sCAR—PPAb基因的原核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化
DOC-1基因的原核表达载体构建及其重组蛋白的表达纯化
ＤＯＣ－1基因的原核表达载体构建及其重组蛋白的表达纯化目的：克隆DOC一1基因、构建原核表达载体并纯化出其重组蛋白。
方法：从人胎脑组织中提取总RNA，经逆转录－聚合酶链式反应(RT—PCR)扩增DOC －1的CDS序列，再通过基因重组技术将该基因片段依次克隆到pMD18-T和pGEX-4T-1载体中，构建融合表达载体pGEX-4T-1-DOC-1，经酶切、测序鉴定后，用该重组质粒转化E.coliBL21，用IPTG诱导表达，OlutathioneSepharose 4B 柱亲和层析纯化重组蛋白。
结果：电泳证实RT-PCR扩增产物与预期目的基因DOC－1长度一致，测序结果与GenBank公布的DOC－1基因序列完全一致，IPTG诱导后经SDS—PAGE电泳分析表明，在相对分子质量38000左右出现新的蛋白表达条带，经亲和层析柱纯化后得到高纯度的GST-p12重组蛋白。
结论：成功构建了pGEX-4T-1－DOC－1原核表达载体，表达并纯化出GST－p12重纽蛋白，为进一步研究p12DOC-1蛋白打下了实验基础。
标签：p12DOC-1；蛋白；口腔癌缺失；基因克隆；基因表达癌症作为一类严重威胁人类生命的疾病，已成为医学研究关注的重要课题。
口腔癌和身体其他部位癌一样，其发生、发展亦涉及癌基因的激活和抑癌基因的失活。
DOC－1基因是Todd等(1995)利用叙利亚仓鼠口腔颊癌模型分离的正常和恶性角化细胞进行细胞杂交实验分离和证实的一个候选抑癌基因，作为一个候选抑癌基因它具有以下几个特点：恶性角化细胞杂合性缺失；与正常上皮相比恶性上皮中DOC－1表达降低；DOC－1的转入抑制肿瘤细胞的生长；经转染DOC －1 cDNA的恶性角化细胞在动物模型中逆转了恶性表型。
p12蛋白作为其编码的蛋白因子，具有抑制DNA复制，从而抑制恶性角化细胞的生长，使其表型改变的功能，近来已逐渐成为研究的热点。
为了开展对DOC－1的研究，进一步了解其功能及其在口腔鳞状细胞癌中表达缺失机制中的作用，本实验通过RT—PCR获得DOC－1的eDNA编码区序列，并且构建了其克隆表达载体，在大肠杆菌中实现了p12DOC－1重组蛋白的高表达，为以后的工作打下了实验基础。
DOC-1基因的原核表达载体构建及其重组蛋白的表达纯化
Ｓ ＡＯ Ｘｉｏ ｊ ｎ，Ｓ — ｉ ＩＬａ — ｅ，Ｃ Ｎ Ｗ ｅ’ Ｙ Ｈ ａ －ｕ ’ ＵＮ Ｍｏ ｙ’ ｉｎ ｋ ＨＥ ｉ ＡＮＧ Ｙ ｏ ＷＵ，Ｌ Ｊａ — ｕ ，Ｌ ， ａ — ’ Ｉ ｉｎ ｈ ’ （．Ｄ ｐ ｒ ｎ ｏ ａ ａ ｄ Ｍａ ｉ ｆｃ ｌ ｕｇ ｒ，Ｓｏ ｔｌｇｃ ｌ ｌ ｇ ， ｈ ｏ ｒ ｌ ｒ ｄｃ ｌ ｉｅｓｙ １ ｅ ａｔ ｔ ｆＯｒｌ ｎ ｘｌ ａ ｉ ｒｅｙ ｔｍａｏｏ ｉａ Ｃｏｌ ｅ ｔｅ Ｆ ｕ ｈ Ｍｉａｙ Ｍｅ ｉ ｖ ｒｉ ｍｅ ｌ ａ Ｓ ｏ ｅ ｔ ｉ ｔ ａ Ｕｎ ｔ
ｓｇ ｅｔ ｆ ｅ ｍ ｎ ｏ ｏｐ ｎ ｒ ａ ｆａ ｅ ｅ ｄ ｒ ｍｅ ｆ ｏ ＤＯＣ 一１ ｗａ ａ ｐ ｉ ｅ ｂ Ｒ ｓ ｍ ｌ ｉｄ ｆ ｙ Ｔ—Ｐ ＣＲ ａ ｄ ｎ ｗａ ｆ ｒ ｅ ｃ ｏ ｅ ｉｔ ｔ ｅ ｅ ｔ ｒ ｓ ｕ ｈ ｒ ｌ ｎ ｄ ｎ ｏ ｈ ｖ ｃ ｏ ｔ ｐ ＭＤ１ － Ｔ，ａ ｄ ｈ ｒ ｋ ｒ ｏ ｉ ｘ ｒ ｓ ｉ ｎ ｅ ｔ ｒ ８ ｎ ｔ ｅ ｐ ｏ ａ ｙ ｔ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｖ ｃ ｏ ，ｐＧＥ ４ ｃ Ｘ一 Ｔ一１ ｙ ｔ ｒ ｓ ｏ ｐｒ ｄｕ ｅ ｔ ｅ ｎ ｗ ｏ ｓ ｒ ｃ ，ｂ ｕ ｎ ，ｔ ｏ ｃ ｈ ｅ ｃ ｎ ｔｕ ｔ ｐＧＥ ４ Ｘ一 Ｔ一
Ｄ Ｃ １ 因的 原核 表 达 载体 构 建 及其 重 组 蛋 白的 表达 纯 化 Ｏ 一 基
邵 小钧 孙 沫逸 ｔ李连 科 陈 伟 杨耀 武 李建 虎 ， ， ， ， ，
（． １ 第四军医大学口腔 医院颌面外科 陕西 西安 ７ ３；２ 解放军第 ３ ２医院 口腔科 山西 大同 １０２ ． ０ ２ ０ ０ ） ３ ０６ ７
纯 化 出 ６ Ｔ ｐ ２重组 蛋 白 ， Ｓ－ ｌ 为进 一 步研 究 ｐ ２ 蛋 白打 下 了 实验 ２ 口腔癌缺 失； 因克隆； 因表达 基 基
一种结核杆菌重组蛋白及其表达纯化方法和应用[发明专利]
![一种结核杆菌重组蛋白及其表达纯化方法和应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/893b5f336f1aff00bfd51e14.png)
专利名称：一种结核杆菌重组蛋白及其表达纯化方法和应用专利类型：发明专利
发明人：王洪海,郄亚卿,祝秉东,王九玲,徐颖,王庆忠
申请号：CN200510030776.9
申请日：20051027
公开号：CN1793367A
公开日：
20060628
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明属基因重组技术领域，具体为一种抗结核杆菌的重组蛋白，它由抗原Ag85B－Mpt64第190－198位多肽和Mtb8.4基因连在一起，克隆进大肠杆菌载体进行表达，然后进一步纯化获得。
记为Ag85B－Mpt64－Mtb8.4(SEQ.ID.NO.1)。
该蛋白可以用作抗结核杆菌亚单位疫苗。
申请人：复旦大学
地址：200433 上海市邯郸路220号
国籍：CN
代理机构：上海正旦专利代理有限公司
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HIV-1 Tat基因重组原核表达载体的构建及融合蛋白的表达纯化与功能鉴定
