微生物免疫学实验报告

1实验内容：

2显微镜油镜的使用与保护。

3细菌的形态与结构的观察。

4实验目的：

5学会显微镜的使用，重点掌握油镜的使用与保护。

6进一步认识细菌的形态，明确细菌的大小与测量单位。

7熟悉细菌的特殊结构。

8实验材料：

显微镜、擦镜纸、液体石蜡、消毒液、细菌的基本形态标本、细菌的特殊结构标本。

4实验方法：

(1)显微镜油镜的使用与保护

显微镜是一种贵重的光学仪器，而油镜又是显微镜的最精密部分，是观察细菌最重要的

工具。因此，要求大家必须熟练地掌握显微镜的使用和保护，尤其是油镜，避免损坏。

1识别油镜：95╳、100╳、HI、OeL。

2对光：自然光用平面反光镜，人工光用凹面反光镜；先用低倍镜对光，次用高倍镜。对好光源后，染色标本将聚光器升高，光圈放开。

3、调节焦距：选一张细菌染色标本置于载物台上，用推进器固定，用低倍镜先找准物象，再用高倍镜看清物体，于标本上加镜油一滴。

⑴用眼从侧面观察，转动粗螺旋调节器，将油镜头徐徐下降浸入其中，切不可用力过猛，以免损坏油镜。

⑵用左眼从接目镜观察，徐徐向上转动粗螺旋调节器，见模糊物象后，再用细螺旋调节器，直到物象完全清晰为止。

4、显微镜的保护：

⑴所有的光学部分结构都不能用手指、普通布擦拭，用过的油镜头应立即先用擦镜纸蘸少许二甲苯擦拭，再用干擦镜纸擦去二甲苯，以防二甲苯镜头上的固定胶，致使镜片脱落。

⑵显微镜的光学部分应避免日光直射。避免接触强酸、强硷、氯仿、酒精。

⑶显微镜用毕，将物镜转成品字形并下降集光器和镜筒，用软布擦拭各部件后覆盖于接目镜上，双手端平送入镜箱内。置于干燥处，以防受潮。

(二)细菌形态观察

1、细菌的基本形态；球菌：肺炎球菌、脑膜炎球菌、葡萄球菌、链球菌杆菌：大肠杆菌、炭疽杆菌、结核杆菌、白喉杆菌弧菌：霍乱弧菌

2、细菌的特殊结构：

荚膜：肺炎球菌、产气荚膜杆菌

鞭毛：水弧菌（周毛菌）

一、实验内容：

3细菌标本片的制备（操作）

4革兰染色法（操作）

二、实验目的：

1进一步了解细菌特殊结构在鉴别细菌过程中的实用意义。

2掌握革兰染色的操作法，充分认识革兰染色的临床意义。

三、实验材料：

革兰染色液全套、擦镜纸、二甲苯、大肠杆菌培养物、葡萄球菌培养物、生理盐水、玻片、接种环、酒精灯。

四、实验方法：

㈠细菌标本片的制备（操作）

1、涂片：点燃酒精灯；取洁净玻片一张，右手持接种环一酒精灯火焰中消毒，稍冷后取

1－2环生理盐水置于玻片中央；再次消毒后，用接种环取菌落中的细菌或菌液或标本少许，在生理盐水中涂匀制成约1cm左右的薄膜，并将接种环再次消毒后，置于试管架中。

2、干燥：在室温中自然干燥；天冷时可在酒精灯火焰上方略加温，不可高温加热，否则，细菌被破坏后染色效果差。

3、固定：右手持玻片一端，标本面向上，在酒精灯火焰上方快速地来回通过三次，约2妙种。固定的目的是杀死细菌，使细菌与玻片粘附较紧密。

㈡革兰染色法（操作）

1、初染：滴加结晶紫染液于标本上，以覆盖满为度，染1分钟后水洗，洒去积水。

2、媒染：加鲁格碘液，媒染1分钟后水洗，洒去积水。

7脱色：加95％酒精脱色（边加酒精边摇晃玻片，使酒精流去再加酒精，如此反复2

－3次）约30妙钟后水洗，洒去积水。

12复染：加复红染液染30妙钟后水洗，洒去积水，待干或用吸水纸吸干后镜检。先低

倍镜观察效果，再用高倍镜看清物象，滴加镜油后用油镜观察。

