常见同尾酶word精品
基因工程题库版--名词解释
各种题型确定题目重要题目候补题目不确定答案的题目试卷与题库重复题目名词解释同裂酶（同切点酶）：有一些来源不同的限制酶识别的是同样的核苷酸靶序列，这类酶称为同裂酶。
同尾酶：与同裂酶对应的一类限制性内切酶,它们来源各异，识别的靶序列也各不相同,但切割后都能产生相同的黏性末端,特称为同尾酶。
测序酶：是经修饰过的T7噬菌体DNA聚合酶，是采用缺失的方法，从外切核酸酶结构域中除去28个氨基酸，这样使得T7DNA聚合酶完全失去了3~-5~外切酶活性，只有5~-3~聚合酶活性，而且聚合能力很强，测序时常用此酶。
与klenow相比优点是：是双脱氧链终止法对长片段进行测序的理想用酶。
限制性核酸内切酶：是一类能识别和切割双链DNA分子中特定碱基系列的核酸水解酶。
限制-修饰系统中的限制和修饰作用：限制-修饰系统中的限制作用是指一定类型的细菌可以通过限制性酶的作用，破坏入侵的外源DNA(如噬菌体DNA等)，使得外源DNA对生物细胞的入侵受到限制；而生物细胞(如宿主)自身的DNA分子合成后，通过修饰酶的作用，在碱基中特定的位置上发生了甲基化而得到了修饰，可免遭自身限制性酶的破坏，这就是限制-修饰系统中的修饰作用。
5. 限制性片段长度多态性（RFLP）：当DNA序列的差异发生在限制性内切酶的识别位点时，或当DNA片段的插入、缺失或重复导致基因组DNA经限制性内切酶酶解后，其片段长度的改变可以经过凝胶电泳区分，出现的这种DNA多态性称为限制性片段长度多态性。
6. 星号活性：限制性内切核酸酶识别和切割特异性位点是在特定的条件下测定的。
当条件改变时，许多酶的识别位点会改变，导致识别与切割序列的非特异性，这种现象称为星号活性。
（“非最适的”反应条件例如高浓度的核酸内切限制酶、高浓度的甘油、低离子强度、用Mn2+取代Mg2+以及高pH值等。
)克服星号活性的方法：维持反应体系适当的离子强度、较低的温度或酶浓度，尽可能缩短反应时间或DNA 样品的重新处理等。
名词解释
名词解释同裂酶:识别相同序列的限制性内切酶称为～。
它们的切割位点可能不同同尾酶（Isocaudarner）:不同的限制性内切酶切割DNA产生的末端是相同的，切是对称的，即相同的粘性末端星星活性：在极端非标准条件下，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性称为～（star activity)。
klenow片段：大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ，经枯草杆菌蛋白酶处理后，分割成两个片段，其中大片段称为～。
具有5′-3′聚合酶和3′-5′外切酶活性核酸外切酶：核酸外切酶（exonucleases）是一类从多核苷酸链的一头开始按顺序降解核苷酸的酶。
质粒的不亲和性：也称不相容性，是指在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能够在同一个寄主细胞系中稳定共存的现象。
α-互补：LacZ′基因编码的α-肽链是β-半乳糖苷酶的氨基末端的短片段，它同失去了正常氨基末端的β-半乳糖苷酶突变体互补时，便会产生有功能活性的β-半乳糖苷酶分子。
于是便可以应用X-gal和IPTG显色技术检测转化子。
重组子为白斑，非重组子为蓝斑。
穿梭质粒载体（shuttle plasmid vector）:是一类有人工构建的具有两种不同复制起点和选择记号，因而可在两种不同的寄主细胞中存活的质粒载体穿梭质粒载体（shuttle plasmid vector）:是一类有人工构建的具有两种不同复制起点和选择记号，因而可在两种不同的寄主细胞中存活的质粒载体基因文库：来自于某种生物的不同DNA序列的集合基因组文库：用于构建文库的DNA来源于基因组DNAcDNA文库：用于构建文库的DNA是mRNA群体的拷贝（cDNA）基因治疗：A.对有基因缺陷的细胞进行修复，从而使其恢复正常，达到治疗疾病的目的B.把健康的外源基因导入到有基因缺陷的细胞中，达到治疗疾病的目的C.运用人工诱变的方法，使有基因缺陷的细胞发生基因突变恢复正常D.运用基因工程技术，把有缺陷的基因切除，达到治疗疾病的目的低拷贝数的质粒：每个寄主细胞中仅有1-3份拷贝，这类质粒为严谨型复制控制的质粒（stringent plasmid）高拷贝数的质粒：每个寄主细胞中可高达10-60份拷贝，这类质粒为松弛型复制控制的质粒（relaxed plasmid）回文结构：DNA局部双螺旋以某一对称轴旋转180度后，与另一侧的互补片段的顺序完全的DNA结构粘性末端（cohesive end）识别位点为回文对称结构的序列经限制性内切酶切割后，产生的末端为粘性末端，形成的两个末端是相同的，也是互补的同序同切酶: 识别序列和切割位置都相同同序异切酶（Isoschizomer) 识别序列相同，但切割位点不同. 结合型质粒（conjugative plasmid），又叫自我转移质粒，除了具有自主复制所必需的遗传信息之外，还带有一套控制细菌配对和质粒结合转移的基因非结合型质粒（non-conjugative plasmid），又称非自我转移的质粒，具有自主复制的遗传信息，但失去了控制细胞配对和结合转移的基因，因此，不能从一个细胞自我转移到另一个细胞质粒的迁移（mobilization），由共存的结合型质粒引发的非结合型质粒的转移过程，叫做质粒的迁移作用。
普通遗传学第十七章基因组自学自出试题及答案详解第一套
