植物中可溶性糖含量的测定
植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定
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植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定摘要:目的通过标准曲线的绘制,测定白菜、芹菜、菠菜中可溶性蛋白和可溶性糖的含量,了解可溶性糖和可溶性蛋白的测定方法。
方法分别用蒽酮法和考马斯亮蓝染色法来测定植物体内可溶性糖和可溶性蛋白的含量。
结论关键词:白菜;芹菜;菠菜;可溶性蛋白含量;可溶性糖含量;蒽酮法;考马斯亮蓝染色法1 引言植物体内的可溶性糖和可溶性蛋白含量是重要的生理生化指标。
在作物的碳素营养中,作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。
它们在营养中的作用主要有:合成纤维素组成细胞壁;转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等;分解产物是其他许多有机物合成的原料,如糖在呼吸过程中形成的有机酸,可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸;糖类作为呼吸基质,为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。
由于碳水化合物具有这些重要的作用,所以是营养中最基本的物质,也是需要量最多的一类。
可溶性蛋白是植物体内氮素存在的主要形式,其含量的多少与植物的代谢和衰老有密切的关系,同时它与植物体维持渗透压抗脱水也有很大关系。
白菜是十字花科芸薹属叶用蔬菜,味道鲜美可口,营养丰富,素有“菜中之王”的美称,为广大群众所喜爱。
芹菜属伞形科植物,富含蛋白质、碳水化合物、胡萝卜素、B族维生素、钙、磷、铁、钠等,同时,具有有平肝清热,祛风利湿,清肠利便、润肺止咳、降低血压、健脑镇静的功效。
菠菜藜科一年生草本植物,菠菜含有丰富的维他命A、维他命C及矿物质,它对各种贫血症和糖尿病、肺结核、高血压、风火赤眼等诸多疾病可起辅助治疗作用。
2 材料与方法2.1 植物体内可溶性糖含量的测定2.1.1材料新鲜的白菜、芹菜、菠菜叶片(剪碎后各取0.5—1.0g)2.1.2试剂葡萄糖标准溶液(200ug/ml)、蒽酮试剂2.1.3仪器设备分光光度计;分析天平;恒温水浴;试管;三角瓶;移液管;剪刀;玻璃棒;滤纸;研钵2.1.4测定方法样品中可溶性糖的提取:称取剪碎混匀的新鲜样品0.5 ~1.0 g (或干样粉5~100 mg ),放入大试管中,加入15 ml 蒸馏水,在沸水浴中煮沸20 min,取出冷却,过滤入100 ml 容量瓶中,用蒸馏水冲洗残渣数次,定容至刻度。
植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量测定
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植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定摘要:目的通过标准曲线的绘制,测定白菜、芹菜、菠菜中可溶性蛋白和可溶性糖的含量,了解可溶性糖和可溶性蛋白的测定方式。
方式别离用蒽酮法和考马斯亮蓝染色法来测定植物体内可溶性糖和可溶性蛋白的含量。
结论关键词:白菜;芹菜;菠菜;可溶性蛋白含量;可溶性糖含量;蒽酮法;考马斯亮蓝染色法1 引言植物体内的可溶性糖和可溶性蛋白含量是重要的生理生化指标。
在作物的碳素营养中,作为营养物质主若是指可溶性糖和淀粉。
它们在营养中的作用要紧有:合成纤维素组成细胞壁;转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等;分解产物是其他许多有机物合成的原料,如糖在呼吸进程中形成的有机酸,可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸;糖类作为呼吸基质,为作物的各类合成进程和各类生命活动提供了所需的能量。
由于碳水化合物具有这些重要的作用,因此是营养中最大体的物质,也是需要量最多的一类。
可溶性蛋白是植物体内氮素存在的要紧形式,其含量的多少与植物的代谢和衰老有紧密的关系,同时它与植物体维持渗透压抗脱水也有专门大关系。
白菜是叶用蔬菜,味道鲜美可口,营养丰硕,素有“菜中之王”的美称,为广大群众所喜爱。
芹菜属植物,富含蛋白质、碳水化合物、胡萝卜素、B族维生素、钙、磷、铁、钠等,同时,具有有平肝清热,祛风利湿,清肠利便、润肺止咳、降低血压、健脑镇定的功效。
菠菜一年生草本植物,菠菜含有丰硕的维他命A、维他命C及矿物质,它对各类贫血症和糖尿病、肺结核、高血压、风火赤眼等诸多疾病可起辅助医治作用。
2 材料与方式植物体内可溶性糖含量的测定材料新鲜的白菜、芹菜、菠菜叶片(剪碎后各取—)试剂葡萄糖标准溶液(200ug/ml)、蒽酮试剂仪器设备。
植物可溶性糖含量的测定
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植物可溶性糖含量的测定可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖,是植物品质的重要构成性状之一,尤其是以果实为目的产品的果树作物,可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。
对于鲜食品种,一般来讲,高糖中酸,风味浓,品质优;低糖中酸,风味淡,品质差。
因此,可溶性糖的定量讨论对果树的品质育种具有重要意义。
一、试材及用具1.试材新奇或冷冻的植物材料2.仪器及试剂高速组织捣碎机、电热恒温水浴锅、1000W调温电炉以及200mL、250mL容量瓶、250mL锥形瓶及50mL碱式滴定管等玻璃仪器;试剂主要包括费林试剂及亚甲基蓝溶液等。
二、原理本试验的主要原理:在加热条件下,用还原糖溶液滴定肯定量的费林试剂时,将费林试剂中的二价铜还原为一价铜,以亚甲基蓝为指示剂,稍过量的还原糖马上使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。
