β-葡聚糖测定方法
β-葡聚糖酶活性测定
β-葡聚糖酶活性测定β-葡聚糖是由葡萄糖单体通过β-1，3和β-1，4糖苷键连接而成的D型葡萄糖聚合物，它主要存在于单子叶禾本科谷实中的糊粉层和胚乳细胞壁中。
β-葡聚糖酶属于水解酶类，能有效地降解β-葡聚糖分子中的β-1，3和β-1，4糖苷键，使之降解为小分子。
由于在饲料中，大麦的β-葡聚糖含量较高，难以被单胃动物消化利用，而且对饲料中各种养分的消化利用具有明显的干扰和抑制作用，成为麦类饲料中的抗营养因子。
在饲料中添加β-葡聚糖酶，能有效地消除β-葡聚糖的抗营养作用，促进饲料中各种养分的消化和吸收利用，增进畜禽健康。
在啤酒生产中，添加β-葡聚糖酶可以加快麦汁和啤酒的过滤速度、提高麦汁得率、增加可发酵糖的含量。
此外，β-葡聚糖酶在造纸工业、日化工业等其它许多方面也有着广泛的应用，对β-葡聚糖酶的研究将越来越受到人们的重视。
β-葡聚糖酶活力的测定方法主要有3种：还原糖测定法（分光光度法）、粘度测定法和底物染色法。
其中还原糖测定法简便实用，比较准确，而且结果重复性好，是广泛使用的一种酶活测定方法。
其原理是：β-葡聚糖酶能将β-葡聚糖降解成寡糖和单糖，其具有的还原基团在沸水浴条件下可与DNS试剂发生显色反应，显色的深浅与还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中β-葡聚糖酶的活力成正比，因此，可以利用比色测定反应液的吸光度值来计算还原糖的生成量，从而得出β-葡聚糖酶的活力。
但在该测定方法的具体操作中存在一些影响酶活力测定结果的因素，本文即对还原糖法测定β-葡聚糖酶活力的几个重要影响因素进行研究，并得出最佳测定条件。
1 材料与方法1.1 菌株与培养基1.1.1 发酵产酶菌株黑曲霉（Aspergillus niger）A47菌株，由本实验室保藏。
1.1.2 固态发酵培养基麸皮70 g、米糠27 g、NH4NO3 2.95 g、微量元素液0.05 ml、蒸馏水100ml，pH值5.0，121 ℃灭菌20 min。
真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测操作SOP文件
声明本产品属精密光学仪器，在日常使用中，应严格按照我公司出具的操作流程进行试验操作，并确保工作环境正常。
本试验的操作者必须为经我公司培训合格的微生物实验室检验人员，如需更换操作者，请做好交接工作，确保新的操作者了解仪器特性、熟悉操作流程。
为避免试验结果不准确，请操作者认真阅读操作注意事项及操作流程，并严格遵守。
如有任何疑问，请联系我公司售后服务部。
售后服务部电话：400-811-9958北京金山川科技发展有限公司真菌（1-3）-β-D葡聚糖测定1.目的建立真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测标准操作规范，保证实验结果的准确性。
2.授权操作人经培训合格的微生物实验室检验人员。
3.实验原理（1-3）-β-D葡聚糖检测原理：真菌（1-3）-β-D葡聚糖激活酶反应主剂中的G因子后形成凝固蛋白，根据其所引起的浊度变化对真菌（1-3）-β-D葡聚糖浓度进行定量测定。
（1-3） -D-Glucan活化因子G 因子G凝固酶原凝固酶凝固蛋白原凝固蛋白（凝胶）4．产品性能指标4.1 灵敏度最小检出值5pg/ml5．实验组成5.1实验仪器及器具：MB-80微生物快速动态检测系统、洁净工作台、低速离心机、恒温仪， 20~200ul 加样器、100~1000ul加样器、旋涡混合器、定时器。
5.2实验耗材：200ul无热原吸头、1000ul无热原吸头、无热原平底试管、无热原真空采血管。
5.3试剂盒组成：真菌（1-3）-β-D 葡聚糖检测试剂盒（光度法）：试剂盒包括反应主剂和样品处理液。
6．工作环境相对湿度：20%~80%；温度控制：10~30℃；电源电压：220V±10%，50Hz±2%。
7．标本采集、处理及保存7.1检测样本：血液、肺泡盥洗液、胸腔积液、腹水、脑脊液、尿液（无菌取中段尿或穿刺尿）7.2采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管（肝素类抗凝）。
常规病人早上用药治疗前空腹采血/取样（血透患者透析前采血）。
紫外分光光度法测定西藏青稞中β-葡聚糖的含量
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收稿 日期 ：０ ０ ０ － ８ ２１ － ４ ２
基金项 目： 西藏 自治 区科技厅科技孵化器入孵项 目“ 青稞 的深度研究与开发” 阶段性成果 。 第 一作者简介 ， 江春艳（ ９ ３ ， ， １ ７－）男 汉族 ， 四川三台人 ， 西藏天知生物科技开发有限公司执业药师 ， 士， 硕 主要研究方 向为食 品药品科研 与生产管理 。
精密 吸取 ０５ ｌ ．ｍｇ ｌＢ— ｌｃｎ标 准溶 液 ， 纯水 补 至 ２ ｌ再 分 别加 入 ４０ 刚果 红溶 液 ， 匀 ， ．ｍ ２ ／ Ｇｕａ ０ ｍ 用 ｍ， ． ｍｌ 摇 以水 为空 白 ，０ —０ ｎ ４ ０ ６ ０ ｍ全波 长 扫描 。 定 １一 ｌｃｎ的最大 吸 收波 长 。 确 ３ Ｇｕ ａ 结果 见 图 １ 结果 表 明 ， 大 吸收 。 最
结 合具 有高度 的专 一 眭 ， 在一 定条 件下形 成有 色物 质 ， 本次 研 究就 利用 这一 原理 ， 用 常规 的紫 外分 光光 运
β-葡聚糖、甘露寡糖的测定方法
A.1原理根据β-葡聚糖和甘露寡糖在流动相和液相色谱柱的固定相之间具有不同的分配系数，将样品注入液相色谱柱，用H2O做流动相，糖类分子流出后，经示差检测器检测，用外标法定量。
