免疫学实验技术概述
兽医免疫学08.免疫学实验技术
（2）试管凝集反应
为一种定量试验，用已知抗原检查血清中有无特异抗体， 并测定其相对含量。
1．取7只洁净小试管于管架，分别加0.5mL生理盐水。
2．在第1管中加1:10稀释血清0.5mL，混合后吸出0.5mL 毫升于第2管，同样混匀后吸出0.5mL于第3管。依次类推，稀 释到第6管，吸0.5mL弃去。第7管不加血清作为对照；
间接血凝抗原的制备可用加碱或加热的方法使菌体中的 多糖物质浸出，去除类脂以免干扰红血球的吸附作用。但如 系蛋白质时则用来吸附的红血球需先用鞣酸予以处理。
Patient
1 2 3 4 5 6 7 8
间接血凝试验
1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 1/512 1/1024 Pos. Neg.
（一）凝集反应
当颗粒性抗原与其相应抗血清混合时，在一定浓度的电解 质环境中，抗原凝集成大小不等的凝集块，叫凝集反应。
凝集反应广泛地应用于疾病的诊断和各种抗原性质的分析。 即可用已知免疫血清来检查未知抗原，亦可用已知抗原检测特 异性抗体。
凝集试验的种类
（1）直接凝集试验： 颗粒性抗原 （2）间接凝集试验： 可溶性抗原 （3）病毒的血凝与血凝抑制试验 （4）乳胶凝集试验
3．用移液管吸取待检抗原，分别加每管0.5mL；
4．同法于第2排各管中加入伤寒O菌液0.5mL。
5．将各管振荡混匀，放37℃水浴箱中2—4小时或37℃ 孵育箱中过夜次日取出观察结果。
2、间接凝集反应 将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的颗粒载体上，然后
与相应的抗体结合，也可出现颗粒载体的凝集现象，称为间接 凝集反应。间接凝集反应比直接凝集反应敏感性为高，可用于 微量抗体或抗原的检查。
1、直接凝集试验
医学免疫学实验技术
医学免疫学实验技术概述免疫学是一门既古老又崭新的学科，涉及医学各个领域，并与理工农各学科相互渗透。
医学免疫学是生命科学的前沿学科，也是医学生的主干必修课程之一。
目前免疫学的研究已经进入了一个崭新的时代。
现代免疫学的研究和应用涉及到生物医学的各个领域。
它与分子生物学一样是生物医学基础研究和临床工作不可缺的工具。
医学免疫学是一门实践性、应用性很强的学科，教学过程分为理论教学和实验教学。
实验教学作为免疫学教学的重要环节，直接影响大人才的培养目标的实现，特别是在培养学生的科学态度、实践技能、创新能力方面，具有重要的地位。
一医学免疫学实验目的与要求医学免疫学实验课程的开设，目的在于不仅使学生验证部分理论知识和加深对课堂讲授内容的理解，更重要的是在掌握系统理论知识的基础上，学习和掌握免疫学实验的基本技术和技能，培养学生观察、思考、分析和解决问题的能力，以及严肃认真的科学态度和创新精神，提高学生的综合素质。
1．基础性实验要求学生系统学习和掌握常用的经典免疫学实验方法和现代免疫学实验技术，使学生理解和巩固所学的理论知识，掌握相应的实验方法和实验技能。
2．综合性实验实验内容涉及本课程的综合知识或相关课程知识的实验，往往由多种实验手段、技术和层次的实验内容所组成。
通过综合性实验，进一步训练学生对所学知识和实验技术的综合运用能力、独立工作能力和对实验结果的综合分析能力。
3．设计性实验是在完成基础性试验和综合性试验的基础上，给定实验目的、要求和所提供的实验条件，由学生自行查阅资料，自选题目、设计实验方案，并在老师指导下，进行试验，最后以论文形式写出实验报告。
目的在于激发学生的创新性思维，培养学生的科研能力，提高学生的综合素质。
二医学免疫学实验室规则1．学生在上实验课前，应对实验内容进行预习，明确实验目的、要求，了解实验原理和操作步骤，熟悉所要使用的仪器、药品的性质和注意事项，预测实验结果。
2．注意保持科学实验的严肃性、严格性和严密性。
常用免疫学检验检测技术
要点一
总结词
要点二
详细描述
蛋白质分析的常用技术
免疫印迹技术是一种用于分离、检测和识别蛋白质的常用 技术。该技术通过将蛋白质混合物在凝胶上进行电泳分离 ，然后将其转移到膜上，再与特异性抗体结合，最后通过 显色反应检测目标蛋白质。免疫印迹技术具有高灵敏度、 高特异性和可同时检测多个蛋白质的特点，广泛应用于生 物学、医学和生物工程领域。
注意事项
由于放射性同位素具有放射性，操作过程中需要注意安全防护，避免对操作人员和环境造成污染。同 时，由于放射免疫分析需要使用放射性同位素标记的抗原，因此成本较高。
优缺点分析
优点
放射免疫分析具有较高的灵敏度和特异性， 可以用于痕量物质的定量检测；操作简便， 易于自动化；测量结果准确可靠。
缺点
