鲜豆浆中菌落总数的测定
食品中细菌菌落总数的测定
312 10-4
ppt课件完整
2.6x103 3.1x106
26
3、 若所有稀释度的平板菌落数均 >300，则取最高稀释度的平均菌落数乘 以稀释倍数计算。
ppt课件完整
27
试样 稀释度
例次 10-2
10-3
1
380
52
平
2 均 526
205
菌
3 落 271
60
数
4
284
152
菌量
10-4 选定计数稀释度 /(个/g 或mL)
ppt课件完整
5
菌落总数并不表示实际中的所有细菌总 数，也不能区分其中细菌的种类，只包括 一群在计数平板琼脂中生长发育、嗜中温 的需氧和兼性厌氧的细菌菌落总数，所以 有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
ppt课件完整
6
2 菌落总数测定的卫生学意义
（1）菌落总数主要作为判别食品被 污染程度的标志，也可以应用这一方法 观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对 被检样品进行卫生学评价时提供依据。
ppt课件完整
9
三 、 材料
1、 食品检样 2、 培养基 平板计数培养基，无菌生理盐水或磷酸 盐缓冲液 3、 其它 无菌培养皿，无菌吸管，电炉、恒温培 养箱等。
ppt课件完整
10
四、 流程
1、检样 2、做几个适当倍数的稀释液 3、选择2~3个适宜稀释度各1 mL,分别加入
灭菌平皿内 4、平皿内倾注15～20 mL琼脂培养基，混匀 5、36 ±1℃培养48±2小时或（24±2）小
ppt课件完整
38
7、为使菌落能在平板上均匀分布， 检液加入平皿后，应尽快倾注培养基并 旋转混匀，可正反两个方向旋转，检样 从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时 间不宜超过20min，以防止细菌有所死 亡或繁殖。
食品中菌落总数测定方案(菌落总数测试片)
食品中菌落总数测定方案菌落总数测试片1.操作步骤1.1 样品的稀释1.1.1 称取25g样品（剪碎）置盛有225ml无菌生理盐水的三角瓶中，充分振摇混匀，制成1:10的样品匀液。
1.1.2 用1ml微量移液器吸取1:10的样品匀液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml无菌生理盐水的无菌试管中（注意吸头尖端不要触及稀释液面），充分振摇混匀，制成1:100的样品匀液。
1.1.3 用1ml微量移液器吸取1:100的样品匀液1ml，沿管壁缓慢注入盛有9ml无菌生理盐水的无菌试管中（注意吸头尖端不要触及稀释液面），充分振摇混匀，制成1:1000的样品匀液。
1.2 样品的接种揭开菌落总数测试片上层膜，用1ml微量移液器分别吸取1:10、1:100、1:1000的样品匀液1ml慢慢均匀地滴加到纸片上，然后将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固（每个样品匀液做2个纸片）。
同时做一片空白阴性对照。
1.3 培养将测试片叠在一起放回原自封袋中，并封口，透明面朝上水平置于36℃±1℃培养箱内培养15～24h，堆叠片数不超过12片。
1.4 菌落计数1.3.1 细菌在测试片上生长后会显示红色斑点，可用肉眼观察,必要时用放大镜,记录稀释倍数和相应的菌落数量。
菌落计数以菌落形成单位(CFU)表示。
1.3.2 选取菌落数在30CFU—300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。
低于30CFU的纸片记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。
每个稀释度的菌落数应采用两个纸片的平均数。
1.3.3 其中一个纸片有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的纸片作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到纸片的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个纸片后乘以2,代表一个纸片菌落数。
1.3.4 当纸片上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。
—1 —— 2 —1.5 结果与报告1.5.1 菌落总数的计算方法1.5.1.1 若只有一个稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个纸片菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g 样品中菌落总数结果。
食品中菌落总数的测定实验
