液相色谱液质简易操作规程

液相色谱-质谱联用仪操作规程

(Waters Alliance 2695/Quattro Micro)

一、准备

流动相：配制所需流动相，并且放入超声波中脱气10分钟以上。

标准或样品：按要求对样品进行前处理，配制好标准。

检查：检查氮气压力，气源压力不低于6-7bar(相当于0.6-0.7Mpa)。

检查质谱后机械泵中的泵油不得低于最低线。

检查电源是否连接好。

二、开机

打开液相色谱（仪器左侧右上角）和质谱电源（仪器底部）开关。

打开计算机。仪器完成自检后，双击计算机屏幕上MassLynx图标。

液相部分

1. 换上所需流动相：

管路A：可换为无机盐溶液或水；

管路B：请保持为甲醇；

管路C：可换为乙腈；

管路D：其他有机溶剂。

2. 控制面板上显示Idle，进入面板控制模式。按Menu/Status键，进入主显示屏“Status（1）”界面。

3.通过方向键，把主显示屏上的亮白条移到“Degasser”的“Mode”“Off”按“Enter”键，选为“On”，再按“Enter”，打开脱气开关。

4.把亮白条移到“Composition”，设定所用其中一个流动相（例如A）的比例为100％，“Enter”回车后，再按右下角“Direct Functions”键，出现另一对话框，选择“Wet P rime”，设定流速和时间（5mL/min，3min即可），按“O K”键，排出管路气泡。结束后，在“Composition”中移动亮白条，依次设定所用的其他流动相B、C、D为100％，重复上述操作。

5. 同样，在主显示屏上设定流动相A百分比为100％，进入“Direct Functions”对话框，选择“Purge Injector”，按“Ok”。之后依次设定流动相B、C、D，重复此操作。

6. 设定流动相比例：把亮白条移到“Composition”，依次设定所用流动相A、B、C、D的百分比，按“Enter”。

7.将柱温箱打开，换上所用色谱柱（注意色谱柱流向），将二极管阵列检测器（PDA）的“out”出口接废液瓶；如未使用PDA，可直接将柱子流出端的PEEK管接废液瓶。把亮白条移到“Col Htr”，设定柱温，按“Enter”。

8.把亮白条移到“Flow”处，设定流速，按“Enter”，此时开始平衡柱子（一般10倍柱体积）。质谱部分

1. 进入MassLynx页面后，点击左边MS Tune进入质谱控制页面。

2. 点击Options出现下拉菜单，选择“Pump”开始抽真空。待真空达到一定状态可以进行实验。

3.点击Tune页面右下角Press for Operate，待灯变绿，点击Gas提供脱溶剂气和锥孔气（注意不要在source temperature低于100℃时关闭气体）。

4.用标准进行质谱调谐，优化质谱条件。通过调节“ES＋Source”和“Analyser”中的各项参数使得质谱峰信号达到最强。

三、设定方法

液相方法：点击左侧“Inlet Method”图标编辑液相方法。

点击进入“Inlet”页面设定各项参数。在“Solvents and Flows”窗口设定流动相比例和名称，设定流速和程序运行时间；“Column Setup”中设定柱温；在“Pump Gradient”窗口设定梯度。

点击“File>Save As….”保存方法（·····.wat）。

点击Change Mode图标切换至计算机控制模式，液相面板上显示为Remote。点击“Load Method”开始运行液相方法。

质谱方法：点击左侧“MS Method”图标编辑质谱方法。有五种方式可供选择可选择。

点击“MS Scan”为全扫描模式：设定质谱扫描开始和终止范围、扫描时间、Cone值和离子源模式以及数据显示模式等；

“MRM Scan”为选择离子模式：设定选择的母离子和子离子、驻留时间、Cone值和Collision 值、扫描间隔和回扫时间、狭缝宽度、重复次数数据显示等

“ Daughter Scan”为子离子模式、“ Parent Scan”是母离子扫描模式、“Neutral Loss“中性丢失，设定参数同上。

四、编辑样品列表-运行序列

4.1 在Masslynx主页面下编辑样品运行所需的文件和参数。样品列表如下：

4.2 将标样和待测样品装入进样小瓶后，放入样品盘中（有A 、B 、C 、D 、E 五个盘），记录每一样品相对应的盘号；

4.3编辑完毕，点击“File ”菜单选择“Save 或Save As ”，设定样品序列名称（····.spl ）。

4.4 运行序列：检查N 2、Ar 气路， PDA 开关、液相与质谱连接、质谱高压开关是否均已打开和连接好，当质谱调谐页面各参数已经达到设定值，液相基线已经平稳，此时选中要检测的样品号（整个横栏变黑），点击Masslynx 主窗口工具栏中绿色三角图标（Start Run ），在弹出窗口点选“Acquire Sample Data ”，检查运行的样品号无误后，点击“OK ”确定，开始运行样品序列，自动进样开始。

五、显示图谱

点击Masslynx 主页面上的“Chromatogram ”可察看流出的色谱图和质谱图。

用右键在色谱图上选中出峰的起始位置，也可点击工具栏中的

或（扣背景）图标均可以看

其质谱图；

工具栏：点击图标可进行实时监控；点击图标表示还原图谱； 图标表示复制图谱；

图标表示对谱图进行积分处理。

六、关机 质谱部分：关闭高压（点击press for operate ），设置源温source temp 为20℃，待温度下降后点击调协页面上方的API GAS 图标停止吹N2，关闭高纯氮气安全阀

光谱检测器：关闭PDA 检测器电源；

液相部分：把液相与质谱连接的管路拧开，按Menu/Status 键切换成手动控制模式，换上适当的清洗溶剂，冲洗管路，一般先用水/有机溶剂，再用纯的有机溶剂冲洗；

当长时间停电或移机时必须关机，点击质谱Tune page-Options 下拉菜单中的Vent 选项，释放真空，待真空压力表指针回到零方可关闭质谱电源。

质谱和液相关机完成，最后关闭计算机及显示器电源。