由于使用放射性同位素，操作过程中存在安 全风险；成本较高，需要特殊仪器和实验室 条件；对于某些样品，可能存在交叉反应或 非特异性干扰。
化学发光免疫分析（CLIA）
总结词
快速、高灵敏度的定量检测技术
详细描述
化学发光免疫分析是一种基于化学发光反应 的免疫分析技术，通过测量化学发光反应过 程中释放的光子数量来检测抗原或抗体的浓 度。该技术具有快速、高灵敏度和低背景干 扰的优点，广泛应用于传染病、肿瘤标志物
和激素等生物分子检测领域。
免疫印迹技术（Western Blot）
05
其他常用免疫学检验检测技术
时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）
总结词
高灵敏度、高特异性的定量检测技术
详细描述
时间分辨荧光免疫分析是一种基于荧光能量共振转移的免疫分析技术，通过测量荧光标 记物的发射光谱来检测抗原或抗体的浓度。该技术具有高灵敏度、高特异性和低背景干
细胞和分子免疫学实验技术
细胞和分子免疫学实验技术细胞和分子免疫学是研究免疫系统的重要领域，它涉及到细胞和分子水平上的免疫反应和免疫调节机制。
在这个领域中，实验技术是非常重要的工具，通过这些技术可以深入了解免疫系统的功能和调控。
本文将介绍一些常用的细胞和分子免疫学实验技术。
1. 细胞培养技术细胞培养是研究细胞生物学和免疫学的基础。
通过细胞培养技术，可以获得大量特定类型的细胞，用于研究其生物学特性和免疫功能。
常用的细胞培养技术包括细胞传代、细胞培养基的配制和细胞培养条件的优化等。
2. 免疫细胞分离技术免疫细胞分离技术是将不同类型的免疫细胞从混合细胞群中分离出来，以便进行单个细胞的研究。
常用的免疫细胞分离技术包括磁珠分离法、流式细胞术和细胞排序术等。
3. 免疫组化技术免疫组化技术是通过使用特异性抗体标记目标蛋白质，以观察其在细胞或组织中的分布和表达水平。
该技术可以用于检测免疫细胞表面标记物、细胞内信号通路蛋白质和炎症标记物等。
常用的免疫组化技术包括免疫荧光染色和免疫组织化学染色等。
4. 免疫印迹技术免疫印迹技术是通过使用特异性抗体检测目标蛋白质在细胞或组织中的表达水平。
该技术可以用于检测特定蛋白质的表达变化，从而研究其在免疫反应中的功能。
常用的免疫印迹技术包括Western blot和ELISA等。
5. 免疫荧光技术免疫荧光技术是利用特异性抗体与目标蛋白质结合，并使用荧光标记的二抗进行检测。
该技术可以用于检测细胞表面标记物、蛋白质相互作用和免疫细胞的分布等。
常用的免疫荧光技术包括免疫荧光染色和流式细胞术等。
6. 免疫PCR技术免疫PCR技术是将PCR技术与免疫学相结合，用于检测特定基因的表达水平。
该技术可以用于研究免疫相关基因的表达变化和免疫调节机制。
常用的免疫PCR技术包括RT-PCR、实时荧光定量PCR等。
7. 细胞因子检测技术细胞因子是免疫反应和炎症过程中的重要调节因子。
通过检测细胞因子的表达水平，可以了解免疫反应的活性和炎症程度。
临床分析中的免疫学检测技术在传染病诊断中的应用
临床分析中的免疫学检测技术在传染病诊断中的应用传染病一直以来都是全球卫生领域的重要问题，其对人类健康和社会稳定造成了巨大影响。
传染病的迅速诊断和有效控制是防控传染病的首要任务。
在传染病诊断中，免疫学检测技术发挥着重要的作用。
本文将针对临床分析中的免疫学检测技术在传染病诊断中的应用进行探讨。
一、免疫学检测技术概述免疫学检测技术是一种通过检测体内产生的特异性抗体和抗原之间的相互作用来判断疾病状态或病原体感染情况的方法。
它以免疫反应的原理为基础，利用抗原与抗体间的特异性相互作用进行定性或定量检测。
常用的免疫学检测技术包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光技术、放射免疫分析技术等。
二、免疫学检测技术在传染病诊断中的优势免疫学检测技术在传染病诊断中具有许多优势。
首先，它具有高度的特异性，能够准确地检测出特定病原体或抗体，避免了误诊和漏诊的问题。
其次，免疫学检测技术具有较高的敏感性，能够在病情早期或感染后的短时间内检测出相关指标，有助于及早发现和治疗传染病。
此外，免疫学检测技术具有简便、快速和经济的特点，可以在临床实验室中进行大规模检测，为传染病的流行监测和控制提供有力支持。
三、免疫学检测技术在临床传染病诊断中的应用1. HIV/AIDS的诊断人类免疫缺陷病毒（HIV）是一种严重危害人类健康的病原体，艾滋病（AIDS）是由HIV感染引起的疾病。
在HIV/AIDS的诊断中，免疫学检测技术起着不可替代的作用。
第一代HIV抗体检测方法采用ELISA技术，能够检测出HIV感染后产生的抗体。