通过试验,学习并把握用费林试剂滴定法测定可溶性糖的原理和方法。
三、方法步骤(一)试剂配制1.费林试剂甲:称取硫酸铜(CuSO45H2O,分析纯)34.6g溶于水中,稀释至500mL,过滤,贮于棕色瓶内。
2.费林试剂乙:称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠(KNaC4O6H44H2O,分析纯)138g溶于水中,稀释至500mL,用石棉垫漏斗抽滤。
3.转化糖标准溶液:称取9.5g蔗糖(分析纯)用水溶解后转入1000mL容量瓶中,加入6mol/L HCl(分析纯)10mL,加水至100mL。
在20~25℃下放置三天或在25℃保温24h,然后用水定容(此为酸化的1%转化糖液,可保存3~4个月)。
测定时,取1%转化糖液25.00mL放入250mL容量瓶中,加入甲基红指示剂一滴,用1mol/L NaOH溶液中和后用水定容,即为1mg/mL转化糖标准溶液。
4.亚甲基蓝溶液:称取0.5g亚甲基蓝(分析纯)溶于10mL水中。
5.乙酸锌溶液:称取21.9g乙酸锌[Zn(OAC)22H2O,分析纯]溶于水中,加冰乙酸3mL稀释至100mL。
植物可溶性糖的测定
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植物组织可溶性总糖的测定2015-8-16一、目的:测定植物组织中总糖(可溶性碳水化合物),用以研究体内能量储藏和渗透物质积累情况,检测范围为10-100ug/ml。
因淀粉在超过45度可能糊化水解,如果已知样品含淀粉较多,应考虑70%乙醇提取或冷水提取(不包括淀粉)或1:4盐酸水解(包括淀粉)。
二、样品前处理:鲜样要称重后105度烘干,称干重,计算含水量,粉碎。
三、可溶性总糖的提取:干样测定完含水量后,称取样品0.25g,或鲜样2.50g,放入250ml 消煮管中,加水100ml,调整消煮炉温度约150-160度,煮沸30分钟,冷却,加水定容,取上清液过滤,滤液或离心上清液以水稀释适当倍数(5-10倍左右)待测。
注:西红柿总糖:取1ml匀浆,用水稀释1000倍,取2ml测定。
四、测定4.5.1试剂配制:4.5.1.1 80%硫酸:200ml水加入到1000ml烧杯中,在搅拌和水冷条件下,缓慢加入800ml浓硫酸,冷却备用。
4.5.1.2 蒽酮试剂:取2g蒽酮溶解到1000ml 80%(V/V)硫酸中,搅拌均匀,冷却后备用。
蒽酮试剂当日配制使用。
4.5.1.3 100μg/ml 葡萄糖标准液制作:称取0.0100g无水葡萄糖(分子量180.16)或者1水葡萄糖(分子量198.18)0.0110g溶于水中,加0.5ml浓硫酸,定容100ml。
4.5.2标准曲线浓度μg/ml(ppm) 0 20 40 60 80 100 样品ml葡萄糖标准液(ml) 0 0.4 0.8 1.2 1.6 22 水 2 1.6 1.2 0.8 0.4 0蒽酮试剂ml 84.5.3 总糖测定:取2ml提取液于试管中,在冷水浴中加8ml蒽酮试剂,沸水浴5分钟,取出迅速冷却,于625nm测定含糖量。
同时取上表标准液2ml加8ml蒽酮同样测定。
如果含糖量太低,可适当减低稀释倍数,如果糖含量太,可适当增加稀释倍数。
此方法适于含糖量1-10%样品的测定,如果超过此含量,需稀释后测定,低于此含量,需增加称量样品。
实验植物组织中可溶性糖含量的测定
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实验方案一、实验目的通过实验,掌握测定萝卜品质的方法(一)萝卜外部形态的测定1、实验材料取鲜样3个∕小区直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸2、实验方法.用自来水将各组萝卜洗净后,再用蒸馏水洗涤,擦干表面水分.每个小区取3个重复,用电子天平称量每株的鲜重,用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长,取平均值作为指标值实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定(蒽酮法)一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理;掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件,不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定,可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法,在强酸性条件下,蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸(还原性和非还原性)作用生成蓝绿色的糖醛衍生物,其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应,但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸的蛋白质时,反应不稳定,呈现红色。
上述特定的糖类物质,反应较稳定。
该法特点:灵敏度高,测定量少,快速方便。
三、材料、仪器及试剂1.材料:植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器:分光光度计;恒温水箱; 20ml具塞刻度试管(3支)漏斗;100ml容量瓶;刻度试管;试管架;剪刀;研钵3.试剂(1)200μg/ml标准葡萄糖:AR级葡萄糖100mg,蒸馏水溶解,定容至500ml。
(2)蒽酮试剂:1g蒽酮,用乙酸乙酯溶解,定容至50ml,棕色瓶避光处贮藏;(3)浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管,编号,按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂,再缓慢地加入5ml浓H2SO4,摇匀后,打开试管塞,置沸水浴中煮沸10分钟,取出冷却至室温,在620nm波长下比色,测各管溶液的光密度值(OD),以标准葡2.称取1克白菜叶,剪碎,置于研钵中,加入少量蒸馏水,研磨成匀浆,然后转入20ml刻度试管中,用10ml蒸馏水分次洗涤研钵,洗液一并转入刻度试管中。
