油脂丙二醛的测定方法

广东恒兴饲料实业股份有限公司

油脂丙二醛的测定方法

1原理

油脂受光、热、空气中氧的作用，发生酸败反应，分解出醛、酸之类的化合物。丙二醛就是分解产物的一种，它能与TBA（硫代巴比妥酸）作用生成粉红色化合物，在532nm波长处有吸收高峰，利用此性质即能测出丙二醛含量，从而推导出油脂酸败的程度。

2仪器设备

2.1离心机

2.2水浴锅

2.3分光光度计

2.4比色管：25mL

2.5带盖三角瓶：250mL

2.6移液管：10mL、25mL

2.7刻度吸管：5mL、10mL

2.8滤纸：直径15cm

3试剂与溶液

3.1TBA（硫代巴比妥酸）；

3.2三氯乙酸：分析纯；

3.3氯仿：分析纯；

3.41，1，3，3－四乙氧基丙烷

3.5乙醚：分析纯；

3.6乙二胺四乙酸二钠（EDTA）：分析纯；

3.7TBA水溶液：准确称取0.288g溶于水中，并称至100mL（如TBA不易溶解，可加热至全溶澄清，然后稀释至100mL），相当于0.02M；

3.8三氯乙酸混合液：准确称取三氯乙酸7.5g及0.1g EDTA，用水溶解，稀释至100mL；

3.9丙二醛标准溶液：称取0.315g,1,1,3,3-四乙氧基丙烷，溶解后稀释至1000mL,此溶液每mL相当于丙二醛10µg，备用。

注：如没有移液枪，需稀释标准液为1µg。

4操作步骤

4.1标准曲线的绘制

准确吸取每mL相当于丙二醛10µg的标准溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4

0.5、0.6mL置于纳氏比色管中（准确吸取每mL相当于丙二醛1µg的标准溶液0、

1、2、3、4、5、6mL），加水至总体积为5mL，加入5mLTBA溶液，然后按样品测定步骤进行，用蒸馏水定容至刻度，测得光密度绘制标准曲线。

4.2油脂样品测定

4.2.1准确称取融化均匀的油脂样品2－3g，置于100mL有盖三角瓶内；

4.2.2加入25mL三氯乙酸混合液；

4.2.3振摇30min（保持油脂融溶状态，如冷结即在70℃水浴上略加热使之融化后继续振摇）；

4.2.4用四层滤纸过滤，除去油脂。

4.2.5准确移取上述滤液10mL置于25mL比色管内；

4.2.6加入10mLTBA溶液，混匀；

4.2.7加塞，置于90℃水浴内保温40min；

4.2.8从水浴中取出，冷却1h；

4.2.9加入5mL氯仿，摇匀；

4.2.10将上清液倒入离心管中，转速4000r/min离心5min（如无离心机，此步骤可改为上清液倾入25mL纳氏比色管中，摇匀，静置，分层）；

4.2.11吸出上清液于532nm波长比色，对照标准曲线得到微克数（同时作空白试验）。

4.3非油脂样品测定

4.3.1称取9－10g样品，按粗脂肪测定方法先将样品中油脂分离出来（浸泡2 h，洗脱3.5h）；

4.3.2用乙醚将分离出来的脂肪溶解转移至100mL有盖的三角瓶内；

4.3.3将三角瓶置于55－60℃水浴上将乙醚蒸干；

4.3.4剩下步骤同4.2.2－4.2.11。5计算

5.1油脂样品丙二醛含量计算

油脂样品丙二醛（MDA）含量（mg/kg）＝

m

C

m

V

V

V

CV50

)

(

1

2

1

⨯

=

+

油脂样品TBA(A

532/kg)=1

2

1

532

1000

)

(

mV

V

V

V

A⨯

⨯

+

⨯

=m

A50000

532

⨯

式中：C——从标准曲线查得丙二醛的微克数(mL)；

V——样品质量(g)；

V

1——

所加入的三氯乙酸混合液的体积(mL)；

V

2——

所加入TBA溶液的体积(mL)。

5.2非油脂样品丙二醛含量计算

样品中丙二醛（MDA）含量（mg/kg）＝

m

C

m

V

V

V

CV50

)

(

1

2

1

⨯

=

+

；

样品中TBA含量(A

532/kg)＝1

2

1

532

1000

)

(

mV

V

V

V

A⨯

⨯

+

⨯

＝m

A50000

532

⨯

；

油丙二醛（MDA）含量（mg/kg）＝样品粗脂脂百分含量

样品中丙二醛含量

油TBA(A

532/kg)＝样品粗脂脂百分含量

含量

样品中TBA

式中：C——从标准曲线查得丙二醛的微克数(µg)；

m——样品质量(g)；

V——所加入的三氯乙酸混合液的体积(mL)；

V

1——

所得到过滤后澄清液体的体积(mL)；

V

2——

所加入TBA溶液的体积(mL)。