第二代检测方法引入了免疫印迹分析技术，提高了检测的准确性和敏感性。
第三代和第四代HIV抗体检测方法进一步改进了检测时间和检测效果。
此外，还可以通过检测HIV感染的指示物如p24抗原和HIV核酸来提高诊断准确性。
2. 结核病的诊断结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病，临床上常见的诊断方法包括结核菌纯蛋白衍生物酶联免疫吸附试验（TB-ELISA）、结核菌抗体检测和结核菌感染的细胞免疫学检测等。
免疫学实验技术教学设计
04
实验技术在教学中的意义
01
提高学生的实践能力
0 2 培 养 学 生 的科学素养 和创新能力
03
帮助学生理解免疫学的基本原理和 概念
提高学生的实验操作技能和实验设 计能力
04
05
培养学生的团队合作精神和沟通能 力
实验技术发展现状与趋势
免疫学实验技术在医学、生物学等 领域的应用越来越广泛
实验技术的发展与创新，推动了免 疫学研究的深入
教师姓名：李明 教学经验：10年 教学成果：发表多篇论文，获得多项教学奖项 教学方法：注重实践操作，注重学生动手能力的培养 教学特色：注重实验技术的创新和应用，注重培养学生的创新思维和实践能力
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免疫学实验技术教学设计
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目录
01 02 03 04 05 06
免疫学实验技术概述
免疫学实验技术教学目标与内容
免疫学实验技术教学方法与手段
免疫学实验技术教学评价与反馈
免疫学实验技术教学资源与平台 免疫学实验技术教学师资队伍与建
设
01
免疫学实验技术概述
实验技术定义与分类
实验技术的自动化、智能化趋势明 显，提高了实验效率和准确性
实验技术的标准化、规范化，提高 了实验结果的可靠性和可比性
实验技术的绿色化、环保化趋势， 减少了对环境的污染和破坏
02
免疫学实验的基本原理和方法
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掌握免疫学实验的数据分析和结果 解释
01
免疫学实验技术：研究免疫反应和 免疫机制的实验方法
03
细胞免疫学实验技术：研究细胞免 疫反应的实验方法，如细胞培养、 细胞融合等
05
免疫学实验
实验四免疫学实验一、机体体液免疫功能测定（一）凝集反应【目的】了解玻片凝集试验、试管凝集试验及胶乳间接凝集抑制试验的操作过程、结果分析和实际应用。
【原理】颗粒性抗原(细菌、细胞等)与相应抗体在一定电解质存在的条件下发生特异性结合并出现肉眼可见的凝集块的现象称为凝集反应。
凝集反应既可用已知抗体检查和鉴定未知的抗原(如鉴定细菌)，也可用已知抗原检查血清中相应的抗体；既可用作定性检测，又可用于定量检测。
凝集反应分两种。
一种是颗粒性抗原与抗体直接结合出现的凝集现象，称为直接凝集反应；另一种是将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的载休颗粒表面，再与相应的抗体结合而出现的凝集反应，称为间接凝集反应。
如将抗体吸附于载体颗粒表面，再与相应的抗原结合而出现的凝集反应则称为反向间接凝集反应。
1、玻片凝集反应【材料】伤寒诊断血清、伤寒沙门菌及大肠埃希菌培养物、载玻片、生理盐水等。
【方法】①取载玻片1张，左侧加生理盐水1滴，中间及右侧各加伤寒诊断血清1滴；②用接种环取伤寒沙门菌培养物少许，分别与盐水及中间的伤寒诊断血清混匀。
同法取大肠埃希菌培养物与右侧伤寒诊断血清混匀；③轻轻摇动玻片1～2min后，观察结果；④观察后，将玻片直接投入消毒缸，不要冲洗，以防污染。
【结果】出现凝集物者为阳性反应，均匀混浊无凝集物者为阴性反应。
【注意事项】玻片凝集反应①用接种环取一种试剂前后均需进行烧灼，不可有杂菌污染以及前一试剂残留。
②用接种环取细菌时应先烧灼灭菌，待冷却后方可挑取细菌。
③用接种环加细菌于血清中后，应先烧灼接种环，再取细菌加入另一血清中。
【结果分析】左：中：右：应用：2、试管凝集反应试管凝集反应为半定量试验，常用已知抗原检测患者血清中相应抗体的效价。
【材料】伤寒诊断血清(抗体)、伤寒菌液(抗原)、生理盐水(NS)、刻度吸管、试管等。