食品中菌落总数的测定实验一、实验目的：了解稀释平板计数的原理，掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法，认识细菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。
二、原理平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是这种计数方法最大的优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验，以及食品、饮料和水等含菌指数或污染度的检测三、试剂和材料1.仪器恒温培养箱：（36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
）均质器或振荡器无菌吸管：1 ml（0.01 ml 刻度）、10 ml（0.1 ml 刻度）或微量移液器及吸头无菌锥形瓶：容量250 ml、500 ml、无菌培养皿：直径90 mm菌落计数器2.样品1）平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基：蛋白胨5.0 g 、酵母浸膏2.5 g 、葡萄糖1.0 g 、琼脂15.0 g、蒸馏水1000 ml、pH 7.0±0.2。
将所有成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。
分装试管或锥形瓶，121 ℃高压灭菌15 min。
注：用平板计数琼脂，称取23.5 g于1 000 ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121 ℃高压灭菌20min，冷却至45~47℃左右备用。
2）无菌生理盐水：氯化钠（NaCl）5.875g 蒸馏水(纯净水) 500ml 称取5.875ｇNaCl溶于500ml蒸馏水中，121 ℃高压灭菌20min。
菌落总数检测方法
菌落总数检测方法菌落总数检测是一种常见的微生物检测方法，用于评估食品、饮用水、医药制品、化妆品等产品的卫生质量。
菌落总数是指在一定条件下，一定时间内生长的微生物菌落总数，是评价样品中微生物污染程度的重要指标。
正确的菌落总数检测方法对于保障产品质量和消费者健康具有重要意义。
菌落总数检测方法主要包括表面菌落总数检测和悬浮菌落总数检测两种。
表面菌落总数检测是指将样品表面的微生物进行检测，常用的方法包括接触平板法和印记法。
接触平板法是将含有富集培养基的琼脂平板与样品表面接触一定时间，然后进行培养计数。
印记法则是将样品表面印在琼脂平板上，然后进行培养计数。
悬浮菌落总数检测是指将样品中的悬浮微生物进行检测，常用的方法包括滤膜法和涂布法。
滤膜法是通过将样品过滤到膜上，然后将膜培养计数。
涂布法则是将样品涂布在琼脂平板上，然后进行培养计数。
在进行菌落总数检测时，需要注意以下几点。
首先，样品的采集和处理应当符合相关标准和规范，避免外界环境对样品的污染。
其次，培养基的选择应当根据样品的特性和检测要求进行合理选择，以保证菌落的生长和计数准确。
此外，培养条件的控制也非常重要，包括温度、湿度、培养时间等因素，都会对菌落总数的检测结果产生影响。
最后，在进行菌落计数时，需要注意菌落的形态和颜色，避免误判。
除了传统的培养计数方法外，现代生物技术的发展也为菌落总数检测提供了新的手段。
比如，基于PCR技术的快速检测方法可以在较短的时间内对样品中的微生物进行快速检测和鉴定，大大缩短了检测周期。
另外，基于光学原理的生物传感器技术也可以实现对微生物的快速检测，具有灵敏度高、操作简便等优点。
总的来说，菌落总数检测方法是保障产品卫生质量的重要手段，正确的检测方法和操作流程对于获取准确的检测结果至关重要。
随着生物技术的不断发展，菌落总数检测方法也在不断完善和更新，为产品质量安全提供了更多的保障。
希望本文所述内容对您有所帮助，谢谢阅读！。
教学课件第一节食品中菌落总数的测定
一、菌落总数
是指食品检样经过处理，在一定条 件下培养后,所得1mL(g)或1cm2面积检 样中所含菌落的总数。
二、菌落总数测定的意义
1、判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。 2、预测食品存用的期限长短。 3、了解细菌在食品中的繁殖动态。
三、菌落总数测定的方法
※ 平板倾注法＃ 平板表面涂布法 平板表面点滴法
或中心深紫色，圆形，稍凸起，边缘整齐，表面光 滑，常有金属光泽； 在麦康凯琼脂上的典型菌落:呈桃红色或中心桃红、 圆形，扁平，光滑湿润。
EMB平板照片及原理
麦康凯琼脂平板 Age of culture is 24 h
大肠杆菌、大肠菌群选择性显色培养基--COLI ID 用于在37℃下对食品中大肠菌群和大肠杆菌进行检测、计数及大肠杆菌的鉴定
湿润纸片后，立即贴于食具内侧表面，30秒后取 下，置于原塑料袋内。筷子以5只为一份样品，用 吸管吸取生理盐水湿润纸片后，立即将筷子进口 端（约5cm）抹拭两张，放入原塑料袋内。
2.将已采样的纸样置于37°C培养15小时.