A.2试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂；蒸馏水或去离子水或符合GB/T6682中规定的一级水或相当纯度的水。
试验中所用制品按GB/T 603的规定制备。
A.2.1盐酸：37%。
A.2.2乙腈：色谱纯。
A.2.3氢氧化钠：40%。
A.2.4葡萄糖和甘露糖混合标液（1000mg/L）：分别称取葡萄糖和甘露糖各0.100g，用纯水定容100mL后用0.45μm微孔滤膜过滤，备用。
A.3仪器A.3.1水浴锅。
A.3.2漩涡混合器。
A.3.3电炉。
A.3.4手提式压力蒸汽灭菌锅。
A.3.5高压液相色谱仪；带示差检测器。
A.4分析步骤A.4.1样品处理精确称取1.000g（准确至0.0002g）样品放入一个20mL的耐热玻璃制的带螺帽的小试管中，加入7.5mL盐酸（37%），小心的将小瓶盖近后用漩涡混合器混合，得到均一的悬浮液。
将小瓶放入30℃水浴中处理45min，每15min用漩涡混合器震荡混合一次。
然后将悬浮物定量的转移到200mL杜氏瓶中（同时用约70-80mL的水洗涤后倒入瓶中），将瓶子放入高压灭菌锅121℃处理60min。
完成后马上冷却，将溶液调pH到6-7，然后定容至200mL。
使用0.45微米孔径的醋酸纤维素膜过滤备用。
A.4.2测定A．4.2.1 液相色谱参考条件A．4.2.1．1 色谱柱：Hyper REZ XP Carbohydrate Ca++，长300mm，内径7.7mm，粒径8μm。
A．4.2.1．2 柱温：70℃。
A．4.2.1．3 流动相：H2O，用前过0.22μm滤膜。
A．4.2.1．4 流速：0.6 ml/min。
A．4.2.1．5 进样体积:40μl。
A.4.3标准曲线的绘制分别吸取甘露糖/葡萄糖标液12.5、25.0、37.5mL到50mL容量瓶中，用高纯水定容到刻度，得到甘露糖、葡萄糖各为250、500、750、1000mg/L的混合标样。
β-葡聚糖研究进展
ß-葡聚糖的研究进展程彦伟李魁赵江燕麦β－葡聚糖是一种存在于大燕麦皮中的天然非淀粉类水溶性植物糖，其基本结构是由D葡萄糖以β14，β1-3糖苷键连接而成的线性多糖，这两种糖苷键的比例大致为7：3。
燕麦β－葡聚糖是一种水溶性膳食纤维，因其具有的黏性阻碍淀粉、蛋白质等物质的消化和吸收，并可增殖消化道有益菌，所以可对人体具有一些极为有利的生理功能：具有显著的降血脂、降血糖及提高免疫能力，维持肠道微生态环境等。
另外，它还能加快确定人群的免疫细胞。
对细菌感染的反应并控制住细菌感染的位置，使感染面尽快恢复；作为化妆品的有效成分，可以提高皮肤抗过敏能力，激活免疫功能，延缓皮肤衰老。
燕麦水溶性膳食纤维和燕麦葡聚糖，可有效降低餐后血糖浓度和胰岛素水平，降低胆固醇和预防心血管疾病.燕麦纤维食品易被人体吸收，并且因含热量很低，既有利于减肥，又适合心脏病,高血压和糖尿病患者食疗的需要。
降低胆固醇早在多年，科学家就发现bata一葡聚糖能够减少肠胃吸收脂肪酸的速率,降低人体胆固醇的合成.随着bata一葡聚糖研究的日趋成熟，学者们先后在动物及人体实验水平上进行了大量的实验,证实了bata一葡聚糖在降低胆固醇和低密度脂蛋白方面具有特异的生理功能.科学家发现bata一葡聚糖对胆固醇的影响主要在于能显著降低血浆中总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDI一TC),而对高密度脂蛋白(HDL)和甘油三醋(TG)没有明显影响仁。
燕麦葡聚糖对高血脂人群有明显的降低胆固醇的作用。
有关燕麦葡聚糖降低胆固醇的机理目前有四种假说:①可结合胆汁酸,增加了胆汁酸的排泄,从而降低胆汁酸水平和血浆胆固醇浓度。
②可被肠道中微生物发酵而产生短链脂肪酸，可抑制肝脏中胆固醇的合成。
③可促进LDL一C分解。
④可在消化道中形成高粘度环境，阻碍消化道对脂肪，胆固醇和胆汁酸的吸收。
降血糖每天食用葡聚糖燕麦食品后，患者血糖水平可降低约50%，使用燕麦食品有显著降低血糖作用燕麦汗葡聚糖可通过降低血脂含量，改善血液流动性能,加快糖类成分在吸收利用过程中的转运速度和效率，同时对糖尿病所并发的肝肾组织病变有良好的修复作用，并且可有效降低肝糖原的分解，从而导致血糖降低。
β-葡聚糖
β-葡聚糖β-葡聚糖是用独特的工艺开发的一种新的产品，其来源于新鲜的食品啤酒酵母。
它是一种多糖，主要化学结构β-1，3 葡聚糖和β-1，6葡聚糖，其中前者具有抗肿瘤性质，而且能够极大地提高人体自然免疫力。
简介Glucan，为D-葡萄糖单体借由糖苷键的键结所形成的多糖。
由于D-葡萄糖残基彼此间结合样式的不同而分为多种，广泛分布于微生物、植物、动物界。
其中异碳头糖苷键是以β方式连接的为β-葡聚糖，如褐藻类的海带多糖（laminarin，主要以β-1，3键），地衣类的木聚糖（β-1，4和β-1，3键），高等植物的纤维素、（β-1，4结合）等[1]。
特点1. 优良免疫激活剂2. 强大的自由基清除剂3. 激活巨噬细胞、噬中性细胞等清除由辐射造成细胞分解碎片4. 能够使巨噬细胞辨别和破坏变异细胞5. 协助受损组织如淋巴组织细胞加速恢复产生细胞素（IL-1）6. 促使包括抗生素，抗真菌，抗寄生药在内的其他药物更好地发挥效用7. 减低血液中的低密度脂肪，提高高密度脂肪，减少高血脂的发生性状无色或略黄色粘稠溶液、略特性的的气味用途1．健康食品营养补充2．胶囊类3．功能饮料、口服液等4．医药及化妆品配料5．其他抗衰老、抗辐射等功能性食品测定方法β-葡聚糖含量的测定方法，大致可归纳为如下几类：（1）粘度法：其原理是大麦抽提液的粘度主要由β-葡聚糖产生(Burnett，1966；White等，1983)。