结果：G＋菌呈紫色，G－菌呈红色。

一、实验内容

1、培养基的制备（操作）

2、细菌的人工培养法（操作）

3、细菌代谢产物观察（示教）

4、药敏试验（示教）

二、实验目的

1、熟悉细菌的培养方法，进一步掌握人工培养细菌的临床意义。

2、了解细菌代谢产物在鉴别细菌中的意义。

三、实验材料

牛肉膏、蛋白胨、、氯化钠、琼脂、SS琼脂、蒸馏水、1molNaOH、0.1 molNaOH、粗天平、0.02%酚红指示剂、pH比色器、无菌培养皿、无菌试管、接种环、酒精灯、各种鉴别培养基、高压消毒灭菌器、量筒、三角烧瓶、吸管、剪刀、绳索、葡萄球菌菌液、大肠杆菌菌液、伤寒杆菌菌液、乙型副伤寒杆菌菌液等。

四、实验方法

㈠培养基的制备（操作）

1、培养基的制备程序

称量溶化pH测定与矫正分装灭菌检定保存。

2、液体培养基的制备

1）称量：称取牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g，置于1000ml三角烧瓶中，加入蒸馏水1000ml。2）混合溶解：加热溶化，待冷至40?50o C时，测定并矫正pH为77.6。

3）pH测定与矫正方法：

⑴准备工作：取pH7.4①、7.6③酚红标准比色管及蒸馏水管②各1支，按图示装好；取口径与比色管相同的试管3支，各加待测液体基5ml，分别编上④、⑤、⑥号，按图示装好。

⑵比色：将比色架对光目视比色，比较二排管的颜色是否相同，若基为酸性（一般呈酸性），则向⑤号管中加0.02%酚红指示剂0.25ml摇匀，取1ml吸管一支吸取0.1 molNaOH1ml，缓慢滴入⑤号管内，边加边摇匀，直至与标准管其中一侧颜色相同，准确记录NaOH的用量。

⑶计算：5ml基矫正至pH7.6用去0.1 molNaOH0.2ml，剩余的培养基则需加入1 molNaOH为Xml。用比例公式计算。N1：V1＝N2：V2

5：975＝0.2：X

X＝0.2*975/5=39(ml)

0.1 molNaOH需要39ml，而加1 molNaOH只需3.9ml。

4）分装：分装十适当容器内（试管），包装好，高压蒸气灭菌后备用。

㈡细菌的人工培养法（操作）

1、平板划线接种法：

1）点燃酒精灯，右手以握笔式持接种环，在火焰上灭菌后稍冷，挑取葡萄球菌、大肠杆菌混合菌液一环。

2）用左手掌持琼脂平板，以左手拇指将平板盖启开，右手将取了菌液的接种环伸入平板，呈45O角，用分段划线法分离细菌（如图所示），盖好平板。

3）于平板底部贴上标签，写明班、组、菌名、日期，底向上，置于37O C温箱中培养24h后，观察结果。

2、液体培养基接种法：

左手持液体培养基，按照平板划线取葡萄球菌少许，用右手小指拔开棉塞，夹于指间（示教），并将管口在火焰上灭菌，将细菌接种于液体培养基内。再次灭菌管口，塞好棉塞。贴上标签，置于37O C温箱中培养24h后，观察结果。

㈢细菌代谢产物观察（示教）

1、糖发酵试验：细菌分解糖后产酸产气，产酸后使批示剂显色，产气后可见到气泡。产酸产气以“＋”表示，只产酸不产气以“＋”表示，不分解以“－”表示。大肠杆菌和伤寒杆菌分解糖的结果如下：

2、硫化氢试验：某些细菌能分解培养基中的含硫氨基酸，产生硫化氢气体。硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐反应，形成黑色的硫化铁或硫化铅沉淀，为阳性，无黑色沉淀为阴性。