纸片在黄色背景上出现红色斑点为阳性，纸片在紫 兰色背景上呈现红色斑点，但周围没有黄晕均为 大肠菌群阴性。同一份样品两张纸片均是阴性为 合格。
MPN 个/100 g/ml
0
0
0
＜30
0
0
1
30
0
0
2
60
0
0
3
90
0
1
0
30
0
1
1
60
0
1
2
90
0
1
3
120
0
2
0
60
0
食品卫生微生物学检验菌落总数测定
本方法规定的培养条件下所得结果，只包括 一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌 落总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标 志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖 的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供 依据。
菌落总数，cfu / g (ml) 大肠菌群 (MPN)个 / 100 ml
稀释液：取储存液 1.25 mL，用蒸馏水稀释至 1000 mL。分装每瓶 100 mL 或每管 10 mL，
121 ℃ 高压灭菌 15 min。 5.3 0.85 %灭菌生理盐水 5.4 75 %乙醇
6 检验程序
检样 做成几个适当倍数的稀释液
选择2个～3个适宜稀释度 各取1mL分别加入灭菌培养皿内
7.1.2 用1 mL 灭菌吸管吸取1∶10 释液1 mL， 注入含有9 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试 管
内，振摇试管混匀，做成 1∶l00 的稀释液。 7.1.3 另取 1 mL 灭菌吸管，按上条操作依次做
10 倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支 1 mL灭菌吸管。 7.1.4 根据食品卫生标准要球或对检样污染情况 的估计，选掸三个稀释度，每个稀释度，接种 三管。
食品卫生微生物学检验 菌落总数测定
中华人民和国国家标准 GB／T 4789.2 — 2003 代替GB／T 4789.2 —1994
2003—08—11发布 2004—01—01实各类食品中菌落总数的测定。
3.1 菌落总数
食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如 培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质 等），所得 1mL(g）检样中所含菌落的总数。
4 设备和材料 4.1 冰箱：0 ℃～4 ℃ 4.2 恒温培养箱： 36 ℃ ± 1 ℃ 4.3 恒温水浴锅： 16 ℃ ± 1 ℃ 4.4 均质器或灭菌乳钵 4.5 架盘药物天平： 0 ～500 g，精确至 0.5 g 4.6 菌落计数器 4.7 放大镜 4 × 4.8 灭菌吸管：1 mL（具0.01 mL刻度）、
实验二市售豆浆中大肠菌群数量的测定
市售豆浆中大肠菌群的测定（一）大肠菌群MPN计数法测定市售豆浆中的大肠菌群一实验目的1.掌握大肠菌群的MPN测定法2.了解MPN计数原理二实验原理大肠菌群是指一群来自于温血动物肠道，36℃48h能发酵乳糖产酸产气的需氧或兼性厌氧菌革兰氏阴性菌无芽孢杆菌。
大肠菌群MPN计数法的原理就是根据大肠菌群的定义，利用它们能发酵乳糖产酸产气的特性，通过二次验证确为大肠菌群阳性的培养管数，对照MPN检索表，可以报告大肠菌群数。
三实验材料月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）、0.85%生理盐水、带小倒管的试管四方法步骤该实验四个同学一组，按学号排。
选择原液、10-1、10-2稀释液进行培养。
每个稀释度接种1mL，每个稀释度接种3管。
五实验记录六结果与分析查MPN表，报告：该样品的大肠菌群MPN数为：____________/mL七思考题1.初发酵的阳性管为什么需要做复发酵实验？2.你认为MPN计数可信度如何？为什么？（二） PetrifilmTM测试片法测定大肠菌群数量一实验目的：1.通过接触PetrifilmTM测试片，了解微生物测试片的使用方法。
2.了解Petrifilm™测试片计数原则。
二实验原理Petrifilm™测试片的计数原则：①计数范围：15~150cfu②都＜15，以最低稀释度计算③都＞150，以最高稀释度计算④都不长菌，报告“＜1×最低稀释倍数”计算方法：同菌落总数报告单位：cfu/g或cuf/mL四实验步骤：每组同学做一张片，选择原液。
方法同菌落总数测定。
放入37℃培养24h计数。
五结果记录报告：24h后计数菌落总数为_____个，据此计算得出该样品的菌落总数为________。
六思考题根据你的测定结果，该样品是否符合卫生国家标准，为什么？。
食品中菌落总数的测定方法
食品微生物学检验菌落总数测定1范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。