【方法及结果】见表试管凝集反应的方法试管 1 2 3 4 5 67生理盐水(ml) 0.9 0.5 0.5 0.5 0.5 弃去0.50.5伤寒诊断血清(ml) 0.1 0.5 0.5 0.5 0.50.5 ＋NS 0.5血清稀释倍数1:10 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320对照菌液(ml) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.50.5血清最终稀释倍数1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640对照56℃ 4小时,4℃冰箱过夜,次日观察结果结果效价【结果判断】见表手持试管，对光观察管内液体混浊度及管底沉淀物之性状。
实验免疫学技术
第四节 蛋白质芯片技术
生物芯片的主要类别:
– 蛋白芯片 – 基因芯片 – 芯片实验室
蛋白芯片的原理
1.将抗原或抗体交联（UV）或吸附在膜上
2. 抗体或抗抗体标记示踪
– –
酶：HRP、AKP 胶体金
–
荧光素：Cy3、Cy5、FITC、RB200、藻胆蛋白等
3.检测标本中的抗体或抗原
点抗原测抗体
3.检测标本中的抗体或抗原
– 实验方法：
IM-PCR指示分子DNA的制备：
3型腺病毒感染HeLa细胞，细胞病变达100%
提取病毒DNA
基因亚克隆
质粒纯化后酶切线形化
加入生物素化dUTP， dATP ， dCTP ， dGTP ，用Klenow 聚合酶合成生物素化DNA
双抗体夹心IM-PCR：
包被NPY单克隆抗体 封闭 加入不同稀释度的NPY抗原 加入NPY多克隆抗体 加入生物素化羊抗兔IgG
免疫学其他实验技术
核酸分子杂交的探针标记 Southern 印迹杂交 聚合酶链反应--------免疫PCR 流式细胞术 蛋白质芯片 免疫磁珠技术 免疫传感器 动物模型
Label the cells of interest with MACS MicroBeads in a short incubation step.
第三节 流式细胞术
是对单细胞进行定量分析和分选的一种自动分析细胞的高新技术， 被誉为实验室的“CT”。
流式细胞仪（flow cytometer，FCM）是集现代电子物理技术、 激光技术、电子计算机技术于一身的先进科学仪器
流式细胞定量技术与传统的免疫学方法相结合，进行细胞表面抗 原、癌基因抗原、其他细胞内抗原、细胞受体及其他成分检测， 弥补了传统免疫学难以准确定量的弊端，已初步形成一个独特的 学科分支——流式免疫学 荧光激活细胞分类仪（fluorescence activated cell sorter， FACS）
医学免疫学实验
第一章免疫学概要1.免疫：免疫是指机体免疫系统识别“自身”与“非己”抗原，并通过面已经打排除抗原异物，以维持机体生理平衡的功能。
2.免疫防御：免疫防御是指机体排斥外源性抗原异物的一种免疫保护功能，这是机体不受外来物质干扰，保持物种纯洁的生理机制。
3.免疫自稳：免疫自稳是指机体识别和清除自身衰老残损的组织、细胞的能力，是机体维持正常内环境稳定的重要生理机制。
4.免疫监视：免疫监视是指机体识别和清除病毒感染的细胞和异常突变细胞的一种生理功能，借以监视和抑制恶性肿瘤在体内生长。
5.TCR：TCR即T细胞抗原受体，是T细胞表面特异性识别和结合抗原的结构。
6.SIg：即B细胞表面的膜免疫球蛋白，为B细胞的抗原受体，是B细胞特异识别和结合抗原的结构。
7.免疫细胞：是指参与免疫应答或免疫应答有关的各类细胞，主要有免疫活性细胞、嗜酸性粒细和嗜碱性粒细胞及组织中的肥大细胞等。
8.CD：CD即白细胞分化抗原，是白细胞（还包括血小板、血管内皮细胞等）在正常分化成熟和记过过程中的不同阶段出现或消失的细胞表面抗原标志。
9.APC：APC即抗原呈递细胞，也称为免疫辅佐细胞，能将抗原信息呈递给T细胞，从而使T细胞活化。
主要有单核巨噬细胞和树突细胞两大类。
10.外周免疫器官：包括淋巴结、脾和黏膜相关淋巴组织等，是免疫细胞聚集和免疫应答发生的场所。
11.中枢免疫器官：中枢免疫器官又称一级免疫器官，包括骨髓、胸腺。
中枢免疫器官是免疫活性细胞的产生、增值和分化成熟的场所，对外周淋巴器官发育和全身免疫功能起调节作用。
12.ADCC：ADCC即抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用。
当IgG类抗体与靶细胞表面相应抗原表位特异性结合后，可通过其IgGd Fc段与NK细胞表面Fc受体结合，定向非特异性杀伤靶细胞。
填空题：1.免疫功能主要是免疫防御、免疫自稳和免疫监视。
2.世界上第一例成功的疫苗是E.Jenner发明的牛痘苗，可预防天花。
3.淋巴细胞包括T细胞、B细胞和大颗粒淋巴细胞（NK细胞）。
免疫学实验一抗,二抗的选择与搭配原则和方法
单克隆二抗
来自单一克隆细胞株，识别单 一表位，具有高特异性和一致 性。
二抗选择依据
种属来源