这种方法可靠性较差，因为不同来源的β-葡聚糖的分子量不同；而在葡聚糖含量相同时，分子量较大者产生的粘度较大，这样β-葡聚糖粘性的大小并不完全取决于其含量，也取决于分子量大小(Sanlinier等，1994)。
另外，抽提条件对其粘度有明显的影响。
（2）沉淀法：其原理是利用特定的盐或有机溶剂沉淀抽提液中的β-葡聚糖(Wood，1986)。
该方法的局限性在于抽提不能完全排除其它物质的干扰。
在高温下抽提时，抽提液中含有其它成分如淀粉等，因而干扰测定的结果。
β-葡聚糖测定方法
β-葡聚糖酶活力测定方法(NY/T911-2004)∙ 1.原理β-葡聚糖酶能将木聚糖降解成还原性糖。
还原性糖在沸水浴条件下可以与3,5-二硝基水杨酸（DNS)试剂反应显色反应。
反应液颜色的深度与酶解产生的还原糖量成正比，而还原糖的生成量又与反应液中β-葡聚糖酶的活力成正比。
因此，通过分光比色测定反应液颜色的强度，可以计算反应液中β-葡聚糖酶的活力。
∙ 2. 操作∙ 2.1.标准葡萄糖曲线的制作2.1.1 吸取PH5.5的0.1M乙酸-乙酸钠+缓冲溶液4.0mL,加入DNS试剂5.0mL，沸水浴加热5min。
用自来水冷却至室温，用水定容至25.0mL,制成标准空白样。
2.1.2 分别吸取葡萄糖溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL、6.00mL和7.00mL,分别用PH5.5的0.1M醋酸缓冲溶液定容至100mL,配制成浓度为0.10mg/mL、0.20mg/mL、0.30mg/mL、0.40mg/mL、0.50mg、0.60mg/mL和0.70mg/mL葡萄糖标准溶液。
2.1.3 分别取上述浓度系列的葡萄糖标准溶液各2.00mL（做两个平行），分别加入到刻度试管中，再分别加入2.0mL缓冲液94.4)和5.0mLDNS试剂。
电磁振荡3s-5s,沸水浴加热5min。
然后用自来水冷却到室温，在用水定溶液至25mL。
以标准空白为对照调零，在540min处测定吸光度A值。
以葡萄糖糖浓度为Y轴、吸光度A值为X轴，绘制标准曲线。
每次新配制DNS试剂均需要重新绘制标准曲线∙ 3. 酶样测定吸取10.0mLβ-葡聚糖溶液,37℃平衡20min。
吸取10.0经过适当稀释的酶液，37℃平衡10min。
∙吸取2.00mL经过适当稀释的酶液（已经过37℃平衡），加入到刻度试管中，再加入5mLDNS试剂，电磁振荡3s-5s。
然后加入8.0g/lβ-葡聚糖溶液2.0ml，37℃保温30min,沸水浴加热5min。
燕麦中可溶性膳食纤维（β-葡聚糖）的提取
燕麦中可溶性膳食纤维(β-葡聚糖)的提取燕麦是世界八大粮食作物之一,也是我围北方各省重要的小杂粮作物.燕麦〔oats〕不但营养价值高,而且医学研究证明,常吃燕麦有降血脂,降血糖和减少心血管疾病的作用.所以美国食品和药物管理局许可在商标或广告上宣传燕麦的降低胆固醇,预防心脏病的作用.国内外科学研究认为,燕麦的保健功能主要归功于燕麦中可溶性燕麦纤维——β-葡聚糖.它是对人体健康十分有益的—种可溶性膳食纤维(SDF), 这种可溶成分在燕麦麸中的含量远高于燕麦胚乳,在燕麦麸中为6.6%～11.3%.在去皮的燕麦粉中为3.0%～5.4%.燕麦麸中的β—葡聚糖含量在4%～10%之间,且可溶部分占65%～90%.由于目前国内对燕麦β—葡聚糖的提取研究不多.大量的燕麦麸仅作为饲料用,经济效益不高.因此积极开展对燕麦麸的深加工利用,进行β—葡聚糖的提取和研究,有着重大的现实意义和良好的应用前景.因此.如果将过去认为是废物的燕麦麸进行深加工利用,对开发保健食品或功能食品具有十分广阔的前景.1 实验方法1.1 原料的预处理1.1.1可溶性膳食纤维物质(β-葡聚糖)的富集提取燕麦中的可溶性膳食纤维或β-葡聚糖,关键是要明确β-葡聚糖位于燕麦籽粒中的部位.国外Wood and Fulcher.《燕麦,化学和工艺》中表明β-葡聚糖主要存在于胚乳细胞壁中,在次糊粉层中大量浓缩.这就说明可以对燕麦经过研磨,将富集可溶性膳食纤维物质(β-葡聚糖)的麸皮分离出来.但在除去胚乳时必须小心防止次糊粉层的胚乳细胞壁过多地随面粉分离出去.1.1.2 研磨燕麦粉燕麦→清理→研磨→燕麦麸皮用布勒试验磨粉机装置对燕麦进行研磨,制成60%的燕麦粉和40%的燕麦麸皮,麸皮中富集β-葡聚糖.1.2 燕麦麸中可溶性膳食纤维(β-葡聚糖)的提取工艺燕麦麸→粉碎→过筛(60目)→加水搅拌提取(调pH9.0,70℃)→离心收集上清液→去蛋白(搅拌下调pH至4.5并静置)→离心收集上清液→醇析(调pH至7.0,80%酒精沉淀)→离心收集沉淀,干燥→β—葡聚糖粗品提取后的物质溶于水,不溶于乙醇.故可以用乙醇进行醇析.1.3 可溶性膳食纤维的定测方法实验中使用可溶性膳食纤维的测定方法.1.4 β-葡聚糖的测定方法:50mg试样中加入1m180%酒精润湿,之后再加入20m1醋酸钠缓冲液(pH5.5),沸水浴溶解;取出后50水浴中恒温10min,加入40Uβ—葡聚糖酶反应1h;冷却到室温,定容至100m1,取0.1m1(两份),加入0.2Uβ—葡萄糖苦酶,50℃反应10min;葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖含量,推算β—葡聚糖含量,由此求得葡聚糖纯度.2 实验结果分析2.1 各因素对β—葡聚糖提取率的影响2.1.1 粉碎粒度对提取率的影响麸皮粒度对提取率有一定的影响,粒度越大,大部分β—葡聚糖尚被颗粒所包裹,不能被提取出来;但粒度太小,澄清困难,粗品中淀粉含量多,色泽不佳.故选择其粒度为40～60目.2.1.2 料水比对提取率影响根据液固萃取基本理论,增大提取液的量将有利于溶质的溶出.但过大的液固比对实际生产过程来说是没有意义的,不仅增加水的消耗及后续的浓缩成本,而且容易导致加工过程中溶质的丢失.