一、名词解释1、蛋白质工程2、基因组文库3. 多克隆位点4. Southern杂交5. 基因治疗6. 转基因动物7. 显微注射技术8. Klenow片段9. 荧光定量PCR10. 基因芯片11、cDNA文库12、基因枪13. 融合蛋白14. 表达载体15. 限制性核酸内切酶16. Northern杂交17. 逆转录PCR18. 转基因植物19. 体细胞核移植20. DNA改组21、多克隆位点：22、穿梭载体：23. DNA连接酶：24. 核酸分子杂交：25. 融合蛋白：26. 基因敲除：27. 反义核酸技术：28. 荧光定量PCR29. 基因治疗30. 显微注射技术31.基因组DNA文库：32.DNA的复性：33.Tm：34.选择标记基因：35.基因和基因组:36.分子杂交：37.生物技术：38.载体：39.cDNA文库：40.转化:41.黏性末端42.重叠基因：43.基因组文库：44.同尾酶：45.酶切位点二、选择题1、构建cDNA文库时，选用下列哪种载体较好？-------------------------（）①质粒②SV40病毒③Ti质粒④YAC（酵母人工染色体）2、在Northern杂交中，探针主要用什么来进行标记？------------------（）①同位素②EB（溴化乙锭）③染料④DNA3、构建GST蛋白表达系统的载体是为了是目标蛋白以哪种方式表达？-----（）①融合表达②分泌表达③独立表达④包含体表达4、PCR反应中Taq酶常常没有错配碱基纠错功能，因为它没有-----------（）①5’－3’聚合酶活性②5’－3’外切酶活性③3’－5’外切酶活性④3’－5’聚合酶活性5、以下哪种酶需要引物？-----------------------------------------（）①限制性核酸内切酶②末端转移酶③逆转录酶④DNA连接酶6、II型限制性核酸内切酶的切割位点是-----------------------------------------（）①识别序列内②识别序列1000bp以外③识别位点下游24－26bp处④DNA分子任一位点7、Ti质粒中能插入到植物基因组中的DNA区段是-----------------（）①复制远点区②毒素蛋白区③T-DNA区④冠婴碱代谢区8、艾滋病病毒HIV是通过下列哪个基因编码的产物识别人体T淋巴细胞的？-----------------------------------------------------（）①env ②pol ③gag ④LTR9、T4DNA连接酶能催化下列哪种分子相邻的5'端磷酸基团与3'端羟基末端之间形成磷酸二酯键？----------------------------------------------（）①双链DNA ②单链DNA③mRNA ④rRNA10、下列基因中，哪个不能作为基因工程载体的报告基因？---------（）①lacZ ②GFP③Ampr ④ori11、基因治疗的载体采用下列哪种载体比较合适？----------------------（）①逆转录病毒②Ti质粒③噬菌体④质粒pBR32212、采用原核细胞表达系统的优点之一是可以与下面什么过程直接相连-----（）①发酵工程②转基因动物③转基因植物④基因治疗13、以mRNA为模板合成cDNA时，所用的工具酶是-----------------------（）①DNA聚合酶I ②DNA连接酶③逆转录酶④核酸酶14、YAC是----------------------------------------------------------（）①酵母人工染色体②人工Y 染色体③细菌人工染色体④粘粒15、用Sanger双脱氧法进行DNA测序时，凝胶上读出的序列是-------------（）①模板链的②模板链的互补链的③mRNA的④cDNA 的16、同位素标记探针是指在探针上连接----------------------------------（）①32P ②生物素③荧光素④酶17、Southern杂交时，探针与膜上的什么成分杂交？---------------------（）①DNA ②RNA③蛋白质④染色体18、同一种限制性核酸内切酶分别切割目的基因DNA 与载体DNA 时，酶切片段不能互相连接的是------------------------------------------------------（）①目的基因与目的基因之间②载体DNA与载体DNA之间③目的基因与载体DNA之间④目的基因与mRNA之间19、pBR322是一种什么样的载体？---------------------------------（）①粘粒②质粒③噬菌体④人工微小染色体20、PCR引物成对存在，位于目的基因的---------------------------（）①5'端②3'端③C端④N端21、构建CDNA文库时，选用下列哪种载体较好？------------------------------------（）①质粒②SV40病毒③Ti质粒④YAC（酵母人工染色体）22、Northern杂交时，探针与膜上的什么成分杂交？-----------------------------------（）①DNA ②RNA③蛋白质④染色体23、以mRNA为模板合成CDNA时，所用的工具酶是--------------------------------------（）①DNA聚合酶I ②DNA连接酶③逆转录酶④核酸酶24、BAC是-------------------------------------------------------------------------------------（）①酵母人工染色体②人工Y 染色体③细菌人工染色体④粘粒25、用酶促合成法进行DNA测序时，凝胶上读出的序列是-------------------------（）①模板链的②模板链的互补链的③mRNA的④cDNA的26、同位素标记探针是指在探针上连接----------------------------------------（）①32P ②生物素③荧光素④酶27、同一种限制性核酸内切酶分别切割目的基因DNA与载体DNA时，酶切片段不能互相连接的是--------------------------------------------------------------------------------（）①目的基因与目的基因之间②载体DNA与载体DNA之间③目的基因与载体DNA之间④目的基因与mRNA之间28、下列基因中，哪个不能作为基因工程载体的报告基因？