卡式微柱凝胶技术在血型鉴定中的应用

卡式微柱凝胶技术在血型鉴定中的应用

【摘要】目的:探讨卡式微柱凝胶法在血型鉴定中的作用。方法:将1800位名病人同时采用卡式微柱凝胶法和传统的手工操作法作血型鉴定。结果:卡式微柱凝胶法正确率为100%,手工正定型法为98.72%,正定型+反定型为100%。结论:卡式微柱凝胶法可作为血型鉴定的常规检测方法。

【关键词】微柱凝胶技术;血型鉴定

【中图分类号】r476.5【文献标识码】b【文章编号】

1005-0515(2010)009-0012-01

准确的血型鉴定是临床安全、有效输血的重要保证。微柱凝胶检测技术(mgi)是近几年刚传入我国的一种用于输血前检查的方法,是目前国际卫生组织推荐的最先进的微柱凝胶免疫检测技术。本血站自2007年6月~2009年12月对1800名献血者做了卡式法与手工操作的平行实验,并对结果进行了比较,现将比较的结论与相关分析报道于下。

1 材料和方法

1.1 试剂:微柱凝胶卡(抗a、抗b、抗d、a型红细胞、b型红细胞、clt管)、微柱凝胶多克隆抗人球卡、谱细胞、低离子液、离心机、孵育箱均由瑞士达亚美公司提供,手工试剂 :抗a、抗b血清为长春生物制品研究所生产。单克隆抗d为台湾贝索公司生产。

1.2 仪器:孵育器:diamed-id(达亚美) id-incubator 37sⅰ专用孵育器。离心机:diamed-id(达亚美) id-centrifuge 12sⅱ专用

离心机。

1.3 检测方法。

1.3.1 卡式检测法:按达亚美公司卡氏血型鉴定手册进行。取diamed-id abo/rh 血型鉴定卡一个,标记病人的姓名病历号等,撕去卡上的锡纸膜。配制 5%的红细胞悬液(25ul病人rbc+0.5ml diluent2低离子缓冲液)在a.b.d孔分别加入10ul抗a抗b抗d,标准血清。在a.b.d孔分别加入已配制的2%病人红细胞悬液

10ul,37℃孵育15分钟,离心,按说明书提示标准判读结果。

1.3.2 手工操作:试管法检测abo、rhd 血型对1800 例抗凝的血标本置37 ℃水浴15 ~ 30 min ,离心分离血浆与红细胞。正向定型:取试管3 支标记并加入抗a1、抗b 及抗d试剂2 滴,分别加入患者2 % ~ 4 %红细胞悬液1 滴,以3 000 r/ min 离心15 s ,观察结果,凝集为阳性,不凝集为阴性。反向定型: 取试管3 支标以ac 、bc 、oc ,分别加入患者血浆2 滴,再加入2 % ~ 4 %abo定型试剂红细胞1 滴。离心后观察结果,凝集为阳性,不凝集为阴性。

2 结果

将上述两种方法的鉴定结果进行比较,凡正反定型和卡式检测法检验相关血型不符合者,将血液红细胞用生理盐水洗涤3次,再用两种方法重复测定,作正确率比较。血型鉴定共1800例,正反定型和卡式检测法不一致23例,其中rh(-)3例。经验证,卡式检测法正确率100%,正向定型正确率98.72%,正定型+反定型为100%。

3 讨论

微柱凝胶技术血型正定型具有检测敏感性高、特异性强、结果准确、易于观察、影响因素少等特点,卡式微柱凝胶法是抗原,抗体反应和凝胶分子筛技术相结合的检测法。它是通过葡聚糖凝胶的浓度来控制分子筛孔径大小,使分子筛只让游离分子通过,从而达到分

离凝聚红细胞和游离红细胞的目的。为确保实验结果准确可靠,微柱凝胶技术对标本的质量也有严格的要求,如采集标本时未充分抗凝,使血浆中含有小凝块。或被细菌污染等,就有可能导致假阳性。故最好要求留取血样必须新鲜,无溶血,并且要充分抗凝等。特别是不能随意缩短离心时间,标本必须离心,以免血清中的纤维蛋白丝

影响试验结果及离心不彻底时血清中含纤维蛋白出现细胞“凝块”,出现假阳性。

本法操作简单,敏感性、特异性都高于手工正定型法。微柱凝胶血型鉴定法的高度敏感性,反定型时,微柱凝胶技术能使红细胞抗

原与极微弱的相应的血型抗体发生阳性反应,说明微柱凝胶抗人球蛋白反应介质能加速和增强凝集反应,且凝集在微柱凝胶孔内的红色凝集颗粒清晰、明确,极易被观察到,可作为反定型检测低滴度血型抗体的有效方法[1],将凝集的,游离的红细胞分开,使结果一目了然。避免了操作上的主观影响[2],所要标本量少,操作容易,省去了繁锁的洗涤过程,不再耽心抗人球蛋白抗体被中和,而产生假阳性。也便于保存,一般而言,在冰箱中可保存半年至一年。还可进行拍照供永久记录,以备发生血型鉴定错误时查对原始资料。虽然微柱凝胶试剂价格比较贵,但从输血安

全、操作安全和操作标准化角度考虑,应该推广微柱凝胶技术在临床血型鉴定中应用.

参考文献

[1] 陈才生,王雷萍,翁彬,等. 新生儿脐血abo血型正反定型及交叉配血实验结果分析. 现代检验医学杂志,2007,22(1):61～63 [2]彭道波,兰炯采,王梁平,等.用微柱凝试验进行交叉配血[j].中国输血杂志,2001,14(4):232