糖含量测定
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植物组织中可溶性糖含量测定(1)标准曲线的制作:1%蔗糖标准液:将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重,精确称取。
加少量水溶解,移入100mL容量瓶中,加入浓硫酸,用蒸馏水定容至刻度。
100ug/L蔗糖标准液:精确吸取1%蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中,加水定容。
取20mL刻度试管11支,从0-10分别编号,按表27-1加入溶液和水,然后按顺序向试管内加入蒽酮乙酸乙酯试剂和5mL浓硫酸,充分振荡,立即将试管放入沸水浴中,逐管准确保温1min取出后自然冷却至室温,以空白作参比,在630nm波长下测其吸光度,以吸光度为纵坐标,以糖含量为横坐标,绘制标准曲线,并求出标准线性方程。
试剂 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10100µg/ml蔗糖标准液 0水(mL)蔗糖量(µg)0 20 20 40 40 60 60 80 80 100 100(2)可溶性糖的提取取新鲜植物叶片,擦净表面污物,剪碎混匀,称取-,共3份,分别放入3支刻度试管中,加入5-10mL 蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min(提取2次),提取液过滤入25 mL容量瓶中,反复冲洗试管及残渣,定容至刻度。
3.显色测定:吸取样品提取液 mL于20 mL刻度试管中(重复2次),加蒸馏水,以下步骤与标准曲线测定相同,测定样品的光密度。
4.计算可溶性糖的含量(%) =(C×VT ×n×100)/(W×VS×106 )C为从标准曲线查得的糖量(ug); VT为提取液总体积(mL)VS为测定时取用的样品提取液体积(mL);n 为稀释倍数W为样品质量(g)。
植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定
![植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定](https://img.taocdn.com/s3/m/3bf5a40ecc7931b765ce15ae.png)
实验四植物组织中可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质的系列测定一、目的从一份植物样品中系统分离和测定可溶性糖、淀粉、氨基酸及蛋白质等多种成分,不仅对研究植物体内碳、氮代谢,了解植物的生长发育状况有重要意义,亦可以作为鉴定其品质的重要指标,而且也有助于训练基本操作技能。
二、原理(一)分离提取原理在80-85%的乙醇中,植物组织中的还原糖、蔗糖以及游离氨基酸和叶绿素等溶解,而淀粉及蛋白质沉淀,再用9.2 mol/L高氯酸溶解淀粉(蛋白质沉淀),最后用0.1 mol/L氢氧化钠溶解蛋白质,然后选用适当的方法测定各个提取液中相应物质的含量。
(二)测定原理1.蒽酮比色法——可溶性糖含量测定碳水化合物及其衍生物经浓硫酸处理,生成糠醛,再与蒽酮脱水缩合而生成蓝绿色化合物,在一定范围内其颜色深浅与碳水化合物含量成线性关系。
蒽酮反应的颜色深浅,随温度条件和加热时间而变化,葡萄糖显色高峰在100℃时,加热10 min后出现,而核糖在相同温度下,加热3 min后出现。
此法灵敏度高,糖含量达30 μg即可测定。
2.茚三酮比色法——氨基酸含量测定氨基酸的游离氨基与水合茚三酮作用后,产生二酮茚胺的取代盐等蓝紫色化合物,在570 nm下有最大光吸收。
在一定范围内,其颜色深浅与氨基酸的含量呈正比。
3.考马斯亮蓝G-250结合法——蛋白质含量测定考马斯亮蓝在游离状态时呈红色,当与蛋白质结合后变为蓝色,后者最大光吸收在595 nm,在一定范围内(0-1000 μg /mL),其颜色深浅与蛋白质的含量呈正比。
此法快速灵敏,反应在2 min内即达到平衡,室温1h内颜色稳定,而且干扰物也少。
三、实验用品(一)实验材料:植物样品。
(二)器皿:1. 25 mL刻度试管⨯8 ,15 mL试管⨯20;2. 10 mL离心管⨯2;3. 容量瓶:50 mL⨯1 ,25 mL⨯1;4. 移液管:5 mL⨯2,2 mL⨯4,1 mL⨯2,0.1 mL⨯2;5. 恒温水浴锅;6. 离心机;7. 电子天平;8. 分光光度计。
植物体内可溶性糖含量的测定
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植物体内可溶性糖含量的测定——蒽酮法一、实验目的1.了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理2.掌握分光光度计的使用二、实验背景糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
三、实验原理总糖是指样品中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。
蒽酮比色法是测定样品中总糖量的一个灵敏、快速、简便的方法。
其原理是糖类在较高温度下被硫酸作用脱水生成糠醛或糖醛衍生物后与蒽酮(C14HoO)缩合成蓝色化合物。
溶液含博量在每mL 150 pg以内,与蔥酮反应生成的颜色深浅与糖量成正比。
蒽酮不仅能与单糖也能与双糖、糊精、淀粉等直接起作用,样品不必经过水解。
四、材料、仪器及试剂1.材料:苹果2.仪器:分光光度计恒温水箱试管漏斗容量瓶试管架研钵刀片3.试剂:蒽酮试剂(称取100 mg蒽酮溶于100 mL 98%硫酸溶液(A.R)中)葡萄糖标准溶液(100 μg)/mL(精确称取100 mg干燥葡萄糖,用蒸馏水定容至1000 mL)。
样品溶液(可自选待测物制成样品溶液。
eg:称取0.1g苹果剪碎置于研钵中加入少量蒸馏水研磨成匀浆然后转入20ml刻度试管中用10ml蒸馏水分次洗涤研钵洗液一并转入刻度试管中。