本实验研究60℃,pH9.0,提取时间1h条件下,料水比在1:9—1:21之间提取情况.料液比1:91:121:151:20得率3.13.33.43.52.1.3 提取温度对提取率影响液固比,pH,提取时间分别固定为15,7.0,1h,研究提取温度的变化对提取率影响.温度40506070得率1.52.53.24.22.1.4 pH对提取率和色泽的影响在50℃下提取1h,液固比为15的条件下研究pH对提取率影响一般在稀碱条件下进行提取,这是由β—葡聚糖本身的碱溶性质决定的.随着pH的升高,提取率也增加,同时提取液颜色也逐渐加深.选择PH值为9.02.1.5 蛋白的去除麸皮中存在大量蛋白会造成制品纯度不高,选择等电点沉淀法去除蛋白.在搅拌下调pH至4.5并静置,用离心法去除沉淀.2.2 粗品的纯化2.2.1 淀粉的检测准确称取NSP样品0.1g,加水定容至100ml,取一滴于白瓷扳上,加碘液1滴,如碘液不显蓝色,表明样品中不含淀粉,可直接进行纯化.若碘液呈显蓝色,则表明混有淀粉,需进行纯化预处理.2.2.2 纯化的预处理由于在热水浸提过程中,随着淀粉在提取液中的糊化,导致它和多糖一起提取出来,因此有必要在制备过程中用酶法除去淀粉.淀粉的去除效果以碘液与提取液反应所产生的颜色变化作为评判标准,颜色越浅表示淀粉残余含量越低,若无颜色变化,即可认为淀粉已水解完全.将提取液用O.1mol/L Na0H调pH至5.5～6.O,于恒温水浴上加热至92℃,加lml α-淀粉酶溶液恒温酶解,并经常搅拌,酶解过程中淀粉检测,直至没有蓝色为止.二,β-葡聚糖的功能性1,β一葡聚糖降血糖功能:研究结果表明:用含5%燕麦可溶性膳食纤维饲料喂养的实验组大鼠,其血糖含量明显低于对照组,仅为对照组的68.9%.该结果与国外文献相关报道一致.该结果表明:NSP是莜麦中降低血糖的主要有效成份之一,它能使高血糖大鼠体内血糖明显降低.该结果也为阐明莜麦血糖指数最低的原因提供了有益的参考:由于莜麦中所含的NSP是富强粉的9.0倍,大量NSP的存在而使得莜麦粉的血糖指数很低oNSP降低血糖的原因可能是因为NSP的存在增加了胃内容物的粘滞性,使得胃排空延迟,从而防止了爱后血糖急剧上升,同时可镕性膳食纤维进人小肠,又使小肠内不搅水层加厚而降低了糖的吸收,因此阳P具有降低血糖的功能.2 β一葡聚糖降血脂作用β一葡聚糖对高血脂人群有明显的降低胆固醇作用. 可以用四种代谢机制来解释这一作用结果:(1)这种可溶性淀粉在肠道内与胆酸结合,使循环至肝的胆酸量减少.这样,可促使胆固醇分解胆酸,来满足内源代谢和循环的需要.只有一小部分胆固醇与胆酸结合随粪便一起排外,所以,经粪便排除并不是降低胆固醇的主要原因.(2)可溶性淀粉在肠内微生物菌丛的作用下发酵产生短链脂肪酸(SCFAs)——乙酸,丙酸和丁酸.这些SCFAs经过门静脉被吸收,通过抑制HMG—CoA(胆固醇生物分解作用的限速酶)的活力,可以阻止肝胆固醇的合成,提高LDL—C的分解作用.但是,据最新研究结果表明.只有SCFAs之丙酸有作用.(3)可溶性淀粉可以减缓胃的排空,这样可以减少由于多食引起的血中胰岛素的提高.这一作用可以减少通过HMG—COA合成肝胆固醇.(4)燕麦可溶性淀粉可提高肠道内粘度,从而抑制膳食中脂肪的吸收,其中包括胆固醇.当粘度增加后,食物含有过量的水,从而减缓了其运动速度.植物组织蛋白质提取方法方法一：1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。
灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定
《灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定》一、引言在当今社会，随着人们对健康和养生意识的提高，灵芝及其相关产品受到了广泛的关注和青睐。
作为一种珍贵的中草药，灵芝被传统中医视为“仙草”、“灵药”，被认为具有多种保健功能。
而其中的β-葡聚糖成分更是备受瞩目，被认为是灵芝功效的重要成分之一。
对灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定变得至关重要。
二、β-葡聚糖的定义和作用1. β-葡聚糖是一种多糖类聚合物，由多个葡萄糖分子通过β-1,3-葡聚糖键和β-1,6-葡聚糖键连接而成。
它存在于许多植物和真菌细胞壁中，包括灵芝。
2. 研究表明，β-葡聚糖具有调节免疫功能、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、抗病毒等作用，是灵芝保健功效的重要保障。
三、灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定方法1. 具体测定方法包括但不限于高效液相色谱法、紫外光谱法、红外光谱法、核磁共振方法等。
这些方法各有优劣，需要根据实际情况进行选择。
2. 综合考虑测定方法的准确性、灵敏度、稳定性、成本等因素，高效液相色谱法被认为是目前测定β-葡聚糖的最佳方法。
四、灵芝产品中β-葡聚糖的含量标准1. 根据《灵芝孢子粉》（GB/T 21835-2008）标准可以得知，β-葡聚糖的含量是灵芝产品质量的重要指标之一。
通常，β-葡聚糖含量越高，产品的保健功效也越明显。
2. 目前，市场上灵芝产品的β-葡聚糖含量参差不齐，对其进行准确测定有助于消费者选择高品质的产品。
五、结语通过对灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定方法和含量标准的了解，我们可以更好地认识灵芝产品，选择高质量的产品，并更好地享受灵芝的保健功效。