----------------（）①lacZ ②GFP③Ampr ④ori29、M13噬菌体是---------------------------------------------------------------------（）①双链噬菌体②单链噬菌体③质粒④粘粒30、常规PCR反应所用到的酶是-------------------------------------------------（）①核酸酶②逆转录酶③DNA连接酶④Taq酶三、填空题1. 世界上成功构建的第一个体外重组DNA分子是在（）年完成的。
常用工具酶
1962年，W．Arber提出一个假设来解释上述现象，就是细菌的 限制（限制酶）-修饰（甲基化酶）系统。
当λ(k)噬菌体侵染E.coliB时，由于其DNA中有EcoB核酸酶特异 识别的碱基序列，被降解掉。而E.coliB的DNA中虽然也存在 这种特异序列，但可在EcoB甲基化酶的作用下，催化S-腺苷 甲硫氨酸（SAM）将甲基转移给限制酶识别序列的特定碱基 ，使之甲基化。 EcoB核酸酶不能识别已甲基化的序列。
CCG GGCTATCGGA Pol I + Mg2+ CCG AT AGCCT GGCTATCGGA CCGATAGCCT GGCTATCGGA Pol I + Mg2+ CCGATAGCCT GGCTATCGGA CCGATAGCCT GGCTA Pol I + Mg2+ CCGATAGCCT T GGCTA
4.识别位点在DNA分子上出现的频率
推测酶切割位点出现的频率对于推断DNA酶切片段大小很有 用。假定4种核苷酸在DNA分子上出现的频率相同，那么靶 序列为6个核苷酸的内切酶在每46（=4096）个核苷酸中酶 切位点就有一次出现机会。据此推算，一条49000bp长的 DNA中有12个6核苷酸识别序列的酶切位点（49000/4096） 。但事实上并非真正如此，因为DNA分子中4种碱基的出现 频率并不均等。
二、连接酶的类型
大肠杆菌DNA连接酶：由大肠杆菌基因组DNA编码Байду номын сангаас，以NAD+作为能源辅助因子； T4 DNA连接酶：由大肠杆菌T4噬菌体DNA编码，以 ATP作为能源辅助因子，是基因工程中常用的连 接酶。
三、DNA连接反应的条件
连接反应最佳温度为37℃，但是此时粘性末端间氢键结合 不够稳定，而且酶活性也会迅速降低。比如，EcoRI 粘性 末端连接部位只有4个碱基对，很容易断开，所以通常在 4-15℃连接。
常用限制性内切酶的识别序列和同裂酶
常用限制性内切酶的识别序列和同裂酶酶同裂酶识别序列酶同裂酶识别序列酶ACC I-GT (A/C)(G/T)AC BsuR I Hae III GG CC Msp I4 ACC III BspE II T CCGGA Cfo I Hha I GCG CBspm II HinP1 I G CGC Mst IIMro I Cfr9 I Xma I C CCGGG Nar I Aha II Acy I G(A/G) CG(T/C)C Sma I CCC GGGHsp92 I Cfr13 I Asu I G GNCCAha III Dra I TTT AAA Sau96 IAlu I-AG CT Cfr42 I Sac II CCGC GG Nco I Alw26 I2BsmA I GTCTC(1/5)Cla I Ban III AT CGAT Nde I Alw44 I ApaL I G TGCAC Bsp106 I Nde II SnoI BspD IApa I-GGGCC C Bsu15 I Nhe I Asp I Tth111 I GACN NNGTC Csp I Rsr II CG G(A/T)CCGAsp718 I Acc65 I G GTACC Cvn I Bsu36 I CC TNAGG Not I Kpn I GGTAC C Dde I- C TNAG Nst I Asn I Vsp I AT TAAT Dpn I3-GmeA TCAsu I Sau96 I G GNCC Dra I Aha III TTT AAACfr13 I Ecl136 II EcolCR I GAG CTC Nsp III Asu II Csp45 I TT CGAA Sal I GAGCT C PaeR7 I Ava I Eco88 I C(T/C)CG(A/G)G Eco24 I Ban II G(AG)GC(TC) C Pal I Nsp III Eco32 I EcoR V GAT ATC Pst I Ava II Sin I G G(A/T)CC Eco64 I Ban I G G(TC)(AG)CC Pvu I Eco47 I Eco88 I Ava I C (TC)CG(AG)G Pvu II Axy I Bsu36 I CC TNAGG Eco91 I BstE II G GTNACC Rsa I Bal I Msc I TGG CCA Eco147 I Stu I AGG CCT Rsr II MluN I Eco255 I Sca I AGT ACT Sac I BamH I-G GATCC