鼠类携带汉坦病毒的核酸检测及核酸序列分析

合集下载

小鼠肝核酸实验报告(3篇)

小鼠肝核酸实验报告(3篇)

第1篇一、实验目的1. 掌握小鼠肝组织中核酸的提取方法。

2. 了解DNA和RNA的组成差异及其鉴定方法。

3. 掌握防止核酸酶降解的措施。

4. 分析实验结果,验证实验方法的有效性。

二、实验原理核酸是生物体内重要的生物大分子,包括DNA和RNA两种类型。

DNA主要存在于细胞核中,负责遗传信息的存储和传递;RNA则参与蛋白质的合成和调控等生物学过程。

本实验旨在从小鼠肝组织中提取核酸,并对其进行鉴定和分析。

三、实验材料与仪器1. 实验材料:小鼠肝脏、小牛胸腺细胞、氯化钠、柠檬酸钠、盐酸、硫酸、3,5-二羟甲苯、二苯胺、无水乙醇、氯仿等。

2. 实验仪器:高速冷冻离心机、电子天平、研磨器、恒温水浴锅、移液器、离心管等。

四、实验方法1. 小鼠肝匀浆制备:(1)取新鲜小鼠肝脏,用生理盐水洗净,去脂。

(2)将肝脏剪成小块,加入适量的生理盐水,用研磨器进行研磨。

(3)将研磨好的肝匀浆转移至离心管中,离心去除细胞碎片。

(4)收集上清液,即为肝匀浆。

2. 核酸提取:(1)取适量的肝匀浆,加入适量的氯化钠溶液,混匀。

(2)加入柠檬酸钠溶液,混匀,置于冰浴中10分钟。

(3)加入等体积的氯仿,混匀,静置10分钟。

(4)将混合液转移至新的离心管中,离心,收集上层水相。

(5)加入等体积的无水乙醇,混匀,静置30分钟。

(6)将混合液转移至新的离心管中,离心,收集沉淀。

(7)用75%乙醇洗涤沉淀,离心,收集沉淀。

3. DNA和RNA的鉴定:(1)取适量的DNA沉淀,加入适量的盐酸和硫酸,共热,观察颜色变化。

(2)取适量的RNA沉淀,加入适量的3,5-二羟甲苯和二苯胺,共热,观察颜色变化。

4. 防止核酸酶降解:(1)选取核酸酶含量较低的材料,如小牛胸腺细胞等。

(2)在制备肝匀浆时,应尽量在冰冷条件下进行。

(3)尽快加入含0.01 mol/L柠檬酸钠的0.14 mol/L氯化钠溶液,以抑制脱氧核糖核酸酶。

五、实验结果与分析1. 肝匀浆制备成功,细胞破碎充分。

RT-PCR检测汉坦病毒基因及分型

RT-PCR检测汉坦病毒基因及分型

附件6 RT-PCR检测汉坦病毒基因及分型材料:(1)急性期病人血清、鼠肺、鼠血或分离的汉坦病毒(2)引物:引物序列(5’~3’)位置片段(bp)逆转录引物TAGTAGTAGACTCC 1~14 LMS通用外引物AAAGTAGGTGITAYATCYTIACAATGTGG 1910~1939 M(+) GTACAICCTGTRCCIACCCC 2373~2354 M(-)型特异性引物汉滩病毒GAATCGATACTGTGGGCTGCAAGTGC 1958~1984 M(+) GGATTAGAACCCCAGCTCGTCTC 2318~2340 M(-) 汉城病毒GTGGACTCTTCTTCTCATTATT 1936~1957 M(+) TGGGCAATCTGGGGGGTTGCATG 2331~2353 M(-) S片段引物ATGTTGCCTGGGGIAAAGAGG 1200~1220 S(+) GCGCACTAGTAGTAGTAGACTCCCTAAAGA 1670~1696 S(-)方法:(1)病毒RNA的提取:采用TRIzol按说明提取,制备模板RNA;(2)逆转录、合成cDNA:采用SuperScrip TM II或AMV逆转录酶,按说明书进行;(3)PCR扩增:反应条件为95℃预变性10分钟,94℃60秒、55℃60秒、72℃45秒、扩增30~35个循环,72℃延伸12分钟。

(4)扩增产物用1~2%琼脂糖凝胶电泳鉴定。

若条带的分子量与预期片段大小相同,则表明为特异性扩增产物。

必要时,可进行:(5)PCR片段的回收和核苷酸序列测定:切下特异分子量条带,用QIAquick 凝胶回收试剂盒回收(按其说明书进行),自动测序仪测序。

意义:扩增到特异性条带可确诊汉坦病毒并明确其型别,序列测定还可以对汉坦病毒的变异情况进行研究。

中俄双边七个口岸地区鼠传疾病病原体调查

中俄双边七个口岸地区鼠传疾病病原体调查

中俄双边七个口岸地区鼠传疾病病原体调查曹晓梅;王静;孙肖红;胡孔新;魏莲;高旭;赵刚;王玉梅【期刊名称】《寄生虫与医学昆虫学报》【年(卷),期】2011(018)003【摘要】对2007年中俄联合监测小组在中俄边境7个口岸地区捕获的鼠进行病原体检测,以了解中俄边境鼠传疾病病原体携带情况.采用RT-PCR法检测鼠肺标本中的汉坦病毒RNA.PCR方法检测鼠肝脏、脾脏中的鼠疫杆菌、土拉杆菌、莫氏立克次氏体的DNA核酸.PCR方法检测肾脏中钩端螺旋体DNA核酸.ELISA方法检测血清中出血热病毒总抗体.胶体金法检测鼠疫杆菌抗体、钩端螺旋体抗体、土拉杆菌抗体、莫氏立克次氏体抗体.结果显示鼠疫杆菌抗体、钩端螺旋体抗体、土拉杆菌抗体、立克次体抗体检测结果均为阴性.鼠疫杆菌、土拉杆菌、立克次体,钩端螺旋体的DNA核酸检测结果均为阴性.汉坦病毒3例核酸阳性,出血热总抗体8例阳性.结果表明中国抚远、俄罗斯布市、哈巴3个口岸地区应该注意肾综合征出血热的防控.【总页数】5页(P184-188)【作者】曹晓梅;王静;孙肖红;胡孔新;魏莲;高旭;赵刚;王玉梅【作者单位】中国检验检疫科学研究院,北京,100123;中国检验检疫科学研究院,北京,100123;中国检验检疫科学研究院,北京,100123;中国检验检疫科学研究院,北京,100123;中国检验检疫科学研究院,北京,100123;中国检验检疫科学研究院,北京,100123;黑龙江出入境检验检疫局,哈尔滨,150001;黑龙江出入境检验检疫局,哈尔滨,150001【正文语种】中文【相关文献】1.2012年中俄边境黑河口岸地区蜱携带病原体调查研究 [J], 闻静;赵刚;焦丹;王建华;王晓丹;王国政;时晓杰2.中俄双边口岸鼠类及体表寄生虫调查 [J], 曹晓梅;胡孔新;王静;赵刚;李明;郭晓明;杨军;温占清3.对满洲里口岸中俄贸易双边本币结算调查与思考 [J],4.南昌口岸鼠、蝇、蚊及其携带病原体的调查 [J], 刘小真;万筱荣;刘中韬;肖经和;汪雁南;王纲荣;陈洪兵;徐小强5.黑龙江省中俄边境七个口岸蜱类调查 [J], 崔文富;张少华;呼满霞;张健;郑超;范东辉;孙秀峰;崔永民;韩成军;赵晓龙;牛志兴;张阳;徐向东;杜忠河;李振江因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

