液相色谱柱选择
高效液相色谱的色谱柱选择与优化
高效液相色谱的色谱柱选择与优化高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于化学、生物、药物等多个领域。
在HPLC中，色谱柱的选择和优化是至关重要的一步，它直接影响到分析结果的准确性和分离效果的好坏。
本文将探讨HPLC色谱柱选择与优化的相关问题。
一、色谱柱选择的基本原则在选择HPLC色谱柱时，需要考虑以下几个基本原则：1. 样品特性：首先要考虑待分离的样品特性，包括其化学性质、分子量、溶解度等。
不同的样品可能需要不同类型的色谱柱，如反相色谱柱、离子交换色谱柱、手性色谱柱等。
2. 分离效果：色谱柱的分离效果是选择的关键因素之一。
分离效果好的色谱柱能够提供较高的分离度和较好的峰形，从而使得分析结果更加准确可靠。
3. 色谱柱品牌和质量：选择知名品牌和质量可靠的色谱柱是保证分析结果准确性的重要保障。
品牌和质量好的色谱柱通常具有较好的稳定性和耐用性，能够提供稳定的分离效果。
二、色谱柱优化的方法和技巧除了选择合适的色谱柱，还可以通过优化色谱条件来改善分离效果。
以下是一些常用的色谱柱优化方法和技巧：1. 流动相的优化：流动相的选择和组成对于分离效果有着重要影响。
可以通过调整流动相的pH值、浓度、添加剂等来改善峰形和分离度。
此外，还可以尝试使用梯度洗脱法，即在分离过程中逐渐改变流动相的组成，以提高分离效果。
2. 温度的优化：温度对于色谱柱的分离效果也有一定影响。
在某些情况下，调整温度可以改善分离度和峰形。
一般来说，提高温度可以加快分离速度，但也可能导致峰形变宽。
因此，在优化温度时需要综合考虑分离效果和分析时间的平衡。
3. 流速的优化：流速是影响分离效果的重要因素之一。
过高的流速可能导致峰形变宽、分离度下降，而过低的流速则会延长分析时间。
因此，需要根据样品特性和分析要求选择合适的流速。
4. 注射量的优化：注射量的大小也会对分离效果产生影响。
hplc色谱柱的选择
hplc色谱柱的选择
高效液相色谱（ HPLC）是一种广泛应用于分析化学领域的分离技术。
在（HPLC（分析中，色谱柱的选择是至关重要的，因为它直接影响分离效果和分析结果的准确性。
下面是一些选择（HPLC（色谱柱的要点：
1.（色谱柱类型：HPLC（色谱柱主要分为反相柱、正相柱和离子交换柱等类型。
根据待分析物的性质选择合适的色谱柱类型，例如，对于非极性化合物，通常选择反相柱；对于极性化合物，正相柱可能更合适。
2.（填料粒度：填料粒度越小，分离效率越高，但柱压也会相应增加。
一般来说，分析小分子化合物时选择细粒度填料，分析大分子化合物时选择粗粒度填料。
3.（柱子长度：柱子长度越长，分离效果越好，但分析时间也会延长。
根据分离要求和分析时间的限制选择合适的柱子长度。
4.（柱子内径：柱子内径越小，柱效越高，但柱压也会相应增加。
一般来说，分析小分子化合物时选择细内径柱子，分析大分子化合物时选择粗内径柱子。
5.（固定相：选择合适的固定相可以提高分离效果。
根据待分析物的性质选择合适的固定相，例如，对于非极性化合物，可以选择（C18（固
定相；对于极性化合物，可以选择硅胶固定相。
6.（品牌和价格：不同品牌的色谱柱质量和价格可能存在差异。
在选择色谱柱时，可以参考其他用户的评价和经验，选择性价比较高的产品。
在选择（HPLC（色谱柱时，需要综合考虑待分析物的性质、分离要求、分析时间和成本等因素。
如果对色谱柱的选择有疑问，可以咨询专业的色谱柱供应商或实验室技术人员。
液相色谱柱的选择与使用
液相色谱柱的选择与使用
目录 一、液相色谱柱的选择 1、 分离模式的选择 2、 C-18柱的性能影响因素 3、 保留值与pH的关系 二、液相色谱柱的安装 1 、液相色谱柱的结构 2、 色谱柱的安装 三、液相色谱柱的使用 1 、样品的前处理 2 、流动相的配制 3、 色谱柱的平衡 4、 流动相流速的选择 四、 分析条件调整的影响 五、液相色谱柱的维护
• 可电离的组份的分离可能会随pH变化发生显著变化 —甚至很小的 0.05–0.25 个pH变化单位.