在未来的研究中，还需要不断完善测定方法，并建立更为科学的含量标准，以推动灵芝产品行业的健康发展。
个人观点：作为一名研究者，我认为对灵芝及其相关产品中β-葡聚糖的测定是非常重要的。
只有通过科学的手段对其进行准确测定，才能更好地保障消费者权益，促进行业良性竞争，推动灵芝产品的健康发展。
乳制品中酵母β-葡聚糖的检测方法
Quality Control乳制品中酵母β-葡聚糖的检测方法徐聪玲1，2，钟世欢1，2，张思奇1，2，黄 南1，2，杨天明1，王 辉11 浙江公正检验中心有限公司，浙江杭州 3100092 赞宇科技集团股份有限公司，浙江杭州 310009摘 要：[目的]目前国内尚无酵母β-葡聚糖在乳制品中定量检测方法的国家标准和行业标准。
本文利用离子色谱法建立快速、准确的乳制品中酵母β-葡聚糖检测方法。
[方法]样品加入沉淀剂离心后，倒去上清液，反复数次至无干扰，加入1 mol/L盐酸溶液，经121 ℃ 60 min酸水解，调节pH值稀释后，过钠柱，用离子色谱仪测定。
[结果]通过对水洗次数、色谱柱选择等因素选择优化，葡萄糖在1～20 μg/mL浓度范围内线性关系良好，相关系数R2>0.999，方法检出限为5 mg/100 g，定量限为15 mg/100 g；葡萄糖的回收率为84.8%～94.9%，相对标准偏差为2.34%（n=6）。
[结论]该方法稳定，定量准确，适用于乳制品中酵母β-葡聚糖含量的检测。
关键字：酵母β-葡聚糖；离子色谱仪；乳制品；葡萄糖文章编号：1671-4393（2023）07-0094-05 DOI:10.12377/1671-4393.23.07.180 引言酵母β-葡聚糖具有增强动物免疫力、抗肿瘤、抗感染、降低胆固醇、促进伤口愈合等功能，2010年5月20号，被原卫生部批准为新资源食品，可添加到乳制品、功能饮料、焙烤制品、糖果等食品中；2012年使用范围再次扩大至较大婴儿配方乳粉。
此外，酵母β-葡聚糖还具有脂肪样口感，可作为低卡路里食品添加剂，在色拉调料、奶酪类似物等冷冻甜点中作为脂肪替代物使用，具有广泛的应用价值，国内已有乳品企业将其作为营养强化剂添加在产品中。
但国内目前没有酵母β-葡聚糖在乳制品中定量检测方法的国家标准和行业标准，因此，本文利用酵母β-葡聚糖是一种无味无臭不溶于水的多糖，且不溶于乙醇、丙酮等有机溶剂，可与蛋白、基金项目：浙江省基础公益研究计划（LGN19B05003）作者简介：徐聪玲（1990-），女，黑龙江讷河人，大专，工程师，研究方向为食品机械与管理； 钟世欢（1992-），女，浙江杭州人，本科，工程师，研究方向为食品检测；张思奇（1995-），男，甘肃礼县人，本科，助理工程师，研究方向为食品检测；黄 南（1986-），女，浙江杭州人，本科，工程师，研究方向为食品检测；杨天明（1990-），男，浙江杭州人，本科，工程师，研究方向为食品检测；王 辉（1985-），男，浙江杭州人，大专，工程师，研究方向为食品检测。
β-1,3-葡聚糖含量测定方法
β-1,3-葡聚糖含量测定方法
β-1,3-葡聚糖（也称为1,3-β-D-葡聚糖或胞外多糖）是一种可溶性聚糖，常用于农业、食品和医药工业。
测定β-1,3-葡聚糖的含量可以通过以下方法之一实现：
1. 紫外可见光谱测定：将葡聚糖溶液经稀酸或酶处理后，通过
测定其在特定波长下的吸收光强度来确定其浓度。
这种方法对于测定
高浓度的β-1,3-葡聚糖样品较为简便。
2. 蒸发法：将葡聚糖溶液加热至葡聚糖变为糊状物，并将其继
续加热蒸发至干燥。
然后称量得到的干燥物的质量，通过质量差来计
算葡聚糖的含量。
这种方法对于测定低浓度的β-1,3-葡聚糖样品较为适用。
3. 原子吸收光谱法：通过将葡聚糖溶解后，在特定条件下使用
原子吸收光谱仪测定其特定金属离子沉淀物的质量，从而计算出含量。
这种方法对于含有特定金属离子的葡聚糖样品测定较为准确。
β-葡聚糖的测定
ß-葡聚糖含量的测定一、原理刚果红与ß-葡聚糖形成有色物质，当反应条件（如pH、缓冲液离子强度、刚果红试剂浓度）一定时，在ß-葡聚糖溶液中ß-葡聚糖含量的增加而增加，符合比尔定律。
二、试验材料1、仪器721分光光度计、恒温水浴锅、pH计。
2、试剂及溶液配制（1）ß-葡聚糖标样备用液：称取ß-葡聚糖0.005g，先用少量无水乙醇湿润后转移到50mL容量瓶中，再加入少量蒸馏水于70℃水浴中助溶，冷却后定容至50mL，摇匀备用。
（2）0.1MpH8.0磷酸缓冲液A液：称取 Na2HPO4.H20 14.196克溶解于蒸馏水中并定容至1升。
B液：称取 NaH2PO4.H20 1.560克溶解于蒸馏水中并定容至100毫升。
用B液调节A液至pH8.0。
（3）100mg/L刚果红溶液：称取100mg刚果红溶解至1000mLpH8.0磷酸缓冲液中。
三、测定步骤1、ß-葡聚糖标准曲线的绘制上述各试管中依次加4.0毫升刚果红（加入时开始准确计时），于20℃水浴中准确反应10分钟，550nm比色，以0号管中的液体作空白调零测吸光度A，以ß-葡聚糖浓度C为横坐标，吸光度A为纵坐标绘制标准曲线，在曲线上求吸光度为1时相当的ß-葡聚糖微克数（即K值）。
2、样品的制备及稀释普通麦汁：稀释10倍或20倍待测。
协定麦汁：稀释10倍或20倍待测。
啤酒：稀释10倍或20倍待测。
3、样品的测定将稀释好的样品各2.0毫升分别加入4.0毫升刚果红准确计时，20℃水浴中准确反应10分钟，以2.0毫升蒸馏水代替样品作空白调零，测反应液的吸光度A。
4、计算样品的ß-葡聚糖（mg/L）=(K/2)×吸光度A×稀释倍数n5.麦芽样品的测定按协定法制得协定麦汁，测麦汁的ß-葡聚糖含量X（mg/100mL），再根据麦芽的水份W、麦汁浸出物含量G、麦汁比重D计算麦芽的ß-葡聚糖的含量。
风味物质的测定方法β-葡聚糖的测...