汉坦病毒Vero细胞灭活疫苗候选毒种筛选(一)

汉坦病毒Vero细胞灭活疫苗候选毒种筛选(一)

汉坦病毒Vero细胞灭活疫苗候选毒种筛选(一)【摘要】目的将肾综合征出血热疫苗后备筛选毒株适应于Vero细胞,并对其抗原性和免疫原性进行研究。

方法将新分离的4株汉坦病毒接种敏感动物,在乳沙鼠脑内连续传代,比较脑内病毒抗原的含量以及乳鼠的发病情况;在Vero细胞中传代,比较培养液中的病毒滴度和抗原滴度以及细胞的病变情况;利用筛选出的毒株研制Vero细胞灭活疫苗,研究疫苗的免疫原性。

结果4株病毒经乳沙鼠脑内传代,鼠脑悬液的病毒滴度和抗原滴度分别达7 00~7 75LgCCID50/ml和1∶320~1∶1280;4株毒株经Vero细胞连续传5代,培养液病毒滴度和抗原滴度分别达6 50~7 50LgCID50/ml和1∶160~1∶768;疫苗免疫家兔2针后,其中出血热病毒株ZJ4与ZJ5株疫苗免疫血清对同型毒株的中和效价达到1∶10。

结论ZJ4与ZJ5两毒株已适应于Vero细胞,且具有病毒滴度高和免疫原性良好的特性,适合用作Vero 细胞肾综合征出血热疫苗理想的候选毒株。

【关键词】汉坦病毒肾综合征出血热(HFRS)是一种严重危害人体健康的自然疫源性疾病。

在各种预防HFRS的措施中,疫苗是一种最特异和最有效的预防手段。

迄今为止,本实验室已经研究出HFRSⅠ型、Ⅱ型和双价及双价纯化沙鼠肾灭活疫苗并已投入规模生产。

经现场流行病学调查,疫区人群的保护率在95%以上,为预防HFRS起到了重要的作用〔1,2〕。

但疫苗的毒种Z10野鼠型(HTN)和Z37家鼠型(SEO)均为20世纪80年代分离,距今已将近20年,随着时间的推移,HFRS 的流行及临床症状有较大的变化,这预示着引起该病的病毒有可能发生变异。

因此,必须选择疫苗的后备毒株,一旦发生目前疫苗保护率不高或不能保护时,即可用后备毒株生产疫苗。

2001~2002年,我们从浙江省的HFRS疫区鼠肺中分离到了9株汉坦病毒,筛选出病毒滴度较高、抗原性较好的4株毒株〔3〕,再将4株毒株在Vero细胞中的增殖特性、抗原性和免疫原性进行研究,从中筛选出ZJ4与ZJ5毒株为汉坦病毒Vero细胞灭活疫苗理想的候选毒株。

5.发热伴出血症候群监测方案(2012版)03.

5.发热伴出血症候群监测方案(2012版)03.

内部资料“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”科技重大专项传染病监测技术平台项目发热伴出血症候群监测方案 (2012版专项实施管理办公室二〇一一年十二月目录I. 流行病学设计 (1)一、监测目的 (1)二、监测哨点医院的设置 (1)三、监测病例定义 (1)四、监测任务 (1)五、监测流程 (2)六、数据收集、分析和反馈 ...........................................2Ⅱ . 标本的采集、运送及保存 (4)一、标本的采集 (4)二、标本的运送 (4)三.标本的保存 .....................................................5 III. 病毒检测内容及流程 (6)一、血液标本检测流程图 (6)二、血液标本的病毒检测方法 .........................................6 IV . 细菌检测内容及流程 . . (9)一、标本检测流程图 (9)二、标本处理 (10)三、各种标本的实验室检测方法 ......................................11 V . 寄生虫检测内容及流程 . (13)一、标本检测 (13)二、实验室检测方法 ................................................13Ⅵ . 质量控制与信息管理 (14)一、质量控制 (14)二、信息管理方案 ..................................................17 VII. 附件 ............................................................................................................................ 19附件1 发热伴出血症候群病例信息调查表 .............................19附件 2 发热伴出血症候群病例标本采样种类指导表 .....................20附件 3 发热伴出血症状症候群标本采集与处理、运送操作程序 .. (21)附件 4 发热伴出血症候群核酸提取方法 ...............................25附件 5 出血汉坦病毒、新疆出血热病毒、登革病毒实验室检测操作规程 ...30附件 6 新布尼亚病毒实验室检测操作规程 .............................69附件 7 鼠疫菌实验室检测操作规程 ...................................70附件 8 猪链球菌实验室检测操作规程 .................................79附件 9 钩端螺旋体实验室检测操作规程 ...............................82附件 10 立克次体实验室检测操作规程 .. (89)附件 11 人嗜吞噬细胞无形体实验室检测操作规程 .....................101附件 12 查菲埃立克体实验室检测操作规程 ...........................105附件 13 巴贝西亚虫实验室检测操作规程 .............................108附件 14 发热伴出血症候群实验室质量控制 ...........................112附件 15 发热伴出血症候群细菌学实验检测结果汇总表 .................114附件 16 发热伴出血症候群病毒学实验检测结果汇总表 .................115附件 17 质量控制与信息管理工作用表 . (116)I. 流行病学设计一、监测目的1、了解我国不同地区的发热伴出血症候群的病原谱构成。

2020年全国植保信息暨农药械推广网重点工作 (5)

2020年全国植保信息暨农药械推广网重点工作 (5)
89
轻工化矿
复合橡胶的胶含量、炭黑含量、灰分、挥发分、密度
胶含量、炭黑含量、灰分、挥发分、密度
90
轻工化矿
固体/液体自燃点测试
自燃点
91
轻工化矿
塑料包装液压测试
液压
92
轻工化矿
铁合金类(钛铁、钒铁等)
主含量及杂质元素
93
轻工化矿
铁矿石有害元素检测
砷、汞、铅、镉、氟
94
轻工化矿
纸张和包装产品
垂直冲击跌落、戳穿强度、边压强度、耐破强度、粘合强度试验
寄生虫卵
62
食品农产品
食品罐头商业无菌检测
商业无菌
63
食品农产品
水产品中亚硫酸盐的检测
亚硫酸盐
64
食品农产品
矿泉水
溴酸盐、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌
65
食品农产品
生活饮用水
锰、氟化物、硝酸盐
66
食品农产品
瓶装水
亚硝酸盐
67
食品农产品
原料药级中西药制剂
重金属及有害元素、农药残留
68
食品农产品
茶叶感官评定
感官品质
69
食品农产品
茶叶中草甘膦残留的检测
草甘膦
70
食品农产品
药用胶囊的铬含量检测

71
食品农产品
一次性卫生用品
微生物项目
72
纺织服装
皮革摩擦色牢度
摩擦色牢度
73
纺织服装
羽绒羽毛
组成成分、透明度、耗氧量、蓬松度
74
纺织服装
纺织品纤维含量分析
纤维含量
75
纺织服装
纺织品中游离水解甲醛的测定