保留值与pH的关系
pH变化： 0.2个pH(7.0~7.2) 保留时间改变： 1.2分钟 (13.6~14.8分钟)
保留时间随pH 改变不明显
保留时间随pH改变 不明显(酸性环境中)
保留时间
保留值与pH的关系
•碳覆盖率 •封端
•硅胶纯度 •色谱柱尺寸 •颗粒形状 •粒径 •表面积 •孔径
C-18柱的性能影响因素：色谱柱物理性质
硅胶纯度 • 填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度
色谱柱尺寸 • 填料床的长度和内径
颗粒形状 • 球型或不规则型
粒径 • 平均颗粒直径, 通常3-10µm
表面积 • 颗粒外表面和内部孔表面的总和, 以m2/gram表示
封端 • 键合步骤之后, 用短链将裸露的硅羟基键
合后封闭起来
C-18柱的性能影响因素：键合类型
CH3
键合类型对色谱分离的影响 ： O Si
单齿键合：
CH3
OSi
CH3
提高传质速率, 加快色谱柱平衡
O Si CH3
CH3
OSi
CH 3
双齿键合：
O Si
增加色谱柱稳定性, 增加色谱柱的载
液相层析法中色谱柱选择与操作技巧
液相层析法中色谱柱选择与操作技巧液相层析法（Liquid Chromatography，LC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。
在液相层析实验中，选择合适的色谱柱和掌握操作技巧是非常重要的，本文将探讨液相层析法中色谱柱选择与操作技巧的相关内容。
一、色谱柱的选择1. 相性选择在选择色谱柱时，相性是首要考虑因素之一。
色谱柱的相性应与待分离的化合物相匹配，以保证分离效果。
对于极性化合物，可以选择正相色谱柱，如C18柱；对于非极性化合物，可以选择反相色谱柱，如C8柱。
此外，还有其他特殊相性的色谱柱，如糖酒石酸柱、氨基酸柱等，可以根据需要进行选择。
2. 尺寸选择色谱柱的尺寸也是需要考虑的因素之一。
常见的色谱柱直径有2.1 mm、4.6mm等，长度一般为150-250 mm。
选择合适的柱尺寸可以提高分离效果和样品通量，同时也会影响分离时间和分辨率。
对于复杂的样品，可以选择细柱，如2.1mm×50 mm，以提高峰形和分辨率；对于样品量较大的情况，可以选择大柱径，如4.6 mm×250 mm，以增加样品通量。
3. 粒径选择色谱柱的粒径也是一个重要的选择因素。
粒径是指填充在柱中的固定相颗粒的直径，常见的有3 μm、5 μm、10 μm等。
粒径越小，表面积越大，分离效果越好，但也会带来较高的压力和较长的分离时间。
一般而言，对于常见的分析要求，5μm的粒径已足够满足分离要求；对于更高的分离要求，可以选择更小的粒径。
需要注意的是，选择不同粒径的柱时，需调整相应的操作参数，以保证分离效果。
二、色谱柱的操作技巧1. 前处理样品在液相层析实验中，样品前处理是一个非常关键的步骤。
样品中的杂质和干扰物会对分离效果产生不利影响，因此需要进行适当的前处理。
常见的前处理方法包括：固相萃取（Solid Phase Extraction，SPE）、液液萃取等。
前处理的目的是提取和富集分析物或去除干扰物，以提高检测灵敏度和分离效果。
液相色谱柱的选择和方法开发
液相色谱柱的选择和方法开发液相色谱（HPLC）是一种高效、准确和灵敏的分离和分析技术，在许多领域中具有广泛的应用。
液相色谱柱的选择和方法开发是HPLC分析中的关键步骤之一，它们直接影响到分离效果和分析结果的准确性和可靠性。
本文将详细介绍液相色谱柱的选择和方法开发的相关内容，并提供一些建议和注意事项。
一、液相色谱柱的选择1.分子排阻柱（SEC）：适用于分离和分析高分子物质，如蛋白质、多肽、聚合物等。
根据目标物分子量的大小选择不同的分子排阻柱。
2.反相柱（RP）：适用于分离和分析非极性、低极性化合物。
常用的反相柱有C18、C8、C4等，根据目标物的亲疏水性选择不同的柱材和碳链长度。
3.离子交换柱（IEC）：适用于分离和分析离子化合物，如酸、碱、金属离子等。
根据目标物的离子性质选择阴离子交换柱或阳离子交换柱。
4.亲合性柱：适用于分离和分析具有特定亲和性的目标物，如抗体、酶、细胞等。
常用的亲合性柱有亲和色谱柱、亲和半制备色谱柱等。
二、方法开发方法开发是指在具体的分析目标下，通过调整柱材、流动相、柱温、检测器等参数，寻找出最佳的分离条件和分析方法。
方法开发的过程中，需要进行实验设计、参数调整和结果评估等步骤。
1.实验设计：按照试验的目的和要求，设计合理的实验方案。
包括选择柱材、柱尺寸、流动相、梯度条件、柱温等参数，并确定荧光标准品的浓度和检测波长。
2.参数调整：根据实验设计，逐步调整各种参数，寻找出最佳的分离效果。
需要注意的是，在参数调整的过程中，要逐步变化，避免一次性调整多个参数。
3.结果评估：通过比较不同条件下的分离效果和结果，评估方法的可行性和可靠性。
主要评估指标包括分离度、保留时间、峰形等。
注意事项：1.根据样品的性质和分析目标选择合适的柱材和柱尺寸。
不同的柱材和柱尺寸对分离效果和分析结果有直接影响。
2.合理选择流动相和梯度条件。
流动相的选择应考虑样品的亲疏水性质，梯度条件应选择合理的温度和时间。
怎样选择合适的液相色谱柱
HPLC色谱柱一、色谱分离模式——正相、反相、离子交换、离子抑制、亲水作用正相色谱是色谱的经典形式，使用极性固定相和非极性流动相。
洗脱物通过其极性基团和固定相上的极性基团作用被保留。
这种应用，经典的是使用未键合的硅胶和氧化铝，但现在使用的极性键合相有以下优点：键合相平衡快，对流动相中微量的水不敏感，和产生不同的选择性。
二醇基键合相比纯硅胶极性小，平衡速度快；氰基键合相是保留能力最小的正相吸附剂；氨基键合相适宜分离芳香族碳氢化合物反相色谱已成为最流行的色谱分离模式。
反相色谱中，固定相非极性，流动相极性。
典型的流动相一般是水或水系缓冲液与甲醇、乙腈或四氢呋喃的混合物。
典型的固定相是用脂肪烃硅完化的硅胶键合相，其它用于反相色谱的基质有石墨化碳和苯乙烯-二乙烯苯基质。
反相色谱的性能还受残留的硅醇基的活性的影响。
硅醇基与洗脱物的极性基团作用。
因此，根据硅醇基的活性不同，填料显示出不同的选择性。
而且，常能观察到碱性物质在硅醇基活性高的填料上产生拖尾峰。
修饰硅醇基活性的一个办法是封端，即用硅烷化试剂把硅醇基转变成三甲基甲硅烷基基团。
不过，即使是作了封端，基质表面的硅醇基密度还是比键合配基的密度大。
硅醇基的活性也和硅胶的预处理（基质灭活）、硅胶纯度有关。
碱性分析物的色谱分析推荐使用高纯度硅胶基质、充分封端的键合相。
未封端的填料在许多应用中有可以获得不同选择性的优点。
使用带有离子电荷的固定相，使根据洗脱物电荷进行分离成为可能。
对于硅胶基质的离子交换填料，离子基团通过标准的硅烷化技术键合到硅胶表面。
