免疫学实验技术概述

抗原与抗体的结合的交叉性
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(三)用已知测未知 ❖ 所有血清学反应都毫无例外地是用已知Ag测 未知Ab或用已知Ab测未知Ag。 ❖ 用已知测未知的依据：抗原抗体的反应是特 异的。 ❖ 正确理解实验原理或进行试验设计的关键是 搞清楚什么是已知，什么是未知，谁是抗原身份， 谁是抗体身份，谁是身兼两职的。
印，免疫沉淀(琼扩、电泳、交叉免疫电泳等) (五) 物种鉴定分型 (六) 有机物提取纯化
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六、血清学试验的类型
（一）沉淀反应：
环状沉淀试验
琼脂扩散：
免疫电泳
对流电泳
火箭电泳
双向电泳
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1．Ag、Ab验证：反复、重复验证 2．交叉试验 3．抑制试验(阻断)
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(七)敏感性试验 (八)重复性试验 (九)稳定性试验
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五、血清学试验的应用 (一) 血清学诊断 (二) 生物活性物质超微定量 (三) Ag/Ab亚细胞、细胞水平定位 (四) Ag组分分析，如病毒结构蛋白可用免疫转
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第二节 细胞免疫技术
自学
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(四)试验与抑制试验 许多血清学试验可以被相应的Ag／Ab所
抑制，即抑制反应现象的出现，抑制试验可 以验证反应的特异性；还可使一些不易被检 测的Ag(如简单半Ag)或Ab(如单价Ab)，得以 检出。
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(五)结合力与离解力 Ag，Ab的结合为弱能量的非共价健结
合，其结合力决定于Ag表位与Ab的结合点 之间所形成的非共价健的数量，性质和距 离，包括4种力的作用：
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❖ Ag-Ab结合的离解力 指Ag-Ab结合具有可逆性，因为Ag-Ab之间靠 非共价结合，因此在一定条件下可使其解离。 解离后的Ag-Ab仍保留其原有活性。
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(六) 结合比例
❖ Ag与Ab的结合常需适当比例才出现可见反 应，在最适比例时反应最明显；
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抗原与抗体的结合的特异性
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（二）交叉性 交叉抗原：不同的Ag物质之间存在相
同的Ag表位时，称为交叉抗原。 交叉反应：又不同抗原制备的抗血清除
与各自的相应Ag发生反应外，尚能与对方 Ag发生反应。
通常两种Ag之间亲缘关系越近，交叉 反应程度越高。
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A
B
第一节 体液免疫的检测 ——血清学反应
血清学反应：体外发生的抗原抗体反应。
所有血清学反应类型的基本原理：抗原抗体 反应的特异性。
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二、血清学反应的一般规律 (一)特异性
• Ab只能与相应Ag特异结合。 • Ag表面常具有多个(多种)不同表位，所以
免疫血清中也应含有相应多种特异性Ab。
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补体结合试验
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（二）凝集反应：
直接凝集：平板、试管
间接凝集：间接血凝、炭凝、乳胶凝集
协同凝集：
凝集抑制：（血凝抑制）
（三）与补体有关的实验：活性、组分、补结、 免疫粘附血凝等。
（四）中和试验
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（五）标记技术： 同位素标记 荧光标记：化学发光免疫技术 酶标记：组化法、测定法（ELISA） ELISA：间接法、免疫酶斑点技术（dotELISA）、 竞争法、 夹心法、 桥联法
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四、血清学试验的制定原则 特定的或建立新的血清学方法时，应注意
以下原则： (一) Ag准备和提纯 1．购自试剂公司：如半Ag、激素、酶、 农药、抗生素、昂贵的天然Ag等。
2．自制：一般天然Ag、动物血清、组织Ag等
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(二) Ab制备提纯 (三)操作程序制定 (四)材料准备和滴定：工作浓度滴量 (五)试验条件选择： (六)特异性试验
❖ 这种现象可以用“格子学说”来解释：Ab(1gG) 为二价，Ag通常为多价，只有Ag，Ab结合形 成大的复合物，肉眼才可见；
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❖ 带现象 只有当Ag与Ab比例适当时，才能形成大的复 合物，比例不适当，就只能形成小的复合物而 抑制反应现象的出现.
❖ 前带现象：Ab过剩，Ag过少；稀释Ab ❖ 后带现象：Ag过剩，Ab过少；稀释Ag。
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(七) 血清学反应的影响因素 1．电介质：生理盐水，缓冲盐水，少数动
物(禽)血清用8.5％NaCl； 2．温度； 3．pH：pH6.0～8.0
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三、血清学技术的优越性 (一)检样量少，预处理简单：
一滴血清/血、一根羽毛、少许组织悬 液、植物一片子叶等。 (二)种类多，可择优选用 (三) 方法简便快速 (四) 特异性、敏感性 (五) Ag/Ab定位、定量
（六）免疫电镜组化技术 胶体金铁蛋白标记技术
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竞争酶联免疫吸附检测法(CiELISA)原理
B
B0
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免疫层析法检测CAP结果
0ng/ml，检测线为清晰红色条带； 1ng/ml，检测线与0标准品的相似; 3ng/ml，检测线浅于0ng/ml标准品; 10ng/ml，检测线明显浅于0 ; 肉眼判定检测限可达3ng/ml。