选择与一抗相同或相近种属来源的二 抗，以减少背景噪音。
抗体类型
根据实验需求选择IgG、IgM等类型 的二抗。
特异性与交叉反应
选择高特异性、低交叉反应的二抗， 以确保实验结果的准确性。
荧光标记
根据实验需求选择不同荧光标记的二 抗，如FITC、PE、APC等。
抗体鸡尾酒法
将多种抗体按一定比例混合后，与样品孵育 ，可同时检测多个抗原并降低背景噪音。
03
二抗选择与搭配原则二抗类型及特点 Nhomakorabea01
02
03
04
IgG类二抗
针对特定种属的IgG，如小鼠、 大鼠、兔等，具有高特异性和 亲和力。
IgM类二抗
主要用于检测IgM抗体，常用 于病毒感染等研究。
多克隆二抗
由多种克隆细胞株混合而成， 可识别多个表位，增加检测灵 敏度。
免疫学实验一抗二抗的选择与 搭配原则和方法
目
CONTENCT
录
• 引言 • 一抗选择与搭配原则 • 二抗选择与搭配原则 • 实验方法与技术 • 结果分析与解读 • 实验案例分享与讨论
01
引言
实验目的与意义
探究抗原与抗体之间的特异性结合关系，为免疫学研究和医学诊 断提供理论支持和实践指导。
通过一抗二抗的选择与搭配，实现对抗原的高灵敏度、高特异性 检测，提高实验的准确性和可靠性。
免疫学实验概述
免疫学实验是研究抗原与抗体 相互作用及其相关生物学效应 的重要手段，涉及免疫学、生 物化学、分子生物学等多个学 科领域。
免疫学实验包括抗原抗体反应 、免疫细胞功能检测、免疫分 子检测等多个方面，其中抗原 抗体反应是免疫学实验的核心 内容之一。
免疫学实验技术设计
免疫组织化学染色
利用特异性抗体与组织切片中的抗原结合，通过显色反应显示抗原在组织中的分 布和定位，适用于病理诊断和科研研究。
原位杂交技术
将标记有特异性探针的核酸序列与组织切片中的靶序列结合，通过显色或荧光反 应显示靶序列在组织中的位置和表达情况，用于基因表达和调控研究。
04 免疫学实验技术设计步骤
生物科学领域的应用举例
免疫细胞研究
利用免疫学实验技术研究免疫细胞的种类、功能及其相互作用， 揭示免疫应答的细胞基础。
免疫分子研究
通过免疫学实验技术，研究抗体、细胞因子等免疫分子的结构、功 能和调控机制。
免疫遗传学研究
运用免疫学实验技术，研究免疫相关基因的遗传变异及其对免疫功 能的影响。
农业领域的应用举例
生物医学应用
免疫学实验技术在生物医学领域具有广泛的应用价值，如疫苗研发 、抗体药物筛选、免疫诊断等。
02 免疫学实验技术设计原理
抗原抗体反应原理
抗原识别
01
抗原被免疫系统识别，通过特定的抗原受体与免疫细胞结合。
抗体产生
02
B细胞在抗原刺激下活化、增殖并分化为浆细胞，浆细胞分泌特
异性抗体。
抗原抗体结合
Western blot
将蛋白质样品通过凝胶电泳分离后，转移到固相支持物上， 利用特异性抗体进行免疫学检测，可实现对蛋白质的表达、 修饰和相互作用研究。
免疫共沉淀（Co-IP）
利用特异性抗体与靶蛋白结合，通过沉淀反应将与之相互作 用的蛋白质一同沉淀下来，用于研究蛋白质复合物或蛋白质 相互作用。
免疫组化技术
免疫学实验技术设计
汇报人：XX 2024-01-19
目录
• 免疫学实验技术概述 • 免疫学实验技术设计原理 • 免疫学实验技术类型及特点 • 免疫学实验技术设计步骤 • 免疫学实验技术操作规范与注意事
免疫学实验课实验报告
免疫学实验课实验报告
一、实验目的
本实验旨在探究免疫学中各种免疫反应的发生机制，以及免疫反应对细胞和组织的影响。
二、实验原理
免疫反应是一种抗原刺激下的生物反应，其发生是由免疫系统中的免疫细胞和抗原相互作用的结果。
免疫反应可分为四个阶段：抗原识别，抗原处理，免疫应答和免疫记忆。
在抗原识别阶段，免疫系统中的抗原接受细胞将抗原识别为“外来物质”，并将其传递给免疫系统中的其他细胞。
在抗原处理阶段，免疫系统中的细胞将抗原分解为较小的分子，以便能够识别并识别抗原。
在免疫应答阶段，免疫系统中的细胞将产生一系列免疫反应，以抵御抗原。
最后，在免疫记忆阶段，免疫系统中的细胞将记住抗原，以便在未来再次接触抗原时能够更快地识别并应对。
三、实验材料和方法
1.实验材料：
（1）免疫细胞：用于检测免疫反应的免疫细胞；
（2）抗原：用于诱导免疫反应的抗原；
（3）实验设备：用于检测免疫反应的实验设备；
（4）实验技术：用于检测免疫反应的实验技术。
2.实验方法：
（1）将免疫细胞放入实验设备中，并进行抗原刺激；
（2）使用实验技术检测免疫反应的发生，并记录结果；
（3）分析免疫反应的结果，并得出结论。
四、实验结果
实验结果显示，在抗原刺激下，免疫系统中的免疫细胞发生了明显的免疫反应，其中包括抗原识别、抗原处理、免疫应答和免疫记忆等。
五、实验结论