对于聚合物基质的离子交换填料，离子交换基团分布于交联聚合物的整体（through the matrix）。
有四种离子交换填料：强/弱阳离子交换填料和强/弱离子交换填料。
弱离子交换填料的特征是电量与pH值有函数关系。
以羧酸基为功能基的离子交换剂是弱阳离子交换剂的代表。
弱阴离子交换剂由一级、二级、三级铵为功能基。
大部分强离子交换剂的电荷与pH值无关。
液相层析法中色谱柱选择与操作技巧指导
液相层析法中色谱柱选择与操作技巧指导液相层析法是一种广泛应用的分离和分析技术，在药物研发、环境监测等领域具有重要的应用价值。
而色谱柱作为液相层析法中的核心部分，对分析结果和分离效果起着至关重要的作用。
本文将从色谱柱的选择和操作技巧两个方面进行探讨，帮助读者更好地应用液相层析法。
一、色谱柱的选择色谱柱作为液相层析法中的关键设备，其选择对分析结果和分离效果有着直接的影响。
在选择色谱柱时，可以从以下几个方面考虑。
1. 分析目标首先，要明确自己的分析目标是什么。
是对样品中的化合物进行定性还是定量分析？是分离目标化合物还是对混合物进行整体分析？根据不同的分析目标，可以有针对性地选择不同类型的色谱柱。
2. 混合物特性其次，要了解待分析的混合物特性。
包括混合物的相对极性、稳定性、分子量大小等。
根据这些特性，选择合适的色谱柱相性和孔径大小。
例如，对于极性较强的化合物，可以选择疏水相色谱柱；对于分析相对稳定的混合物，可以选择碳链较长的色谱柱，以提高分离效果和分析精度。
3. 样品基质同时，要考虑样品基质对色谱柱的影响。
一些样品基质可能会与色谱柱发生反应或引起堵塞，影响柱效。
因此，在选择色谱柱时，要综合考虑样品基质对柱效的影响，并选择与基质相容的色谱柱。
4. 实验条件最后，要考虑实验条件对色谱柱的要求。
包括流速、温度、洗脱剂的pH值等。
色谱柱的选择要与实验条件相匹配，以获得最佳的分离效果和分析结果。
同时，要注意避免超出柱的承受能力。
二、色谱柱的操作技巧指导1. 储存和保养色谱柱的储存和保养对其使用寿命和分析效果有着重要的影响。
在不使用时，应将色谱柱存放于干燥、避光、避热和防尘的环境中，避免柱内填料湿润或干燥。
在取用柱时，要注意避免撞击和摩擦，以免损坏柱内填料。
2. 前处理在使用色谱柱进行分析之前，需要提前进行必要的前处理步骤，以减少样品基质的影响，确保准确的分析结果。
常见的前处理步骤包括样品提取、固相萃取、净化等。
在前处理过程中，要注意合理选择和使用前处理试剂和固相萃取柱，以确保前处理的有效性和可重复性。
常用液相色谱柱选择
常用色谱柱简介气相色谱毛细柱（键合，聚二甲基硅氧烷）HP-1，DB-1，P-1，CP-SIL5CB，Ultra-1,007-1,RTx-1,AT-1类似固定相：SE-30，SP-2100，OV-1，OV-101,使用温度：-60℃-320℃应用范围：烷烃，芳烃，多环芳烃，醇，酚，酮，酯，醛，胺，卤代烃，吡啶，糖衍生物，氨基酸衍生物，维生素衍生物，镇痛药，农药，溶剂，胆固SPB-50型中等极性柱醇，香料，咖啡，食品添加剂等。
(键合, 50%二苯基,50%二甲基聚硅氧烷)对照品牌：HP-50，HP-17，DB-17，RTx-50，AT-50 SPB-5型弱极性柱类似固定相：OV-17, SP-2250,使用温度：30℃-310℃（键合，5%苯基，95%甲基聚硅氧烷）应用范围：烷烃，低沸点芳烃，多环芳烃，醇，甘对照品牌：HP-5，DB-5，BP-5，CP-SIL 8CB，油三酸酯，喹啉，卤素化合物，香料，农药，酯，Ultra-2, ,RTx-5,AT-5镇痛药，除草剂等。
类似固定相：SE-54，SE-52，OV-73 使用温度：-60℃-320℃PTE-5，PTE-5QTM型弱极性柱应用范围：烷基苯，多环芳烃，醇，酚，酮，脂肪(MS专用柱,键合,5%苯基,95%甲基聚硅氧烷)酸酯，苯二甲酸酯，硝基芳烃，芳胺，烷基胺，联对照品牌：HP-5 MS，DB-5 MS, DB-5.625，XTI-5，苯胺，卤代烃，多氯联苯，，糖类衍生物，维生素衍BPX625，半挥发污染物分析柱（US EPA方法525，生物，有机酸，镇痛药，农药，抗组胺药，溶剂，625.5，625）生物碱，防腐剂，香料等。
类似固定相：SE-54,SE-52 使用温度：-60℃-320℃应用范围：多氯联苯，胺，有机磷，有机氯农药，SUPELCOWAX 10型极性柱含氯除草剂，酚，苯胺，香料等。
(键合,聚乙二醇二万)对照品牌：HP-Wax，DB-Wax，BP-20，CP-Wax 52CB，SPB-1701型中等极性柱HP-INNO Wax,AT-Wax(键合, 14%氰丙基,86%二甲基聚硅氧烷)类似固定相：PEG-20M, CARBOWAX-20M,使用温对照品牌：HP-1701，DB-1701，RTx-1701，AT-1701，度：35℃-280℃BP-10，CPSil19CB应用范围：低沸点芳烃，醇，酮，酸，酯，醛，醚，类似固定相：OV-1701,SP-2250 使用温度：室温-280乙二醇，丙二醇，甘油，吡啶，胺，亚硝胺，卤代℃烃，胆汁酸衍生物，冰片，薄荷，精油，香料，酒，应用范围：醇，卤素化合物，有机氯农药，酸性药苯乙烯，茶，溶剂等。
液相色谱柱的选择
液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障及排除液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱;正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团ODS 称为C18柱,其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等;另外还有离子交换柱,GPC柱,聚合物填料柱等;本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用：一、反相色谱柱的选择1．柱子的PH值使用范围反相柱优点是固定相稳定,应用广泛,可使用多种溶剂;但硅胶为基质的填料,使用时一定要注意流动相的PH范围;一般的C18柱PH值范围都在2-8,流动相的PH值小于2时,会导致键合相的水解；当PH 值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解;一旦发生上述情况,色谱柱人口处会塌陷;同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同;如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时,建议选择PH范围大的柱子,例如戴安公司的Acclaim柱PH2-9或Zorbax的PH2-11.5的柱子;2．