置沸水浴中加盖煮沸10分钟冷却后过滤滤液收集于100ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度摇匀备用。
)四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作:取七支干燥洁净的试管编号后,按下表操作。
编号123456700.100.200.300.400.600.80葡萄糖标准液(100ug/ml)H2O 1.00.900.800.700.600.400.20蒽酮试剂10101010101010每管加人葡萄糖标准液和水后立即混匀,迅速置于冰浴中,传各管都加人蒽酮试剂后,同时置于沸水浴中,准确加热7分钟,立即取出置冰浴中迅速冷却。
植物生理指标检测方法
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植物组织中可溶性糖含量的测定在作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。
它们在营养中的作用主要有:合成纤维素组成细胞壁;转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等;分解产物是其他许多有机物合成的原料,如糖在呼吸过程中形成的有机酸,可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸;糖类作为呼吸基质,为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。
由于碳水化合物具有这些重要的作用,所以是营养中最基本的物质,也是需要量最多的一类。
Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,故可用于糖的定量测定。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物,不但可以测定戊糖与己糖含量,而且可以测所有寡糖类和多糖类,其中包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应),所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量,实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下,用蒽酮法可以一次测出总量,省去许多麻烦,因此,有特殊的应用价值。
但在测定水溶性碳水化合物时,则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中,不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。
此外,不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同,果糖显色最深,葡萄糖次之,半乳糖、甘露糖较浅,五碳糖显色更浅,故测定糖的混合物时,常因不同糖类的比例不同造成误差,但测定单一糖类时,则可避免此种误差。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620 nm ,故在此波长下进行比色。
二、实验材料、试剂与仪器设备(一)实验材料任何植物鲜样或干样。
(二)试剂1. 80 %乙醇。
2. 葡萄糖标准溶液(100 μg/mL ):准确称取100 mg 分析纯无水葡萄糖,溶于蒸馏水并定容至100 mL ,使用时再稀释10 倍(100 μg/mL )。
植物生理指标检测方法
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植物生理指标检测方法植物组织中可溶性糖含量的测定作为一种营养素,主要指可溶性糖和淀粉。
其营养功能主要包括:合成纤维素形成细胞壁;转化并形成其他有机物质,如核苷酸、核酸等;分解产物是合成许多其他有机化合物的原料,例如糖在呼吸过程中形成的有机酸,可以转化为氨基酸作为NH3受体;作为呼吸基质,糖为作物的各种合成过程和生命活动提供能量。
因为碳水化合物具有这些重要的功能,它是营养中最基本、最需要的物质。
ⅰ蒽酮法测定可溶性糖一、原则糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,故可用于糖的定量测定。
该方法的特点是,它可以测定几乎所有的碳水化合物,不仅是戊糖和己糖的含量,还可以测定所有低聚糖和多糖,包括淀粉和纤维素(因为反应溶液中的浓硫酸可以将多糖水解成单糖并反应),所以蒽酮法测得的碳水化合物含量实际上是溶液中所有可溶性碳水化合物的总量。
不需要对所有种类的碳水化合物进行详细的划分,可以用蒽酮法一次测量总量,省去了很多麻烦。
因此,它具有特殊的应用价值。
然而,在测定水溶性碳水化合物时,应注意不要将样品的未溶解残留物添加到反应溶液中,否则由于细胞壁中的纤维素和半纤维素与蒽酮试剂反应,会增加测量误差。
此外,不同糖和蒽酮试剂的显色深度不同,果糖最深,葡萄糖次之,半乳糖和甘露糖较浅,戊糖较浅。
因此,在测定糖混合物时,误差通常由不同糖的不同比例引起,但在测定单一糖时,可以避免这种误差。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620nm,故在此波长下进行比色。
二、实验材料、试剂与仪器设备(一)实验材料任何植物鲜样或干样。
(二)试剂1.80%乙醇。
2.葡萄糖标准溶液(100)μG/ml):准确称取分析纯无水葡萄糖100mg,溶于蒸馏水中,定容至100ml,使用时稀释10倍(100%)3.蒽酮试剂:称取1.0g蒽酮,溶于80%浓硫酸(将98%浓硫酸稀释,把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中)1000ml中,冷却至室温,贮于具塞棕色瓶内,冰箱保存,可使用2~3周。
实验8 植物可溶性糖的测定
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2、用此法测定时,什么样的材料需要用活性碳脱色?
3、请设计一实验,用本实验获得的同一份提取液在测 定可溶性糖含量的同时,一并测定蔗糖、葡萄糖和果 糖?这种测定方法比分别测定有什么优点?