本标准适于食品中菌落总数的测定方法。
2术语和定义菌落总数：指食品检样经过处理，在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等),所得1mL(g)检样中所含菌落的总数3设备和材料恒温培养箱：36±1℃30±1℃；冰箱：2～5℃；恒温水浴：46±1℃；天平：感量为0.1g；均质器；震荡器；无菌吸管1mL、10mL或微量移液器及吸头；无菌锥形瓶：250 mL；500 mL；无菌培养皿：直径90mm；pH计或pH比色管或精密pH试纸；放大镜、菌落计数器4培养基和试剂4.1平板计数琼脂培养基4.1.1成分4.1.2制法将上述成分加入到蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。
分装试管和锥形瓶，121℃高压灭菌15min。
4.2磷酸盐缓冲液4.2.1成分4.2.2制法贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L 的氢氧化钠溶液调节pH，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。
稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15min。
4.3无菌生理盐水4.3.1成分4.3.2称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，，121℃高压灭菌15min。
5检验程序菌落总数的检验程序如下：检样25g（或25mL）样品+225mL稀释液，均质↓10倍系列稀释↓选择2～3个适宜样品匀液，各取1mL分别加入无菌培养皿内↓每皿中加入15 ～20mL平板计数琼脂培养基，混匀↓培养36℃±1℃↓48 h±2 h计算各平板菌落数↓计算菌落总数↓报告6操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8 000r/min～10 000r/min 均质1 min～2 min ，或放人盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min ，制成1：10 的样品匀液。
菌落总数的检测方法
菌落总数的检测方法一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。
检验方法参见：GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品菌落计数》三、说明（一）样品的处理和稀释：1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。
菌落总数的检测方法[教育]
![菌落总数的检测方法[教育]](https://img.taocdn.com/s3/m/fe3bcf3c59fb770bf78a6529647d27284b7337dc.png)
菌落总数的检测方法一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
按国家标准方法规定，即在需氧情况下，37℃培养48h，能在普通营养琼脂平板上生长的细菌菌落总数，所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。
菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
二、检验方法菌落总数的测定，一般将被检样品制成几个不同的10倍递增稀释液，然后从每个稀释液中分别取出1mL置于灭菌平皿中与营养琼脂培养基混合，在一定温度下，培养一定时间后（一般为48小时），记录每个平皿中形成的菌落数量，依据稀释倍数，计算出每克（或每ml）原始样品中所含细菌菌落总数。
基本操作一般包括：样品的稀释－－倾注平皿－－培养48小时－－计数报告。
国内外菌落总数测定方法基本一致，从检样处理、稀释、倾注平皿到计数报告无何明显不同，只是在某些具体要求方面稍有差别，如有的国家在样品稀释和倾注培养进，对吸管内液体的流速，稀释液的振荡幅度、时间和次数以及放置时间等均作了比较具体的规定。
检验方法参见：GB4789.2-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定》SN0168-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品菌落计数》三、说明（一）样品的处理和稀释：1．操作方法：以无菌操作取检样25g（或25ml)，放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振要或研磨制成1：10的均匀稀释液。
实验一市售豆浆中细菌总数的测定