HIV-1 Tat基因重组原核表达载体的构建及融合蛋白的表达纯化与功能鉴定邱会平;程晓东;卢春【期刊名称】《江苏大学学报（医学版）》【年(卷),期】2013(023)004【摘要】目的:在大肠埃希菌中表达人免疫缺陷病毒1型(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)反式激活蛋白(trans activative transcription protein,Tat),为进一步研究可溶性Tat在艾滋病相关卡波氏肉瘤(AIDS-KS)致病过程中的作用提供材料.方法:以本实验室保存的重组质粒pcDNA3.1(+)/Tat101为模板,PCR扩增目的基因Tat.将PCR产物克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组原核表达质粒pET-28a(+)-Tat.将重组质粒转化大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白.表达产物经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹鉴定后,通过镍亲和层析柱纯化.纯化后蛋白采用虫荧光素酶报告实验进行功能验证.结果:限制性内切酶酶切和基因测序证实,成功构建了含有Tat基因的重组原核表达质粒.蛋白质印迹结果显示,His融合蛋白在大肠埃希菌中得到正确表达,纯化后获得了相对分子质量为18×103的融合蛋白.虫荧光素酶报告实验证实,Tat与HIV-1长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)具有结合能力.结论:重组质粒pET-28a(+)-Tat能在大肠埃希菌BL21(DE3)中稳定表达Tat蛋白,镍亲和层析柱纯化的His-Tat融合蛋白具有生物学功能.%To construct the prokaryotic expression vector carrying HIV-1 Tat gene and to purify the fusion protein in E.coli.Methods:The DNA fragment of the Tat gene from pcDNA3.1(+)/Tat101 was cloned into the prokaryotic expression vector pET-28a(+),named pET-28a(+)-Tat.Then the recombinant vector was transformed into E.coli BL21 (DE3).The expression of the histidine-tagged (His-Tag)fusion protein was induced with isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside (IPTG).The fusion protein was detected and purified by Western blot and immobilized Ni2+ absorption chromatographic column,respectively.Results:The prokaryotic expression vector carrying Tat gene was successfully constructed.The expression of the His-Tag fusion protein in E.coli BL21 (DE3) was detectable.Finally,the fusion protein with the relative molecular weight of 18 × 103 was gained after purified using the affinity chromatographic column.Conclusion:Recombinant Tat gene can be expressed in E.coli BL21 (DE3) and the fusion protein obtained can be functionally active.【总页数】5页(P308-312)【作者】邱会平;程晓东;卢春【作者单位】南京医科大学基础医学实验教学中心,江苏南京210029;南京医科大学微生物学与免疫学系,江苏南京210029;南京医科大学微生物学与免疫学系,江苏南京210029【正文语种】中文【中图分类】R34;Q78【相关文献】1.抗凋亡融合蛋白 PTD－Bcl－xL 原核表达载体的构建及表达纯化 [J], 王晓晔;石博妹;王英群;李珣;刘徳玉;李铭;李芳芳;胡传活2.β分泌酶原核表达载体的构建、表达及融合蛋白纯化 [J], 朱爱华;李敬;陆军;钱进;郑元林3.含KSHV vIL-6基因原核表达载体的构建及融合蛋白的表达纯化与鉴定 [J], 葛高霞;王平;卢春4.含HIV-1 Tat基因重组反转录病毒表达载体构建与表达Tat蛋白功能检测 [J], 卢春;钱超;唐桂霞;黄丽;曾怡5.融合蛋白TAT-HIF-1α-PAS-B原核表达载体的构建、表达及纯化 [J], 戚华兵;汪仕良;王凤君因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人β肌动蛋白基因原核表达载体的构建及其表达和纯化
人β肌动蛋白基因原核表达载体的构建及其表达和纯化宋烨琼;郭靖;徐小洁;李玲;梁迎春;洪甜;纪贝贝;叶棋浓;吕朝晖【期刊名称】《生物技术通讯》【年(卷),期】2015(026)006【摘要】目的:构建带GST标签的人β肌动蛋白(β-actin)基因的原核表达产物,纯化出GST-β-actin融合蛋白,为探究β-actin的各项生理功能做准备.方法:以人乳腺文库为模板,利用PCR技术扩增β-actin基因,将其连接到带有GST标签的载体上,经鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌Rossate感受态细胞,小量诱导表达后,利用GST-Sepharose 4B亲和珠纯化GST-β-actin融合蛋白,经SDS-PAGE和Western印迹检测.结果:目的基因经PCR技术得以扩增,将其与带GST标签的载体连接后再经双酶切鉴定及测序后确认构建成功;转化大肠杆菌Rossate感受态后获得小量诱导表达,纯化出GST-β-actin融合蛋白,并证实其有生物活性.