啤酒中风味物质的测定方法β-葡聚糖的测定TBA（硫代巴比妥酸）法测定啤酒中羰基化合物RSV（风味保鲜值）EBC法测定啤酒中的总多酚二氧化硫的测定1 β-葡聚糖的测定1.1 原理刚果红在一定条件下与β-葡聚糖反应具有高度的专一性，并形成有色物质，β-葡聚糖在适当的范围内，吸光度的变化与β-葡聚糖的浓度成正比。
1.2 实验材料1.2.1 仪器分光光度计、恒温水浴锅1.2.2 试剂(1)、β-葡聚糖标准溶液：准确称取β-葡聚糖（sigma公司）0.0010克，加入少量的蒸馏水70℃水浴助溶，冷却至室温后，定容至10ml，配成0.1mg/ml溶液，冰箱保存。
（2）、0.2M PH8.0的磷酸缓冲溶液：取0.2mol/L Na2HPO4.12H2O（71.64g/L）947ml，0.2mol/L NaH2PO4.2H2O（31.21g/L）53ml。
（3）、刚果红溶液：100mg刚果红试剂溶于0.2M的PH8.0的磷酸缓冲溶液，定容至1L。
1.3 实验方法1.3.1 标准曲线的绘制取6组试管，除0号为1支外，其余均为3支平行管。
按下表1将标准β-葡聚糖溶液进行稀释。
以上各管中，分别加入4.0ml刚果红溶液摇匀，20℃下准确作用10分钟，用1.0cm 的比色皿，于550nm波长下测定吸光度，以0号管中反应液作空白调零。
以β-葡聚糖含量为横坐标，吸光值A为纵坐标，绘制标准曲线。
麦汁或除气啤酒，稀释20倍。
取稀释液2.0ml+4.0ml刚果红溶液摇匀，20℃，反应10分钟，550nm比色，以2.0ml 蒸馏水代替样品稀释液20℃、10分钟做空白调零，测样品反应液的吸光值，根据标准曲线可查得反应液的β-葡聚糖含量。
样品中β-葡聚糖含量（ppm）=A×20A：根据标准曲线查得反应液的β-葡聚糖含量20：稀释倍数1.4注意事项(1)刚果红的配制一定要准确，否则直接影响到结果的准确性。
(2)β-葡聚糖的配制要用标准药品，注意密封保存，在冰箱中放置。
β-葡聚糖测定方法
β-葡聚糖测定方法(总4页) -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除6.2 交联β-葡聚糖含量测定 AACC 32-236.2.1实验目的在大麦、麦芽、麦芽汁和啤酒产品质量控制中经常需要测定其中的β-葡聚糖含量，Megazyme方法很好的解决了测定中的系列问题，本方法能够在一天内测定50-100个样品。
本方法现在也适用于燕麦产品及燕麦纤维产品β-葡聚糖含量测定。
6.2.2实验原理样品水化后加入真菌多糖酶在pH6.5缓冲液中培养，提取液离心（或过滤）后加入β-葡萄糖苷酶，在葡糖糖氧化－过氧化酶缓冲液保护下产生葡萄糖。
图6.1 葡聚糖测定原理示意图Megazyme测试包：（可以测定100个样品）⑴全套测定方法；⑵真菌多糖酶；⑶β-葡萄糖苷酶；⑷葡糖糖标准液；⑸大麦和燕麦纤维标准样品。
6.2.3实验试剂：⑴真菌淀粉酶（bottle 1）〔（1-3）（1-4）β-D-葡萄糖4-葡聚糖水解酶〕：（活力>1000U/mL）制备：1.0mL真菌淀粉酶用20mM NaH2PO4缓冲液（pH6.5）稀释至20.0mL。
将溶液分装成5.0mL在冰箱中冷冻保存。
最终真菌淀粉酶浓度50U/mL。
⑵β-葡萄糖苷酶（bottle 2）：（活力>40U/mL）制备：将1.0mLβ-葡萄糖苷酶用50.0mM醋酸钠缓冲液（pH4.0）稀释至20.0mL。
将溶液分装成5.0mL在冰箱中冷冻保存。
最终β-葡萄糖苷酶浓度2U/mL。
⑶葡糖糖标准液：100μg⁄0.1mL，用0.2%叠氮化钠溶液溶解。
⑷大麦标准样品：含量见标签。
⑸燕麦纤维标准样品：含量见标签。
⑹NaH2PO4缓冲液制备（20mM，pH6.5）：3.12g NaH2PO4－2H2O溶解于900ml蒸馏水中，用100mM氢氧化钠溶液（4g/L）将pH值调至6.5（大约需50mL），加0.2g叠氮化钠，将溶液定容至1L。
葡聚糖酶酶活测定
八、Beta—葡聚糖酶活力的测定方法1 方法：3，5—二硝基水杨酸比色法，简称DNS法。
2 原理：还原糖能将3，5—二硝基水杨酸分子中的硝基还原成橙黄色的3—胺基5—硝基水杨酸。
溶液橙黄色强度与还原糖量成正比。
3. 主要仪器和设备天平（感量1mg和0.1mg两种），离心机，恒温水浴锅，磁力搅拌器,分光光度计（722型，符合GB9721的有关规定）。
4. 试剂和溶液4.1 所用水除特别要求外,均为符合GB/6682—1992规定的三级水, 化学药品除特别要求外,均为分析纯。
4.2 DNS试剂称取3，5—二硝基水杨酸10g加入500 ml水中，分多次加入氢氧化钠16g，搅拌溶解(温度＜45℃)，再分多次加入酒石酸钾钠300g，搅拌至全溶，冷却后用水定容至1000ml。
室温下棕色瓶储存暗处放置，一周后使用(如有沉淀过滤后使用)。
4.3 0.1mol/L，pH5.0醋酸—醋酸钠缓冲液吸取冰醋酸1.8ml于烧杯中,加适量水，加醋酸钠5.78g，溶解, 定容至1000ml，调节PH至5.00±0.01后使用。
室温下存放2个月有效。
4.4 0.1%即1mg/ml葡萄糖溶液无水葡萄糖于80℃烘至恒重，称取0.1000g于烧杯中,加适量水溶解,转入容量瓶中并定容至100ml。
4.5 0.5%β—葡聚糖溶液称取β—葡聚糖0.50g于烧杯中,加入适量缓冲液，在沸水浴中搅拌加热溶解后，转入容量瓶中,用缓冲液(4.3)定容至100 ml,置2—8℃冰箱中备用。
有效期三天。
4.6 葡萄糖标准曲线的绘制吸取1mg/ml无水葡萄糖溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml于试管中，补水至2ml，加DNS试剂3ml，混合后于沸水中煮10min,冷却后定容至15ml,于分光光度计540nm波长下测吸光度（A）。