填料的端基封尾或称封口把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾,可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了,有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了,组分的保留时间重现性就好;如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物,最好选用填料经端基封尾的色谱柱;3．戴安公司Acclaim柱子介绍—极性封尾C16固定相柱戴安公司有28种类型的柱子,Acclaim反相柱填料高纯,金属含量极低,完全封尾;PH2-9范围内兼容,低流失,高柱效;尤其是2003年推出的Acclaim极性封尾C16柱,是最先商品化的磺酰氨-O链接键的色谱柱,具极低的硅羟基活性,能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用;对酸性和碱性化合物有极为尖锐的好的色谱峰形,与现有的一流色谱柱相比有更好的立体选择性;下图是Acclaim极性封尾C16柱和市售极性封尾一流色谱柱分离酸性化合物谱图的比较二、液相色谱柱的使用色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考;在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行出厂测试所使用的条件是最佳条件,只有这样,测得的结果才有可比性;但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;1、样品的前处理a、最好使用流动相溶解样品;b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质;c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质;2、流动相的配制液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的,因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力,保证样品组分不会沉淀在柱中或长时间保留在柱中;b、流动相与样品不产生化学反应c、流动相的黏度要尽量小,以便得到好的分离效果；降低柱压降,延长泵的使用寿命可运用提高温度的方法降低流动相的黏度;d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应;如使用UV检测器,最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制;e、流动相沸点不要太低,否则容易产生气泡,导致实验无法进行;f、在流动相配制好后,一定要进行脱气;除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测,还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用;3、流动相流速的选择因柱效是柱中流动相线性流速的函数,使用不同的流速可得到不同的柱效;对于一根特定的色谱柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速;对内径为4.6mm的色谱柱,流速一般选择1ml／min,对于内径为4.0mm柱,流速0.8ml／min为佳;当选用最佳流速时,分析时间可能延长;可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间如使用反相柱时,可适当增加甲醇或乙腈的含量;注意：a．含水流动相最好在实验前配制,尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜;最好加入叠氮化钠,防止细菌生长;b．流动相要求使用0.45μm滤膜过滤,除去微粒杂质;c．使用HPLC级溶剂配制流动相,使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命,提高柱性能;三．色谱柱的维护1.色谱柱的平衡反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的;新柱应先使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱;请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶;每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱,您就会在处理问题方面获得最大的"补偿",而且您的色谱柱的寿命也会变得更长操作步骤：a.平衡开始时将流速缓慢地提高,用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线缓冲盐或离子对试剂流速如果较低,则需要较长的时间来平衡b.如果使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水"过渡"即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡；分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子;2．色谱柱的再生长期使用的色谱柱,往往柱效会下降柱子的理论塔板数减低;可以对色谱柱进行再生,在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生;建议用来冲洗柱子的溶剂体积色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积125-4mm1.6ml30ml250-4 mm3.2ml60ml250-10mm20ml400ml选择再生方法：极性固定相如Si,NH2,DIOL基色谱填料的再生：正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水非极性固定相如反相色谱填料RP－18,RP－8,CN等的再生：水→乙腈→氯仿或异丙醇→乙腈→水注意：a.