实验一 市售豆浆中细菌总数的测定（一）平板菌落计数法测定市售豆浆中细菌总数一 实验目的：1.掌握平板菌落计数法测定细菌总数的基本方法和原理；2.体验菌落总数测定对被检样品的卫生学评价意义。
3.掌握菌落计数的方法。
4.了解菌落总数的计算方法二 实验原理：1.细菌总数（bacteria count ）是指在普通营养琼脂培养基上，在一定的条件下（需氧，36±1℃，48h ±2h ）培养长出的菌落总数，以菌落形成的单位cfu 表示，一般以1g 、1mL 或1cm 2食品表面积上所含的细菌数来报告结果。
2.菌落总数测定对被检样品的卫生学评价意义至少有以下两点：①判断食品被污染的程度。
②预测食品耐存放的程度和期限。
3.菌落计数可采用肉眼（或放大镜下）观察，也可借助菌落计数器计数。
计数原则：①选取菌落数在30~300cfu 之间、无蔓延菌落生长的平板进行计数。
低于30cfu 的平板记录具体菌落数，大于300cfu 的可记做“多不可计”。
②当平板上有较大片状菌落生长时，不宜用于计数；当片状菌落生长不到平板一半时，可计数有散生菌落的半个平板，然后乘以2，即代表一个平板的菌落数。
③当平板上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链记为1cfu 。
4.结果与计算①当只有一个稀释度的菌落数在适宜计数范围内，则以该稀释度的平均菌落数来计算总菌落数（cfu/g 或/mL ）；②当两个连续稀释度的菌落数在适宜计数范围内，则以下式计算：式中 ： N ——菌落总数∑C ——平板（适宜计数范围内）菌落总数之和n 1——第一个适宜稀释度用以计数的平板个数n ２——第二个适宜稀释度用以计数的平板个数d ——稀释因子（第一稀释度）N ＝ ∑C (n 1 + 0.1n ２) d③若所有稀释度的菌落数均大于300cfu ，则对稀释度最高的平板进行计数并以此计算菌落总数； ④若所有稀释度的菌落数均小于30cfu ，则对稀释度最低的平板进行计数并以此计算菌落总数； ⑤若所有稀释度（包括样品原液）均无菌落生长，则以小于1cfu 乘以最低稀释倍数记录菌落总数； ⑥若所有稀释度的菌落数均不在30~300cfu 之间，而是＜30cfu 或＞300cfu ，则以最接近30或300cfu 的平均菌落数乘以稀释倍数计数。
食品微生物菌落总数测定方法
食品微生物菌落总数测定方法1 主题内容与适用范围本标准规定了食品中菌落总数的测定方法。
本标准适用于食品中菌落总数的测定。
2 术语菌落总数是指食品检样经过处理,在一定条件下培养后(如培基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等),所得1mL(g)检样中所含菌落的总数。
本方法规定的培养条件下所得结果,只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温性需氧的菌落总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志,也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
3 引用标准GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂4 设备和材料4.1 温箱：36±1℃。
4.2 冰箱：0～4℃。
4.3 恒温水浴：46±1℃。
4.4 天平。
4.5 电炉。
4.6 吸管。
4.7 广口瓶或三角瓶：容量为500mL。
4.8 玻璃珠：直径约5mm。
4.9 平皿：直径为90mm。
4.10 试管。
4.11 放大镜。
4.12 菌落计数器。
4.13 酒精灯。
4.14 均质器或乳钵。
4.15 试管架。
4.16 灭菌刀或剪子。
4.17 灭菌镊子。
5 培养基和试剂5.1 营养琼脂培养基：按GB 4789.28中4.7规定。
5.2 磷酸盐缓冲稀释液：按GB 4789.28中3.22规定。
5.3 生理盐水。
5.4 75％乙醇。
6 检验程序菌落总数的检验程序如下。
┌─────┐│ 检 样 │└─────┘↓┌─────────────┐│ 做成几个适当倍数的稀释液 │└─────────────┘↓┌──────────────┐│ 选择2～3个适宜稀释度 ││ 各以1mL分别加入灭菌平皿内 │└──────────────┘↓┌─────────────┐│ 每皿内加入适量营养琼脂 │└─────────────┘36±1℃ ↓ 48±2h┌─────┐│ 菌落计数 │└─────┘↓┌──────┐│ 报告 │└──────┘7 操作步骤7.1 检样稀释及培养7.1.1 以无菌操作,将检样25g(或mL)剪碎放于含有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1∶10的均匀稀释液。
检测食品化验菌落总数的实验步骤