结论:构建了人β-actin的原核表达载体,并获得了GST-β-actin融合蛋白.【总页数】3页(P783-785)【作者】宋烨琼;郭靖;徐小洁;李玲;梁迎春;洪甜;纪贝贝;叶棋浓;吕朝晖【作者单位】解放军总医院内分泌科,北京100853;军事医学科学院生物工程研究所,北京100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京100850;军事医学科学院生物工程研究所,北京100850;解放军总医院内分泌科,北京100853【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.人NDRG2两亚型基因原核表达载体的构建及表达与纯化 [J], 牛锋;邓艳春;秦娜;刘新平2.人NPTX2基因原核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化 [J], 张玲;高军;李兆申;杜奕奇;龚燕芳;黄文;金晶;吴洪玉;满晓华3.人IL-24基因原核表达载体的构建及蛋白的表达纯化 [J], 喻放;杨忠华;范汉东;左振宇4.人源DCF1基因原核表达载体构建及蛋白分离纯化 [J], 王倩;杨眉;冯瑞丽;王娇;文铁桥5.APEC毒力基因ygeG的原核表达载体构建、表达纯化及鉴定 [J], 姜楠;郑倩倩;李倩文;涂健;宋祥军;邵颖;刘红梅;祁克宗因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
重组蛋白的表达与纯化技术研究
重组蛋白的表达与纯化技术研究随着基因工程和生物技术的发展，重组蛋白的表达及纯化技术在生物医药领域得到了广泛应用。
重组蛋白是通过将目标基因转移到宿主表达系统中，利用宿主细胞表达并合成特定蛋白的技术。
表达后的蛋白需要经过纯化、鉴定和活性分析，以确保获得高纯度和高活性的蛋白。
本文将介绍重组蛋白的表达与纯化技术研究的相关内容。
重组蛋白表达技术是通过将目标基因克隆到表达载体中，然后将表达载体转入宿主细胞中进行表达。
常用的表达系统包括大肠杆菌、酿酒酵母、昆虫细胞和哺乳动物细胞等。
在选择表达载体时，需要考虑载体的复制数、启动子的强度和宿主细胞的适应性。
而在选择宿主细胞时，需要考虑宿主细胞的生长特性、表达能力以及宿主细胞的酶切位点等因素。
表达载体和宿主细胞的选择将直接影响重组蛋白的表达水平和纯化效果。
在重组蛋白的表达过程中，除了选择适合的表达系统外，还需要优化培养条件和表达工艺。
培养基的组成、培养温度、培养时间、诱导条件等因素都会影响蛋白的表达水平和纯度。
常见的优化方法包括调整培养基的成分、优化培养条件和诱导条件、构建工程菌株以及使用辅助因子等。
通过合理的优化，可以提高蛋白的表达水平和纯度，为后续的纯化工作奠定基础。
重组蛋白的纯化是确保蛋白质高纯度和高活性的关键步骤。
常见的纯化方法包括亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析、逆流色谱和层流洗脱等技术。
亲和层析是通过目标蛋白与特异性结合剂之间的亲和力选择性地捕获目标蛋白。
离子交换层析是利用蛋白质与带电离子交换剂间的相互作用进行纯化。
凝胶过滤层析则是根据蛋白分子大小进行分离纯化。
逆流色谱和层流洗脱则是利用目标蛋白与静电荷间的相互作用进行分离。
通过合理选择和组合这些方法，可以获得高纯度和高活性的重组蛋白。
在纯化过程中，还需要进行蛋白质的结构鉴定和活性分析。
结构鉴定可以通过质谱分析、核磁共振、X射线晶体学等技术来实现。
活性分析则是通过特定的活性测定方法来验证蛋白的功能和活性。
PAP蛋白重组表达载体的构建及在原核和真核细胞中的表达
ＰＡＰ的内化，提高其抗病毒效果。
由于编码ＰＴＤ的１０个氨基酸的核苷酸序列仅为３０ｂｐ，本实验采用在引物中直接引入该编码序列的方法实现ＰＴＤ与ＰＡＰ的基因重组。
同时引入在两个引物（Ｐ１和ＩＣ。
２）中分别构建原核大肠杆菌表达中所需的ＢａｍＨＩ和ＰｓｔＩ酶切位点。
具体步骤详见图１。
ＰＴＤ－ｐｒｉｍｅ吖ＣＧ曼昼盘里￡９＿岫ＨＤＡＴＧＡＧＧＡＡＧＡＡＧＣＧＧＡＧＡＣＡＧＣＧＡＣＧＡＡＧＡＧＴＧＡＡＴＣＣＡＡＴｅＡＴＣＴＡＣＡＡＴＧ）ＰＴｎＰＡＰ图１．ＰＴＤ－ＰＡＰ的合成模式图通过ＰＣＲ扩增，用ＴａｑＤＮＡｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ加Ａ后电泳得到了约８００ｂｐ的扩增片段。
回收后的片段与ｐＰＧＥＭ－ＴＶｅｃｔｏｒ连接。
转入大肠杆菌ＤＨ５Ｑ中，经蓝白筛选，选取白色菌落行ＰＣＲ鉴定见可扩增出约８００ｂｐ的片段；提取ＰＣＲ阳性菌株的质粒，经ＢａｍＨＩ／ＰｓｔＩ双酶切，电泳示可约８００ｂｐ和３Ｋｂ处两条条带（见图２）。
株的质粒，经ＢａｍＨＩ／ＰｓｔＩ双酶切，电泳示可约１Ｋｂ和３Ｋｂ处两条条带（图４）。
图４ｐＰＧＥＭ—ＴＶｅｃｔｏｒ／ＴＡＴ－ＰＡＰ重组体酶切图示：１．分子量标准为ＢＬ２０００：２．酶切片段。
图中可见酶切下略大于１Ｋｂ片段，相当于Ｔａｔ加上ＰＡＰ序列的大小，支持二者重组成功。
将酶切鉴定阳性菌株质粒测序示ｒＩ钒序列和ＰＡＰ序列正确连入ｐＰＧＥＭ．ＴＶｅｃｔｏｒ中。
１．３．２Ｔａｔ与ＰＡＰ的基因重组体中Ｔａｔ显性负突变体的构建前期的工作共获得的ＨＩＶ的Ｔａｔ显性负突变体共六个：ｐＭｌ：Ｃｙｓ２２＋Ｇｌｙ；ｐＭ２：Ｈｉｓ３３／Ｃｙｓ３４一Ａｌａ／Ｓｅｒ；ｐＭ３：Ｔｈｒ４０／Ｌｙｓ４１一Ａｌ矶～ｌａ；ｐＭ４：Ｌｙｓ５０一ＳＴＯＰ；ｐＭ５：Ａｒ９５２一Ｌｅｕ；ｐＭ６：Ｔｈｒ４０／Ｌｙｓ４１／Ｃｙｓ５０一Ａｌａ／Ａｌａ／ＳＴＯＰ。
之后验证了突变Ｔａｔ对ＨＩＶ－１Ｔａｔ活性的影响：结果说明不同Ｔａｔ突变蛋白都对正常Ｔａｔ有一定程度的抑制作用，其中以ｐＭ５最大，达８５％，另外ｐＭ３可达４０％。
重组蛋白的分离纯化PPT课件
• Moreover , gel filtration is more generic, can be performed in any buffer condition, and can be used to resolve the oligomerization state of the target protein.