在对NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能以铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1M 的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出;b.0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱,如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,在水洗后加用0.05M稀硫酸冲洗非常有效;3.色谱柱的维护a．使用预柱保护分析柱硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度b．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围c．避免流动相组成及极性的剧烈变化d．流动相使用前必须经脱气和过滤处理e．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存于甲醇或乙腈中f．氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀;怎样选择色谱柱现代高效液相色谱中,分离效果好坏的一个重要指标是色谱填的选择;但是色谱填料的选择范围很宽,因此,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解;一.硅胶基质填料1·正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶Silica以及其他具有极性官能团胺基团,如NH2,APS和氰基团CN,CPS的键合相填料;由于硅胶表面的硅轻基SiOH或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组份的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱;正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正己烷Hexane、氯仿Choroform、二氯甲烷MethyleneCloride等;2,反相色谱反相色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相;反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲掖与甲醇、乙情等的混合物;样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组份最先被冲洗出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留;常用的反相填料有:C18ODS、C8MOS、C4Butyl、C6H,Phenyl等;二·聚合物填料聚合物填料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸醋等,其主要优点是在pH值为1一14均可使用;相对于硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效;现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低;三、其它无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化由于其特殊的性质,一般仅限于特殊的用途;如,石墨化碳黑正逐渐成为反向色谱柱填料;这种填料的分离不同于硅胶基质烷基键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性;该柱填料一般比烷基键合相硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强;石墨化碳可用于分离某些几何异构体,由于在HPLC流动相中不会被溶解,这类柱可在任何PH与温度下使用;氧化铝也可以用于HPLC;氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱柱柱床,其优点是可以在PH高达12的流动相中使用;但由于氧化铝与碱性化合物的作用也很强,应用范围受到一定限制,所以未能广泛应用;新型色谱氧化锆基质填料也可用于HPLC;商品化的只有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱,应用PH1-14,温度可达100℃;由于氧化锆填料是最近几年才开始研究,加之面临的实验难度,其重要用途与优势尚在进行之中;怎样选择填料粒度目前,商品化的色谱填料粒度从1um到超过30um均有销售,而目前分析分离主要用3和5um填料进行;填料的粒度主要影响填充柱的两个参数,即柱效和背压;粒度越小,柱压越大,柱压的增加限制了粒度小于3um的填料应用;在相同选择性条件下,提高柱效可提高分离度,但不是唯一的因素;如果固定相选择是正确,但是分离度不够,那么选用更小的粒度的填料是很有用的;3um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%；然而,3um的色谱柱的背压却是5um的2倍;与此同时,柱效提高意味着在相同条件下可以选用更短的色谱柱,即相同的塔板数或分离能力,但是柱长更短,以缩短分析时间;另外,可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度,比如用乙腈代替甲醇,以降低色谱柱的压力;。
液相色谱柱的分类与选择
液相色谱柱的分类与选择液相色谱柱的分类(按色谱固定相基质分)1.硅胶基质：1.1反相色谱柱：反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。
反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反相填料有C18(ODS)、C8(MOS)、C4(B)、C6H5(Phenyl)等。
1.2正相色谱：正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)，以及其他具有极性官能团，如胺基团(NH2,APS)和氰基团(CN，CPS)的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷(Hexane),,二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
1.3离子交换色谱柱：以磺化交联强阴/阳离子键合硅胶色谱柱，常用规格：强阴离子色谱柱(SAX)，强阳离子交换色谱柱(SCX)2.聚合物基质：聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要优点是在PH值为1～14均可使用。
