热带水草红椒的组培快速繁殖及色彩显现研究

收稿日期:2002-10-14

作者简介:莫肖蓉(1973-),女,浙江诸暨人,从事观赏植物组织培养研究。

浙江农业学报Acta Agriculturae Zhejiangensis 15(2):91～94,2003

热带水草红椒的组培快速繁殖及色彩显现研究

莫肖蓉,蒋琴素　(浙江大学生命科学学院,浙江杭州310029)

摘　要:研究了热带水草红椒(Cryptocoryne wendtii tropica )的组培快速繁殖及其色彩显现。结果表明,适宜的芽增殖培养基为MS +BA 3mg/L +NAA 0.5mg/L ,而适宜的生根培养基为1/2MS 的无激素培养基。在此生根培养基中,植株上部叶能显现出其独特的红褐色彩,其呈现的颜色主要取决于花青素含量。类胡萝卜素含量和Chlb/Chla 比值的提高有利于其色彩的显现。添加1mg/L 的

G A 3可促进植株的生长。

关键词:热带水草;红椒;组培快速繁殖;花青素中图分类号:S682.32 文献标识码:A

文章编号:1004-1524(2003)02-0091-04

Study on rapid proliferation and color appearing of tropical aqu atic grass Cryptocoryne wendtii tropica :M O X iao 2rong ,J I ANG Qin 2su (College o f Life Sciences ,Zhejiang Univer sity ,Hangzhou 310029,China )Abstract :The rapid proliferation and color appearing of tropical aquatic grass Cryptocoryne wendtii tropica were studied.The results shown that optimum culture medium for bud proliferation was MS medium containing 3mg/L of BA +0.5mg/L of NAA ,whereas optimum one for bud proliferation was 1/2MS the medium without hor 2m one.In the rootting culture medium ,the upper leaves could change its special red -brown color ,which was mainly dependent to the content of anthocyanidins.Increase of the contents of carotenoids and the ratio of Chlb/Chla was fav orable to the color appearing.Addition of 1mg/L of G A 3could prom ote the growth of the plants.K ey w ords :tropical aquatic grass ;Cryptocoryne wendtii tropica ;rapid proliferation of tissue ;anthocyanidin

红椒(Cryptocoryne wendtii tropica )属天南星科隐棒花属温蒂椒草的红色系品种,其叶片呈红褐色,原产斯里兰卡,是名贵的观赏水草之一。红椒对水质的适应能力较强,易种养,深受人们喜爱。我国目前主要从丹麦进口,价格较贵,近年来我国南部少数地区虽然有引种繁殖,但外观颜色不及原种理想,而红椒的组培快繁在国内外也尚未有报道。为此,我们开展了此项研究。

1　材料与方法

1.1　材料

红椒(Cryptocoryne wendtii tropica )购自丹麦热带水草公司。1.2　组织培养

1.2.1　无菌初代培养物的获得　切去植株的

所有根及大部分叶,剩下的茎段用自来水洗10min ,用70%酒精浸泡30s 后置于011%升

汞溶液中消毒15min ,无菌水冲洗3～4次后再在无菌水中浸泡10min ,无菌条件下切取茎节基部分蘖的小芽点(约2mm ),接种到培养

基MS+BA1mg/L+NAA0.5mg/L上,培养温度25℃,光照12h,光强1000lx。

1.2.2　芽增殖培养基筛选　初代培养获得的无菌小芽分别接种于附加不同浓度激素的MS培养基上,以筛选最佳芽增殖培养基。1.2.3　生根培养基筛选　将株高2～3cm 的不定芽丛转接于两种不同的生根培养基中,以筛选适宜的生根培养基。

1.2.4　增产的生长培养基筛选　在生根培养基I219的基础上添加不同浓度G A3以筛选出既能较快生根又增产的培养基,G A3溶液用无菌微滤膜过滤后添加到经高压灭菌的培养基中。每一种浓度的处理设3个重复,1个月后测量其株高增加值和地上部分重量增加的相对百分比。

1.3　各种色素含量测定

1.3.1　花青素　花青素的提取和鉴定方法参考文献[1],[2],并作必要改动,取0.5g 充分显色的叶片,用5ml1%HCl甲醇溶液浸提,提取液黑暗处放置2h后,4000r/min离心5min,上清液用石油醚洗4～5次,直至石油醚层无色为止,样液稀释15倍后,在Beck2 man Du27spectrophotometer可见光谱分析仪中扫描其波长365～715nm范围的吸收光谱,可见在530nm处有一特征峰(图1),并对提取液作酸碱滴定的显色反应,当pH从1.5～1

2.0,提取液由红变蓝,证明提取液中含有花青素。花青素含量测定的提取方法同上,用7512G型分光光度计测530nm下的吸光度。以每0.1g鲜重在5

ml提取液所测得的0.1 OD值为1个色素单位。在培养的第45天进行测定,每一材料做3个重复。

1.3.2　叶绿素和类胡萝卜素含量测定　按波钦诺克[3]的方法,经丙酮浸提后,在7512G 型分光光度计上测吸光度。

2　结果与分析

2.1　芽增殖培养图1　花青素吸收光谱图

Fig.1　Abosrption spectrogram of anthocyanidins

红椒不定芽在BA浓度由1mg/L提高到3mg/L时,平均芽增殖数相应增加(表1),当BA浓度提高到4mg/L时,发现小芽叶片生长速度较慢且叶片颜色逐渐发黄最后完全褪绿而死去。表明I-11培养基既具较好的不定芽增殖能力,又有保持叶片绿色的功能,是较适宜的不定芽增殖培养基。

2.2　生根诱导

在许多植物的生根培养中,往往用1/2 MS外加低浓度I BA或NAA使之生根壮苗,当我们选用I218作为红椒生根培养基时,发现生根很慢,影响出苗速度,为此我们尝试I2 19进行无激素培养,两种培养基差别虽然很小,但在生根效果上却有显著差异(表2),结果表明I219为适宜的生根培养基。

表1　不同激素水平对芽增殖的作用

T able1　E ffect of different concentrations of horm ones on the proliferation of buds

培养基编号激素/mg・L-1

BA NAA

平均芽增殖倍数I-1640.50

I-1130.5 2.16

I-520.5 1.25

I-910.50.50

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・浙江农业学报　第15卷(2003)