蒽酮比色法
测定可溶性总糖
同 一 份 乙 醇 抽 提 液
预处理
间苯二酚比色法
3 绘制标准曲线:取标准葡萄糖溶液将其 稀释0、20、40、60、80μg/mL系列浓度, 按上述方法分别测其OD值,绘制标准曲线。
计பைடு நூலகம்:
V 为植物样品提取液的体积 C 为提取液糖的浓度 W 为植物样重或为颗粒数 可溶性糖 % = CV/W 同一种子类型之间按每粒种子 计算
实验结果:
表1 不同种子和同一种子萌发前后可溶性糖含量变化
小麦种子 干种子 可溶性 糖含量 萌发种子 萝卜种子 干种子 萌发种 子
注意事项
1 定量实验,且涉及标准曲线绘 制,分光光度计的使用,因此溶 液配制、材料选取等方面必须精 确、仔细,减少误差。 2 实验组、对照组步骤应同步, 使结论准确。
问题:
实验步骤
1 可溶性糖的提取:
分别取2粒干种子和萌发种子于研 钵中,加80%乙醇少许,磨成匀浆,倒 入大试管中, 再用80%乙醇洗涤,水浴 80℃半小时,冷却后转移至10ml量筒, 并用80%乙醇定容至10ml。过滤,所得 的透明液体即为可溶性糖提取液。
2 显色及比色:吸取上述糖提取液1ml, 加入5ml蒽酮试剂,沸水浴10 min,冷却后 于625nm处测OD值,从标线取得提取液中 糖的浓度。
测定蔗糖
不预处理
植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量测定
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植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定摘要:目的通过标准曲线的绘制,测定白菜、芹菜、菠菜中可溶性蛋白和可溶性糖的含量,了解可溶性糖和可溶性蛋白的测定方法。
方法分别用蒽酮法和考马斯亮蓝染色法来测定植物体内可溶性糖和可溶性蛋白的含量。
结论关键词:白菜;芹菜;菠菜;可溶性蛋白含量;可溶性糖含量;蒽酮法;考马斯亮蓝染色法1 引言植物体内的可溶性糖和可溶性蛋白含量是重要的生理生化指标。
在作物的碳素营养中,作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。
它们在营养中的作用主要有:合成纤维素组成细胞壁;转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等;分解产物是其他许多有机物合成的原料,如糖在呼吸过程中形成的有机酸,可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸;糖类作为呼吸基质,为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。
由于碳水化合物具有这些重要的作用,所以是营养中最基本的物质,也是需要量最多的一类。
可溶性蛋白是植物体内氮素存在的主要形式,其含量的多少与植物的代谢和衰老有密切的关系,同时它与植物体维持渗透压抗脱水也有很大关系。
白菜是十字花科芸薹属叶用蔬菜,味道鲜美可口,营养丰富,素有“菜中之王”的美称,为广大群众所喜爱。
芹菜属伞形科植物,富含蛋白质、碳水化合物、胡萝卜素、B族维生素、钙、磷、铁、钠等,同时,具有有平肝清热,祛风利湿,清肠利便、润肺止咳、降低血压、健脑镇静的功效。
菠菜藜科一年生草本植物,菠菜含有丰富的维他命A、维他命C及矿物质,它对各种贫血症和糖尿病、肺结核、高血压、风火赤眼等诸多疾病可起辅助治疗作用。
2 材料与方法2.1 植物体内可溶性糖含量的测定新鲜的白菜、芹菜、菠菜叶片(剪碎后各取0.5—1.0g)葡萄糖标准溶液(200ug/ml)、蒽酮试剂分光光度计;分析天平;恒温水浴;试管;三角瓶;移液管;剪刀;玻璃棒;滤纸;研钵样品中可溶性糖的提取:称取剪碎混匀的新鲜样品0.5 ~1.0 g (或干样粉5~100 mg ),放入大试管中,加入15 ml 蒸馏水,在沸水浴中煮沸20 min,取出冷却,过滤入100 ml 容量瓶中,用蒸馏水冲洗残渣数次,定容至刻度。
实验24 植物组织中可溶性糖与淀粉的测定
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实验24 植物组织中可溶性糖与淀粉的测定植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质性状,常以可溶性糖和淀粉的含量作为重要指标,本实验学习几种定量测定可溶性糖和淀粉的方法。
一、苯酚法测定可溶性糖【原理】植物体内的可溶性糖主要指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是:糖在浓硫酸作用下,脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物,在10~100μg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比,且在485nm波长下有最大吸收峰,故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定,方法简单,灵敏度高,基本不受蛋白质存在的影响,并且产生的颜色稳定160min以上。
【仪器与用具】分光光度计;电炉;铝锅;20ml刻度试管;刻度吸管5ml 1支,1ml 2支;记号笔;吸水纸适量。
【试剂】1.90%苯酚溶液称取90g苯酚(AR),加蒸馏水10ml溶解,在室温下可保存数月;2.9%苯酚溶液取3ml 90%苯酚溶液,加蒸馏水至30ml,现配现用;3.浓硫酸(比重1.84);4.1%蔗糖标准液将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重,精确称取1.000g。
加少量水溶解,移入100ml容量瓶中,加入0.5ml浓硫酸,用蒸馏水定容至刻度;5.100μg/ml蔗糖标准液精确吸取1%蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中,加水定容。
【方法】1.标准曲线的制作取20ml刻度试管11支,从0~10分别编号,按表24-1加入溶液和水。
表24-1 各试管加溶液和水的量然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液,摇匀,再从管液正面快速加入5ml浓硫酸,摇匀。
比色液总体积为8ml,在恒温下放置30min,显色。
然后以空白为参比,在485nm波长下比色测定,以糖含量为横坐标,光密为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程。
2.可溶性糖的提取取新鲜植物叶片,擦净表面污物,剪碎混匀,称取0.10~0.30g,共3份,或干材料。
植物组织中可溶性糖含量的测定
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植物组织中可溶性糖含量的测定一.实验目的学习可溶性糖测定的蒽酮比色法二.实验原理植物在个体发育的各个时期,代谢活动也发生相应的变化,碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。
了解可溶性糖含量的变化,在生理上和实践上都有重要的意义。
本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。
糖在硫酸的作用下生成糠醛,糠醛再与蒽酮作用,形成一种绿色的络合物.在低浓度时,625nm 的OD值与糖含量成正相关。
该实验方法简便,但没有专一性,对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应,产生颜色。