相对与硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。
现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。
所有聚合物基质在流动相发生变化时都会出现膨胀或收缩。
用于HPLC的高交联度聚合物填料，其膨胀和收缩要有限制。
溶剂或小分子容易渗入聚合物基质中，因为小分子在聚合物基质中的传质比在陶瓷性基质中慢，所以造成小分子在这种基质中柱效低。
对于大分子像蛋白质或合成的高聚物，聚合物基质的效能比得上陶瓷性基质。
因此，聚合物基质广泛用于分离大分子物质。
色谱柱的选择液相色谱仪基质的选择大致遵循以下法则，硅胶基质的填料被用于大部分的HPLC分析，尤其是小分子量的被分析物，聚合物填料用于大分子量的被分析物质，主要用来制成分子排阻和离子交换柱。
如何挑选液相色谱柱
分离模式
色谱柱
备注
量
பைடு நூலகம்
小于 2000
溶于正己 烷
正相吸附色 谱
Silica
填料孔径通 常为 100Å
脂溶性
溶于四氢 呋喃
溶于甲醇/
GPC
正相键合色 谱
氰基柱、氨基柱
水
C18、C8、PH 或 PLRP(反
反相色谱
相聚合物色谱柱)
水溶性 非离子型 反相色谱
C18、C8、PH 或 PLRP
离子抑制色 谱
C18、C8、PH 或 PLRP
首先，如果之前开发方法时色谱柱已经做过别的样品，那么之前的样品或使用的流动相 对这个样品分析可能有干扰，只能重新找条件。建议：开发方法时使用新的色谱柱。
其次，如果是更换了品牌发生这样的情况，可能是由于不同品牌的键合技术不同，造成 了选择性的细微差异 ，需要调整条件，并再次确定出峰顺序（有些样品的洗脱顺序会改变）。
快、峰形异常的情况。 ·色谱峰形异常，基线不稳。 ………… 当发生以上情况，请仔细检查，是否有某个操作疏忽了？
1）测试柱性能 通常情况下，我们建议用户在拿到色谱柱后，第一件事情就是在一台性能完好的仪器系
统上，按照厂家说明书对色谱柱进行柱效测试。其实，对于一个合格的色谱分析工作者来说， 拿到一根新色谱柱，要开始一个课题之前，都会这样做，目的有二：一、了解色谱柱之前的
(1) 内径
在理想情况下，当填料、柱长和流动相优化线速度确定时，色谱柱内径的变化将只影响 上样量和灵敏度，柱效、分离度、分析时间等均不发生变化。与内径为 4.6 mm 的色谱柱相 比，内径为 2.1 mm 的色谱柱的截面积仅相当于前者的 1/5，所以为取得相同的线速度，后 者所需的体积流速仅为前者的 1/5，因而使用细径柱能显著减少溶剂用量；同样由于截面积 小，样品组分在细径柱中的稀释也较小，可以得到较高的灵敏度；细径柱的最大载样量也相 应减小。
液相不同粒径色谱柱最佳流速选择
液相不同粒径色谱柱最佳流速选择
液相色谱柱是液相色谱法中的重要组成部分，其中不同粒径的色谱柱对于流速的选择有着不同的最佳值。
本文将介绍液相色谱柱最佳流速的选择方法，以便更好地发挥色谱柱的性能，提高分离效果。
一、液相色谱柱粒径对流速的影响
液相色谱柱的粒径是影响流速的重要因素之一。
一般来说，粒径越小，色谱柱的塔板高度越低，传质效率越高，但是柱压降也会增加。
因此，选择合适的粒径对于液相色谱柱的流速选择至关重要。
二、最佳流速选择方法
1. 实验测定法
实验测定法是一种常用的确定液相色谱柱最佳流速的方法。
通过实验测定不同流速下的分离效果，可以找到最佳流速。
具体步骤如下：
（1）选择合适的色谱柱，确定色谱条件；
（2）改变流速，分别进行实验；
（3）记录每个流速下的分离效果，如峰形、分离度等；
（4）分析实验结果，找到最佳流速。
2. 经验公式法
经验公式法是根据液相色谱柱的粒径和其他因素，通过经验公式估算最佳流速的方法。
常用的经验公式如下：
V=d^2*1.5*10^4/t
其中，V为最佳流速（mL/min），d为粒径（cm），t为塔板高度（cm）。
可以根据色谱柱的粒径和塔板高度计算出最佳流速。
三、最佳流速选择注意事项
1. 考虑到实验条件和分离效果，选择合适的流速范围；
2. 对于不同粒径的色谱柱，最佳流速可能不同；
3. 在选择最佳流速时，需要考虑色谱柱的使用寿命和维护成本；
4. 在实际应用中，可以根据具体分离物质的特点和分离度要求，适当调整流速。
液相色谱柱选择
探讨液相分析色谱柱的选择很多人对色谱柱选择无从下手，本人根据多年经验写了个小结，可能不太全面或者某些有争议，在此申明仅供参考。
液相色谱柱是色谱心脏，决定最终的分离效果，所以在选择色谱柱时候有必要考虑清楚自己的需求。
首先液相色谱柱目前来说分为正反相色谱柱，正相有SI、CN、二醇基等；反相有C18、C8等；氨基可以用于正反相；目前还流行HILIC属于正相反用色谱柱。
正相主要分离极性物质，反相主要分离非极性、弱极性物质，氨基柱等主要分离二者之间的，hilic属于反相体系分离极性物质，解决样品溶解等问题。
明确了色谱柱大概功能之后，确认下自己样品信息，基本就有点眉目了。
大方向对了，剩下的事情就是细节确认了，如：键合相、粒径、孔径、碳载量等1、键合相：确定了正反相后基本就简单了，正相很简单，我们重点讨论下反相，C18主要分离非极性和弱极性物质，因为是键合硅胶，所以C18也分好几种有常规的如C18-A，耐纯水的OL Apple C18-AQ、耐酸碱的OL Apple C18-EX等，如果发现C18保留很弱，调整流动相也不行，这个时候可以考虑C8甚至C4等。
2、粒径：色谱法追求的是高效、高分辨、高速等。
目前来说亚2um 填料或者2UM核壳填料是很理想的模型，基本具备“三高”特征尤其是高速，线速度不在影响分离度，不过附带的缺点就是高压，要升级相应的硬件，成本高昂，需要谨慎考虑。
5um填料最普遍，目前来说完全可以胜任各种日常检测，即使有特殊要求，3um色谱填料基本上也能全覆盖，不过该模型下线速度和分离度是成反比的。
3、孔径：目前很多60~300A都有，甚至更高或者更低的。
开孔的填料多了个类似分子筛功能，所以选择孔径一定要关注分子量，蛋白（分子量5000以上）一般都需要在160A以上，多肽（分子量上限在3000左右）在120A左右，一般快速柱孔径都很小，可以缩短样品路径。
所以国际上还有无孔硅胶柱子，也很适合蛋白分离，彻底解决蛋白分子量大和太粘稠堵住孔径问题。
选择液相色谱柱要考虑哪些因素
选择液相色谱柱要考虑哪些因素液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于生物、化学分析、医药等领域的分离技术。
选择合适的液相色谱柱是成功进行HPLC分离的重要保证。
本文将介绍液相色谱柱的种类及选择柱的时需要考虑的因素。