本实验结果表明，免疫反应是一种由抗原刺激下的生物反应，由免疫系统中的免疫细胞
和抗原相互作用的结果，其发生分为四个阶段：抗原识别、抗原处理、免疫应答和免疫记忆。
免疫学技术在食品安全检测应用
多残留同时检测
发展多残留同时检测技术，实现在一 次检测中同时识别多种有害物质，提 高检测效率。
免疫学技术与其他技术联用
将免疫学技术与色谱、质谱等分离分 析技术相结合，提高检测的准确性和 可靠性。
自动化和智能化
开发自动化和智能化的免疫学检测技 术，降低人为操作误差，提高检测效 率和准确性。
检测方法
化学发光免疫分析法是一种新兴的免疫学检测方法，具有灵敏度高、特异性强、线性范围宽等优点，适用于 粮食作物中多种真菌毒素的同时检测。
应用实例
国内外多个粮食检测机构已采用免疫学技术对粮食作物进行真菌毒素检测，有效防止了受污染粮食进入市场 和食品链。
05 免疫学技术优缺点及改进 方向
免疫学技术优点
发光免疫技术等。
根据应用领域分类
可分为临床诊断免疫学技术、生 物制品学免疫学技术、食品免疫
学技术和环境免疫学技术等。
02 食品安全检测现状及挑战
食品安全检测意义
保障公众健康
01
食品安全检测能够及时发现并防止食品中的有害物质对消费者
造成健康危害。
维护市场秩序
02
通过对食品的安全检测，可以确保市场上流通的食品符合国家
应用
用于食品中微生物、毒素、重金属等的快速检测。
优点
快速、简便、可现场检测。
酶联免疫吸附试验（ELISA）
1 2
原理
将抗原或抗体与酶结合，形成酶标抗原或抗体， 通过酶与底物的显色反应来检测目标物质。
应用
用于食品中过敏原、激素、抗生素等的定量检测。
3
优点
高灵敏度、高特异性、可定量检测。
常用免疫学相关实验技术及方法
(二)放射免疫测定(radioimmunoassay)
放射免疫测定通常用于测定组织液和血液中的激素水平。放射免疫 分析多数用125I来标记抗体。被检测抗原即未标记物，通常吸附在固 相载体中，如多孔酶联塑料板或试管中。在此固相载体中标记的特异 性抗体与特定的未标记抗原产生特异性免疫结合。非特异性吸附可以 通过加入过量的非特异性卵磷脂蛋白或洗涤液来封闭。未结合的标记 抗体则用洗液去除。最终特异性结合的抗原、抗体复合物残留在反应 板或试管中。用125I标记的抗体，其放射性强度可以直接测定。
三、淋巴细胞及其亚群的分离 纯淋巴细胞的采集 黏附贴壁法 1.磁铁吸引法
四、淋巴细胞亚群的分离 E花环沉降法 尼龙毛分离法 亲和板结合分离法 荧光激活细胞分离仪分离法 1.流式细胞分选法
五、淋巴细胞的功能分析 (一)T细胞功能的检测 T细胞转化试验 (1)非抗原性刺激物 (2)抗原性刺激物
第三节 转基因动物
一、转基因动物的概念及发展史 转基因动物(transgeni animal)是指所有细胞基因组中稳定地整合 由人工导入的外源基因，能正常表达并能遗传给后代的一类动物。 仅有部分组织细胞的基因组中整合有外源基因的动物，称为嵌合 体动物(chimera animal)。
二、转基因动物技术 转基因动物技术的基本原理：将经过基因工程改造过的目的基
2. 细胞杀伤试验 (1)形态学检查法 (2)放射性核素法
(二)B细胞功能的检测 B细胞早期活性指标的测定 溶血空斑形成试验 B细胞增殖能力的试验
(三)NK细胞能力的检测 形态法 酶释法 荧光法 放射性 化学发光法
(四)吞噬细胞的检测 中性粒细胞功能的检测 (1)细胞运动功能检测 (2)吞噬和杀菌功能的检测 2. 巨噬细胞功能的检测 (1)炭粒廓清试验 (2)吞噬功能的检测 (3)巨噬细胞溶酶体酶的测定
免疫学实验技术
免疫学实验技术
免疫学实验技术是一种用于研究和分析免疫系统的实验方法。
它涉及到各种技术和手段，用于检测、分析和研究免疫细胞、免疫分子以及免疫反应。
其中一些常见的免疫学实验技术包括：
1. 流式细胞术：这是一种用于对单个细胞进行高速分析和分选的技术。
它可以用于检测细胞表面标志物、细胞内蛋白质、细胞功能等。
2. 免疫组织化学：该技术用于检测组织样本中的特定抗原或蛋白质。
通过使用特异性抗体与组织中的目标抗原结合，然后通过显色或荧光染料进行可视化。
3. 酶联免疫吸附试验（ELISA）：这是一种常用的检测体液中特定抗体或抗原的技术。
ELISA 利用抗体与抗原的特异性结合，并通过酶催化的显色反应来定量检测目标分子。
4. Western blotting：该技术用于检测蛋白质样本中的特定抗原。
它通过电泳分离蛋白质，然后将其转移到膜上，再使用特异性抗体进行检测。
5. 免疫沉淀：这是一种用于研究蛋白质-蛋白质相互作用的技术。
通过使用特异性抗体捕获目标蛋白质，然后通过沉淀和分析来确定与其相互作用的其他蛋白质。