重组蛋白的分离纯化
.
1
基因表达体系
1. 原核体系 2. 真核体系
.
2
大肠杆菌 (Escherichia coli)
遗传背景清楚，基因工程操作方便，商品 化表达载体种类齐全，表达效率高；
基本不分泌，易形成包含体(无正确折叠的 立体结构)，无加糖等修饰
.
3
枯草杆菌 (Bacillus subtilis)
the fraction of the recombinant protein that is extracted while minimizing protein oxidation, unwanted proteolysis and sample contamination with genomic DNA.
+-
---+---------+---
- ++
+
-
.
29
equilibration
anion exchanger bead
+-
++-- +++- --
.
30
sample application and wash
--
-
+- ++-+
++
重组蛋白的表达与分离纯化
基因工程重组蛋白的表达与分离纯化实验目的：1.了解基因工程重组表达载体的构建和筛选方法；2.掌握重组蛋白诱导表达的机理；3.掌握蛋白的分离纯化方法，并学会使用SDS-蛋白质凝胶电泳；实验原理：将外源基因克隆在含有lac启动子的pET-30表达载体中，让其在E.coli中表达。
先让宿主菌生长，lacI产生的阻遏蛋白与lacI操纵基因结合，从而不能进行外源基因的转录与表达，此时宿主菌正常生长。
然后向培养基中加入lac操纵子的诱导物IPTG，阻遏蛋白不能与操纵基因结合，则DNA外源基因大量转录并高效表达。
表达蛋白可经SDS-PAGE检测。
实验器材：1.仪器：高速冷冻离心机、恒温培养箱、高压灭菌锅、SDS-凝胶电泳仪、水浴锅、抽滤装置、AKTA液相色谱仪等；2.材料：LB培养基、溶菌酶、缓冲液A和B、氨苄青霉素、IPTG诱导剂、10%SDS等；实验内容：1.灭菌：①配置LB培养基20 ml*2 +100 ml*6(配方：酵母粉 0.5%，NaCl 1%，胰蛋白胨1%)；②黄、蓝枪头各一盒；2.菌体活化及扩培：①每瓶20 ml LB培养基中加入20 ul Amp后，再加入30~40 ul DH5α菌液，置于37℃恒温箱内，培养12~16 h；②活化后，在六瓶100 ml LB培养基中分别加入100 ul Amp后，再从20 ml活化后的菌液中取2 ml，置于37℃恒温箱内扩大培养，至少培养2.5 h以后加入IPTG 200ul，37℃，培养14~16h；3.细胞破碎及蛋白分离：①将菌液用大离心管收集，配平后，4000r/min，离心15 min，收集菌体；②用20 ml BufferA重悬菌体，4000r/min，再离心15 min，收集菌体；③用4 ml BufferA重悬菌体，加入溶菌酶40 ul混匀，静置15min；④再加入4 ml BufferB，混匀，75℃水浴保温1 h；⑤用高速冷冻离心机在4℃的条件下，8000r/min，离心20 min，收集上清液；⑥将上清液分装入几个浓缩管中，4℃，3000r/min浓缩一段时间至终体积为5-10ml，做好标记，备用；⑦实验过程中，配置五种AKTA液相色谱仪所需液体，并抽滤2遍；4.AKTA液相色谱分析及SDS凝胶电泳：①首先学习AKTA仪器的相关使用方法和注意事项，对仪器进行排气，平衡缓冲液冲洗等操作(该部分由老师操作演示)；②取5 ml浓缩后的液体过滤后上样，观察屏幕上紫外吸收曲线的变化，适时用离心管收集每个峰的样品，做好标号，备用。
基因工程的下游技术 重组蛋白的表达、纯化和分析(精选)PPT文档80页
61、奢侈是舒适的，否则就不是奢侈 。——CocoCha nel 62、少而好学，如日出之阳；壮而好学 ，如日 中之光 ；志而 好学， 如炳烛 之光。 ——刘 向 63、三军可夺帅也，匹夫不可夺志也。 ——孔 丘 64、人生就是学校。在那里，与其说好 的教师 是幸福 ，不如 说好的 教师是 不幸。 ——海 贝尔 65、接受挑战，就可以享受胜利的喜悦 。——杰纳勒 尔·乔治·S·巴顿
谢Байду номын сангаас！
基因工程的下游技术 重组蛋白的表达、 纯化和分析（精选）
56、极端的法规，就是极端的不公。 ——西 塞罗 57、法律一旦成为人们的需要，人们 就不再 配享受 自由了 。—— 毕达哥 拉斯 58、法律规定的惩罚不是为了私人的 利益， 而是为 了公共 的利益 ；一部 分靠有 害的强 制，一 部分靠 榜样的 效力。 ——格 老秀斯 59、假如没有法律他们会更快乐的话 ，那么 法律作 为一件 无用之 物自己 就会消 灭。— —洛克
表达双功能融合蛋白(sCAR-EGF)腺病毒载体的构建及其活性检测
表达双功能融合蛋白(sCAR-EGF)腺病毒载体的构建及其活性检测任鹏康;王丰;李惠明;李宗海;黄倩【期刊名称】《生物工程学报》【年(卷),期】2006(22)5【摘要】为了提高腺病毒载体用于基因治疗的靶向性,采用PCR和体外连接的方法构建了柯萨奇病毒-腺病毒受体(Coxsackie virus-Adenovirus Receptor)胞外段sCAR和表皮生长因子(Epidermal growth factor)EGF融合基因,然后将此融合基因插入穿梭质粒pDC315.利用Ad-MAX腺病毒系统,将重组质粒pDC315-sCAR-EGF与腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE13cre共同转染AD-293细胞,成功包装出一种复制缺陷型腺病毒Ad5-CMV-sCAR-EGF.经PCR鉴定该病毒含有sCAR-EGF 融合基因片段,Western blotting证实该病毒能表达sCAR-EGF融合蛋白.体外试验证实该病毒感染细胞所产生的融合蛋白能够引导携带报告基因的腺病毒Ad5-CMV-luc高水平感染肿瘤细胞,为高水平表达EGFR的肿瘤的靶向性基因治疗提供了新的手段.