液相色谱柱的种类液相色谱柱的种类繁多，不同的柱具有不同的分离能力和使用范围。
常见的液相色谱柱主要有以下几种：1.反相柱（C18柱）：反相柱是最常用的液相色谱柱之一，具有较普遍的使用范围和较好的分离效果。
它是在硅胶柱上镀上碳氢化合物，表面成为疏水的反相材料；当样品以极性溶剂为移动相时，在反相柱的表面上形成一层水相，样品中亲水性的组分会进入水相，亲疏性较为均衡的组分则留在反相材料上。
2.正相柱：正相柱是指涂覆有极性固定相的液相色谱柱，常用于分离极性化合物。
和反相柱相反，正相柱的固定相是具有亲水性质的羟基化硅胶，样品以非极性溶剂为移动相时，样品中疏水性的组分会被固相吸附，而亲水性的组分则被保留在移动相中。
3.离子交换柱：离子交换柱由于其对离子的亲和性而被称为离子色谱柱。
它是一种通过离子交换作用分离有电荷分子的方法。
使用离子交换柱时，需要选择适当的离子缓冲溶液来调整交换和洗脱过程。
4.手性柱：手性柱是专门用于分离非对称分子体系的液相色谱柱。
手性柱的特点在于其固定相具有光学异构体的区分能力，而固定相的选择可以影响柱的手性选择和分离度。
除了上述几种常见液相色谱柱，还有很多其它类型的柱，如亲水作用柱、亲疏作用柱、氨基酸柱、芳香族柱等，通过选择不同的柱可以更好地完成不同类型的物质分离。
液相色谱柱的选择选择液相色谱柱的时候需要考虑到许多因素，包括样品性质、分离条件、固定相种类和尺寸等。
样品性质液相色谱柱的选择首先要考虑到样品的性质。
具体而言，要考虑到样品的分子量、结构、亲水亲疏性、电荷性、挥发性等特征。
例如，对于极性组分，选择正相柱会更好；对于非极性组分，反相柱更为合适。
分离条件另一个重要的考虑因素是分离条件，如：移动相的组成、流动速度、温度等。
液相色谱柱选择方法
液相色谱柱选择方法一、液相色谱柱选择方法|液相色谱柱选择的简单思路1.确定分离目的确定你的应用是否要求高分离度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命，低的操纵本钱等等。
2.评估分析物的化学性质评估分析物的化学性质..诸如化学结构、溶解性、稳定性等等。
3.选择合适的色谱柱了解色谱填料的物理和化学性质。
二、液相色谱柱选择方法|液相色谱柱选择的条件A填料基质1.硅胶基质：纯度高本钱低，强度大，化学修饰轻易，但pH值范围有限。
大多硅胶基质填料在pH2-8之间稳定，但经过特殊修饰的硅胶键合相可以稳定在pH1.5-10。
2.聚合物基质：应用pH值范围宽，温度稳定(高温可以达到80度以上)，机械强度小。
B颗粒外形大多现代HPLC填料都是球形颗粒，但有时是不规则的颗粒。
球形颗粒提供较低的柱压、较高的柱效和稳定性以及较长的柱寿命在使用高粘度的活动相时;不规则颗粒有较大比表面积和相对低廉的价格。
C颗粒粒径粒径越小柱效越高、分离度越高，但同时会导致较高柱压降。
选择1.5-3μm的填料以解决一些复杂样品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒径的填料用作半制备或制备柱。
D含碳量含碳量指的是硅胶表面键合相的比例，与比表面积和键合覆盖度等有关。
高含碳量进步柱容量、分辨率及分析时间，用于要求高分离度的复杂样品;低含碳量分析时间短、展现不同的选择性，用于快速分析简单样品及需要高含水活动相条件的样品。
一般C18的含碳量在7-19%不等。
E孔径和比表面积HPLC吸附介质是多孔的颗粒，尽大多数的反应表面于孔内。
因此，分子必须进进孔内才能被吸附和分离。
孔径和比表面积是相辅相成的两个概念。
孔径小比表面积大，反之亦然。
比表面积大，增加样品与键合相之间的反应，增加保存,上样量和复杂成分的分离度;比表面积小，平衡时间快，适合梯度分析。
F孔容和机械强度孔容，又称“孔体积”。
指单位颗粒的空隙体积大小。
它能很好的反应填料的机械强度。
孔体积大的填料相对孔体积小的填料机械强度要略弱。
液相色谱柱的选择原则
液相色谱柱的选择原则
1. 目标分析物性质：液相色谱柱的选择应考虑目标分析物的性质，比如分子大小、极性、酸碱性等。
一般来说，较小的分子更适合使用短柱，而较大的分子则需要使用较长的柱子。
同时，柱子的化学性质也应与目标分析物的性质相匹配。
2. 样品基质特性：柱子的选择还要考虑样品基质的性质，比如是否含有杂质、是否具有极性等。
柱子的选择应能够有效分离目标分析物和基质之间的干扰物。
3. 分析目标：液相色谱柱的选择还应考虑分析目标，如分析目的、检测灵敏度要求等。
不同的柱子可能对于不同的目标分析物具有不同的分离效果和灵敏度。
4. 柱子的使用寿命和稳定性：选择具有较长使用寿命和良好稳定性的色谱柱，可以提高分析结果的稳定性和可靠性。
5. 厂家供应和技术支持：选择有可靠供应和良好技术支持的厂家的色谱柱，能够确保柱子的质量和性能，并且在实验中出现问题时能够及时得到技术支持。
需要根据具体分析要求和条件综合考虑上述因素，选择最适合的液相色谱柱。
液相色谱柱选择方法及保存 液相色谱常见问题解决方法
液相色谱柱选择方法及保存液相色谱常见问题解决方法液相色谱柱选择方法及保存一、液相色谱柱选择方法液相色谱柱选择的简单思路1.确定分别目的确定你的应用是否要求高分别度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命，低的操纵本钱等等。
2.评估分析物的化学性质评估分析物的化学性质.诸如化学结构、溶解性、稳定性等等。
3.选择合适的色谱柱了解色谱填料的物理和化学性质。
液相色谱柱的保存1.反相色谱柱每天试验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，试验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应当在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
2.长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必需存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度*好是室温。
一）压力异常操作压力的变化往往是故障的征兆。
A、没有压力显示，没有流动相流动：原因解决方法1、电源问题接通电源，开机2、保险丝被烧坏更换保险丝3、掌控器设定不正确或设定失败实行恰当的设定、修理或更换掌控器4、柱塞杆折断更换柱塞杆5、泵头内有空气溶剂脱气、启动泵抽出空气6、流动相不足补充流动相、更换入口滤头7、单向阀损坏更换单向阀8、漏液拧紧或更换手紧接头B、流动相流动正常，但没有压力显示：原因解决方法1、仪表损坏更换仪表2、压力传感器损坏更换压力传感器C、压力持续偏高原因解决方法1、流速设定过高调整流速设定2、柱前筛板堵塞反冲色谱柱、更换筛板、更换色谱柱3、流动相使用不当或缓冲盐的结晶沉淀使用恰当的流动相、冲洗柱塞杆。