6. 细胞培养和功能分析：免疫学实验常涉及细胞培养，如淋巴细胞的激活、增殖和功能测定，以研究免疫细胞的行为和应答。
这些技术在免疫学研究、疾病诊断、药物开发等领域都有广泛的应用。
随着技术的不断发展，新的免疫学实验技术也在不断涌现，为深入了解免疫系统的功能和机制提供了更多的手段和工具。
医学免疫学实验设计
实验后应对实验结果进行严格 的审核和分析，确保实验结果
的准确性和可靠性。
安全管理制度完善及执行情况检查
免疫学实验室应建立完善的安全管理制度，包括实验室安全、生物安全、化学品安 全等方面的管理制度。
实验室人员应严格遵守安全管理制度，加强安全意识教育，提高安全防范能力。
定期对实验室进行安全检查，及时发现和排除安全隐患，确保实验室的安全运行。
数据分析方法
根据实验目的和数据特点，选择合适的数据分析方法，如 描述性统计、假设检验、方差分析等。
结果呈现
将分析结果以图表、表格等形式呈现，使结果更加直观和 易于理解。同时，撰写实验报告或论文，将实验结果和结 论进行交流和分享。
05
免疫学实验结果解读与讨论
结果呈现方式选择及优缺点比较
表格呈现
适用于展示大量数据，便于比较和分析，但可能 缺乏直观性。
医学免疫学实验设计
汇报人：XX 2024-01-23
contents
目录
• 实验设计概述 • 免疫学实验技术 • 实验动物与模型选择 • 免疫学实验方案设计与实施 • 免疫学实验结果解读与讨论 • 免疫学实验质量控制与安全管理
01
实验设计概述
实验目的与意义
01
02
03
探究免疫学机制
通过实验手段深入探究免 疫系统的组成、功能及调 控机制，为免疫学理论研 究提供实验依据。
设计实验方案
制定详细的实验计划，包括实 验分组、样本处理、观察指标 、数据收集与分析等。
结果分析
对实验数据进行统计分析，验 证实验假设并得出结论。
02
免疫学实验技术
抗原抗体反应技术
酶联免疫吸附试验（ELISA）
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(七) 血清学反应的影响因素 1．电介质：生理盐水，缓冲盐水，少数动
物(禽)血清用8.5％NaCl； 2．温度； 3．pH：pH6.0～8.0
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三、血清学技术的优越性 (一)检样量少，预处理简单：
一滴血清/血、一根羽毛、少许组织悬 液、植物一片子叶等。 (二)种类多，可择优选用 (三) 方法简便快速 (四) 特异性、敏感性 (五) Ag/Ab定位、定量
1．Ag、Ab验证：反复、重复验证 2．交叉试验 3．抑制试验(阻断)
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(七)敏感性试验 (八)重复性试验 (九)稳定性试验
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五、血清学试验的应用 (一) 血清学诊断 (二) 生物活性物质超微定量 (三) Ag/Ab亚细胞、细胞水平定位 (四) Ag组分分析，如病毒结构蛋白可用免疫转
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补体结合试验
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（二）凝集反应：
直接凝集：平板、试管
间接凝集：间接血凝、炭凝、乳胶凝集
协同凝集：
凝集抑制：（血凝抑制）
（三）与补体有关的实验：活性、组分、补结、 免疫粘附血凝等。
（四）中和试验
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（五）标记技术： 同位素标记 荧光标记：化学发光免疫技术 酶标记：组化法、测定法（ELISA） ELISA：间接法、免疫酶斑点技术（dotELISA）、 竞争法、 夹心法、 桥联法
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抗原与抗体的结合的特异性
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（二）交叉性 交叉抗原：不同的Ag物质之间存在相
同的Ag表位时，称为交叉抗原。 交叉反应：又不同抗原制备的抗血清除
与各自的相应Ag发生反应外，尚能与对方 Ag发生反应。
通常两种Ag之间亲缘关系越近，交叉 反应程度越高。
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A