检测食品化验菌落总数的实验步骤1、样品的稀释固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min,或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打 1 min～2 min,制成 1:10 的样品匀液.液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中,充分混匀,制成1:10 的样品匀液.2、用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液 1 mL,沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面）,振摇试管或换用 1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100 的样品匀液.3、制备10 倍系列稀释样品匀液.每递增稀释一次,换用 1 次1 mL 无菌吸管或吸头.4、根据对样品污染状况的估计,选择2 3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液）,在进行10 倍递增稀释时,吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿.同时,分别吸取 1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照.5、及时将 15 mL～20 mL 冷却至 46 ℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46 ±1 ℃℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀.6、培养:待琼脂凝固后,将平板翻转,36 ±1 ℃℃培养48 h±2 h.水产品30 ±1 ℃℃培养72 h±3 h.如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约 4 mL）,凝固后翻转平板,条件进行培养.7、菌落计数可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量.菌落计数以落形成单位（colony-forming units,CFU）表示.8、选取菌落数在 30 CFU～300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数.低于30 CFU的平板记录具体菌落数,大于300 CFU的可记录为多不可计.每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数.9、其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以代表一个平板菌落数.10、当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数.。
第六组豆浆中菌落总数的测定2
豆浆中菌落总数的测定
小组成员：刘涛 刘新兴 马姣
• 在操作过程中未注重每一个操作细节， 导致了第二次污染
菌落总数的测定
－－平板菌落计数法 菌落总数记录报告
产品名称
食堂豆浆
生产车间
班次
生产日期
2013年4月 抽样日期
检验日期
检验依据
培养 基
接种
10-1
10-2 10-3 空白
备注
细菌总数
GB/T4789.2-2010
营养琼脂培养基
结果报告数（个/g或ml）
A
B
平均数
13
15
14
10Biblioteka 12111
3
2
5
7
6
检验员：
日期：
复核：
日期：
数据分析
• 在空白对照上有菌落生长； • 在10-1和10-2这两个稀释度上的
菌落数没有形成梯度；
• 因此，无法进行结果报告数的 计算
• 加样时，可能未充分混匀；
• 培养皿未充分洗涤，可能含有抑菌物 质；
• 平板、移液管和试管包扎时不严密， 导致灭菌不彻底；
• 移液管在第二次注样前可能受到污染；
鲜豆浆中菌落总数的测定
鲜豆浆中菌落总数的测定韩磊;史艳东;秦盼盼;张峰;孙华华【摘要】通过稀释平板计数法对鲜豆浆进行菌落总数的测定,在牛肉膏蛋白胨培养基平板上有3种菌落产生,菌落总数为8.3×108CFu/mL.取刚煮沸的鲜豆浆进行测定,菌落总数达610 CFU/mL;保持沸腾至少2 min,然后再进行测定,发现菌落总数为0 CFU/mL.【期刊名称】《乳业科学与技术》【年(卷),期】2010(033)005【总页数】3页(P228-230)【关键词】鲜豆浆;菌落总数的测定;煮沸【作者】韩磊;史艳东;秦盼盼;张峰;孙华华【作者单位】潍坊职业学院微生物研究所,山东,潍坊,261041;潍坊职业学院微生物研究所,山东,潍坊,261041;潍坊职业学院微生物研究所,山东,潍坊,261041;潍坊职业学院微生物研究所,山东,潍坊,261041;潍坊职业学院微生物研究所,山东,潍坊,261041【正文语种】中文【中图分类】TS252.7豆浆被誉为“植物性牛奶”，其蛋白质氨基酸成分比较接近完全蛋白质。