5株鼠样品中分离汉坦病毒毒株S基因序列比较与分析

5株鼠样品中分离汉坦病毒毒株S基因序列比较与分析

5株鼠样品中分离汉坦病毒毒株S基因序列比较与分析胡群;邹春颖;马思杰;童淑梅;梅勇【摘要】目的了解近年来从宁波口岸捕获的鼠类样品中分离的5个汉坦病毒株遗传学差异.方法利用RT-PCR方法,对5个汉坦病毒株S基因全长进行扩增、克隆和测序,并将这5个毒株的S基因序列分别与GenBank登录的20个汉坦病毒感毒株进行比较分析.结果 DX1507株和DX1408株S基因核苷酸序列长度为1766 bp与汉城型(SEOV)病毒株Rn-DH27同源性最为接近,LJ1112株S基因核苷酸序列长度为1772 bp与汉城型(SEOV)病毒株Cherwell同源性最为接近,DX0903株和BL1402株S基因核苷酸序列长度为1725 bp与大别山型(DABV)病毒株Yongjia-Nc-95和Yongjia-Nc-38同源性最为接近.结论宁波口岸分离到的汉坦病毒株分别为汉城型和大别山型,对宁波口岸开展汉坦病毒传播防控有重要意义.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2016(032)005【总页数】4页(P502-505)【关键词】汉坦病毒;宁波;序列分析;S基因【作者】胡群;邹春颖;马思杰;童淑梅;梅勇【作者单位】大榭出入境检验检疫局,宁波315812;大榭出入境检验检疫局,宁波315812;大榭出入境检验检疫局,宁波315812;大榭出入境检验检疫局,宁波315812;大榭出入境检验检疫局,宁波315812【正文语种】中文【中图分类】R373汉坦病毒(Hantavirus, HV)是重要的人兽共患病病原体,人类感染HV后主要导致2种严重疾病,即肾综合征出血热(hemorrhagic fever withrenal syndrome,HFRS)和汉坦病毒肺综合征(hantaviruspulmonary syndrome,HPS)。

HV流行范围之广泛、危害严重,已经成为一个全球性的公共卫生问题[1-2],近年来不断有新型或新亚型病毒被发现,已知HV至少可分为40个血清型/基因型,其中已证实至少有22个型的HV可引起人类疾病[3-4]。

三峡库区重庆段2014-2016年汉坦病毒鼠类宿主监测分析

三峡库区重庆段2014-2016年汉坦病毒鼠类宿主监测分析

三峡库区重庆段2014-2016年汉坦病毒鼠类宿主监测分析彭靖尧;黄为;凌华;毛德强;夏宇;蔡同建【摘要】目的通过对三峡库区重庆段2014-2016年汉坦病毒鼠类宿主的监测分析,分析鼠种构成及带毒特征,为三峡库区重庆段肾综合征出血热的防治提供依据.方法在三峡库区重庆段设置4个监测点,每年捕获鼠类宿主动物,分类后取其肺组织应用聚合酶链反应(PCR)方法进行汉坦病毒检测分型及带毒率分析.结果 2014-2016年在各监测点总共捕鼠8种637只,其中黄胸鼠280只,占总捕获数43.96%,平均鼠密度为3.94%;鼠肺汉坦病毒检出阳性35份,均为汉城型病毒,带毒率为5.49%;室内(4.59%)和户外鼠密度(3.39%)差异有统计学意义(x2=15.32,P<0.05);主城区鼠密度(0.88%)与区县鼠密度(6.04%)差异有统计学意义(x2 =272.88,P<0.05).结论三峡库区重庆段多种鼠类携带汉城型病毒,优势鼠种为黄胸鼠,主城区以外的各区县更应加强鼠患的防治.%Objective To analyze the composition of rodent host species and the viruliferous rat rate of Hantavirus,so as to offer essential scientific basis for hemorrhagic fever of renal syndrome(HFRS) prevention and control in Chongqing section of Three Gorges Reservoir.Methods Four monitoring stations were set in Chongqing section of Three Gorges Reservoir,and rats were captured every year during 2014-1016.Rats were taxonomically identified and their lung tissues were collected and tested for Hantavirus nucleotide sequences and host infection rate by real-time PCR test.Results Eight kinds of 637 rats were captured during 2014-2016 included 280 rattus flavipectus(43.96%).The average density of rodents was 3.94%.A total of 35 Hantavirus nucleotide positive lung samples were detected with uniform genotype Seoulvirus(SEOV).The rate of Hantavirus carrier was 5.49%.The difference of the density of rodents had statistical significance between outdoor(3.39 %) and indoor(4.59 %)(x2=15.32,P<0.05).And the difference of the density of rodents had statistical significance in main city zone(0.88 %) compared with other districts(6.04%)(x2 =272.88,P<0.05).Conclusion Only genotype SEOV of Hantavirus is found in rodent host in this study and the dominant rat species is rattus flavipectus in Chongqing section of Three Gorges Reservoir.The districts far from main city zone should strengthen the prevention and control of the rodents.【期刊名称】《检验医学与临床》【年(卷),期】2017(014)023【总页数】3页(P3447-3448,3452)【关键词】汉坦病毒;肾综合征出血热;鼠密度;带毒率【作者】彭靖尧;黄为;凌华;毛德强;夏宇;蔡同建【作者单位】陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学院军队流行病学教研室,重庆400038;重庆市疾病预防控制中心 400042;重庆市疾病预防控制中心 400042;重庆市疾病预防控制中心 400042;重庆市疾病预防控制中心 400042;重庆市疾病预防控制中心 400042;陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学院军队流行病学教研室,重庆400038【正文语种】中文汉坦病毒隶属布尼亚病毒科,为分节段的负链RNA病毒,鼠类为自然宿主,其感染人类时会引发肾综合征出血热(HFRS)[1]。

关于发表论文授予继续教育学分的说明

关于发表论文授予继续教育学分的说明

902V〇L31 No. 8Journal of Aerospace Medicine Aug 2020染源为黑线姬鼠、褐家鼠等。

褐家鼠分布广、数量多,繁殖 能力强,为居民区优势鼠种,是汉坦病毒的主要宿主。

因此,日常监测中需重点关注,应制定有效的防制措施,严格 控制鼠密度。

按照ISO/IEC17025:2017条款要求,对三种 检测方法进行了方法验证,证实三种检测方法均可正确运 用,其中方法2的检测下限、重复性更好,推荐作为日常检 测的首选方法。

ISO/IEC17025:2017规定,“在引人检测 或校准之前,实验室应证实能够正确地运用这些标准方法”。

研究中的三种方法均来自于行业标准,但要正式使 用,仍需进行方法验证。

三种方法特异性、灵敏性、抗干扰 能力、亚型检测能力基本相同,但检测下限、重复性、等方 面存在一定的差异。

检测下限方面,第一轮PCR扩增,汉 滩病毒检测,方法2与方法3相同,优于方法1;汉城病毒 检测,方法3优于方法1,方法2优于方法1;第二轮PCR 扩增,汉滩病毒检测,方法2与方法3相同,优于方法I ;汉 城病毒检测,方法3优于方法1,方法2优于方法3。

因此,总体来说,检测方法2效果最好。

接着使用该方法,在多个 口岸鼠类监测中多次检出汉坦病毒核酸阳性样本。

近年 来,广东地区H FRS发病率逐年上升,以广州市、佛山市、深 圳市、东莞市、珠海市出现的病例数最多(占82. 6%)[7_9],珠海市自建市以来发生过多起病例,并呈散发流行。

