。

密度梯度法的基本原理是根据流体密度随深度的变化来推断地下流体的性质。

在地球重力场中,流体受到重力作用会产生密度梯度,即密度随深度的变化。

根据阿基米德原理,密度高的流体会向下运动,密度低的流体则向上运动。

因此,通过观察密度梯度的变化,可以推断地下流体的性质。

密度梯度法通常使用密度差异较大的物质作为示踪剂,注入到地下流体中。

示踪剂的密度通常比地下流体的密度高或低,以便观察到密度梯度的变化。

在注入示踪剂之后,通过观测示踪剂在地下的分布和运动,可以推断出地下流体的性质和分布。

密度梯度法的具体实施过程包括示踪剂的选择与注入、观测与分析等步骤。

首先,选择合适的示踪剂,使其密度与地下流体的密度差异较大,并且具有较好的稳定性和可观测性。

然后,将示踪剂注入到地下流体中,并通过观测井或其他观测手段,实时或定期监测示踪剂的分布和运动。

观测示踪剂的分布和运动可以使用不同的方法,如地下水位监测、地下水化学分析、地电阻率测量等。

这些观测数据可以用于构建密度梯度模型,并通过数学模拟和数据分析方法,推断地下流体的性质和分布。

密度梯度法在地下水和石油勘探中有着重要的应用。

在地下水领域,通过监测地下水中的示踪剂,可以推断地下水流动的路径和速度,帮助解决地下水污染和资源管理等问题。

在石油勘探中,密度梯度法可以用于识别油气藏的边界和储量分布,为油田开发提供重要的依据。

除了地下水和石油勘探,密度梯度法还可以应用于地质构造研究、环境地质调查、地质灾害预测等领域。

通过观测地下流体的密度梯度变化,可以揭示地下介质的性质和结构,为地质研究和工程建设提供重要的参考依据。

密度梯度法是一种基于流体密度变化的方法,通过观测密度梯度的变化来推断地下流体的性质和分布。

该方法在地下水和石油勘探、地质构造研究等领域具有重要的应用价值。

高中生物中差速离心法和密度梯度离心法的应用

高中生物中差速离心法和密度梯度离心法的应用

高中生物中差速离心法和密度梯度离心法的应用
差速离心法和密度梯度离心法是生物学中常用的离心技术。

差速离心法可以用于分离细胞和细胞器,根据它们在不同离心力下,不同的沉降速率进行分离。

密度梯度离心法则可以用于分离不同密度的生物分子,例如DNA、RNA和蛋白质等。

在高中生物学中,学生可以通过实验学习这些离心技术的应用。

例如,使用差速离心法可以分离出细胞质和线粒体等细胞器,进一步研究它们的结构和功能;使用密度梯度离心法可以分离出DNA、RNA 和蛋白质等生物分子,进行进一步的分析和研究。

此外,这些离心技术还可以应用于医学和生物工程领域。

例如,差速离心法可以用于分离血细胞和血浆,对于研究血液疾病和制备血液制品非常重要;密度梯度离心法可以用于纯化生产工业用途的蛋白质和酶等生物产品。

总之,差速离心法和密度梯度离心法是生物学中非常重要的离心技术,其应用广泛,包括教育、研究和工业等领域。

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密度梯度管法测定高聚物的密度和结晶度

密度梯度管法测定高聚物的密度和结晶度

实验1 密度梯度管法测定高聚物的密度和结晶度高聚物的密度是高聚物的重要物理参数之一,它对于指导高聚物的合成、成型工艺以及探索结构与性能之间的关系等方面都是不可缺少的数据。