【总页数】7页(P713-719)【作者】任鹏康;王丰;李惠明;李宗海;黄倩【作者单位】上海市第一人民医院中心实验室,上海,200080;上海交通大学附属第一人民医院中心实验室,上海,200080;上海交通大学附属第一人民医院中心实验室,上海,200080;上海交通大学肿瘤研究所癌基因及相关基因研究国家重点实验室,上海,200032;上海交通大学附属第一人民医院中心实验室,上海,200080【正文语种】中文【中图分类】Q81【相关文献】1.SA/hIL21双功能融合蛋白的表达、纯化及生物学活性检测 [J], 法萍萍;张振;李金龙;胡志明;高基民2.TAT-Apoptin融合蛋白分泌表达载体的构建及其活性检测 [J], 刘雪梅;崔剑;侯伟健;李其久;贲松彬3.可诱导表达mIL-12单链融合蛋白的腺病毒载体的构建 [J], 陈坚;薛绪潮;方国恩;苏长青;钱其军4.可表达人呼吸道合胞病毒融合蛋白辅助病毒依赖型腺病毒载体的构建与制备 [J], 杨兵;何金生;石长信;张梅;虞结梅;谢灿;陆燕燕;付远辉;彭向雷;洪涛5.产肠毒素大肠埃希菌STa-K99融合蛋白重组腺病毒载体的构建及表达 [J], 邓光存;包少文;杨继辉;曾瑾;李武;刘晓明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
两种不同的原核表达载体蛋白表达及纯化的比较
基因组学与应用生物学，2020年，第39卷，第9期，第4136-4144页研究报告Research Report两种不同的原核表达载体蛋白表达及纯化的比较邱淑彬1,2荆韧威3郭正隆3谢晓东1,2*1天津农学院农学与资源环境学院,天津,300384;2天津市作物抗逆的机理及遗传改良国际联合研究中心,天津,300384;3天津医科大学基础医学研究中心,天津-牛津基因治疗联合实验室,天津,300070*通信作者,*************.cn摘要为了比较两种不同的原核表达载体体外表达纯化CP05-GFP蛋白的能力，本研究通过构建pET28b-CP05-GFP(双His-Tag)、pET28b-CP05-GFP(单His-Tag)、pGEX-6p-1-CP05-GFP(GST-Tag)三个原核表达质粒，诱导表达并纯化带有不同标签的CP05-GFP蛋白。
通过考马斯亮蓝染色技术比较两种不同的原核表达载体表达以及体外纯化CP05-GFP蛋白的能力，发现3个原核表达载体均能诱导表达出CP05-GFP蛋白，且能纯化出CP05-GFP蛋白，但是不同标签纯化CP05-GFP蛋白的纯化效率是不同的：pET28b-CP05-GFP (双His-Tag)原核表达系统能够表达并纯化出CP05-GFP蛋白，但其表达量低易纯化；pET28b-CP05-GFP(单His-Tag)原核表达系统能够表达并纯化出CP05-GFP蛋白，其表达量高但不易纯化；pGEX-6p-1-CP05-GFP (GST-Tag)原核表达系统可表达出足量的CP05-GFP(GST-Tag)蛋白，并且易纯化。
本研究有助于选择合适的载体进行融合蛋白的表达和纯化。
关键词原核表达,载体构建,蛋白纯化Comparison of Two Different Prokaryotic Expression Vectors in Protein Expression and PurificationQiu Shubin1,2Jing Renwei3Guo Zhenglong3Xie Xiaodong1,2*1College of Agronomy and Resource Environment,Tianjin Agricultural University,Tianjin,300384;2Tianjin Joint Research Center for Crop Stress Resistant and Genetic Improvement,Tianjin Agricultural University,Tianjin,300384;3Tianjin-Oxford Joint Laboratory Gene Therapy,Research Cen-ter of Basic Medical Science,Tianjin Medical University,Tianjin,300070*Corresponding author,*************.cnDOI:10.13417/j.gab.039.004136Abstract To compare the ability of two different prokaryotic expression vectors in the expression and purification of CP05-GFP in vitro,the pET28b-CP05-GFP(Double His-Tag),pET28b-CP05-GFP(Single His-Tag) and pGEX-6p-1-CP05-GFP(GST-Tag)expression vectors were constructed.Afterwards,the CP05-GFP proteins with different tags were expressed and purified.The expression efficiency of these two vectors and the ability of different tags to purify the CP05-GFP proteins were compared by coomassie blue staining.The CP05-GFP proteins with different Tags could be obtained from the pET28b-CP05-GFP(Double