以吸光度为纵坐标，葡萄糖量为横坐标,绘制标准曲线,三次重复试验的均值用最小二乘法拟合一元线性方程y＝ax﹢b,求出吸光度与葡萄糖量的关系。
葡聚糖检测方法
葡聚糖检测方法（试剂盒方法翻译）一．提供试剂瓶1：exo-1,3-β-Glucanase (100 U/mL) plus β-Glucosidase(20 U/mL) suspension, 2.0 mL瓶2：Amyloglucosidase (1630 U/mL) plus invertase(500 U/mL) solution in 50 % v/v glycerol, 20 mL瓶3：GOPOD Reagent Buffer. Buffer (48 mL,pH 7.4), p-hydroxybenzoic acid and sodium azide(0.4 % w/v).瓶4：GOPOD Reagent Enzymes. Glucose oxidaseplus peroxidase and 4-aminoantipyrine. Freeze-dried powder.瓶5：D-Glucose standard solution (5 mL, 1.00 mg/mL) in0.2 % w/v benzoic acid瓶6：Contr ol yeast β-glucan preparation ( 2 g, β-glucan content stated on the bottle label).二．提供试剂的处理1.向瓶1中加入8ml醋酸钠缓冲液，分装-20℃存放。
2.直接使用瓶2中的试剂，稳定在4°C ~ 2年或者-20°C > 4年。
3.将瓶3的GOPOD试剂用纯化稀释水定容到1L，稳定在4°C >2年。
4.将瓶4的GOPOD试剂用纯化稀释水定容到1L，黑暗环境存放，稳定在4 °C 2 - 3个月,在-20°C或> 12个月。
5.直接使用瓶5中的试剂，在室温下稳定> 4年。
6.直接使用瓶6中的试剂，在室温下稳定> 5年。
β-1,3-葡聚糖酶活性的测定
β-1，3-葡聚糖酶活性的测定在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成β-1，3-葡聚糖酶。
该酶水解昆布多糖，内切β-1，3-葡萄糖苷键，产生还原末端。
可通过测定还原糖表示酶活力。
1.仪器设备恒温水浴、分光光度计、研钵、高速冷冻离心机、透析袋等。
2.操作方法1)试剂配制①铜试剂：称取12g酒石酸钾钠（NaKC4H4O3·4H2O），24g无水碳酸钠，16g碳酸氢钠，分别溶于200ml蒸馏水中后混匀。
另称硫酸铜4g（CuSO4·5H2O）溶于200ml蒸馏水，缓缓加入并搅拌到上述混合液中。
再称取无水硫酸钠180g，溶于其中，置沸水浴20min，冷却后过滤，最后定容至1000ml备用。
此液易出现结晶，应保存在20℃以上。
②砷钼酸试剂：25g钼酸铵[（NH4）6Mo7O24·4H2O]溶于450ml蒸馏水，加入22ml浓H2SO4，充分混匀。
另称取3g砷酸氢二钠（Na2HAsO4·7H2O），溶于25ml蒸馏水后，与上述钼酸铵溶液混合，37℃保温24~48h，贮于棕色瓶备用。
2）标准还原糖测定：将500μg/ml的葡萄糖溶液准确稀释至150μg/ml，用此再稀释成数种不同浓度的葡萄糖溶液。
然后取几支干净试管，分别加入不同浓度的葡萄糖溶液0.5ml，并加0.5ml铜试剂，置沸水浴10min后，自来水冷却。
加入0.5ml砷钼酸试剂，混匀，再加入3.5ml蒸馏水，于分光光度计660nm处测定光密度，并作光密度-还原糖浓度标准曲线。
3）酶蛋白的提取和活力测定①酶蛋白的提取：将植物材料加5倍量0.05mol/L的乙酸钠缓冲液（pH5.0），充分研磨，于15000×g 离心15min后，将上清液置透析袋中，用提取液在4℃下透析过夜。
经离心取上清液，放于冰箱备用。
②酶活力的测定：取0.4ml的1mg/ml昆布多糖（Sigma公司，溶于上述乙酸缓冲液），加入0.1 ml酶液，于37℃保温15min，立即加入0.5ml铜试剂，混匀，并于100℃水浴10min，置冷水中冷却，再加入0.5ml砷钼酸试剂，呈现蓝色后加蒸馏水3.5ml，660nm处比色，对照标准曲线求出样品液中的还原糖量。
真菌(1-3)-β-D葡聚糖检测操作SOP文件
真菌（1-3）-β-D葡聚糖测定规范操作1.目的建立真菌（1-3）-β-D葡聚糖检测标准操作规范，保证实验结果的准确性。
2.授权操作人经培训合格的微生物实验室检验人员。
3.实验原理（1-3）-β-D葡聚糖检测原理：真菌（1-3）-β-D葡聚糖激活酶反应主剂中的G因子后形成凝固蛋白，根据其所引起的浊度变化对真菌（1-3）-β-D葡聚糖浓度进行定量测定。
4．产品性能指标4.1 灵敏度10pg/ml4.2 精密度批间CV≤10% 。
4.3 准确性回收率75-125%。
4.4 标准曲线相关系数r绝对值≥0.9805．实验组成5.1实验仪器及器具：MB-80微生物快速动态检测系统、洁净工作台、低速离心机、恒温仪，20~200µl加样器、100~1000µl加样器、旋涡混合器、定时器。
5.2实验耗材：200µl无热原吸头、1000µl无热原吸头、无热原平底试管、无热原真空采血管。
5.3试剂盒组成：真菌（1-3）-β-D 葡聚糖检测试剂盒（光度法）：试剂盒包括反应主剂和样品处理液。
6．工作环境相对湿度：20%~80%；温度控制：10~30℃；电源电压：220V±10%，50Hz±2%。
7．标本采集及保存7. 1检测样本：血液、脑脊液、胸腹水、肺泡灌洗液等。
7.2采集要求：采样过程要求无菌操作，用专用的无热原真空采血管（肝素类抗凝）。