与牛奶相比，虽然豆浆的蛋白质和钙含量低于牛奶，但铁、磷等微量元素和B类维生素的含量却远高于牛奶。
牛奶含有胆固醇，而豆浆不含胆固醇，且饱和脂肪酸含量低。
另外，豆浆含有丰富的不饱和脂肪酸、大豆异黄酮、卵磷脂等几十种对人体有益的物质，具有降低人体胆固醇、防止高血压、冠心病、糖尿病等多种疾病的效果，还具有增强免疫力、延缓肌体衰老的作用[1]。
豆浆保留了大豆中绝大部分营养成分和生理活性物质。
但是由于豆浆营养丰富，腐败微生物极易在其中生长繁殖，致使豆浆保质期较短，成为制约豆浆大规模产业化的瓶颈之一[2]。
汪立平等从5种变质豆浆中分离得到3株腐败菌株，均为革兰氏阳性细菌，分别为地衣芽孢杆菌、短小芽孢杆菌和短芽孢杆菌[3]。
龙霞等从2001～2002年对豆浆的微生物进行检测，合格率仅为37 %。
他们为查清豆浆微生物污染来源，于2002年10～12月选择一处学校豆浆加工厂对其生产过程进行了跟踪调查。
实验四 食品中细菌菌落总数的测定
精选版课件ppt
19
1、 平皿菌落数的选择 选取菌落数在30～300之间的平板作
为菌落总数测定标准。每一个稀释度应 采用两个平皿，大于300的可记为多不 可计。
精选版课件ppt
20
2、其中一个平板有较大片状菌落生 长时，则不宜采用，而应以无片状菌落 生长的平板作为该稀释度的菌落数；若 片状菌落不到平板的一半，而其余一半 中菌落分布又很均匀，则可以计算半个 平板后乘以2，以代表一个平板的菌落数。
细菌菌落总数： ≤30000 CFU/mL 大肠菌群： ≤90 MPN/100mL 肠道致病菌： 不得检出
精选版课件ppt
48
生活饮用水卫生标准（GB5749-2006）
菌落总数cfu/ml： ≤100 总大肠菌群cfu/100ml或MPN/100ml ：不得检出 耐热大肠菌群cfu/100ml或MPN/100ml ：不得检出 大肠埃希氏菌cfu/100ml或MPN/100ml ：不得检出
精选版课件ppt
5
菌落总数并不表示实际中的所有细菌总 数，也不能区分其中细菌的种类，只包括 一群在计数平板琼脂中生长发育、嗜中温 的需氧和兼性厌氧的细菌菌落总数，所以 有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
精选版课件ppt
6
菌落总数主要作为判别食品被污染 程度的标志，也可以应用这一方法观察 细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检 样品进行卫生学评价时提供依据。
精选版课件ppt
3
1、菌落总数
是指食品检样经过处理，在一定条 件下培养后，所得1g或1mL检样中形成 的细菌菌落总数。以 CFU/g（mL）来 表示。
一定条件包括培养基成分、培养温度 和时间、pH、是否需要氧气等。
早餐中的细菌实验报告
早餐中的细菌实验报告天气凉了，早晨喝一杯热乎乎的豆浆，既健康又享受。
但最近，一则“豆浆常温下放置6小时，细菌超36倍”的消息在朋友圈传开，这让爱喝豆浆的市民有些担心，在外买的豆浆卫生吗？自己在家鲜榨的豆浆喝不完是倒掉还是放着？带着这些问题，记者前往温州市疾控中心微生物检验科做了一个实验。
实验结果显示，路边早餐店买的豆浆静置6小时后，细菌竟暴增近80倍。
实验一：鲜榨豆浆静置6小时细菌繁殖情况步骤：1、将早上刚从农贸市场买来的新鲜黄豆放入豆浆机中鲜榨并煮沸；2、待鲜榨豆浆稍稍冷却后放入无菌实验室取样，检测最初细菌数量；3、将鲜榨豆浆分成4份样品：记者将鲜榨的豆浆分为四份。
（1）常温下敞开静置；（2）常温下保鲜膜密封静置；（3）冰箱内敞开静置；（4）冰箱内保鲜膜密封静置；4、4份样品分别静置1、3、6小时后送往无菌实验室取样。
实验二：餐饮店买的豆浆静置6小时细菌繁殖情况步骤：1、在路边早餐店及一家连锁豆浆店各购买一份豆浆；2、在无菌实验室取样，检测最初细菌数量；3、因买来的两份豆浆样品已在餐饮店内放置一段时间，实验组决定直接静置6小时，再送往无菌实验室取样。
实验结果：经工作人员测试，具体数据如下：测试显示，在路边早餐店购买的豆浆样品菌落数最多，且在静置6小时后菌落数从最初的120单位增加至9700个单位，暴增近80倍。
家中鲜榨热豆浆最初的菌落数最少，用保鲜膜密封的样品放入冰箱静置6小时后的菌落数也是最少的。
提醒：无论是家里鲜榨的豆浆还是从市面上买来的豆浆都不宜久置，尽量做到一次性喝完。
如果真的喝不完，可以用保鲜膜密封后放入冰箱内冷藏，放置时间不要超过4个小时。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
关键词 ：鲜豆 浆； 菌落总数 的测定 ；煮沸
中 图分 类 号 ：Ｔ ２ ２７ Ｓ５． 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ： １ ７—１ ７２ １）５０ ２ ．３ ６ １ ８ （０ ００ ．２ ８０ ５