EcolCR I Ecl136 II GAG CTCBan I BshN I G G(T/C)(A/G)CC Sac IEco64 I Sst I GAGCT C Sac IIHgaC I EcoR I-G AATTCBan III Cla I AT CGAT EcoR II BstO I CC (A/T)GGBbe I-GGCGC C EcoR V Eco32 I GAT ATC Sal I Nar I GG CGCC EcoT14 I Sty I C C(A/T)(A/T)GG Sau I Bbu I Pae I GCATA C EcoT22 I Nsi I ATGCA T Sau3A I Sph I Eco47 I Ava II G G(A/T)CCBcl I-T GATCA Sin I Sau96 I Bcn I Nci I CC (C/G)GG Eco81 I Bsu36 I CC TNAGGBst98 I C TTAAGG Fok I-GGATG(9/13)Sca I Bgl I-GCCNNNN NGGC Hae II Bsp143 II(A/G)GCGC (T/C)Sfi I BseN I BsrS I ACTGGN Hae III BsuR I GG CC Sin I Bsr I Pal IBgl II- A GATCT Hap II Hpa II C CGG Sma I BshN I Ban I G G(T/C)(A/G)CC Msp IBsp19 I Nco I C CATGG HgaC I Ban I G G(T/C)(A/G)CCBsp68 I Nru I TCG CGA Hha I Cfo I GCG C Spe I Bsp106 I Cla I AT CGAT HinP1 I G CGC Sph IBsp143 I Mbo I GATC Hinc II Hind II GT(T/C) (A/G)ACBsp143 II Hae II(A/G)GCGC (T/C)Hind III- A AGCTT Ssp I BspD I Cla I AT CGAT Hinf I-G ANTC Sst I BspE I Acc III T CGGA HinP1 I-G CGCBspM II Acc III T CCGGA Hha I Cfo I GCG C Sst II Bst71 I2Bbv I GCAGC(8/12)Hpa I-GTT AAC Sty I Bst98 I Afl II C TTAAG Hpa II Msp I C CGG Taq I Bfr I Hap II Tru9 I BstB I Csp45 I TT CGAA Kpn I-G GTACC Tru II BstE II BstP I G GTNACC Asp718 I GGTAC C Tth111 I Eco91 I Acc65 IBstN I BstO I CC (A/T)GG Ksp I Sac II CCGC GG TtHB8 I Bst0 I Apy I CC (A/T)GG Xba I BstN I Mbo I Sau3A I GATC Xho I EcoR II Nde II Xho IIMva I Bsp143 IBstX I-CCANNNNN NTGG Mbo II-GAAGA(8/7)Xma I BstY I Xho II(A/G) GATC(T/C)Mfl I Xho II(A/G) GATC(T/C)Bsu15 I Cla I AT GAT Mlu I- A CGCGT Xma III Bsu36 I Axy I CCTNAGG MluN I Bal I TGG CCASau I Mro I Acc III T CCGGAMstII Msc I Bal I TGG CCACvn IAoc IEco81 I同裂酶识别序列Hpa II C CGGHap IIBsu36 I CC TNAGG-GG CGCC Ehe I GGC GCCKas I G GCGCCBbe I GGCGC CBsp19 I C CATGG-CA TATG Mbo I GATCSau3A I-G CTAGC Sph I-GC GGCCGC Ava III ATGCA T EcoT22 IMph1103 IAva I C (T/C)CG(A/G)G Xba I T CTAGA Hae III GG CC -CTGCA GXor II CGAT CG-CAG CTG-GT AC Csp I CG G(A/T)CCGSst I GAGCT CEcl136 II GAG CTC EcolCR I GAG CTCSst II CCGC GGKsp ICfr42 I-G TCGACBsu36 I C CTNAGGMbo I GATCNde IIAsu I G GNCCCfr13 IEco255 I AGT ACT-GGCCNNNNN NGGCC Ava II G G(A/T)CC Eco47 I-CCC GGG Xma I C CCGGGCfr9 I- A CTAGT Bbu I GCATG CPae I-AAT ATTSac I GAGCT C EcolCR I GAG CTCSca II CCGC GG EcoT14 I C C(A/T)(A/T)GG TthHB8 I T CGA Mse I T TAATth111 I GACN NNGTC Asp I GACN NNNGTC Tru IITaq I T CGA-T CTAGA PaeR7 I C TCGAG BstY I(A/G) GATC(T/C) Mfl I Cfr I C CCGGG Sma I CCC GGGEco52 I C GGCCG BstZ IEag IEclX I。