三.实验用品721型分光光度计分析天平研钵恒温水浴锅烧杯刻度试管大试管活性炭移液管漏斗酒精(80%)葡萄糖标准溶液:称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液,即得每mL含糖为200μg的标准溶液。
蒽酮试剂:称取1g经过纯化的蒽酮,溶解于1000mL稀硫酸中即得。
稀硫酸溶液由760mL浓硫酸(比重1.84)稀释成1000mL而成。
四.实验步骤1.可溶性糖的提取称取0.5g的新鲜植物(青菜)叶片,于研钵中加80%酒精4ml,仔细研磨成匀浆,倒入离心管内,置于80℃水浴中不断搅拌30min,离心10分钟(5000转/min),收集上清液于10ml的刻度试管中,其残渣加2ml80%酒精重复提1次,合并上清液。
在上清液中加0.5g活性炭,80℃水浴脱色30min,定容至10ml,过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。
2.显色及比色吸取上述糖提取液1mL,放入一干洁的试管中,加蒽酮试剂5mL混合之,于沸水浴中煮沸10分钟,取出冷却,然后于分光光度计上进行测定,波长为625nm,测得吸光度。
从标准曲线上查得滤液中得糖含量(或经直线回归公式计算),然后再行计算样品中含糖百分数。
3.绘制标准曲线取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液,浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80μg。
按上述方法分别测得其吸光度,然后绘制A625-糖浓度曲线,或进行直线回归求得直线方程。
植物中可溶性糖含量的测定
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在作物的碳素营养中,作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。
它们在营养中的作用主要有:合成纤维素组成细胞壁;转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等;分解产物是其他许多有机物合成的原料,如糖在呼吸过程中形成的有机酸,可作为 NH 3 的受体而转化为氨基酸;糖类作为呼吸基质,为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。
由于碳水化合物具有这些重要的作用,所以是营养中最基本的物质,也是需要量最多的一类。
Ⅰ 蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,故可用于糖的定量测定。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物,不但可以测定戊糖与己糖含量,而且可以测所有寡糖类和多糖类,其中包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应),所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量,实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。
在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下,用蒽酮法可以一次测出总量,省去许多麻烦,因此,有特殊的应用价值。
但在测定水溶性碳水化合物时,则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中,不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。
此外,不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同,果糖显色最深,葡萄糖次之,半乳糖、甘露糖较浅,五碳糖显色更浅,故测定糖的混合物时,常因不同糖类的比例不同造成误差,但测定单一糖类时,则可避免此种误差。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ,故在此波长下进行比色。
二、实验材料、试剂与仪器设备(一)实验材料任何植物鲜样或干样。
(二)试剂1. 80 %乙醇。
2. 葡萄糖标准溶液( 100 μg/mL ):准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖,溶于蒸馏水并定容至 100 mL ,使用时再稀释 10 倍(100 μg/mL )。
植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定
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为农业生产提供理论依据和实 践指导
Part Four
实验操作技巧和注 意事项
实验操作技巧
准确称取样品, 保证测量精度
严格控制实验条 件,如温度、pH 值等
使用合适的提取 剂,充分提取可 溶性糖和可溶性 蛋白
测定过程中要避 免污染,确保实 验结果的准确性
实验安全注意事项
实验操作前必须穿 戴好防护服和护目 镜
实验前准备:确保实验器具干净、无 菌,准备好所需的试剂和材料。
样品处理:将植物样品进行研磨、离 心,取上清液进行测定。
测定方法:采用分光光度法进行测定, 记录吸光度值。
结果计算:根据标准曲线和吸光度值 计算可溶性蛋白的含量。
注意事项:实验过程中要避免交叉污 染,确保试剂的准确性和有效性。
Part Three
实验结果分析和应 用
数据处理和结果分析
数据处理方法:采用Excel或类似软件进行数据整理、计算和绘图 结果分析:比较不同处理或不同组织之间的可溶性糖和可溶性蛋白含量 差异,分析其可能的原因和生物学意义 可靠性检验:进行统计学分析,如t检验或方差分析,以确定数据可靠性
结果呈现:以表格、图表等形式展示实验结果,便于观察和分析
避免使用过期的试 剂和仪器
实验结束后及时清 理现场,确保安全
实验室内禁止吸烟 和饮食
实验误差控制和数据处理方法
实验误差来源: 取样、试剂加 入、读数等环
节
误差控制措施: 准确称量、规 范操作、多次 测量求平均值
等
数据处理方法: 统计、图表绘 制、计算变异
系数等
数据可靠性分 析:置信区间、
误差范围等
实验材料和试剂
实验材料:植 物组织样品
试剂:乙醇、 酚酞、氢氧化 钠、硫酸铜、 双氧水、亚甲
植物组织中可溶性糖含量的测定
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植物组织中可溶性糖含量的测定XXX,YYY,ZZZ(版权所有,仅限个人)一.实验目的1、学习植物组织中可溶性糖的测定方法。
2、了解可溶性糖在植物物质代谢中的作用。
二、实验原理:(一)提取:利用可溶性糖溶于水的特性,将植物磨碎,用热水将组织中的可溶性糖提取出来,用铅离子沉淀提取液中的蛋白质,用草酸钠除去多余的铅离子,过滤后即可获得植物的可溶性糖提取液。
(二)测定:蒽酮比色法五碳糖和六碳糖在90~100℃温度下可被浓硫酸脱水生成糠醛或羟甲基糖醛,与蒽酮(C14H10O)脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色。
该物质在600nm处有最大吸收,在0~200µg/mL范围内,其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