病例 多发生于城乡结合处和环境复杂的地域,患者病情严重,预后差。

1995年3月在珠海市香洲区前山镇首次发现3例 H FRS疑似病例,经省、市卫生防疫站联合调查和疫源检索,证实为本地感染n°]。

珠海市区和口岸地区鼠间均存在 有汉坦病毒的感染。

黄利群等报道珠海市鼠间汉坦病毒 感染率呈上升趋势,鼠间流行传播教严重。

朱汉荣等调 查,鼠带毒率为2.69% [^13],略低于全国平均阳性率(2. 75%)1141。

黑龙江黑河口岸鼠类及蜱类携带巴尔通体的调查

黑龙江黑河口岸鼠类及蜱类携带巴尔通体的调查

黑龙江黑河口岸鼠类及蜱类携带巴尔通体的调查鞠文东;王艳梅;徐宁;耿聪;韩茜宇;刘岩;程成;焦丹;黄洋【摘要】目的调查黑龙江黑河口岸鼠类及蜱类携带巴尔通体的情况.方法利用布旗法和夹夜法捕获蜱类及鼠类样本,其中捕获蜱类样本640只,鼠类样本8只,对样本进行处理后,利用PCR方法检测巴尔通体,获得的阳性样本通过基因测序进一步鉴定.结果在蜱类检测中,仅在森林革蜱中检测到巴尔通体,阳性数为22只,在森林革蜱中的感染率为3.77%(22/583);在鼠类检测中,仅在黑线姬鼠中检测到巴尔通体,阳性率为33.33%(2/6).结论黑龙江黑河口岸存在鼠类及蜱类携带巴尔通体的情况,提示应重点关注巴尔通体感染,并开展鼠类及蜱类携带巴尔通体的常态化监测.【期刊名称】《口岸卫生控制》【年(卷),期】2018(023)002【总页数】4页(P60-63)【关键词】黑河口岸;鼠类及蜱类;巴尔通体;监测【作者】鞠文东;王艳梅;徐宁;耿聪;韩茜宇;刘岩;程成;焦丹;黄洋【作者单位】黑龙江国际旅行卫生保健中心黑龙江,哈尔滨,150001;黑龙江国际旅行卫生保健中心黑龙江,哈尔滨,150001;黑龙江国际旅行卫生保健中心黑龙江,哈尔滨,150001;黑龙江国际旅行卫生保健中心黑龙江,哈尔滨,150001;黑龙江国际旅行卫生保健中心黑龙江,哈尔滨,150001;黑龙江国际旅行卫生保健中心黑龙江,哈尔滨,150001;黑龙江国际旅行卫生保健中心黑龙江,哈尔滨,150001;黑河出入境检验检疫局黑龙江,黑河,164300;黑龙江省森工总医院黑龙江,哈尔滨,150001【正文语种】中文【中图分类】R181.8黑河口岸是黑龙江对俄口岸中客运量最大口岸之一,举足轻重的客运大口岸地位,决定了口岸稳定安全的公共卫生环境对其的重要性,巴尔通体具有传播广泛、感染迅速、致病性强等特点,通过家畜及宠物既可传染给人类,长期以来地方卫生检疫的盲点导致相关疾病的蔓延,对口岸卫生安全构成潜在的威胁,本研究对中俄边境黑河口岸地区的蜱类、鼠类进行本底调查,对该地区的蜱类、鼠类所携带的巴尔通体(Bartonella)进行监测及检测,目的在于明确中俄黑河口岸地区蜱及鼠类种群状况及其携带的病原体本底情况,该研究对于及时快速监测中俄边境口岸地区的蜱媒、鼠媒携带巴尔通体具有重要意义。

2014—2016年河南省鼠类携带汉坦病毒的病原学分析

2014—2016年河南省鼠类携带汉坦病毒的病原学分析

2014—2016年河南省鼠类携带汉坦病毒的病原学分析杜燕华;李懿;马宏;王海峰;许汴利;黄学勇【摘要】目的分析河南省鼠类携带汉坦病毒的基因型别和病原学特点.方法选取2014—2016在驻马店市确山县捕获的600只鼠类标本,分析该地区野外和居住区优势鼠种和鼠密度.采用RT-PCR法扩增鼠肺标本中汉坦病毒的特异性片段(M和S 片段),以M片段(2003~2302 nt)构建系统发生树,分析基因亚型和进化特点.结果确山县野外优势鼠种为褐家鼠和黑线姬鼠,鼠密度在1.33%~1.83%;居住区优势鼠种为褐家鼠、小家鼠和黄胸鼠,鼠密度1.36%~1.97%.RT-PCR结果显示2014年3只鼠携带汉坦病毒,鼠种分别为小家鼠、大仓鼠和褐家鼠.3株病毒M片段和S片段核苷酸同源性均为100%,基于M片段的系统进化分析显示属于S4亚型汉城型汉坦病毒,与韩国和我国湖北省分离的病毒亲缘关系较近.结论河南省确山县鼠类携带的汉坦病毒为S4亚型,宿主范围广泛,有必要采取相关防控措施,预防肾综合征出血热的流行.%Objective To analyze the genotyping of hantavirus and investigate the pathogenic features of local rats in Henan province. Methods A total of 600 rats captured in Queshan county, Zhumadian city from 2014-2016 were chosen to find out the major species and density. Rat lung specimens were detected by RT-PCR using partial M and S segment primers, then sequencing and phylogenetic analysis based on M segment (2003-2302 nt) were performed to analyze gene subtype and evolution. Results In the field of Queshan county, major species were sewer rats and apodemus agrarius, and the average density of rats was 1.33%-1.83%. Sewer rats, mus musculus and apodemus agrarius were major species in the residential area, and the average density of rats was1.36%-1.97%. Hantaviruses were detected by RT-PCR in three captured rats in 2014, and the species were mus musculus, cricetulus triton and sewer rats. Nucleotide homology similarity based M and S segment of three positive products was 100%. Phylogenetic analysis indicated the virus was belonged to S4 subgenotype of Seoul virus, which was similar with the strains in Korea and Hubei province, China. Conclusion The virus from rats in Queshan county, Henan province is seoul virus, S4 subgenotype. It is necessary to take the relevant prevention and control measures to prevent hemorrhagic fever of renal syndrome because of wide host range.【期刊名称】《天津医药》【年(卷),期】2017(045)006【总页数】4页(P648-651)【关键词】肾综合征出血热;汉坦病毒;基因型;河南;病原学;系统进化分析【作者】杜燕华;李懿;马宏;王海峰;许汴利;黄学勇【作者单位】郑州,河南省疾病预防控制中心,河南省传染病病原生物重点实验室450016;郑州,河南省疾病预防控制中心,河南省传染病病原生物重点实验室450016;郑州,河南省疾病预防控制中心,河南省传染病病原生物重点实验室450016;郑州,河南省疾病预防控制中心,河南省传染病病原生物重点实验室450016;郑州,河南省疾病预防控制中心,河南省传染病病原生物重点实验室450016;郑州,河南省疾病预防控制中心,河南省传染病病原生物重点实验室450016【正文语种】中文【中图分类】R373.32肾综合征出血热是由汉坦病毒引起的、以啮齿类动物为主要传染源的一种自然疫源性疾病。