3.1重组DNA技术的基本工具——高二生物学人教版(2019)选择性必修三同步课时训练
3.1重组DNA技术的基本工具——2023-2024学年高二生物学人教版（2019）选择性必修三同步课时训练一、单选题1．同尾酶是指一组识别序列不同，但切出的黏性末端相同的限制酶。
下图为EcoRI、Bam-HI、BglI和MboI四种限制酶的识别序列及酶切位点。
下列说法正确的是( )A.BamHI、BgⅡ、MboI属于同族酶，他们的识别序列相同B.使用同尾酶构建基因表达载体时，切割位点的选择范围扩大C.选用两种不同的限制酶切割目的基因，都可以防止目的基因自身环化D.用DNA连接酶将BamHI和MboI形成的黏性末端连接后，可被二者重新切开2．红细胞生成素（EPO）是体内促进红细胞生成的一种激素物质，是当今最成功的基因工程药物，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。
由于天然EPO来源极为有限，目前临床使用的红细胞生成素主要来自基因工程技术生产的重组人红细胞生成素（rhEPO）。
其简要生产流程如图，下列相关叙述正确的是( )A.过程①用到的工具酶有DNA聚合酶、限制酶和DNA连接酶B.构建的重组表达载体中终止子的作用是终止翻译过程C.检测重组细胞是否表达出rhEPO常用抗原—抗体杂交技术D.用乳腺生物反应器生产EPO可将人EPO基因导入哺乳动物体细胞获得3．甲、乙、丙三种限制酶均识别6个核苷酸序列，下列有关如图所示的黏性末端的说法，正确的是( )A.甲、乙、丙三种限制酶识别的核苷酸序列由核糖核苷酸组成B.限制酶切割DNA分子一次可断开2个磷酸二酯键，产生2个游离的磷酸基团C.甲、乙、丙是由不同的限制酶切割产生的相同黏性末端D.甲、乙黏性末端形成的重组DNA分子片段能被甲、乙限制酶切割4．甲型流感病毒的抗原性与感染性与其表面的R蛋白（血凝素蛋白）密切相关，现利用基因工程的方法生产相关疫苗。
图甲为构建R蛋白基因表达载体的过程，图乙为重组质粒被相关酶切后的电泳结果。
下列相关叙述错误的是( )A.电泳技术可以用于人类亲子鉴定、生物间亲缘关系的鉴定B.图甲过程中至少需要用到逆转录酶、DNA聚合酶、限制酶、DNA连接酶C.通过PCR技术从1个cDNA分子中特异性扩增出R蛋白基因时，在第四轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的R蛋白基因D.据图乙可推测重组质粒长度最短为200bp,Bam HⅠ在重组质粒上最少有3个酶切位点5．基因编辑是一种基因工程技术，CRISPR/Cas9基因编辑技术，可以实现对DNA的定点切割。
基因工程作业1
基因工程作业1.同尾酶和同裂酶有何区别？同尾酶是指许多不同的限制性内切酶切割DNA长生的末端是相同，且是对称的，即它们可以产生相同的粘性末端，这些酶统称为同尾酶。
同裂酶是识别相同序列的限制酶称同裂酶，但它们的切割位点可能不同，他切割的位点有以下几种①：同序同切酶，这些酶识别位点和切割位点都相同②：同序异切酶，识别的序列是相同的但它们的切割位点不同。
③：同功多位许多识别简并序列的限制酶包含了另一种限制酶的功能。
④：其他，识别的序列有交叉。
2.简述书上各种酶的催化活性与用途，上网查查是否还有其他工具酶，请在作业上用红色标明。
①：限制性内切酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某一种特定的核苷酸序列，并在此处切割DNA双链的核酶作用：自我保护作用（细菌的修饰和保护系统）、在制备重组载体时经常用到限制性内切酶长生相同的粘性末端。
②：甲基化酶原核生物和真核生物中存在大量的甲基化酶，原核生物中的甲基化酶作为限制与修饰系统中的一员，用于保护宿主DNA不被相应的限制酶切割，甲基化酶可以在腺嘌呤或者嘧啶上引入甲基。
在转录修复系统中有依赖甲基化的错配修复。
③：DNA聚合酶主要活性是催化DNA的合成（在具备模板、引物、dNTP的情况下）及其向辅的活性。
用途：合成大量的DNA、进行末端标记、补平末端。
④：连接酶就是将两段核酸连接起来的酶，主要作用是连接双链DNA中的缺口，及切口。
⑤：核酸酶有核酸内切酶和核酸外切酶核酸外切酶是一类从多核苷酸链的一头开始按序催化降解核苷酸的酶。
分为单链核酸外切酶和双链核酸外切酶主要用途是催化单链DNA/RNA的降解，切掉双链中的单链区。
⑥反转录酶即依赖于RNA的DNA聚合酶，有5'-3'聚合酶活性,但没有有3'-5'的外切酶活性，主要作用：cDNA克隆中第一条链的合成、合成cDNA探针。
⑦琼脂糖酶：琼脂糖酶英文名称：agarase定义：催化琼脂糖的1，3-β-D-半乳糖糖苷键水解的酶。
解密-选择题.pdf
【选择题】1.以黏粒为载体转染受体菌后，平板上生长的菌落会出现大小不一、生长速度不一的现象，其原因是（）A.营养成分不足 B.重组后的质粒复制不稳定 C.重组后的黏粒整合到宿主染色体上 D.重组体中插入片段的大小不同2.有关 DNA 序列自动化测定的不正确叙述是（）A.用荧光代替了同位素标记 B.激光扫描分析代替人工读序 C.基本原理与手工测序相同 D. 不再需要引物3.以下为同尾酶的是（）A.Eco RⅠ,MfeⅠ,ClaⅠB.Bam HⅠ,Sau3AⅠ,StyⅠC.SpeⅠ,NheⅠ,AccⅠD.Hin d Ⅲ,Not Ⅰ,Eco RⅡ4.用碱法分离质粒 DNA 时，染色体 DNA 之所以可以被除去，是因为（）A.染色体 DNA 断成了碎片 B.染色体变性后来不及复性 C.染色体 DNA 分子量大，难以释放D.染色体未同蛋白质分开而沉淀5.构建 cDNA 文库时，首先需分离细胞的（）A.染色体 DNAB.线粒体 DNAC.