常规病人早上用药治疗前采血/取样（血透患者透析前采血）。
7.3样本保存：样本采集后应在3000转/分进行离心，若不能及时检测，应将血浆转移至无热原转移管内，在-20℃冰箱中冷冻保存，一周内使用。
8．操作程序8.1 打开MB-80微生物快速动态检测系统主机、电脑及恒温仪预热30min。
8.2 打开MB-80微生物快速动态检测系统软件，录入病人信息、样本种类及检测项目等信息后点击采集。
8.3 血液前处理过程，无菌操作，用专用无热原真空采血管（肝素类抗凝）抽取静脉血4ml轻轻混匀，按转速3000r/min进行离心1分钟，得到富含血小板血浆。
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6.2 交联β-葡聚糖含量测定 AACC 32-23
6.2.1实验目的
在大麦、麦芽、麦芽汁和啤酒产品质量控制中经常需要测定其中的β-葡聚糖含量，Megazyme方法很好的解决了测定中的系列问题，本方法能够在一天内测定50-100个样品。
本方法现在也适用于燕麦产品及燕麦纤维产品β-葡聚糖含量测定。
6.2.2实验原理
样品水化后加入真菌多糖酶在pH6.5缓冲液中培养，提取液离心（或过滤）后加入β-葡萄糖苷酶，在葡糖糖氧化－过氧化酶缓冲液保护下产生葡萄糖。
图6.1 葡聚糖测定原理示意图
Megazyme测试包：（可以测定100个样品）
⑴全套测定方法；⑵真菌多糖酶；⑶β-葡萄糖苷酶；⑷葡糖糖标准液；⑸大麦和燕麦纤维标准样品。
6.2.3实验试剂：
⑴真菌淀粉酶（bottle 1）〔（1-3）（1-4）β-D-葡萄糖4-葡聚糖水解酶〕：（活力>1000U/mL）
制备：1.0mL真菌淀粉酶用20mM NaH2PO4缓冲液（pH6.5）稀释至20.0mL。
将溶液分装成5.0mL在冰箱中冷冻保存。
最终真菌淀粉酶浓度50U/mL。
⑵β-葡萄糖苷酶（bottle 2）：（活力>40U/mL）
制备：将 1.0mLβ-葡萄糖苷酶用50.0mM醋酸钠缓冲液（pH4.0）稀释至20.0mL。
将溶液分装成5.0mL在冰箱中冷冻保存。
最终β-葡萄糖苷酶浓度2U/mL。
⑶葡糖糖标准液：100μg⁄0.1mL，用0.2%叠氮化钠溶液溶解。
⑷大麦标准样品：含量见标签。
⑸燕麦纤维标准样品：含量见标签。
⑹NaH2PO4缓冲液制备（20mM，pH6.5）：3.12g NaH2PO4－2H2O溶解于900ml蒸馏水中，用100mM氢氧化钠溶液（4g/L）将pH值调至6.5（大约需50mL），加0.2g叠氮化钠，将溶液定容至1L。
4℃保存。
⑺醋酸钠缓冲液（50mM，pH4.0）：饱和醋酸（2.9mL）加入900mL蒸馏水，用1M氢氧化钠调节pH值至4.0，加0.2g叠氮化钠，将溶液定容至1L，4℃保存。
⑻葡萄糖氧化－过氧化酶缓冲液：建议使用Megazyme测试包里的高纯度葡萄糖氧化溶液和葡糖糖过氧化酶。
将测试包的葡萄糖工作液（bottle 3）（50mL）稀释至1L。
把测试包中的葡萄糖测定液（bottle 4）用1L葡萄糖工作液溶解（简称GOPOD）。
为了保证GOPOD溶液的稳定性，应该在低温条件下在棕色瓶中避光保持。
测定过程中从冰箱中取出的凉的GOPOD溶液可以直接加入测定管。
葡萄糖工作液包括：CaHPO4－2H2O（136.0g），NaOH （42.0g），酸（30.0g），叠氮化钠（4.0g）。
6.2.4仪器需求：
⑴聚丙烯具塞试管（35mL）；
⑵移液器：量程分别为100μL，200μL，5.0mL（用于Na2HPO4缓冲液和葡萄糖氧化－过氧化酶缓冲液），25mL（用蒸馏水）。
⑶顶载天平：1/1000g。
⑷漩涡混合器；
⑸分光光度计：510nm。
⑹水浴锅：40℃和100℃水浴锅各一个。
⑺秒表：一只。
⑻离心机：离心力100g。
⑼试验粉碎机：细度0.5mm。
6.2.5测定步骤：
⑴将燕麦用试验粉碎机粉碎成细度0.5mm的颗粒。
⑵仔细称量燕麦粉样品（0.5g左右），放入35mL聚丙烯具塞试管。
样品需要已知水分含量，以便最后转为干基。
⑶向试管中加入1.0mL 50%（v/v）的乙醇溶液，使样品充分润湿。
⑷加入5.0mL NaH2PO4缓冲液（20mM，pH6.5），在漩涡混合器上充分混合。
⑸将试管放入100℃水浴锅中保温5min 。
每隔0.5min 取出快速在漩涡混合器上混合。
前2.0min 加热及混合效果对于结果影响较大。
⑹将试管在室温下降至40℃，向每个试管加入0.2mL 真菌淀粉酶（10U ）。
试管加盖，震荡混匀，放入40℃水浴锅中保温1h 。
每隔10min 将样品在漩涡混合器上混合。
⑺向每个试管加入24mL 蒸馏水，将溶液体积调整为30mL 。
⑻将试管放入离心机中，在1000g 离心力下离心10min 。
⑼用移液枪移取0.1mL 样品液，分别放入3个玻璃试管。
一个玻璃试管作对照，另外两个为代测样品。
⑽按如图6.1所示加入试剂。
黑色方框为比色杯。
一次可以同时完成11个样品的测试。
⑾将玻璃试管放入40℃水浴锅中保温15min 。
⑿向每支试管加入3.0mL GOPOD 溶液，在40℃水浴锅中保温20min 。
⒀将试管中液体转入1.0cm 比色杯，在510nm 测定吸光度。
1h 内完成测定。
⒁计算β-葡聚糖含量：
样品干重＝样品重量×（100-水分含量）/100
β-葡聚糖含量（％ w/w ）＝吸光度×F ×300×（1/1000）×（100/W ）×（162/180）
＝吸光度×（F/W ）×27
F ＝100/葡糖糖标准溶液吸光度；
300为体积校正系数；
162/180为将游离葡萄糖转化为脱水葡萄糖；
W ＝样品干重；
图6.2 葡聚糖测定试剂及样品添加示意图。