His-Tag),pET28b-CP05-GFP(single His-Tag)and pGEX-6p-1-CP05-GFP(GST-Tag)expression vectors.While the abilities of different tags to purify to purify CP05-GFP in vitro were compared by Coomassie blue staining technique.The results showed that the CP05-GFP protein with double His-Tag was expressed in a low level,but easy to be purified.In contrast,the CP05-GFP protein with a single His-Tag could be expressed with high abundance but difficult to be purified. Significantly,the CP05-GFP with a GST-Tag could be expressed with high abundance and easy to be purified.基金项目：本研究由国家自然科学基金(31771858)资助引用格式：Qiu S.B.,Jing R.W.,Guo Z.L.,and Xie X.D.,2020,Comparison of two different prokaryotic expression vectors in protein expression and purification,Jiyinzuxue Yu Yingyong Shengwuxue(Genomics and Applied Biology),39(9):4136-4144(邱淑彬,荆韧威,郭正隆,谢晓东,2020,两种不同的原核表达载体蛋白表达及纯化的比较,基因组学与应用生物学,39(9):4136-4144)体外重组蛋白表达技术已经渗透到生物学的各个领域。
αB-晶状体蛋白CRYAB基因重组表达载体的构建及分子生物学鉴定
αB-晶状体蛋白CRYAB基因重组表达载体的构建及分子生物学鉴定陈强;陈思礼;郑芳【期刊名称】《中南民族大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2008(027)004【摘要】目的:构建人晶状体蛋白CRYAB基因与真核表达载体pIRES2-DsRed-Express的重组体,为研究人晶状体蛋白CRYAB基因的功能奠定基础.方法:根据人晶状体蛋白CRYAB基因的核苷酸序列,设计并合成分别带有酶切位点的引物,从pMD 18T-CRYAB基因克隆载体中扩增出CRYAB基因外显子片段,与载体pIRES2-DsRed-Express连接构建人晶状体蛋白CRYAB基因的表达载体,转化入大肠杆菌DH5α中.经抗生素筛选阳性克隆,通过酶切图谱分析、菌落PCR和测序鉴定所构建的表达载体.结果:构建的载体经PCR、酶切鉴定和测序证实插入方向正确,表达阅读框正确,载体构建成功.结论:重组人晶状体蛋白CRYAB基因表达载体的构建为研究CRYAB基因的功能及进一步研究先天性白内障的发病机制奠定了基础.【总页数】4页(P40-43)【作者】陈强;陈思礼;郑芳【作者单位】武汉大学,第二临床学院基因诊断中心,武汉,430071;中南民族大学,生命科学学院,武汉,430074;武汉大学,第二临床学院基因诊断中心,武汉,430071【正文语种】中文【中图分类】Q784【相关文献】1.锌指蛋白ZBTB20基因重组腺病毒表达载体的构建和鉴定 [J], 朱晓彤;杨瑞;周露婷;张晔;李玲;章卫平;施广霞;陈玉霞2.LeftyA基因重组慢病毒表达载体的构建及鉴定 [J], 邱宇安;陈文学;靳文剑;陈火国;钟宁;余洁丽3.HIV-1 Tat基因重组原核表达载体的构建及融合蛋白的表达纯化与功能鉴定 [J], 邱会平;程晓东;卢春4.大鼠肾皮质受体相关蛋白克隆基因重组表达质粒的构建及分子生物学鉴定 [J], 胡迎青;张卫苏5.绿色荧光蛋白报告基因与ZNF580基因重组真核表达载体的构建与鉴定 [J], 张文成;扎拉嘎胡;陈莉;买霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
GAPB基因原核表达载体的构建
GAPB基因原核表达载体的构建田霞;代其林;龚元亚;孙英坤;谢琳;杨娟;王劲【期刊名称】《西南园艺》【年(卷),期】2011(005)003【摘要】以拟南芥cDNA为模板,用PCR扩增出GAPB的基因全长,然后将GAPB 基因片段连接到PET28a（＋）载体上,构建重组质粒并转化大肠杆菌DH5α,经菌落PCR和酶切鉴定筛选出阳性克隆,测序正确后,再将阳性克隆的质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）。
结果表明：成功构建了原核表达载体PET28a（＋）-GAPB,为后续的GAPB融合蛋白的表达以及纯化奠定了基础。