蒽酮比色法该物质在600nm处有最大吸收,在0~200µg/mL范围内,其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比,可以比色测定。
该法方法简便,绝大部分的碳水化合物(五碳糖、六碳糖)都能与蒽酮反应产生颜色。
三、实验材料:大白菜Brassica campestris ssp.pekinensis四.实验步骤:1.标准曲线的绘制配制浓度分别为0,50,100,150,200µg/ml的糖标准溶液各10ml。
显色:取糖标准液lml于一干洁的试管中,加蒽酮试剂5ml混合,于沸水浴中煮沸10分钟。
比色:测定A600nm的吸光度值。
浓度:ug/mL050100150200吸光度:a00.1950.3550.5150.689绘制标准曲线:.可溶性糖的提取:称取0.250g待测植物叶片,放入研钵中,加少许乙醚研磨成均浆,用70℃的热水洗涤研钵,植物材料和洗涤后的溶液全量转移到100ml烧杯中,使总体积在30~ 40ml,将烧杯放在水浴锅中70~80℃半小时,冷却后滴加饱和中性醋酸铅以除去溶液中的蛋白质,连同残渣一起全量转移到100ml容量瓶中,定容,充分摇匀,用干燥漏斗过滤于一干燥的三角瓶中,瓶中事先放入少量(约0.2-0.4g)的草酸钠粉末,除去滤液中过量的铅,使生成草酸铅沉淀再行过滤,所得透明滤液即为可溶性糖提取液。
实验8植物组织中可溶性糖含量测定(蒽酮比色法)
![实验8植物组织中可溶性糖含量测定(蒽酮比色法)](https://img.taocdn.com/s3/m/d90f0a1e482fb4daa58d4b97.png)
实验方案一、实验目的通过实验,掌握测定萝卜品质的方法(一)萝卜外部形态的测定1、实验材料取鲜样3个∕小区直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸2、实验方法.用自来水将各组萝卜洗净后,再用蒸馏水洗涤,擦干表面水分.每个小区取3个重复,用电子天平称量每株的鲜重,用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长,取平均值作为指标值实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定(蒽酮法)一、实验目的了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理;掌握分光光度计的使用二、实验原理糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。
不同载培条件,不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。
因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定,可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。
蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法,在强酸性条件下,蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸(还原性和非还原性)作用生成蓝绿色的糖醛衍生物,其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。
蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应,但显现的颜色不同。
当存在含有较多色氨酸的蛋白质时,反应不稳定,呈现红色。
上述特定的糖类物质,反应较稳定。
该法特点:灵敏度高,测定量少,快速方便。
三、材料、仪器及试剂1.材料:植物种子、白菜叶、柑桔2.仪器:分光光度计;恒温水箱; 20ml具塞刻度试管(3支)漏斗;100ml容量瓶;刻度试管;试管架;剪刀;研钵3.试剂(1)200μg/ml标准葡萄糖:AR级葡萄糖100mg,蒸馏水溶解,定容至500ml。
(2)蒽酮试剂:1g蒽酮,用乙酸乙酯溶解,定容至50ml,棕色瓶避光处贮藏;(3)浓硫酸四、实验方法1.葡萄糖标准曲线的制作取6支20ml具寒试管,编号,按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。
在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂,再缓慢地加入5ml浓H2SO4,摇匀后,打开试管塞,置沸水浴中煮沸10分钟,取出冷却至室温,在620nm波长下比色,测各管溶液的光密度值(OD),以标准葡2.称取1克白菜叶,剪碎,置于研钵中,加入少量蒸馏水,研磨成匀浆,然后转入20ml刻度试管中,用10ml蒸馏水分次洗涤研钵,洗液一并转入刻度试管中。
植物可溶性糖含量的测定
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实验8 植物可溶性糖含量的测定可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖,是植物品质的重要构成性状之一,尤其是以果实为目的产品的果树作物,可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。
对于鲜食品种,一般来讲,高糖中酸,风味浓,品质优;低糖中酸,风味淡,品质差。
因此,可溶性糖的定量研究对果树的品质育种具有重要意义。
一、试材及用具1.试材新鲜或冷冻的植物材料2.仪器及试剂高速组织捣碎机、电热恒温水浴锅、1000W调温电炉以及200mL、250mL 容量瓶、250mL锥形瓶及50mL碱式滴定管等玻璃仪器;试剂主要包括费林试剂及亚甲基蓝溶液等。
二、原理本实验的主要原理:在加热条件下,用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时,将费林试剂中的二价铜还原为一价铜,以亚甲基蓝为指示剂,稍过量的还原糖立即使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。
通过实验,学习并掌握用费林试剂滴定法测定可溶性糖的原理和方法。
三、方法步骤(一)试剂配制1.费林试剂甲:称取硫酸铜(CuSO4•5H2O,分析纯)34.6g溶于水中,稀释至500mL,过滤,贮于棕色瓶内。
2.费林试剂乙:称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠(KNaC4O6H4•4H2O,分析纯)138g 溶于水中,稀释至500mL,用石棉垫漏斗抽滤。
3.转化糖标准溶液:称取9.5g蔗糖(分析纯)用水溶解后转入1000mL容量瓶中,加入6mol/L HCl(分析纯)10mL,加水至100mL。
在20~25℃下放置三天或在25℃保温24h,然后用水定容(此为酸化的1%转化糖液,可保存3~4个月)。
测定时,取1%转化糖液25.00mL 放入250mL容量瓶中,加入甲基红指示剂一滴,用1mol/L NaOH溶液中和后用水定容,即为1mg/mL转化糖标准溶液。
4.亚甲基蓝溶液:称取0.5g亚甲基蓝(分析纯)溶于10mL水中。
5.乙酸锌溶液:称取21.9g乙酸锌[Zn(OAC)2•2H2O,分析纯]溶于水中,加冰乙酸3mL 稀释至100mL。
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植物组织中可溶性糖含量的测定
在作物的碳素营养中,作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。