我国汉坦病毒基因型和基因亚型的分布研究

我国汉坦病毒基因型和基因亚型的分布研究

我国汉坦病毒基因型和基因亚型的分布研究王世文;杭长寿;王华;解燕乡;马本江【期刊名称】《病毒学报》【年(卷),期】2002(18)3【摘要】为了搞清全国汉坦病毒的基因型和亚型的分布情况 ,广泛收集了全国各地汉坦病毒毒株、阳性病人血清和阳性鼠肺 ,并应用RT -PCR的方法 ,应用汉坦病毒型特异性引物 ,对这些不同来源的阳性标本中汉坦病毒型特异性M和S片段进行扩增和测序 ,并与其它已知病毒序列进行比较 ,以明确其型别和亚型及其在全国的分布情况。

结果表明 :我国HFRS各疫区仍然为HTNV和SEOV两型病毒 ,但亚型分布差异较大 ,其中HTNV可分为 9个亚型 ,SEOV则有 4~ 6个亚型。

Q32株的部分M和S片段分属于H9和H2亚型 ,是一个基因重排病毒 ,而Nc16 7株在系统发生上与其它HTNV明显不同 ,比较核苷酸序列发现 ,其M片段与其它HTNV 的同源性在 71 3%~ 76 7%之间 ,S片段与其它HTNV的同源性只有 5 2 3%~ 5 7 8% 。

【总页数】6页(P211-216)【关键词】汉坦病毒;基因型;基因亚型;中国;分布【作者】王世文;杭长寿;王华;解燕乡;马本江【作者单位】中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所【正文语种】中文【中图分类】R373.9【相关文献】1.河南省Ⅱ型汉坦病毒基因亚型及其分布的研究 [J], 孙黎;张永振;李林红;张彦平;张爱梅;郝宗宇;孙建伟;陈化新2.乙型肝炎病毒基因型和血清亚型在我国部分地区的分布及其特点 [J], 夏国良;Omana;V;Nainan;等3.广西乙型肝炎病毒基因型及基因亚型流行病学分布研究 [J], 黄月莹;何雨;黄天壬;邓伟;张玉丽;吴玲红;曾洁4.扩增HCV 5'-UTR基因序列分析河南地区HCV基因型和基因亚型分布 [J], 魏君锋;曾艳丽;靳秀;侯环荣;肖二辉;丁岗强;康谊;尚佳5.福州市乙肝病毒基因型和基因亚型的分布及其与前C、C基因启动子变异的关系[J], 郭燕;郑能雄;姚栩;纪惠玲;陈智伟;陈艳;徐珊;张彩云;黄晓霞;杨建娜;卢园因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

鼠疫实验室检测技术

鼠疫实验室检测技术
(F1McAb)
吸水纸
C区:羊抗 小鼠Ig
免疫荧光技术(IFT)
标记物-荧光素(如异硫氰荧光素 Yersinia pestis 免疫荧光染色 FITC)
荧光素标记抗体检测相应抗原-直 接法:如FITC-FIMcAb为异硫氰 酸荧光黄标记鼠疫F1单克隆抗体。
方法:固定好的玻片标本用1%牛 血清PBS浸洗5分钟,流水冲洗。 用FITC-FIMcAb适量(0.2ml)荧 光染色,室温作用30分钟,流水 冲洗。干燥,荧光显微镜油镜观 察,鼠疫菌染上翠绿色荧光
鼠疫噬菌体试验
➢ 在培基上密集平行划线培养鼠疫菌,鼠疫噬菌体滴 于上端划线中部,直立平板,使噬菌体液垂直划线 自然流下,置20℃培养24h,有明显的噬菌带。
➢ 在18~22℃鼠疫噬菌体只能裂解鼠疫菌而不裂解假 结核菌,具有较强的专一性(噬菌作用具有种的特异 性),是鼠疫细菌学诊断中特异的鉴定方法之一。
目标基因
引物序列
产物长度
fra 1F 5’-GGAACCACTAGCACATCTGTT-3’
249 bp
1R 5’-ACCTGCTGCAAGTTTACCGCC-3’ pla 2F 5’-ACTACGACTGGATGAATGAAAATC-3’ 456 bp
2R 5’-GTGACATAATATCCAGCGTTAATT-3’
鼠疫菌染色方法有革兰氏染色(菌体染成红 色)、美兰染色(菌体染成兰色,两极浓染明 显)、姬姆萨染色(菌体染成色,荚膜染成色)
鼠疫菌染色检查(脏器压印片)
革兰氏染色
美兰染色
鼠疫菌染色
鼠疫菌涂片的革兰氏染色
鼠疫菌染色检查
Wayson stain(魏申氏染 荚膜染色—墨汁负染色 色)呈现的两极浓染特 征

吉林省图们铁路口岸鼠类本底调查报告

吉林省图们铁路口岸鼠类本底调查报告

关键 词
媒介 生物 密度
种 群 口岸
传 染病
中图分 类号
R 8 文献标 识Байду номын сангаас 15
B d i 1 . 9 9 ji n 1 0 o 0 3 6 /.s . 0 8—5 7 .0 2 0 .0 s 7 7 2 1 .3 0 5
图们铁路 口岸 是吉林 省仅 有 的两个 对朝铁 路 口 岸 之一 , 中朝 贸易有 着不可估 量 的作用 , 类有 害 对 各
检, 按生 物 系形 态 进 行 分 类 鉴 定 ; 将 死 鼠进 行 解 再
褐家 鼠 Rt s ovg u e ehu. 6 at rei s r not1 9 un c Bk 7
姬 属 鼠 A o e u a p pd m s u K
第 1卷 第3 7 期
口岸卫 生控 制
吉 林 省 图们 铁 路 口岸 鼠 类 本 底 调 查 报 告
黄 大雷 王 岸英 寇传 勇 李 南植 李 佳隆 杨 志明 吉林 出入境 检验检 疫 局 图们 办事处 ( 吉林 , 图们 ,3 10 130 )
邵 丽筠 ( 通讯 作者 ) 曹 国祥
此次监测工作严格按照 国质检 [0 1 6 号文 20 ] 1 件 的规定 , 采用 Et ln夹 日法 、 o 二号铁板 鼠夹 , 根据 鼠类 活动情 况选 择 国际联运 交 接所货 运仓 库和生 活
办公 区两个 栖 息 地 布 放 鼠夹 , 距 为 5 行 距 为 5 夹 m, O

1 — 5
口岸卫生控制
第1 卷 第3 7 期
米, 连放 3 , 月一 次 , 天布 夹20 ; 晚布 夹 , 天 每 每 0盘 傍 清晨收 夹 , 饵采 用麻花 ; 获的死 鼠连 同 鼠夹 一起 诱 捕 放 入 白色可密 封塑 料 袋 内 , 洒 麻醉 剂 熏 杀 鼠体 外 喷 寄生虫后 封 口, 置半小 时后 放入 白色搪 瓷盘 , 放 用牙 刷 在 鼠耳 、 、 鼻 腋下 、 股 沟 等 处进 行 体 外 寄 生虫 搜 腹

中国部分地区汉坦病毒在鼠形动物中感染及基因变异

中国部分地区汉坦病毒在鼠形动物中感染及基因变异

中国部分地区汉坦病毒在鼠形动物中感染及基因变异汉坦病毒(Hantavirus, HV)属布尼亚病毒科汉坦病毒属,是一种分节段的、单股、负链RNA病毒,其基因组由S(small)、M(medium)和L(large)三个片段组成。