%In this study,GAPB DNA fragment was amplified by polymerase chain reaction from Arabidopsis cDNA template.The GAPB DNA fragment was then connected into plasmid PET28a（＋）,and was transformed into E.coli DH5α.The positive clones were screened by colony PCR【总页数】4页(P1-4)【作者】田霞;代其林;龚元亚;孙英坤;谢琳;杨娟;王劲【作者单位】西南科技大学植物生物技术研究中心,四川绵阳621010;西南科技大学植物生物技术研究中心,四川绵阳621010;西南科技大学植物生物技术研究中心,四川绵阳621010;西南科技大学植物生物技术研究中心,四川绵阳621010;西南科技大学植物生物技术研究中心,四川绵阳621010;西南科技大学植物生物技术研究中心,四川绵阳621010;西南科技大学植物生物技术研究中心,四川绵阳621010【正文语种】中文【中图分类】Q946【相关文献】1.GAPB基因原核表达载体的构建 [J], 田霞;官开江;代其林;王志敏;龚元亚;汤青林;孙英坤;牛义;谢琳;宋明;杨娟;王劲2.丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式激活基因4剪切体Ns5atp4a基因原核表达载体的构建和表达 [J], 陈立冬;成军;洪源;张连峰;韩莉;郭江3.幽门螺杆菌cagA基因片段原核表达载体的构建及其cagA基因和CagA蛋白及感染者血清抗体的检测 [J], 王媛;罗依惠;严杰4.淋球菌孔蛋白基因与脂寡糖表位融合基因原核表达载体的构建及表达 [J], 赵莉群;陈中伟;张伟;王希良;于三科5.牛对氧磷酶1基因和对氧磷酶2基因原核表达载体的构建及其表达分析 [J], 姬爱国;淮亚红;张路培;李俊雅;王淑辉;许尚忠;高雪;任红艳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
重组沙门菌侵袭蛋白A的原核表达与纯化
重组沙门菌侵袭蛋白A的原核表达与纯化周爱萍;张祖昌;许欣;樊学军;占利;孙敏;裴晓方【期刊名称】《四川大学学报：医学版》【年(卷),期】2006(37)3【摘要】目的在大肠杆菌中表达重组沙门菌侵袭蛋白A,并对表达产物进行分离和纯化。
方法提取沙门菌基因组模板,PCR扩增侵袭因子invA基因目的片段,插入表达质粒载体pET-30c(+)中,构建pET-invA重组子,经双酶切和测序证实后,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导重组蛋白表达,镍琼脂糖凝胶亲和层析纯化重组蛋白,SDS-PAGE和Westernblot检测鉴定表达蛋白。
结果成功构建了沙门菌pET-invA大肠杆菌表达重组子,实现了该蛋白在大肠杆菌中的高效表达,分离纯化的表达产物纯度达到电泳纯。
结论沙门菌侵袭蛋白A的成功表达和分离纯化,为该蛋白的免疫学性能研究、相应抗体的制备以及沙门菌快速检测方法的建立奠定了基础。
【总页数】4页(P369-372)【关键词】沙门菌侵袭蛋白A;重组蛋白质;原核表达【作者】周爱萍;张祖昌;许欣;樊学军;占利;孙敏;裴晓方【作者单位】四川大学华西公共卫生学院医学检验学教研室;四川检验检疫局国际旅行卫生保健中心【正文语种】中文【中图分类】R378.22【相关文献】1.鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FliC的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备 [J], 陈明;徐幸莲;周光宏;汤晓艳;袁飞;陈爱亮2.原核表达纯化的抗菌肽LL-37重组蛋白对小鼠外阴阴道假丝酵母菌病的治疗作用[J], 王芳;霍彦;尹利荣;孙蓓;张萍萍3.表达VP3重组减毒沙门氏菌的构建和融合蛋白纯化 [J], 王丽娟;刘少宁;向廷秀;王丕龙4.肠炎沙门菌I型菌毛主要亚单位FimA原核表达及纯化 [J], 王勇祥;孟霞;段进坤;周明旭;陶洁;杨溢;朱国强5.鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白的原核表达及纯化 [J], 肖星星;柳纪省;殷相平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
xiap原核重组蛋白的表达和纯化共26页文档
二、蛋白纯化条件优化
Ni-NTA柱标准方法洗脱跑胶检测 M：Marker A：蛋白原液 B：穿透液 W：清洗液 5.9：洗脱液ⅠpH 4.5:洗脱液ⅡpH
Ni-NTA柱改进方法洗脱后SDS-PAGE胶检测
M：Marker A：蛋白原液 B：穿透液 W：清洗液 5.9：洗脱液ⅠpH 4.5:洗脱液ⅡpH
xiap原核重组蛋白的表达和纯化
1、纪律是管理关系的形式。——阿法 纳西耶 夫 2、改革如果不讲纪律，就难以成功。
3、道德行为训练，不是通过语言影响 ，而是 让儿童 练习良 好道德 行为， 克服懒 惰、轻 率、不 守纪律 、颓废 等不良 行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸 美纽斯
5、教导儿童服从真理、服从集体，养 成儿童 自觉的 纪律性 ，这是 儿童道 德教育 最重要 的部分 。—— 陈鹤琴
• 材料 试验用质粒pET151-XIAP、菌种JMY109、Rosseta
为实验室保存 主要试剂 诱导培养：LB培养基、氨苄、异丙基-β-硫代半乳
糖苷（IPTG） 蛋白纯化：尿素、Tris、NaH2PO4 SDS-PAGE电泳：30%丙烯酰胺、 1.5mol/L
Tris(pH8.8)、10%SDS、 10%过硫酸铵 、 TEMED 、1mol/L Tris(pH6.8)
• 本文通过pET151-XIAP载体在大肠杆菌中表达，Ni-NTA亲和层析柱纯化。 • 表达和纯化优化（初始OD600 0.6、温度30、IPTG浓度0.5ug/ml、诱导
时间4h时）。 • 纯化过程中，增加两个不同pH的洗脱液（pH 5.4、pH 4.9）。
XIAP结构和功能示意图
材料和方法
• 蛋白纯化条件优化
1.Ni-NTA柱标准方法洗脱
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摘
要： 为获得腺 病毒 受体 ｓ ＡＲ与 掌蛋 白， Ｐ Ａ６基因克隆入 已 Ｃ Ｐ Ａ） （Ｐ ） 将 Ｐ