总 mRNAD. tRNA6.pBluescript M13 载体在多克隆位点的两侧引入了 T7 和 T3 两个噬菌体的启动子，这样增加了该载体的功能，以下4种功能哪一种是不正确的（）A.可以对插入到多克隆位点的外源片段进行转录分析 B.利用这两个启动子的通用引物进行 PCR 扩增 C.利用通用引物进行序列分析 D.利用这两个启动子进行定点突变7.在长模板链的指导下引物延伸合成长的 DNA 互补链时应选用（）A.T4 DNA 聚合酶B.T7 DNA 聚合酶C.Klenow DNA 聚合酶D.大肠杆菌 DNA 聚合酶Ⅰ8.用于鉴定转化子细胞是否含重组 DNA 的最常用方法是（） A.抗性标记选择 B.分于杂交选择 C.RNA 反转录 D.免疫学方法9.以下保存 DNA 的温度中，哪一种是最好的（）A.室温B.4－5℃C.－20℃D.－70℃10.催化聚合酶链反应的酶是（）A.DNA 连接酶B.反转录酶C.末端转移酶D.Taq DNA 聚合酶11.以下各项中不是 PCR 反应所必须的是（）A.模板和引物B.dNTPC.Taq酶和 bufferD.甘油12.用免疫化学法筛选重组体的原理是（）A.根据外源基因的表达 B.根据载体基因的表达C.根据 mRNA 同 DNA 的杂交D.根据DNA 同 DNA 的杂交13.以下不属于 PCR 介导的诱变的为（）A.DpnⅠ法B.SOE 重叠延伸剪接法C.Kunkel 法D.DNA shuffling14.SDS 是分离 DNA 时常用的一种阴离子去污剂，下列对其作用描述不正确的是（）A.溶解膜蛋白及脂肪，从而使细胞膜破裂，亦可以溶解核膜和核小体，使其解聚，将核酸释放出来 B.对Rnase、Dnase有一定的抑制作用 C.与蛋白质形成复合物，使蛋白质变性沉淀D.消除反应中的泡沫15.下列关于细菌人工染色体（BAC）的特点描述，除（）以外都是正确的A. BAC 载体在细菌中以环状超螺旋状态存在，使分离操作比 YAC 容易B. BAC 载体在大肠杆菌中为高拷贝C. 用电击法将大质粒转化大肠杆菌比酵母的转化率提高了 10～100 倍D. 克隆在载体上的外源片段可以直接进行末端测序16.下列哪一种酶作用时需要引物（）A. 末端转移酶B.反转录酶C.DNA 连接酶D.限制酶17.关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确（）A. 在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点B. 在不同的宿主中具有不同的复制机制C.在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶D.在不同的宿主细胞中具有不同的复制速率18.下列哪种克隆载体对外源 DNA 的装载量最大（）A. 黏粒B.酵母人工染色体 YACC.质粒D.λ噬菌体19.SSC 是由 NaCl 和柠檬酸钠组成的试剂，其作用分别是（）A.前者是使 DNA 溶解，后者作为螯合剂，抑制核酸酶的活性B.前者增加渗透压，后者使DNA溶解C. 前者使 DNA 溶解，后者增加渗透压D.前者去除杂交中的背景，后者使DNA溶解20.以下不属于核酸探针的是（）A.RNA 探针B.基因组探针C.cDNA 探针D.抗体21.菌落杂交筛选重组体时，（）A.需要外源基因的表达B.不需要外源基因的表达C.不需要对菌体进行处理D.以上说法都正确22.Agarose-EB 电泳法分离纯化 cccDNA 的原理是（）A.EB 可以较多的插入到 cccDNA 中，因而迁移速度快B.EB 不容易插入到 cccDNA 中，因而迁移速度快C.EB 不容易插入到线性 DNA 中，因而迁移速度快D.EB 不容易插入到线性DNA中，因而迁移速度慢23.以下不属于 PCR 的应用的为（）A.随机扩增多态性 DNA（RAPD）B.扩增片段长度多态性（AFLP）C.RACED.S1 酶作图24.基因组代表一个细胞或生物体的（）A.部分遗传信息B.整套遗传信息C.可转录基因D.非转录基因25. 在大肠杆菌中，大多数都有三个位点特异性的 DNA 甲基化酶，以下选项中哪一种酶不包括在内（）A.damB.dcmC.Eco KⅠD.SssⅠ26.关于 cDNA 的最正确的说法是（）A.以 mRNA 为模板合成的双链 DNAB.同 mRNA 互补的单链 DNAC.同 mRNA 互补的双链DNAD.以上都正确27.下列哪一项不是 Southern blotting 的步骤（）A. 用限制酶消化 DNAB.DNA 与载体的连接C. 凝胶电泳分离 DNA 片段D.DNA 片段转移到硝酸纤维膜上28.PCR 扩增有时会出现弥散的条带，以下原因阐述不正确的是（）A.退火温度过低 B.退火温度过高 C.dNTP 浓度过高 D.循环次数过多29.限制性图谱与限制性片段长度多态性（RFLP）图谱的最显著区别在于（）A.前者是物理图谱后者是连锁图 B.前者是连锁图后者是物理图谱 C.前者是遗传图谱后者是物理图谱D.前者是物理图谱后者是遗传图谱30.用 SDS－酚抽提 DNA 时， SDS 浓度十分重要， 0.1% 和 1% 的 SDS 的作用分别为（）A.前者能将 DNA 和 RNA 一起分离出来；后者只能将 RNA 分离出来B.前者只能将RNA 分离出来；后者能将 DNA 和 RNA 一起分离出来C.二者均只能将 DNA 分离出来D.二者均能将 DNA 和 RNA 一起分离出来31.ColE1 是唯一用作遗传工程载体的自然质粒，以下对这种质粒描述不正确的是（）A.是松弛复制型 B.具有四环素抗性 C.能被氯霉素扩增 D.能产生肠杆菌素32.反向重复序列：（）A.参与转座子的转座B.可以是某些蛋白的结合位点C.可以回折形成发夹结构D.以上说法都不对33.