4、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱5、进样阀损坏清洗或更换进样阀6、柱温过低提高温度7、掌控器失常修理或更换掌控器8、保护柱堵塞清洗或更换保护柱9、在线过滤器堵塞清洗或更换在线过滤器D、压力持续偏低：原因解决方法1、流速设定过低调整流速2、系统漏液确定漏液位置并维护和修理3、色谱柱选择不当选择恰当的色谱柱4、柱温过高降低温度5、掌控器失常维护和修理或更换掌控器E、压力波动：原因解决方法1、泵中有气体溶剂脱气、从泵中除去气体2、单向阀损坏更换单向阀3、泵密封损坏更换泵密封4、脱气不充分重新过滤一遍、溶剂脱气5、系统漏液确定漏液位置并维护和修理6、使用梯度洗脱由于流动相粘度的变化引起的压力波动二）漏液通常可以通过拧紧或更换管路接头来解决漏液的问题。
选择液相色谱柱要考虑哪些因素？
选择液相色谱柱要考虑哪些因素？色谱柱是运用于色谱仪系统中起着分离作用的仪器，是色谱仪分析系统的核心部件，色谱柱柱效的高低影响着检测速率的快慢以及检测结果的准确性。
因此，为了提高色谱柱的柱效，保证液相色谱仪分析检测的灵敏性，了解液相色谱柱的选购技巧尤为重要。
选择液相色谱柱时需要考虑的主要因素包括：键合相、粒径、孔径、碳载量，下面来一一介绍：1、键合相：确定了正反相后基本就简单了，正相很简单，我们重点讨论下反相，C18主要分离非极性和弱极性物质，因为是键合硅胶，所以C18也分好几种有常规的如C18-A，耐纯水的OLAppleC18-AQ、耐酸碱的OLAppleC18-EX等，如果发现C18保留很弱，调整流动相也不行，这个时候可以考虑C8甚至C4等。
2、粒径：色谱法追求的是高效、高分辨、高速等。
目前来说亚2um填料或者2UM核壳填料是很理想的模型，基本具备“三高”特征尤其是高速，线速度不在影响分离度，不过附带的缺点就是高压，要升级相应的硬件，成本高昂，需要谨慎考虑。
5um填料普遍，目前来说完全可以胜任各种日常检测，即使有特殊要求，3um色谱填料基本上也能全覆盖，不过该模型下线速度和分离度是成反比的。
3、孔径：目前很多60~300A都有，甚至更高或者更低的。
开孔的填料多了个类似分子筛功能，所以选择孔径一定要关注分子量，蛋白（分子量5000以上）一般都需要在160A 以上，多肽（分子量上限在3000左右）在120A左右，一般快速柱孔径都很小，可以缩短样品路径。
所以国际上还有无孔硅胶柱子，也很适合蛋白分离，彻底解决蛋白分子量大和太粘稠堵住孔径问题。
4、碳载量：快速柱碳载量很低，如A家等，省时间，省溶剂，但分析部分复杂样品如中药等有点力不从心，这个时候可以考虑英国OLApple色谱柱，碳载量15~23%，碳载量数值就像河床的水草，越高代表越密集，保留样品能力越强，越有可能分离开难分离物质。
液相色谱柱。
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液相色谱柱选择
如何选择色谱柱，比较一下C-18及C-8柱的硅烷基质
C-18和C-8硅烷色谱柱是高效液相色谱（HPLC）中最常使用的色谱柱，而且，在美国市场上有多于100种C-18和C-8色谱柱出售。
面对这么多可供选择的色谱柱，分析工作者很难从中选出适当的色谱柱来具体使用，同时更难选择出一根合适的替换柱。
对于非极性样品（如小分子芳烃）或弱极性样品（如对羟基苯甲酸酯），C-18和C-8色谱柱是最容易选择的。
对于这类样品，色谱柱之间的主要差异在于保留因子（k）；而在选择性方面却只有微小的差异。
但对于极性和中等极性样品色谱柱的选择却相当困难。
例如含氨基或酸性基团的药物化合物。
分析工作者会发现极性样品在保留时间、选择性和峰形都有很大的差别。
色谱柱的选择性和峰形受到担体硅胶的影响远大于键合相的影响。
另外，有研究报道在反相色谱中表面硅烷醇、硅酸及金属杂质的影响。
在特殊情况下，选择性的差异可由填料制备时使用的键合过程决定的。
通常情况下，色谱工作者选择HPLC色谱柱是通过比较由色谱柱供应商所提供的填料介质的规格来决定的。
这些规格内容包括：表面积、末端封尾、含碳量、颗粒形状、颗粒尺寸、孔径、孔容积、装填密度和键合度。
含碳量和键合度仅由色谱制造商提供，没有这些规格使用者不可能计算出碳的克数，也不可能计算出一根色谱柱中键合相的微分子数。
分析工作者可使用这两个数据来估计一根色谱柱的疏水性质。
然而，即使制造商提供所有上述规格数据，使用者也不可能精确地预测出色谱柱对含有极性官能团的化合物的选择性。
由于色谱的保留时间是基于分析物和填充基质之间许多微妙的相互作用，我们建议使用混合物测试来比较填充基质的规格与性能。
Engelhardt 和他的同伴回顾了硅烷反相色谱的特性，并且提出用溶解物试验来描述固定相的疏水性和亲硅基醇特性。
另外有一些人也改进了测试条件和方法来解释那些色谱数据，但他们只测试了很少的商品色谱柱，并且在他们的测试混合物中没有羧酸。
在本文中，我们使用了一个含有羧酸的测试混合物来收集了86根C-18和C-8硅烷色谱柱（见表1）的数据。
我们将测试结果详细描述如下。
表1：研究中所使用的色谱柱的生产商(略)。
在我们的比较中，我们使用了含有6种物质的测试混合物，此6种物质列于图1。
每一种物质在测试混合物中都起特殊的作用。
尿嘧啶是用于产生空体积。
甲苯是测试色谱柱的疏水性。
吡啶和N，N-二甲基苯胺是用来测试硅醇基对碱性物质的活性的碱性胺类物质。
苯酚是一种弱酸，用于与吡啶联合起来确定活性担体硅的数量。
4-正丁基苯甲酸是一种用于测试硅醇基对酸性物质的活性羧酸，此方面是色谱柱制造者开发碱性去活色谱柱来作胺类物质分析时经常忽略的。
我们使用的流动相是含有65%的乙腈和35%的浓度为0.05M的磷酸钾混合溶液，pH值为3.2。
pH=3.2的缓冲溶液可使4-正丁基苯甲酸质子化，同时可提高吡啶和N，N-二甲基苯胺的保留时间的重现性。
我们发现使用没有加缓冲溶液的流动相，如65%乙腈和35%水，即使
我们使用同一瓶流动相，也无法得到重现性较好的保留时间和峰形。
高离子强度的缓冲溶液，如本次测试所使用的0.05M的缓冲溶液，会抑制一些硅醇基的活性（2，5），但对于将胺从一些非碱性去活的反相色谱柱中洗脱下来，有一些抑制作用是必要的。
我们测试过另外两种缓冲溶液，但它们的作用均少于pH=3.2的0.05M 磷酸钾溶液。
0.01M磷酸钾缓冲溶液在pH=3.2时，胺类化合物在有些色谱柱中产生前移峰。
0.05M磷酸钾缓冲溶液在pH=7时，胺类物质产生的峰形比在pH=3.2时更好。
吡啶和N，N-二甲基苯胺的pKa 均大约为5.2；因此，这些组分在pH=7时未质子化并且呈中性，同时并不与强酸性的硅醇基发生离子交换作用。