而对于结晶高聚物来说,结晶度反映了物质内部结构规则程度,影响着其许多物理、化学性能和应用性能,密度和结晶度之间有着密切的关系。

因此,测定高聚物的密度和结晶度,对研究其结构状态进而控制材料的性能有着很大的实用意义。

测定高聚物结晶度的方法很多,有X-射线衍射法、红外吸收光谱法、核磁共振法、差热分析法、反相色谱法、化学方法(水解法、甲酰化法、氘交换法)、密度法等等。

其中前几种方法都需要使用复杂的仪器设备,而密度法是从较容易测定的高聚物密度换算成结晶度,既简单易行,又较为准确。

凡是能测定出高聚物试样密度的方法都属于密度法。

本实验采用密度法中的一种方法 ── 密度梯度管法测定高聚物的结晶度。

一、实验目的1. 了解用密度梯度管法测定高聚物的密度和结晶度的基本原理和方法。

2. 学会用连续灌注法制备密度梯度管的技术及密度梯度管的标定方法。

3. 用密度梯度管测定结晶高聚物试样的密度,并计算其结晶度。

二、实验原理将两种密度不同且又能互溶的液体配制成一系列等差密度的混合液,并按照低密度液体(轻液)位于高密度液体(重液)之上的层次,把不同密度的混合液置于带有刻度的玻璃管中,由于液体分子的扩散作用,管中的液体密度将会从下到上呈连续的线性分布,这就是密度梯度管。

当把一个颗粒状试样放入密度梯度管中时,根据悬浮原理,试样会在与其密度相等的液位上悬浮不动。

配制密度梯度管所选用的轻液和重液种类不同时,密度梯度管的密度梯度范围就会不同。

在本实验后面的附表1-1中列出了一些常用的密度梯度管溶液体系。

高度图 1-1 密度梯度管的标定曲线将若干个已知其准确密度的标准玻璃小球放入密度梯度管中,读出各个小球在密度梯度管中的高度值,再以玻璃小球的密度值对小球的高度值作图,就可得到该密度梯度管的标定曲线。

密度梯度离心法densitygradientcentrifugationmeth

密度梯度离心法densitygradientcentrifugationmeth

密度梯度离心法density gradient centrifugation method,为得到必要的浓度梯度,可采用浓氯化铯溶液,也可以采用蔗糖等一些小分子溶液,预先在分离超离心机的样品地内制备出密度梯度,在其上面再加上一层少量的大分子溶液后,离心,大分子就形成层状而沉降。

不连续密度蔗糖梯度离心液一般可以采用优级纯的蔗糖用超纯水配制成百分比浓度分别为16.1%、37.4%、45%的蔗糖溶液,从离心管底部逐层向上铺设。

也有用8层Feicoll梯度离心,即在14mL离心管中由下至上从84%到35%Feicoll液,按7%递减,各加1.0mL,形成7层Feicoll 梯度。

连续密度蔗糖梯度离心液则需要用专用仪器配制。

密度梯度离心又称速率—区带离心,沉降系数较接近的物质分离的方法;原理:不同颗粒之间存在沉降系数差时,在一定离心力作用下,颗粒各自以一定速度沉降,在密度梯度不同区域上形成区带的方法。

介质梯度应预先形成,介质的最大密度要小于所有样品颗粒的密度。

常用的有蔗糖、甘油;密度梯度液的制备用梯度混合器,形成由管口到管底逐步升高的密度梯度;操作:离心前将样品小心铺放在密度梯度溶液表面,离心形成区带。

离心后不同大小、不同形状、有一定沉降系数差异的颗粒在密度梯度液中形成若干条界面清楚的不连续区带;可用来分离核酸、蛋白质、核糖体亚基及其它成分〔1〕亦称平衡密度梯度离心法。

用超离心机对小分子物质溶液,长时间加一个离心力场达到沉降平衡,在沉降池内从液面到底部出现一定的密度梯度。

若在该溶液里加入少量大分子溶液,则溶液内比溶剂密度大的部分就产生大分子沉降,比溶剂密度小的部分就会上浮,最后在重力和浮力平衡的位置,集聚形成大分子带状物。

利用这种现象,测定核酸或蛋白质等的浮游密度,或根据其差别进行分析的一种沉降平衡法。

自1958年米西尔逊(M.Meselson),斯塔尔(F.W.Stahl),维诺格拉德(J.Vinograd)成功地分离了〔15N〕DNA和〔14N〕DNA以来,该法取得许多成果。