构 建 的 原核 表 达 栽 体 ｐ ３一Ｃ Ｒ 中 ， Ｐ Ｒ和 测 序 鉴 定 正确 的重 组 质 粒 ｐ ３ 一Ｃ ＿Ｐ ， 化 大 肠杆 菌 Ｍ１ ＱＥ ０ｓ Ａ 经 Ｃ ＱＥ ０ｓ ＡＲＰ Ａｂ 转 ５
中 图分 类 号 ： ３３ ２ Ｒ７—６
文 献 标 识码 ：Ａ
０ 引 言
白血病 （ ｅ ｋ ｍｉ） Ｌ ｕ ｅ ａ 是造血 系统 的原发恶 性 肿瘤 ， 容易 发 生全 身 多脏 器 的转 移 和 浸润 ， 过 程与 细胞 很 该
膜 表面糖蛋 白及糖链 结构变 化有关 ＿ ］ ｌ 。由于血液 细胞 及 白血 病 细胞 表 面均 缺乏 柯 萨奇一 病毒 受体 （ ｏ — 腺 Ｃ ｘ
后荻得工程茵。该 菌株经 ＩＴ Ｐ Ｇ诱导后 ， 高效表 达 出带有 组氨酸 标签 以包涵体 形式存在 的融合蛋 白 ｓ Ａ ＿Ｐ 。 ｃ Ｒ Ｐ Ａｂ
包 涵体 经过 尿 素 变性 溶 解 、Ｂ Ｐ Ｓ稀 释 复性 、 ｉ Ｎ 离子 亲 和 层 析 柱 纯 化 ， 得 目的 蛋 白 。ｓ Ｐ ＧＥ及 Ｗ ｅｔｒ ｌｔｎ 获 Ｄ Ａ ｓ ｎｂｏｔ ｇ ｅ ｉ
并结 合甘露糖 ［ ， ５ 其特 有的糖 结合特性 为分 析各种肿 瘤细 胞表 面糖 链结 构 变化 及 对肿 瘤 恶化 、 ］ 迁移 、 后等 预
方 面的研究提 供有用 的工具 ＿ 。 ６ ｊ
掌 叶半夏蛋 白有 ３个保守 的甘露糖 结合 位点 ， 发 现 Ｐ Ａ 蛋 白前 体含 有两 个 结构 域［ ， 研究 Ｐ ７ 经过 蛋 白剪 ］ 接 修饰成 两个不 同 的亚基 Ａ（ 一个 甘露糖结 合位点 ） 含 和亚基 Ｂ（ 两个 甘露 糖 结合 位 点 ） 两个 １ Ｄ 的亚 含 ， ２ｋ 基 Ａ 和 两 个 １ Ｄ 的 亚 基 Ｂ再 组 成 分 子 量 约 为 ４ Ｄ 的 异 四 聚体 ， 甘 露 糖 结 合 位 点 为 保 守 的序 列 ２ｋ Ｏｋ 其 ＱＸ ＮＸ Ｙ， ＤＸ ＶＸ 同源性 分析 表明亚 基 Ｂ（ ｏ ｉＢ 为识 别 甘露 糖 的亚 基 ＿ ］ Ｄ ｍａ ） ｎ ８ 。可 以应 用 于恶 性 肿瘤 细 胞膜
通 讯 作 者 ： 恭 楚 ， 子 邮箱 ： ｃ ｓｕ ｅｕ ｃ 李 电 ｌ ＠ｚｔ．ｄ ．ｒ ｇ ｌ
第 ２期
李 娜等： Ａ Ｐ ｂ ｓ ＲＰ Ａ 基因的原核表达载体构建及重组蛋白的表达纯化 Ｃ
３９ １
１ 材
料
１１ 载 体 、 ． 菌及 细胞 ｐ ３ ＱＥ Ｏ载体 、 大肠 杆菌 Ｍ１ ５购 自 Ｎｏ ａ ｅ ｖ ｇ ｎ公 司 ， 大肠 杆 菌 ＤＨ５ 为 浙江 理 工大学生 命科 学 学 院实 验室 ａ 保存 。ｐ ３ Ｃ ＱＥ Ｏｓ ＡＲ表 达载 体 、 ＧＦ ＡｄＥ Ｐ病毒 为 本课 题 组 构 建 。Ｋａｕ ｓ ｍｉ １细胞 由浙 江 大学 钱 文斌 教授 惠
浙江理 工大学 学报 ， ２ 第 ７卷 ， ２期 ，０ ０ ３月 第 ２１ 年
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆ ｈ ｊ ｎ ｃ ＴｅｈＵｎｖ ｒｉ ｏ ｒ ａ ｏ ｅ ａ ｇＳ ｉ ｃ ｉｅｓ ｙ Ｚ ｉ — ｔ
Ｖｏ． ７ １２ ，Ｎｏ ２，Ｍ ａ ． ２ １ ． ｒ ００
文章 编 号 ：１７ －８ １（Ｏ Ｏ ０— ３ ８０ ６ ３３ ５ ２ １ ） ２ ０ １—５
ｓ ＝Ｐ Ａ Ｃ ｆ Ｐ ｂ基 因 的原 核 表 达 载 体 构 建 ｝ 一 及 重 组 蛋 白 的 表 达 纯 化
李 娜 。王双 辉 ， 学 田 ， 艳 红 ， 岳 张 仰 毅 ， 玉梅 ， 武 李 新， 牛 娜 ， 恭 楚 李
（ 江 理 工 大 学 生命 科 学 学 院 ，杭 州 ３ ０ １ ） 浙 １ ０ ８
ｓｃ ｉ ｄｎ ｖｒｓｒｃｐｏ ， ＡＲ）因此 限制 了 ５型腺 病 毒 载 体 应 用 于 白血病 的 治疗 ］ ａｋ ａｅｏｉ ｅｅｔｒ Ｃ ｕ ， 。 。掌 叶半 夏 蛋 白 （ ｎｌａＰ ｄ ｔ ｅｔ ｇｕｉｉ， Ｐ 是 存在 于掌 叶半 夏 中的单 子 叶甘露糖 型植物 凝集素 ， Ｐｉｅｌ ｅａｉ ｃ Ａｇ ｌｔ ｎ Ｐ Ａ） ｉ ｓ ａ ｎ 能特异性 识别
（Ｃ － Ｐ ） 该融合 蛋 白的 ｓ ＡＲ部分 可与 ５型腺病 毒结 合 ， 基 Ｂ部 分 与 白血 病细 胞 表 面的甘 露糖 结 ｓ ＡＲ Ｐ Ａｂ ， Ｃ 亚
合 ， 而介导 ５型腺病 毒 ＡｄＥ Ｐ标记 细胞 表 面暴 露甘 露糖 基 的 白血 病细 胞 。为 开展 以甘 露糖 为 靶点 筛 从 —ＧＦ 选具 有高 甘露糖 型而低 Ｃ ＡＲ受体 的 白血病细胞 ， 研究 此类细 胞在肿 瘤发生 、 转移 中的作用 奠定 基础 。
分析表 明， ４ Ｄ左右 有一条 明显 的特异性 蛋 白条带 。同时细胞 实验 结果表 明融合蛋 白 ｓ Ａ － Ｐ ｂ能提 高 在 ２ｋ Ｃ Ｒ ＰＡ
ＡｄＥ Ｆ 对 Ｋ ｓ ｍｉ —Ｇ Ｐ ａ ｕ － 感 染效 率 。 １的
关键词 ： Ｐ ｓ Ａ —Ｐ Ｐ Ａ； Ｃ Ｒ Ｐ Ａｂ融 合蛋 白 ；亲 和层 析
收稿 日期 ：２Ｏ 一Ｏ — １ ０９ ３ ６ 基 金 项 目 ：国家 自然科 学 基 金 （０ ０３ ９ ３ ８ ０ ９ ）浙 江 省 生 物 医药 工 程 重 中之 重 学 科 开 放 基 金 （Ｗ ＹＸ ８ ４ ３ ８ １ ７ ，０ ０ ０ ３ ； Ｓ ００）
作者简介 ： 李
娜（ ９２ ， ， １８ 一）女 山东临沂人 ， 硕士研究生 ， 研究方 向为肿瘤的靶 向基 因一病毒治疗 。
糖链 的识别［］ 。本研究 将 Ｐ Ａ 的亚基 Ｂ Ｐ Ａｂ序 列克 隆人 带 有六 聚 组氨 酸 （ ×Ｈｉ 纯 化标 签且 有 腺病 Ｐ （Ｐ ） ６ ｓ ） 毒受体 Ｃ ＡＲ序列 的原核表 达载体 ｐ ３—Ｃ ＱＥ Ｏｓ ＡＲ 中， 功地表 达和纯 化 了重 组 ｓ ＡＲＰ Ａ 亚基 Ｂ融合 蛋 白 成 Ｃ －Ｐ