微生物学(沈萍)考试重点
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③平板划线法 a 用接种环以无菌操作蘸取少许待分离的材料，在无菌平板表面进行平板划线、扇形划线或其他形式的连续 划线； b 微生物细胞的数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分 散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
④稀释摇管法(对氧气敏感的厌氧型微生物) a 先将一系列盛无菌培养基的试管加热，使琼脂融化后冷却并保持在 50℃左右； b 将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释，试管迅速摇动均匀； c 冷凝后，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开； d 培养后，菌落形成在琼脂柱的中间； e 进行单菌落的挑取和移植，需先用一只灭菌针将液体石蜡—石蜡盖取出，再用一只毛细管插入琼脂和管壁 之间，吹入无菌无氧气体，将琼脂柱吸出，置放在培养皿中，用无菌刀将琼脂柱切成薄片，进行观察和聚 落的移植。
7、普通光学显微镜 ①利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜；分辨率为 0.2um。 ②分辨率：能辨别两点之间最小距离的能力。 ③最小可分辨距离=0.5λ/n*sinθ，n*sinθ为数值孔径值；滴加香柏油（n=1.52）的目的是增加数值孔径。 ④光学显微镜分辨率的限制：光学显微镜在使用最短波长的可见光（λ=450nm）作为光源时在油镜下可达到其 最大分辨率 0.18um。
微生物学考试复习重点
第一章 绪论 1、微生物学的定义
微生物学一般定义为研究肉眼难以看清的称之为微生物的生命活动的科学。 2、微生物的种类
①无细胞结构不能独立生活的病毒、亚病毒因子（卫星病毒、卫星 RNA 和朊病毒）； ②原核细胞结构的细菌、古生菌； ③真核细胞结构的真菌（酵母菌、霉菌、覃 菌等）、单细胞藻类、原生动物等。 3、微生物生命现象的特性和共性 ①微生物具有其他生物不具备的生物学特性、代谢途径和功能； ②微生物具有其他生物共有的基本生物学特性； ③易操作性：微生物具有个体小、结构简单、生长周期短、易大量培养、易变异、重复性强等优势。 4、微生物的发现 荷兰商人安东•列文虎克利用自制的显微镜发现了微生物世界。 5、微生物学发展过程中的重大事件 ①1867：Lister 创立了消毒外科； ②1890：Von Behring 制备抗毒素治疗白喉和破伤风； ③1892：IV anowsky 提供烟草花叶病是由病毒引起的证据； ④1928：Griffith 发现细菌转化； ⑤1929：Fleming 发现青霉素； ⑥1977：Woese 提出古生菌是不同于细菌和真核生物的特殊类群； ⑦1995：第一个独立生活的细菌（流感嗜血杆菌）全基因组序列测定完成； ⑧1996：第一个独立生活的古生菌（詹氏甲烷球菌）基因组测序完成； ⑨1997：第一个真核生物（啤酒酵母）基因组测序完成。 6、微生物学发展的奠基者 ①巴斯德和科赫是微生物学发展的奠基者。 ②巴斯德的贡献
5、选择培养 ①选择平板培养 根据待分离微生物的特点选择不同的培养条件。 ②富集培养 利用不同的微生物生命活动特点的不同，制定特定的环境条件，使仅适应于该条件的微生物旺盛生长，从而 使其在菌落中的数量大大增加，使人们能够更容易地从自然界中分离到这种所需的特定微生物。
6、微生物保藏技术 ①传代培养保藏 ②冷冻保藏 ③干燥保藏 a 沙土管保存 b 冷冻真空保藏
a 彻底否定了“自生说”：巴斯德用著名的曲颈瓶实验彻底否定了“自生说”，并从此建立了病原学说，推 动了微生物学的发展；
b 免疫学—预防接种：巴斯德研究了鸡霍乱，发现将病原菌减毒可诱发免疫性，以预防鸡霍乱病，他为人类 防病、治病作出了重大贡献；
c 证明发酵是由微生物引起的 d 其他贡献—巴斯德消毒法和家蚕软化病问题。 ③科赫的贡献 a 证明炭疽杆菌是炭疽病的病原菌； b 发现肺结核的病原菌； c 提出了证明某种微生物是否为某种疾病病原体的基本原则——科赫原则； d 用固体培养基分离纯化微生物的技术； e 配制培养基。 ④科赫原则 a 在每一相同的病例中都出现这种微生物； b 要从寄主分离出这样的微生物并在培养基中培养出来； c 用这种微生物的纯培养接种健康而敏感的寄主，同样的疾病会重复发生； d 从实验发病的寄主中能再度分离培养出这种微生物。 第二章 微生物的纯培养和显微技术 1、无菌技术的概念 在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物所污染，其自身也不污染操作环境的技术被称为无菌技术。 2、最常用的灭菌方法 高压蒸汽灭菌 3、接种操作 ①接种环在火焰上灼烧灭菌； ②烧红的接种环在空气中冷却，同时打开装有培养物的试管； ③用接种环蘸取一环培养物转移到一装有无菌培养基的试管中，并将试管重新盖好；