到目前为止,全世界已确定有23种汉坦病毒的血清型存在,且不同的汉坦病毒在致病性、疾病谱以及自然携带宿主上都各不相同,该病毒在临床上主要引起欧亚地区的肾综合征出血热(Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome, HFRS)和美洲的汉坦病毒肺综合征(Hantavirus Pulmonary Syndrome, HPS)。

我国是肾综合征出血热的高发国家,每年报告发病人数在2-5万,占世界该病总数的90%以上。

长期以来,汉滩型(Hantaan, HTNV)和汉城型(Seoul, SEOV)病毒是存在于我国的两个主要血清型,其宿主分别为黑线姬鼠(Apodemus agrarius)和褐家鼠(Rattus norvegicus)。

近年来,随着现代生物技术的进步和发展,我国对汉坦病毒的研究也不断深入,一些在国内从未报道过的新基因型或新亚型病毒相继被发现和报道。

然而,我国地势辽阔,地理环境多样,生物物种丰富。

是否存在其它尚未发现的新型汉坦病毒或病毒的新亚型还有待进一步的调查和研究。

本研究采用将现场调查与实验室检测相结合的方法,在我国云南西北部大小中甸山周围、内蒙古呼伦贝尔盟莫力达瓦旗、陕西西安地区等地针对汉坦病毒进行了系统深入的分子流行病学调查研究,以了解我国可能存在的新型或新亚型汉坦病毒及其宿主分布和感染状况,进而探讨分析这些病毒的基因特征及其与其他汉坦病毒的关系。

对采自云南西北部地区11个采样点的600余份来自40多个鼠种的小动物脏器标本中汉坦病毒L片段进行RT-PCR检测,结果提示该地区多种小动物携带变异较大的汉坦病毒,总的阳性率为6.4%,除啮齿目动物外,首次在国内发现食虫目动物如纹背鼩鼱、缺齿鼩、短尾鼩、多齿鼩鼹等也携带变异很大的汉坦病毒,这些研究结果提示该地区汉坦病毒的流行状态可能十分复杂;对来自内蒙古呼伦贝尔盟莫力达瓦旗地区的80份标本进行检测,结果提示,宿主动物总的病毒感染率为2.5%,而且该地区至少有两种动物----大林姬鼠和黑线姬鼠为当地汉坦病毒的主要携带宿主,其中大林姬鼠可能感染率较高,而且所携带的汉坦病毒变异也较大,因而在当地汉坦病毒流行中的作用值得引起重视;对来自西安的26份抗原阳性黑线姬鼠标本进行检测,结果提示该地区主要流行汉滩型病毒,病毒序列与以前报道的当地流行株的基因差异较大,与贵州地区流行株的同源性较高,但各毒株之间序列差异较小,具有地区聚集性的特点。

2024年度出血热病毒(汉坦病毒)

2024年度出血热病毒(汉坦病毒)

2024/3/23
25
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
2024/3/23
26
2024/3/23
12
社区防控策略部署
01
02
03
开展灭鼠行动
组织专业队伍定期开展灭 鼠行动,降低鼠类密度, 减少病毒传播风险。
2024/3/23
加强环境卫管理
建立健全环境卫生管理制 度,保持公共区域清洁, 及时清理垃圾和废弃物。
开展健康教育
通过宣传册、讲座等形式 向居民普及出血热病毒相 关知识,提高居民防范意 识和能力。
02
根据其基因型和血清型的不同, 汉坦病毒可分为多个不同的型别 ,如汉城型、汉滩型、普马拉型 等。
4
出血热病毒传播途径
01
02
03
04
呼吸道传播
通过吸入被病毒污染的气溶胶 而感染,如鼠类排泄物干燥后
形成的尘埃。
消化道传播
进食被病毒污染的食物或水而 感染。
接触传播
通过破损的皮肤或粘膜接触被 病毒污染的血液、体液等而感
避免接触鼠类及其排泄物
定期消毒
保持室内清洁,及时清理垃圾,避免 吸引鼠类;在野外活动时,不要直接 接触死鼠或其排泄物。
对可能受到病毒污染的物品和场所进 行定期消毒,如使用含氯消毒剂擦拭 家具、地面等。
加强个人防护
在可能接触到病毒的环境中,如清理 鼠类排泄物或死鼠时,应穿戴防护服 、手套和口罩,避免皮肤直接接触。
中药及天然药物筛选
从中药及天然药物中筛选具有抗病毒活性的成分,开发新型抗病毒药 物。
2024/3/23
17
患者康复期管理指导
心理干预
对患者进行心理评估,提供必要的心 理支持和干预,减轻焦虑、抑郁等情 绪问题。

巴彦淖尔地区汉坦病毒的分子流行病学调查

巴彦淖尔地区汉坦病毒的分子流行病学调查

9 4℃ 1mi, 2℃ 1mi , 2℃ 2mi, 3 循环 , n 5 n 7 n 共 0个 最后 于 7 2℃延 伸 l n 取 5 L第 一轮 反应 产物 Omi ,
为模板 进行第二 轮反应 , 反应 总体积 均为 5 L O .
收稿 日期 :2 0 —0 0 8 1—2 6
作 者简 介 :杨鹏  ̄ ( 9 3 ) 1 8 一 ,男 , 山西 阳 泉 人 ,硕 士 ,主要 从 事 分 子 病 毒 学研 究
维普资讯
第3 3卷 第 3期
Vo.3 No 3 1 3 .
西 南 师 范 大 学 学 报 ( 自然科 学版)
J un l fS uh s iaNoma ies y ( trl ce c dt n o ra o o t wet Chn r l Unv ri Naua S in eE io ) t i
1 3 RT- . PCR
经免疫荧光 检测汉 坦病毒 抗原 阳性 的标本 用 于扩 增 S基 因.参 照 Ivto e n i g n公 司 的 T i l A 试 剂 r r o RN z 使用 说明书提取 总 R NA. P 4引物用 于反转 录汉坦病 毒 基 因的 c 1 DNA .S基 因 片段 的扩 增 采 用套 式一 C P R方 法 ,HSP 2为外 引 —r 物 ,内引物 S O S E — N1和 S O S ,引物序列 见表 1 E - N2 ,由北 京奥科 生物技 术有 限公 司合成. 逆转 录反应条件 为 4 2℃ 9 n 7 0mi , 2℃ 1 n 0mi.套式一 C 的两轮反 应条件 相 同 : 4℃预 变性 3mi , P R 9 n
1 疆 石 河 子 大 学 生命 科 学 学 院 ,新疆 石河 子 8 2 0 ;2 .新 30 3 .中 国疾 病 预 防控 制 中 心 传 染病 预 防控 制 所 ,北 京 12 0 026

疾病控制主治医师专业实践能力3

疾病控制主治医师专业实践能力3

[模拟] 疾病控制主治医师专业实践能力3一、以下每一道考题下面有A、B、C、D、E五个备选答案。

请从中选择备选答案中所有正确答案。

第1题:流行性出血热预防控制措施,不包括A.环境治理B.灭鼠和防鼠C.个人防护D.预防接种E.灭蟑螂参考答案:E答案解析:流行性出血热的预防措施为:疫情监测,防鼠灭鼠;做好食品卫生和个人卫生;疫苗接种。