B
抗原与抗体的结合的交叉性
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(三)用已知测未知 ❖ 所有血清学反应都毫无例外地是用已知Ag测 未知Ab或用已知Ab测未知Ag。 ❖ 用已知测未知的依据：抗原抗体的反应是特 异的。 ❖ 正确理解实验原理或进行试验设计的关键是 搞清楚什么是已知，什么是未知，谁是抗原身份， 谁是抗体身份，谁是身兼两职的。
印，免疫沉淀(琼扩、电泳、交叉免疫电泳等) (五) 物种鉴定分型 (六) 有机物提取纯化
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六、血清学试验的类型
（一）沉淀反应：
环状沉淀试验
琼脂扩散：
免疫电泳
对流电泳
火箭电泳
双向电泳
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第一节 体液免疫的检测 ——血清学反应
血清学反应：体外发生的抗原抗体反应。
所有血清学反应类型的基本原理：抗原抗体 反应的特异性。
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二、血清学反应的一般规律 (一)特异性
• Ab只能与相应Ag特异结合。 • Ag表面常具有多个(多种)不同表位，所以
免疫血清中也应含有相应多种特异性Ab。
（六）免疫电镜组化技术 胶体金铁蛋白标记技术
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竞争酶联免疫吸附检测法(CiELISA)原理
B
B0
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第3为清晰红色条带； 1ng/ml，检测线与0标准品的相似; 3ng/ml，检测线浅于0ng/ml标准品; 10ng/ml，检测线明显浅于0 ; 肉眼判定检测限可达3ng/ml。
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❖ Ag-Ab结合的离解力 指Ag-Ab结合具有可逆性，因为Ag-Ab之间靠 非共价结合，因此在一定条件下可使其解离。 解离后的Ag-Ab仍保留其原有活性。
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(六) 结合比例
❖ Ag与Ab的结合常需适当比例才出现可见反 应，在最适比例时反应最明显；
❖ 这种现象可以用“格子学说”来解释：Ab(1gG) 为二价，Ag通常为多价，只有Ag，Ab结合形 成大的复合物，肉眼才可见；
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❖ 带现象 只有当Ag与Ab比例适当时，才能形成大的复 合物，比例不适当，就只能形成小的复合物而 抑制反应现象的出现.
❖ 前带现象：Ab过剩，Ag过少；稀释Ab ❖ 后带现象：Ag过剩，Ab过少；稀释Ag。
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(四)试验与抑制试验 许多血清学试验可以被相应的Ag／Ab所
抑制，即抑制反应现象的出现，抑制试验可 以验证反应的特异性；还可使一些不易被检 测的Ag(如简单半Ag)或Ab(如单价Ab)，得以 检出。
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(五)结合力与离解力 Ag，Ab的结合为弱能量的非共价健结
合，其结合力决定于Ag表位与Ab的结合点 之间所形成的非共价健的数量，性质和距 离，包括4种力的作用：
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四、血清学试验的制定原则 特定的或建立新的血清学方法时，应注意
以下原则： (一) Ag准备和提纯 1．购自试剂公司：如半Ag、激素、酶、 农药、抗生素、昂贵的天然Ag等。
2．自制：一般天然Ag、动物血清、组织Ag等
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(二) Ab制备提纯 (三)操作程序制定 (四)材料准备和滴定：工作浓度滴量 (五)试验条件选择： (六)特异性试验
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第二节 细胞免疫技术
自学
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