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④接种环在火焰上灼烧，杀灭残留的微生物。 4、用固体培养基获得纯培养
①涂布平板法 a 先将已融化的培养基倒入无菌培养皿，制成无菌平板； b 冷却凝固后，将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用无菌涂布棒将菌液分散至整个平板 表面； c 培养后挑取单个菌落。
②稀释倒平板法 a 先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如 1:10、1:100、1:1000、1:10000……）； b 分别取不同稀释液少许，与已融化并冷却至 50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中， 待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，在平板表面 或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个微生物细胞繁殖而成的； c 挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。
8、细菌染色法
9、细菌的形态和排列 细菌的三种基本形态：球状、杆状、螺旋状。
10、原核细胞的大小 ①球菌大小以其直径表示、杆菌和螺旋菌以其长度和宽度表示。 ②蓝细菌 8um×50um、巨大芽孢杆菌 1.5um×4um、大肠杆菌 1um×3um、肺炎球菌 0.8um、噬血流杆菌 0.25um ×1.2um、纳米细菌 50nm。
11、真菌形态和繁殖方式 ①霉菌：一些“丝状真菌”的统称，菌体由分支或不分支的菌丝构成。 在固体培养基上，部分菌丝伸入培养基内吸收养料，称为营养菌丝；另一部分则向空中生长，称为气生菌丝。 有的气生菌丝发育到一定阶段，分化成繁殖菌丝。 ②酵母菌：一群单细胞真核微生物，以芽殖或裂殖来进行无性繁殖，极少数种可产生子囊孢子进行有性繁殖。
④稀释摇管法(对氧气敏感的厌氧型微生物) a 先将一系列盛无菌培养基的试管加热，使琼脂融化后冷却并保持在 50℃左右； b 将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释，试管迅速摇动均匀； c 冷凝后，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开； d 培养后，菌落形成在琼脂柱的中间； e 进行单菌落的挑取和移植，需先用一只灭菌针将液体石蜡—石蜡盖取出，再用一只毛细管插入琼脂和管壁 之间，吹入无菌无氧气体，将琼脂柱吸出，置放在培养皿中，用无菌刀将琼脂柱切成薄片，进行观察和聚 落的移植。
7、普通光学显微镜 ①利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜；分辨率为 0.2um。 ②分辨率：能辨别两点之间最小距离的能力。 ③最小可分辨距离=0.5λ/n*sinθ，n*sinθ为数值孔径值；滴加香柏油（n=1.52）的目的是增加数值孔径。 ④光学显微镜分辨率的限制：光学显微镜在使用最短波长的可见光（λ=450nm）作为光源时在油镜下可达到其 最大分辨率 0.18um。
微生物学考试复习重点
第一章 绪论 1、微生物学的定义
微生物学一般定义为研究肉眼难以看清的称之为微生物的生命活动的科学。 2、微生物的种类