它们在营养中的作用主要有:合成纤维素组成细胞壁;转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等;分解产物是其他许多有
机物合成的原料,如糖在呼吸过程中形成的有机酸,可作为 NH 3 的受体而转化为氨基酸;
糖类作为呼吸基质,为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。
由于碳水化
合物具有这些重要的作用,所以是营养中最基本的物质,也是需要量最多的一类。
Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖
一、原理
糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽
酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,故可用于糖
的定量测定。
该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物,不但可以测定戊糖与己糖含量,而且可以测
所有寡糖类和多糖类,其中包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成
单糖而发生反应),所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量,实际上是溶液中全部可溶性碳水
化合物总量。
在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下,用蒽酮法可以一次测出总量,
省去许多麻烦,因此,有特殊的应用价值。
但在测定水溶性碳水化合物时,则应注意切勿将
样品的未溶解残渣加入反应液中,不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发
生反应而增加了测定误差。
此外,不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同,果糖显色最深,
葡萄糖次之,半乳糖、甘露糖较浅,五碳糖显色更浅,故测定糖的混合物时,常因不同糖类
的比例不同造成误差,但测定单一糖类时,则可避免此种误差。
糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ,故在此波长下进行比色。
二、实验材料、试剂与仪器设备
(一)实验材料
任何植物鲜样或干样。
(二)试剂
1. 80 %乙醇。
2. 葡萄糖标准溶液(100 μg/mL ):准确称取 100 mg 分析纯无水葡萄糖,溶于蒸馏水并定容至 100 mL ,使用时再稀释 10 倍(100 μg/mL )。
3 .蒽酮试剂:称取 1.0 g 蒽酮,溶于 80% 浓硫酸(将 98% 浓硫酸稀释,把浓硫酸缓缓加入
到蒸馏水中) 1000 mL 中,冷却至室温,贮于具塞棕色瓶内,冰箱保存,可使用 2 ~ 3 周。
(三)仪器设备
分光光度计,分析天平,离心管,离心机,恒温水浴,试管,三角瓶,移液管( 5 、 1 、
0.5 mL ),剪刀,瓷盘,玻棒,水浴锅,电炉,漏斗,滤纸。
三、实验步骤
1. 样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品 0.5 ~ 1.0 g (或干样粉末 5 ~ 100 mg ),放入大试管中,加入 15 mL 蒸馏水,在沸水浴中煮沸 20 min ,取出冷却,过滤入 100 mL 容
量瓶中,用蒸馏水冲洗残渣数次,定容至刻度。
2. 标准曲线制作取 6 支大试管,从 0 ~ 5 分别编号,按表 24-1 加入各试剂。
表 24-1 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量
测定光密度,以光密度为纵坐标,含葡萄糖量(μg )为横坐标绘制标准曲线。
3 .样品测定取待测样品提取液 1.0 mL 加蒽酮试剂 5 mL ,同以上操作显色测定光密度。
重复 3 次。
四、结果计算
溶性糖含量(%)=从标准曲线查得糖的量(μg)×提取液体积(ml)×稀释倍数/[测定用样品液的体积(ml)×样品重量(g)×106]×100
式中: C ——从标准曲线查得葡萄糖量,μg 。
V T ——样品提取液总体积 , mL 。
V 1 ——显色时取样品液量, mL 。
W ——样品重( g )。
Ⅱ苯酚法测定可溶性糖
一、原理
植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。
苯酚法测定可溶性糖的原理是:糖在浓硫酸作用下,脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物,在 10 ~ 100mg 范围内其颜色深浅与糖的含量成正比,且在 485 nm 波长下有最大吸收峰,故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定,方法简单,灵敏度高,实验时基本不受蛋白质存在的影响,并且产生的颜色稳定 160 min 以上。
二、实验材料、试剂与仪器设备
(一)实验材料
新鲜的植物叶片。
(二)试剂
1. 90 %苯酚溶液:称取 90 g 苯酚(AR),加蒸馏水溶解并定容至 100 mL ,在室温下可保存数月。
2. 9 %苯酚溶液:取 3 mL 90 %苯酚溶液,加蒸馏水至 30 mL ,现配现用。
3. 浓硫酸(比重 1.84 )。
4. 1 %蔗糖标准液:将分析纯蔗糖在 80 ℃下烘至恒重,精确称取 1.000 g ,加少量水溶解,移入 100 mL 容量瓶中,加入 0.5 mL 浓硫酸,用蒸馏水定容至刻度。
5. 100 μg/L 蔗糖标准液:精确吸取 1 %蔗糖标准液 l mL 加入100 mL容量瓶中,加蒸馏水定容。
(三)仪器设备
分光光度计,电炉,铝锅, 20 mL 刻度试管,刻度吸管 5 mL 1 支、lmL 2支,记号笔,吸水纸适量。
三、实验步骤
1 .标准曲线的制作取 20 mL 刻度试管 11 支,从 0 ~ 10 分别编号,按表 24 –
2 加入溶液和水,然后按顺序向试管内加入 1mL 9 %苯酚溶液,摇匀,再从管液正面以 5 ~ 20 s 时间加入5 mL 浓硫酸,摇匀。
比色液总体积为 8 mL ,在室温下放置 30 min ,显色。
然后以空白为参比,在 485 nm 波长下比色测定,以糖含量为横坐标,光密度为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程。
表 24-2 苯酚法测可溶性糖绘制标准曲线的试剂量
2 .可溶性糖的提取取新鲜植物叶片,擦净表面污物,剪碎混匀,称取 0.1 ~ 0.
3 g, 共 3 份,分别放入 3 支刻度试管中,加入 5 ~ 10 mL 蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取 30 min (提取 2 次),提取液过滤入 25 mL 容量瓶中,反复冲洗试管及残渣,定容至刻度。
3 .测定吸取 0.5 mL 样品液于试管中(重复 2 次),加蒸馏水 1.5 mL ,同制作标准曲线的
步骤,按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液,显色并测定光密度。
由标准线性方程求出糖的量,计算测试样品中糖含量。
四、结果计算
可溶性糖含量(%)=从标准曲线查得糖的量(μg)×提取液体积(ml)×稀释倍数/[测定用
样品液的体积(ml)×样品重量(g)×106]×100
式中: C ——标准方程求得糖量,μg 。
V T ——提取液体积, mL 。
V 1 ——吸取样品液体积, mL 。
W ——组织重量, g 。