干细胞分离_密度梯度离心法分选_分层_概述说明

干细胞分离_密度梯度离心法分选_分层_概述说明

干细胞分离密度梯度离心法分选分层概述说明1. 引言1.1 概述干细胞是一类特殊的细胞,具有自我更新和分化为多种细胞类型的能力。

这使得干细胞在许多领域,如再生医学和组织工程中具有巨大的应用潜力。

然而,干细胞的分离和纯化是有效利用其优势的关键步骤之一。

本文主要关注干细胞分离过程中使用的一种常见方法——密度梯度离心法。

该方法通过离心过程将样品中不同密度的细胞分层清除,从而实现对干细胞的选择性富集。

随着技术发展和研究进展,密度梯度离心法已经成为广泛应用于干细胞研究和临床实践中的重要手段。

1.2 文章结构本文将按照以下结构进行说明:引言、干细胞分离密度梯度离心法分选、干细胞分层过程、研究现状及关键问题讨论以及结论与展望。

在引言部分,我们将简要介绍干细胞以及其在医学领域的重要性。

然后,我们将详细描述干细胞分离密度梯度离心法及其原理、步骤和条件。

接着,我们将探讨干细胞分层过程的技术简介、方法选择与优化,以及分层后的应用和前景展望。

1.3 目的本文旨在提供一个全面的概述,说明干细胞分离中密度梯度离心法的使用方法和重要性。

通过了解该方法的工作原理、实施步骤以及关键条件,读者能够更好地理解该技术在干细胞研究中的应用,并掌握如何进行有效的干细胞分选与分离。

接下来,在"2. 干细胞分离密度梯度离心法分选"部分,我们将深入探讨干细胞分离过程中使用的密度梯度离心法。

2. 干细胞分离密度梯度离心法分选2.1 分离干细胞的重要性干细胞具有自我更新和多向分化为各种细胞类型的能力,因此在医学研究和临床应用中具有巨大潜力。

然而,由于干细胞数量相对较少且与其他细胞类型难以区分,准确、高效地分离纯度较高的干细胞是必不可少的。

干细胞分离密度梯度离心法通过利用不同密度的浓溶液形成梯度,在离心过程中将不同密度的细胞分层从而实现干细胞的精确分选。

2.2 密度梯度离心法的原理密度梯度离心法是基于不同物质在浓溶液中具有不同密度的原理进行设计。

密度梯度管法测定聚合物的密度和结晶度-高分子物理-实验6-06

密度梯度管法测定聚合物的密度和结晶度-高分子物理-实验6-06

实验六 密度梯度管法测定聚合物的密度和结晶度一、实验目的1.掌握密度梯度管法测定聚合物密度和结晶度的基本原理;2.掌握连续注入法制各密度梯度管的技术及密度梯度的标定;3.用密度梯度管法测定聚合物的密度并计算聚合物的结晶度。

二、实验原理结晶度是表征聚合物性质的一个重要指标,它是反映聚合物内部结构规则程度的物理量,对聚合物的力学性能、热性能、光学性质、溶解性和耐腐蚀性都有着非常显著的影响。

聚合物结晶度的测定方法很多,如X 射线衍射法、红外吸收光谱法、核磁共振法、差热分析和反相色谱等。

与以上各种实验手段相比较,用密度梯度管法测定聚合物密度和结晶度设备简单,操作便利,又有非常好的实验精确度。

不仅如此,密度梯度管法还可以同时对一定范围内不同密度的一组样品进行测定,是确定聚合物密度和结晶度的一种行之有效的实验方法。

需要指出的是,尽管结晶度的概念已沿用了很久,但是由于聚合物的晶区与非晶区的界限不明确,在一个样品中,实际上同时存在着不同程度的有序状态,这样就使得准确确定结晶部分的含量十分困难,又由于各种测定结晶度的方法涉及不同的有序状态,测定结果常常有较大出入,有时数据的差别超过测量误差,因此,在指出某种聚合物的结晶度时,应说明测量的方法,也只有这样才能正确理解和比较结晶度。

对结晶性聚合物而言,当其处于结晶温度时,即处于玻璃化转变温度以上、结晶融化温度以下时,便开始结晶。

由于高分子结构的复杂性,大分子内摩擦阻碍等原因,使得聚合物的结晶与小分子晶体相比较会有更多的缺陷,所以结晶总是不完善的,成为一种晶区和非晶区共存的体系。

结晶度f w 即表征聚合物样品中晶区部分重量占全部重量的百分数:%100f w ×+=晶区重量非晶区重量晶区重量 在实际结晶聚合物中,晶区部分和非晶区部分的界限并不是想象的那么明显,每个高分子可以同时贯穿几个晶区和非晶区,而且晶区和非晶区两相间的交替部分有着半有序的过渡状态。

即使是晶区部分,往往又有很多缺陷,这些缺陷同样表现为无序态的性质,因此实际测定的结晶度并不是想象中的那样具有非常明确的物理意义。

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