第2题:霍乱弧菌在肠道定居后,在该处繁殖并产生致泻性极强的毒素,使患者出现严重的水样腹泻综合征。

该毒素为下列5种毒素中的哪一种A.志贺毒素B.霍乱肠毒素C.耐热肠毒素D.溶血素E.溶细胞素参考答案:B答案解析:霍乱弧菌在肠道定居后,在该处繁殖并产生致泻性霍乱肠毒素,使患者出现严重的水样腹泻综合征。

第3题:流行性出血热高危地区的高危人群是A.家鼠型疫区中从事野外劳动的青壮年劳动力B.鼠密度、带病毒率高于10%的自然疫源地分布区中的<6岁儿童C.姬鼠型疫地中的老年人及儿童D.发病率≥100/10万,乡镇中≥16岁,尤其男性家民等居民E.林区疫源地中的家庭妇女参考答案:D答案解析:一般认为人群普遍易感,隐性感染率较低,在野鼠型多为3%~4%;但家鼠型疫区隐性感染率较高,有报告为15%以上,一般青壮年发病率高。

第4题:某小学生患猩红热,防疫人员对其进行流行病学调查。

在追溯传染源时,除猩红热患者外,还应询问其在距发病最长潜伏期内接触过何种人员A.咽峡炎患者B.扁桃体炎患者C.小耳炎患者D.丹毒患者E.以上都是参考答案:E答案解析:在追溯传染源时,除猩红热患者外,还应询问其在距发病最长潜伏期内是否接触过咽峡炎患者、扁桃体炎患者、中耳炎患者和丹毒患者。

第5题:某地高温季节,突然出现一剧烈腹泻患者,粪便呈清水样,伴有呕吐并迅速出现严重脱水、循环壹竭和肌肉疼挛;此例病人在病原学检查尚未肯定前即可作出下列哪种诊断A.轮状病毒腹泻B.空肠弯曲菌肠炎C.疑似霍乱D.霍乱确诊病例E.以上都不对参考答案:C答案解析:霍乱是由霍乱弧菌引起的烈性肠道传染病,典型的临床表现为:起病急,剧烈的腹泻、呕吐以及由此引起的脱水、电解质紊乱及酸碱失衡、循环衰竭。

延吉机场口岸鼠类携带病原情况调查

延吉机场口岸鼠类携带病原情况调查

米, 连续3 , 日布 夹10 次 , 天 每 0夹 收夹 时将捕 获 的 鼠体 连 同鼠夹一 起放入 白色可密封 塑料袋 内, 置乙醚棉 放 球麻醉 鼠体 表寄生虫后封 口, 回实验 室疏检 鼠体表 带 寄生虫 , 同时对 鼠体进行个体 测量后 解剖取 鼠肺 、 、 肝 脾置 于医用 冻存管 内 , 于液氮罐 中 , 保存 待检测 。
4 ℃ 4 n; 5 C 4 n 2 5 mi 9  ̄ mi 。
区和野外 环境结 合部 分 采用 E T N夹 夜 法 , 用二 LO 使
号铁板夹 , 以油炸花生米粒诱饵 , 距为5 行距 为5 夹 m, 0
12 3 2 P R扩 增 试 剂 采用 Pe i E a o . . . C rm x xT q。H t M
鼠类 的种 群 构成 、 节 消 长 、 外 寄生 虫 调查 的 同 季 体 时 , 鼠类 携带 鼠疫 菌 、 疹 伤 寒立 克 次 体 、 坦 病 对 斑 汉 毒情 况开展 了调 查 , 现将 部分 调查结 果报 告如 下 :
1 材 料与 方法
123 1 汉 坦病 毒 反转 录合 成 c N 采 用 Pie ... D A: r — m
摘 要 目的 了解延 吉机 场 口岸 鼠类病 原携 带情 况 , 口岸 传 染病 监 测和媒 介 生物控 制提供依 据 。 为
方法 采 用 E T N 夹夜 法捕 鼠 , 集 鼠类体 表寄 生 虫、 LO 搜 个体 测 量后 解 剖取 鼠肺 、 、 置 于 医用 冻 肝 脾
存 管内, 做好标记 , 保存 于管液氮罐 中, 检测鼠疫茵、 地方性斑疹伤寒立克次体 、 汉坦病毒 。 结果 本 次调查共捕获鼠类10 其 中 份鼠肺汉坦病毒检测阳性。 5 只, 6 结论 应进一步开展 口岸鼠类携带病原
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。

B f r . L 4×d T . p ,模 板2 0x ,弓 物 u e 50 , f N P5 O . L .1 L I S O—M ( 0 M) . w ,弓 物 S O—MR ( 0 M) E F 2 w 2O L I E 2w
2 2 核酸 序列分 析结 果 . 对 扩增 的特 异 性 核酸 片 段纯 化 、 隆并 进 行 核 克 酸序 列测定 ( ) 图2 。 通过 B A T与在 G n ak数 据 库 中 已 注册 的 LS eB n 汉城 型汉 坦病 毒核酸 序列进 行 比较 。 析结 果表 明 , 分 本次 采集 的褐家 鼠所 携 带 的汉坦 病 毒 , 测 定 的 核 其 酸序 列与 G n ak数 据 库 中 已注 册 的对 应 核 酸 序 eB n 列 ( Q 35 5 G 522 、 F037 A 10 等 ) D 13 0 、 U 999 E 257 、 F9 19 1
( 。 , 、州 1c, // ^ \^ ^\^/^ 吣/ \ ) w\ I v\ nw f / /M^ ^ n v) f /√√ v , 一 v 0 \\ ^ /^\f ^ ^^ // 『 \ \ \ M ^ vk \ M , \ \ / / \『 f / ^\
: … … : … … 一: … … … … 一篇… … 一 : … … 一 : … … … … 品… … 三 : : 一: … … … … … … : ;
本 研究 参考 相关 文献 , 据 汉坦 病 毒 M基 因序 依