下列 DNA 聚合酶中，哪一种酶只切割双链 DNA 中的一条链，产生单链切口，即切口酶（）A.DnaseⅠB.Klenow DNA 聚合酶C.T4 噬菌体 DNA 聚合酶D.T7 噬菌体 DNA 聚合酶34.迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于（）A.既可以作用于双链 DNA ，又可以作用于单链 DNA B.只能作用于单链 DNA C.只能作用于双链DNA D.只能作用于RNA35.BAP 与 CIAP 的区别在于（）A.BAP 68℃时失活，而 CIAP 68℃稳定B.CIAP 68℃时失活，而 BAP 68℃稳定C. 二者均耐酚抽D.二者均不耐酚抽36.下列试剂中，哪一种可以螯合 Ca2＋离子（）A.EDTAB.柠檬酸钠C.SDSD.EGTA37.以质粒为载体，将外源基因导人受体菌的过程称（）A.转化B.转染C.感染D.转导38.苯酚/氯仿/异戊醇中，异戊醇的作用是（）A.减少气泡，促进分相B.使蛋白质脱水C.使 DNA 脱水D.帮助 DNA 进入水相39.限制性内切酶一般保存在（）浓度的甘油溶液中。
高中生物学中与DNA有关的6类酶
高中生物学中与DNA有关的6类酶（1 山东省东营市河口区一中山东东营2572002 安徽省宣城市第三中学安徽宣城242000）摘要高中生物学中涉及到与DNA 有关的6类酶：DNA酶、解旋酶、DNA聚合酶、逆转录酶、限制性核酸内切酶、DNA连接酶。
通过查阅文献，对这6类酶的有关知识作一综述，并提出了相应教学建议，以期对同行的教学起到帮助作用。
关键词DNA酶解旋酶DNA聚合酶逆转录酶限制酶DNA连接酶1 DNA酶DNA酶，也称脱氧核糖核酸酶，是水解DNA中磷酸二酯键，生成低级多核苷酸或单核苷酸的磷酸二酯酶[1]。
其中能够水解DNA分子内磷酸二酯键的酶又称为DNA内切酶，如DNA酶I（DNase I），DNA酶II（DNase II）等；而从DNA链的一端逐个水解下核苷酸的酶称为DNA外切酶，如牛脾磷酸二酯酶和蛇毒磷酸二酯酶等非专一性核酸酶（底物也可为RNA）。
在DNase I的作用下，DNA 被水解成3′端为游离羟基，5′端为磷酸基团的寡聚脱氧核苷酸，其平均长度为4个脱氧核苷酸残基。
在DNase II的作用下，DNA被水解成5′端为游离羟基，3′端为磷酸基团的寡聚脱氧核苷酸，平均长度约6个核苷酸残基。
牛脾磷酸二酯酶可从DNA的5′羟基端开始逐个切割磷酸二酯键，蛇毒磷酸二酯酶可从DNA的3′羟基端开始逐个切割磷酸二酯键[2]。
人教版高中生物必修2教材中，艾弗里等“证明DNA是遗传物质” 的经典实验就用到了DNA酶。
在该酶作用下，载有S型肺炎双球菌荚膜遗传信息的DNA被分解破坏，无法将R型菌转化成S型，从而进一步证明了DNA是转化因子。
2 解旋酶DNA分子的许多生物学功能都需要解开双链才能执行，而解旋酶就能通过水解ATP获得能量来解开双链DNA。
解旋酶每解开一对碱基，需要水解2分子ATP。
分解ATP的活性依赖于单链DNA 的存在。
如果双链DNA中有单链末端或缺口，则解旋酶可以首先结合在这一部分，然后逐步向双链方向移动。
高中生物所有酶总结
高中生物所有酶总结酶是生物体内一类具有催化活性的特殊蛋白质分子。
它们在生物体内起着极为重要的作用，能够促进和加速化学反应的进行，从而维持生命体的正常功能。
高中生物课程中，学生们需要对常见的酶进行深入了解。
以下是对高中生物所有酶的一个总结，讨论了它们的结构、功能和作用。
一、氧化还原酶1. 氧化酶：通过氧化反应去除有机物中的电子。
例如，葡萄糖氧化酶催化葡萄糖的氧化反应，生成二氧化碳和水。
2. 还原酶：通过还原反应增加有机物中的电子。
例如，细胞色素C还原酶催化细胞色素C的还原反应，将电子从细胞色素C传递给氧化酶。
二、水解酶1. 淀粉酶：催化淀粉的水解反应，将淀粉分解成葡萄糖单元。
2. 脂肪酶：催化脂肪的水解反应，将脂肪分解成甘油和脂肪酸。
3. 蛋白酶：催化蛋白质的水解反应，将蛋白质分解成氨基酸。
三、合成酶1. 脱氢酶：催化合成反应中的脱氢反应。
例如，脑苷酸脱氢酶催化脱氢鸟苷酸生成脱氧鸟苷酸。
2. 缩合酶：催化合成反应中的缩合反应。
例如，脱氧核糖核酸聚合酶催化核糖核酸单链的缩合反应，形成双链的脱氧核糖核酸。
四、转移酶1. 氨基酸转移酶：催化氨基酸的转移反应。
例如，天门冬氨酸转氨酶催化天门冬氨酸向α-酮戊二酸转移氨基。
2. 羧酸转移酶：催化羧酸的转移反应。
例如，乙醛丙酮酸转移酶催化乙醛丙酮酸向异亮氨酸转移羧基。
五、拆分酶1. 磷酸酶：催化磷酸酯键的水解反应。
例如，碱性磷酸酶催化ATP的水解反应，将ATP分解成ADP和无机磷酸。
2. 核苷酸酶：催化核苷酸的水解反应。
例如，核苷酸酶催化AMP的水解反应，将AMP分解成腺苷和无机磷酸。
六、异构酶催化同分异构体之间的反应，将同分异构体转变为具有不同结构和性质的分子。
例如，糖异构酶催化葡萄糖和果糖之间的异构化反应。
七、缺陷酶指因基因突变而导致酶的催化活性发生异常改变或丧失。
这些缺陷酶常导致一些遗传病的发生。
酶是生物体内不可或缺的重要分子，它们能够催化生物体内的化学反应，使得这些反应能以适当的速率进行。
限制酶的多种切割方法
321限制酶的多种切割方法一、错位切割含目的基因的DNA片段和运载体──形成黏性末端1. 单酶切（1）同一种限制酶分别切割含目的基因DNA片段与运载体。
这是最简单的一种方法，含目的基因的DNA片段与运载体在同种限制酶作用下形成相同的黏性末端，这两个黏性末端间能通过碱基间的配对而连接，进而形成重组DNA分子。
（2）用同裂酶去切割含目的基因DNA片段与运载体。
有一些来源不同的限制酶识别核苷酸顺序和切割位置都相同，这类酶称为同裂酶（同切酶或异源同工酶）。