①无细胞结构不能独立生活的病毒、亚病毒因子（卫星病毒、卫星 RNA 和朊病毒）； ②原核细胞结构的细菌、古生菌； ③真核细胞结构的真菌（酵母菌、霉菌、覃 菌等）、单细胞藻类、原生动物等。 3、微生物生命现象的特性和共性 ①微生物具有其他生物不具备的生物学特性、代谢途径和功能； ②微生物具有其他生物共有的基本生物学特性； ③易操作性：微生物具有个体小、结构简单、生长周期短、易大量培养、易变异、重复性强等优势。 4、微生物的发现 荷兰商人安东•列文虎克利用自制的显微镜发现了微生物世界。 5、微生物学发展过程中的重大事件 ①1867：Lister 创立了消毒外科； ②1890：Von Behring 制备抗毒素治疗白喉和破伤风； ③1892：IV anowsky 提供烟草花叶病是由病毒引起的证据； ④1928：Griffith 发现细菌转化； ⑤1929：Fleming 发现青霉素； ⑥1977：Woese 提出古生菌是不同于细菌和真核生物的特殊类群； ⑦1995：第一个独立生活的细菌（流感嗜血杆菌）全基因组序列测定完成； ⑧1996：第一个独立生活的古生菌（詹氏甲烷球菌）基因组测序完成； ⑨1997：第一个真核生物（啤酒酵母）基因组测序完成。 6、微生物学发展的奠基者 ①巴斯德和科赫是微生物学发展的奠基者。 ②巴斯德的贡献
5、选择培养 ①选择平板培养 根据待分离微生物的特点选择不同的培养条件。 ②富集培养 利用不同的微生物生命活动特点的不同，制定特定的环境条件，使仅适应于该条件的微生物旺盛生长，从而 使其在菌落中的数量大大增加，使人们能够更容易地从自然界中分离到这种所需的特定微生物。
6、微生物保藏技术 ①传代培养保藏 ②冷冻保藏 ③干燥保藏 a 沙土管保存 b 冷冻真空保藏
a 彻底否定了“自生说”：巴斯德用著名的曲颈瓶实验彻底否定了“自生说”，并从此建立了病原学说，推 动了微生物学的发展；
b 免疫学—预防接种：巴斯德研究了鸡霍乱，发现将病原菌减毒可诱发免疫性，以预防鸡霍乱病，他为人类 防病、治病作出了重大贡献；
c 证明发酵是由微生物引起的 d 其他贡献—巴斯德消毒法和家蚕软化病问题。 ③科赫的贡献 a 证明炭疽杆菌是炭疽病的病原菌； b 发现肺结核的病原菌； c 提出了证明某种微生物是否为某种疾病病原体的基本原则——科赫原则； d 用固体培养基分离纯化微生物的技术； e 配制培养基。 ④科赫原则 a 在每一相同的病例中都出现这种微生物； b 要从寄主分离出这样的微生物并在培养基中培养出来； c 用这种微生物的纯培养接种健康而敏感的寄主，同样的疾病会重复发生； d 从实验发病的寄主中能再度分离培养出这种微生物。 第二章 微生物的纯培养和显微技术 1、无菌技术的概念 在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物所污染，其自身也不污染操作环境的技术被称为无菌技术。 2、最常用的灭菌方法 高压蒸汽灭菌 3、接种操作 ①接种环在火焰上灼烧灭菌； ②烧红的接种环在空气中冷却，同时打开装有培养物的试管； ③用接种环蘸取一环培养物转移到一装有无菌培养基的试管中，并将试管重新盖好；
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④接种环在火焰上灼烧，杀灭残留的微生物。 4、用固体培养基获得纯培养
①涂布平板法 a 先将已融化的培养基倒入无菌培养皿，制成无菌平板； b 冷却凝固后，将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用无菌涂布棒将菌液分散至整个平板 表面； c 培养后挑取单个菌落。
②稀释倒平板法 a 先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如 1:10、1:100、1:1000、1:10000……）； b 分别取不同稀释液少许，与已融化并冷却至 50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中， 待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。如果稀释得当，在平板表面 或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个微生物细胞繁殖而成的； c 挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。
8、细菌染色法
9、细菌的形态和排列 细菌的三种基本形态：球状、杆状、螺旋状。
10、原核细胞的大小 ①球菌大小以其直径表示、杆菌和螺旋菌以其长度和宽度表示。 ②蓝细菌 8um×50um、巨大芽孢杆菌 1.5um×4um、大肠杆菌 1um×3um、肺炎球菌 0.8um、噬血流杆菌 0.25um ×1.2um、纳米细菌 50nm。
11、真菌形态和繁殖方式 ①霉菌：一些“丝状真菌”的统称，菌体由分支或不分支的菌丝构成。 在固体培养基上，部分菌丝伸入培养基内吸收养料，称为营养菌丝；另一部分则向空中生长，称为气生菌丝。 有的气生菌丝发育到一定阶段，分化成繁殖菌丝。 ②酵母菌：一群单细胞真核微生物，以芽殖或裂殖来进行无性繁殖，极少数种可产生子囊孢子进行有性繁殖。