Ti l egn 购 自 Ivtgn公 司 ;一 步法 R ro R aet z nioe r T P R试 剂 盒 、 N o m rs、 C D A Pl eae 4×d T 、 N y N P D A分
子量标准 D2 0 、 N I00 D A纯化试 剂盒、 T 、 gl I G X— a P 等试 剂购 自宝 生物 工程 ( 大连 ) 限公 司。 有
肾综 合 征 出 血 热 (hm r ai fvrwt ea e or gc ee i rnl h h snrme,H R ) 源地遍 布五大 洲 的8 多 个 国家 ydo F S疫 0
1 1 实验 材料 . 11 1 样 品采集 .. 于2 1 ̄4 一5 , 00 月 月 采用 夹夜 法 、 鼠笼法从 辽宁 口岸 地 区采集 的褐 家 鼠。 取肺 脏样 品进行 核酸检 测 。 1 12 质 粒和 菌株 .. p 1 TV co 购 自宝生 物工 程 ( MD 8一 et r 大连 ) 限 有 公 司 ; 主菌 大肠杆 菌 E clX 1一bu , 宿 .oi L le 本实 验 室 保存。
分 型试 验 ( C 。 应 组成 : 应 总体 积5 w , P R) 反 反 0 L
包 括 D A P lm r e ( U w )2 O , 0XP R N o ea y s 1/ L . p L,1 C
图1 汉坦病毒部分检测结果 ( 汉城型 J
( : L 0 0 M r r1— 样 品 P R 产 物 ) M D 2 0 ak ; 6: e C
2 1 核 酸检 测结果 .
内, 加入l LT z 试剂后研磨成匀浆, m ro il 室温放置5l ; In l i 加脚 氯仿, 剧烈振荡1s , 5e 室温放置3 i, ℃ e mn于4 100 离 1 i; 心吸 出上 清 , 2 0g 0 5 n小 m 置于 另一15 L离 .m 心管 中 , 入 异 丙 醇 50 L 室 温 放 置 1 mn 4 加 0w , 0 i , ℃
12 4 产物分 析 ..
吸取I w O L扩增 产 物 , 入 到 1 琼 脂 糖凝 胶 电 加 % 泳 加样 孔 中 , 恒压 10 3mi 2 V,0 n后将 胶置 于 凝胶 成像 系统 中观看 结果 并拍 照 。
具有高度的相似性 , 相似度为9 % ~ 9 , 7 9 % 确认为汉
100 离心 1 mn弃 上 清 , 入7% 乙醇 l L洗 涤 , 2 0g 0 i; 加 5 m 4C70g L i;  ̄ 50 离 5 n弃上清 , ,m 将沉淀 自然干燥 , 加入适 量的 D P E C水溶解沉淀 , 直接用于反转 录。 12 3 反应 组成 及反应 条件 ..
地 区 、 鲜 半 岛和 日本等 地 。 朝 近年 来 , 口岸 地 区 的大 规 模 开发 建 设 影 响 了 鼠
类 的栖息地 。 同时 , 伴随着 国际贸易的快速发展 , 鼠 类可随飞机 、 轮船等交通工具在国际 口岸之间扩散。 上述因素导致了国境 口岸地区肾综合征 出血热疫情 出现 了一些 新 的变化 , 加强 监测 。 需
J \ ^
。 … … 一 … 一 一;
、 、 , 、 ,

、、 ^ 、 , ^ , 、 ^ 、 , , 、 , 、
、 ^\, j ^ ^『, f ^^『 『^/ \/ 『\ \\ ^\
1 13 主要试 剂 ..
和地区, 全球约12 / 的人 口在其威胁之下 。 该病是 由
汉 坦病 毒 ( at i s V) H n v u,H 引起 的, 黑线 姬 鼠 ar 以 ( pdm sarr s 、 家 鼠 ( au ovges 等 A oe u gau ) 褐 i R t snrei ) t u 鼠类宿主动物为主要传染源的 自然疫 源性疾病。 世 界流行性出血热疫情主要集 中在亚洲 , 亚洲病例 主 要分布在中国及与中国东北三省毗邻的俄罗斯远东
1 2 实验 方法 .
列设计并合成特异性引物 , 建立特异性核酸检测方
法 。 辽宁 口岸 地 区 鼠类 携 带 汉 坦 病 毒 的情 况 进 行 对 初 步调 查 , 口岸地 区 肾综 合 征 出血 热 的 预 防控 制 为
12 1 引 物设计 ..
参考文献报道 , 根据汉坦病毒 M基因序列设计 并合 成 特异 性 引 物。 片段 外 引物 : T M H v—M O F
Mx2O L 2×B fr 5 0 , i .w , ue . L 4×d T .w , f 2 N P5O L 模 板 R A20x 弓 物 H V—MF (0 M)20 , N . 1 L, l T O 2w . L
弓 物 H V—M O ( 0 M) . w ,卒 充 R aeFe f T R 2 2O L 卜 N s re
金( 0 0K 1 ) 2 1I2 5
C C。E C S O型引 物 :E S O—MFG G A T T C . T G C C T T
T T A 兀 1 ' S O — MR T GC T T C C ATI E . GG AA C GGGG GGT 一

3l一
口岸卫生控制
在辽宁口岸捕获的1 只 4
褐 家鼠( au o ei s 中, 中 只检测到汉城型汉坦病毒 。 列分析结果表 明, G n ak数 Rts r g u) 其 7 t nv c 序 与 eB n 据库 中已注册的汉坦病毒核酸序列具有高度的相似性 (7 一 9 ) 结论 辽宁口岸褐家鼠中汉 9% 9% 。 城型汉坦病毒的感染率较高。 应加强对口岸地 区鼠类的监测和控制, 防治肾综合征 出血热疫情在 口
第 1卷 第6 6 期
口岸卫生控制
鼠 类 携 带 汉 坦病 毒 的核 酸 检 测 及核 酸序 列分 析
程 晓兰 孙 时 高玉峰 王 有 姜 陆 辽 宁 出入境检验检疫局( 宁, 辽 大连 ,101 160)
周士博
大连 市第2 中学( 3 辽宁, 大连 , 10 1 160 )
研 究 国境 口岸 地 区 鼠类 自然 携 带 汉 坦病 毒 ( at i s V) 况 , 国境 口岸 地 区 H n v u,H 状 ar 为
本 次 野外 采 集 , 采用 鼠笼法 和 夹 夜法 从 辽 宁 口 岸 地 区共采集 鼠类 1只 , 4 经鉴定 均为褐 家 鼠 , 全部 解
剖后取 鼠肺放置于 一 0 8 ℃超低温冰柜保存 , 分批次 进 行核 酸检测 。 核 酸扩 增 产 物经 琼脂 糖 凝 胶 电泳 检测 。 果 显 结
^\^ M M ^M『 『 ^M『 ^M^^^『『 0^『 ^u ^ M^ ^ ^^ 『『^ ^ M『^ ^M^^^^M^/ n, f ^^ M, \\『 ^ \ 『 ^ ^^n^ ^^M Mf \ 『 \ 『 ^ 、『M\ ^ / J ^ 0『『 ^^ ^\ \ \ , / \ \ \ \ f \ \\ \\ \ \ \ w
T AT GC G。
第l 卷 第6 6 期
将 目的 片断 切 下并 纯 化 , 纯化 产 物 克隆 后进 行 核 酸序 列测定 。
2 实 验结果
1 2 2 核酸 ( N 提 取 .. R A) 以鼠肺 为检测 材料 , 进行 核酸 提取 。
在生物安全柜 内 , 取适量 鼠肺 , 放入15 L离心管 .m
2O L 补充 d H 03 . L 使 总体积达 到5 。 .w , d 2 20 , 0 L 反 应 条 件 :4C, mi ; 4 , 5s 5 o 2 s 7 o 9 o 3 n 9 ℃ 1 , 3C, 5 , 0C,
2 ,3 y ls;7 C ,5mi 5s 8 c c e 0 ̄ n。
摘 要 目的
鼠类防治及 肾综合征 出血热疫情控制提供基础数据。 方法 利用分子生物学技术 , 通过对采集于 口岸 地 区的 鼠类样 品 的核 酸 ( N 提取 、 R A) 逆转 录聚合 酶 链 反 应 ( T— C 、 R P R) 凝胶 电 泳分 析 以及 核
酸序列分析等过程 , 1岸地区鼠类携带汉坦病毒的状况进行确认 。 对: 2 结果
示 ,4 待检样 品中 , 有 7 l份 共 份样 品在 特 定 位置 出现 扩增条 带 , 阴性对 照在 特 定 位 置 没有 出现 扩增 条 带 ( ) 推 断7 样 品 中含 汉城 型汉坦病 毒 。 图1 。 份
相关文档
最新文档