ｂ ｅ ｄｕ ｅｆ ｍｅ ｉ ｍ． ｈ ｏ ｏ ｙ ｃ ｕ ｔ ｓ ８３ １ ＣＦ ｍＬ． ｏ ｏ ｙ ｃ ｕ ｔ ｎ ｆｅ ｈ ｓ ｙ ｅ ｎ ｍｉ ｓｄ ｔ ｒ ｉｅ ｆｅ ｅ ｎ ｅ ｔｄ ｔ Ｔ ｅｃ ｌｎ ｏ ｎ ． ￣ ｗａ ０ Ｕ／ Ｃ ｌ ｎ ｏ ｎ ｓ ｏ ｂ ａ ｌ ｗａ ｅ ｅｍ ｎ ｄ ａ ｒ ｉ ｇ ｈ ａｅ ｉ ｌ ｋ ｔ ｂ ｏ
ｂ ｇｎ ｂ ｉ ｎ ． ｔ ｓ６ ＣＦ ｍＬ． ｄ ｉ ｗａ ｅ ｏｗｈ ｎ ｔ ｅ ｆ ｓ ｏ ｂ ａ ｌ ｓ ｅ ｔｄ ｔ ｏ ｌ ｎ ｅ ｔ ｔ ｅ ｓ ２ ｍｉ ｕ ｅ Ｓ ｅ ｉ ｏｌ ｇ Ｉ ｗａ Ｕ／ ｉ １ ０ Ａｎ ｓｚ ｒ ｅ ｅ ｈｓ ｙ ｅ ｎ ｍｉ ｗａ ａｅ ｏｂ ｉ ａ ｄｋ ｐ ａ ｔ ｎ ｔ． ｏ ｔ ｈ ｒ ｋ ｈ ａｌ ｔ ｅｆｅ ｈ ｓ ｙ ｅ ｎ ｍｉ ｅ ｄ ｏｂ ｅ ｔｄ ｂ ｆ ｒ ｅ ｎ ｒｎ ｅ ｈ ｒ ｓ ｏ ｂ ａ ｌ ｎ ｅ ｓｔ ｅｈ ａ ｅ ｅ ｏ ｅｂ ｉ ｇ ｄ ｉｋ ｄ． ｋ
２８ ２
乳业科 学与技术
２ １ 年 第 ５期 ００
（ 第 １４期 ） 总 ４
鲜豆浆 中菌落总数 的测定
韩 磊 ，史艳 东，秦盼盼，张 峰 ，孙 华华
潍 坊职 业学院微 生物研 究所 ， 山东潍坊 ２ １４ ６０ １
摘 要：通过稀释平板计数法对鲜豆浆进行 菌落总数的测定，在牛肉膏蛋 白胨培养基平板上有 ３ 种菌落 产 生 ，菌落总数 为 ８ ￣ ０Ｃ ＵｍＬ ． １ Ｆ ／ 。取 刚煮沸 的鲜 豆浆进 行 测定 ，菌落总数 达 ６０Ｃ ＵｍＬ ３ １ Ｆ ／ ；保持 沸腾
ｔ ｐ ｓｏ ｌｎ ｅ ， ｎ ｉｄ ｏ ｉ ａ ｔｒａ ｃ ｌ ｎ ， ｎ ｉｄ ｏ ｌｃ ｎ ｎ ｉｄ ｏ ｉ ｃｉ ｏ ｃ ｔ， ｐ ｅ ｒ ｄ ｉ ｅ ｔｎ ｙ ｅ ｆ ｏ ｏ ｉｓ ｏ ｅｋ ｎ ｆ ｃ ｗｈ ｔ ｂ ｃｅ ｉ ｌ ｏ ｏ ｙ ｏ ｅｋ ｎ ｆ ａ ｋ ａ ｄ ｏ ｅｋ ｎ ｆ ｅ ｂ ｗｈ ｔ ａ ｔ ｍｙ ｅｅ ａ ｐ ａ ｅ ｎｐ ｐ ｏ ｅ ｅ ｎ
踪 调查 。豆 浆加 热至 １０℃，１ ｉ，微 生物指标 ０ ５ｒ ｎ ｎ １０％合格 ， 分装后 ， ０ 经 菌落 总数合 格率 为 ６ ． ９ ６％， 冲 洗管道 水菌落 总数 １０％超标 。 ０ 空气 、包装材料 消毒前 后 无影 响 。认 为主要 是 生产 线上 的管道污 染 ，造成 豆浆卫 生质量 下 降【。 ４ Ｊ 目前 有 关豆 浆 的研 究 多在 于工 艺方 法 ，有零 星 的关 于腐 败 豆浆 的研 究 ，新 鲜豆 浆 中菌落 总数 测 定 的报 道 极少 ，因此 我们 尝试 测 定鲜 豆浆 中 的 菌 落总数 ，为倡 导健康 消 费豆 浆提 供理论 依据 。
Ｉｓｉ ｔ ｆ ｉｒｂｏｏ ｙ Ｗｅｆｎ ｏ ａｉｎ ｌ ｌ ｇ ， ｉａ ｇｏ ｈ ｎ ｏ ｇ２ １ ４ ， ｉ ａ ｎｔｕ ｅｏ Ｍ ｃｏ ｉｌｇ ， ｉ ｇＶ ｃｔ ａ ｌ ｅ Ｗｅｆｎ ｆＳ ａ ｄ ｎ ６ ０ １ Ｃｈ ｎ ｔ ａ ｏ Ｃｏ ｅ
Ａｂ ｔ ａ ｔ ：Ｉ ｉ ｅ ｐ ｒｍｅ ｔ ｃ ｌ ｎ ｏ ｎ ｎ ｆｅ ｈ ｓ ｙ ｅ ｎ ｍｉ ｓｄ ｔ ｒ ｉｅ ｙ ｄ ｌｔ ｎ ｍｅｈ ｄ ｏ ｌｔ ｏ ｎ ｉ ｇ Ｔｈ ｅ ｓｒ ｃ ｓ ｎ ｔ ｓ ｘ ｅ ｈ ｉ ｎ ， ｏ ｏ ｙ ｃ ｕ ｔ ｓ ｏ ｂ ａ ｌ ｗａ ｅ ｅｍ ｎ ｄ ｂ ｉ ｉ ｔ ｏ ｆｐ ａｅ ｃ ｕ ｔ ． ｒ ｅ ｉ ｌ ｋ ｕｏ ｎ
成 分 比较接近 完 全 蛋 白质 。与牛 奶相 比，虽然 豆 浆 的蛋 白质 和钙 含量 低 于牛奶 ，但 铁 、磷 等微 量 元 素和 Ｂ 类 维生 素的含 量却远 高于牛 奶 。牛 奶含 有胆 固醇 ，而豆 浆不 含胆 固醇 ，且 饱和 脂肪 酸 含 量低 。另外 ，豆 浆含 有丰 富 的不饱 和 脂肪 酸 、大 豆异 黄 酮 、卵磷 脂等 几十 种对 人 体有 益 的物质 ， 具有 降低 人 体胆 固醇 、 防止 高血压 、冠心病 、糖 尿病 等 多种疾 病 的效 果 ，还具 有增 强 免疫 力 、延 缓肌 体衰老 的作用 【。 Ｉ Ｊ 豆 浆 保 留 了大 豆 中绝 大部 分营 养成 分和 生 理 活性 物质 。但 是 由于豆 浆 营养 丰 富 ，腐 败微 生 物
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
Ｄｅ ｅ ｍ ｉ ａ ｉｎ ｏ ｌ ｎ ｕ ｎＦｒ ｓ ｏ ｂ ａ ｉ ｔｒ ｎ ｔｏ ｆ Ｃｏ ｏ ｙＣｏ ｎｔ ｅ ｈ Ｓ ｙ ｅ ｎ Ｍ ｌ ｉ ｋ
Ｈ ｎＬ ｉＳ ｉ ａ ｄ ｎ ， ｉ ａｐ ｎ Ｚ ａ ｇ ｅ ｇ Ｓ ｎＨ ａｕ ａ ｅ， ｈ ｎ ｏ ｇ Ｑ ｎＰ ｎ ａ ， ｈｎ ｎ ， ｕ ｕ ｈ ａ Ｙ Ｆ
Ｋｅ ｒ ｓ ｆｅ ｈ ｓ ｙ ｅ ｎ ｍｉ ， ｅ ｅ ｍｉ ａｉ ｎ ｏ ｌｎ ｏ ｎ ， ｅ ｔ ｏ ｂ ｉ ｙｗｏ ｄ ： ｓ ｏ ｂ ａ ｌ ｄ ｔｎ ｎ ｔ ｆ ｏ ｏ ｙ ｃ ｕ ｔ ｈ ａ ｏ ｌ ｌ ｋ ｏ ｃ ｔ
豆 浆被 誉为 “ 植物 性牛奶 ” 蛋 白质氨 基酸 ，其