同裂酶产生同样的切割，形成相同的黏性末端。
2009年江苏生物高考第34题就出现了同裂酶（BamHⅠ与 Bst Ⅰ），其中的差别只在于当识别顺序中有甲基化的核苷酸时，一种限制性内切酶可以切割，另一种则不能。
（3）用同尾酶切割含目的基因DNA片段与运载体。
有一些来源不同、识别的核苷酸顺序和切割位置各不相同，但能产生相同的黏性末端，这类酶被称为同尾酶。
常用的限制酶BamHⅠ、BglⅡ、BclⅠ和Sau3A就是一组同尾酶，它们切割DNA之后都形成由GATC四个核苷酸组成的黏性末端。
显而易见，由同尾酶所产生的DNA片段，是能够通过其黏性末端之间的碱基互补作用而彼此连接起来。
【例1】（2005年天津理综）：限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC —。
在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。
①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。
②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。
③在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接？为什么？解析：这两种酶属于同尾酶，能产生相同的黏性末端，因此能够连接起来。
③由于两者产生的黏性末端相同（都是GATC），黏性末端之间能发生碱基互补配对而连接。
（4）单酶切的优点与缺点。
单酶切优点就是操作简单。
它的缺点主要有两个：①酶切后的质粒与目的基因在DNA连接酶作用下易自身环化：用单酶切切割后的目的基因和质粒的两侧各有一个黏性末端，而且是相同的末端，因此这两个末端会发生碱基互补配对而使目的基因和质粒分别发生首尾相连，都形成环状DNA分子，其中质粒又恢复成没有切割前的样子。
(完整版)酶的EC编号
酶的EC编号EC1：氧化还原酶EC2：转移酶EC3：水解酶EC4：裂合酶EC5：异构酶EC6：连接酶EC1：氧化还原酶EC1。
1：作用在给体的CH—OH上EC1.1。
1：以NAD+或NADP+为受体EC1。
1。
1。
1:醇脱氢酶EC1.2：作用在给体的醛基或氧桥上EC1.2。
1：以NAD+或NADP+为受体EC1。
2.1.1：（已删除，以EC1。
1。
1。
284和EC4。
4。
1。
22 代替）EC1.3:作用在给体的CH—CH上EC1.3。
1：以NAD+或NADP+为受体EC1.3。
1.1：二氢尿嘧啶脱氢酶(NAD+）EC1。
4:作用在给体的CH—NH2上EC1。
4。
1：以NAD+或NADP+为受体EC1.4.1。
1：丙氨酸脱氢酶EC1.5：作用在给体的CH—NH上EC1。
5。
1：以NAD+或NADP+为受体EC1。
5。
1。
1:吡咯啉-2-羧酸还原酶EC1.6：作用在NADH或NADPH上EC1。
6。
1：以NAD+或NADP+为受体EC1。
6。
1.1：NAD(P）+转氢酶(B)EC1。
6.1.2：NAD(P）+转氢酶（AB)EC1.7：以其他含氮化合物为给体EC1.7.1：以NAD+或NADP+为受体EC1。
7。
1。
1：硝酸还原酶（NADH+）EC1.8:作用在给体的硫族上EC1。
8。
1：以NAD+或NADP+为受体EC1。
8。
1.1:半胱胺脱氢酶（已删除。
)EC1.9：作用在给体的血红素上EC1.9。
3：以氧为受体EC1.9.3.1：细胞色素C氧化酶EC1。
10:以联苯酚及其相关化合物为给体EC1。
10.1：以NAD+或NADP+为受体EC1。
10.1.1:顺—苊—1，2—二醇脱氢酶EC1.11：以过氧化物为给体EC1.11.1：过氧化物酶类EC1.11。
1。
1：NADH过氧化物酶§NADH peroxidase EC1。
12：以氢为给体EC1。
12.1：以NAD+或NADP+为受体EC1。
用同尾酶切BamHI
3’ GCTAGCCGG
模板
3’
PCR产物 互补序列
GCTAGCCGG
第一节 DNA的体外重组
二、外源基因与载体的连接 3. PCR产物的连接 （2）与T载体直接连接
Taq DNA聚合酶的特性：在DNA双链的3’ 端再加上一个多余的核苷酸（优先加A）,因 此PCR产物两个3’端一般都有一个A
T载体的两个3’端人为地各加一个T： 利用Taq DNA聚合酶，当原料中只有dTTP时， 被迫在平端载体上添加T！
EcoRI
BamHI
第一节 DNA的体外重组
三、DNA体外连接应注意的事项
3. 插入基因的开放阅读框（ORF）正确
（1）DNA定向插入 （2）起始密码 尤其当载体上有ATG起始密码的时候，更要注意。
EcoRI
EcoRI
ATGGAATTC
ATGCGGAATTCT
载体
插入片断
ATGGAATTC T
重组
重组DNA
第一节 DNA的体外重组
二、外源基因与载体的连接 1. 粘性末端连接（由同一种酶或同尾酶产生 末端）
第一节 DNA的体外重组
二、外源基因与载体的连接 1. 粘性末端连接
（1）具有相同粘末端的 DNA分子之间的连接
使用碱性磷酸 酶处理载体DNA， 去掉其5’末端的磷 酸基，以防质粒 DNA的自身环化 。
第一节 DNA的体外重组
一、重组DNA的概念和目的
• 重组DNA是来源不同的 DNA在体外结合在一起从 而形成的新的DNA分子 Recombinant DNA
• 形成重组DNA的目的有三 个：
(i)形成新的蛋白产物 (ii)形成多拷贝的基因 (iii) 插入外源基因片段到新
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