毕赤酵母发酵罐发酵
毕赤酵母发酵过程的染菌分析及预防策略
毕赤酵母发酵过程的染菌分析及预防策略1. 引言1.1 毕赤酵母发酵过程的重要性毕赤酵母是一种重要的微生物，在食品发酵工业中起着至关重要的作用。
它能够利用糖类等有机物质进行代谢，产生乙醇和二氧化碳等物质，从而发挥酵母发酵的作用。
毕赤酵母发酵过程不仅可以用于生产啤酒、面包、酸奶等食品，还可以用于生产化妆品、药品等工业产品。
其发酵产物具有丰富的营养价值和特殊的风味，深受人们喜爱。
毕赤酵母发酵可以促进食品中有害物质的降解和清除，提高食品的品质和安全性。
其产生的乙醇和二氧化碳等物质可以抑制有害微生物的生长，延长食品的保存期限。
毕赤酵母发酵可以改善食品的口感和营养价值，使食品更加美味可口。
发酵产物中的氨基酸、酶类等对人体具有益处，有助于促进消化吸收，提高食品的营养价值。
毕赤酵母发酵过程还可以带来经济效益，推动相关产业的发展。
发酵工业是一个重要的产业领域，毕赤酵母作为其中的关键微生物，在食品、医药、化工等领域都具有广泛的应用前景。
加强对毕赤酵母发酵过程的研究和控制，不仅有助于提高食品的质量和安全性，还有利于推动发酵产业的发展和壮大。
1.2 染菌对发酵过程的影响染菌是毕赤酵母发酵过程中常见的问题，而染菌会对发酵过程造成严重影响。
染菌会影响毕赤酵母的生长和繁殖，导致发酵速度变慢甚至停滞，影响产物的质量和产量。
染菌会引起发酵罐内环境的污染，可能产生异味、变色等问题，影响产品的口感和外观。
染菌还可能产生有害物质，对发酵产物的安全性构成威胁。
对于发酵过程来说，一旦染菌出现，往往需要加大处理的力度和时间，甚至可能需要废弃整批产品，造成浪费和经济损失。
预防染菌的重要性不言而喻。
只有加强对发酵过程中的染菌问题的监测和预防，才能确保毕赤酵母发酵过程的顺利进行，保证产品的质量和安全。
在制定相关的预防措施时，需要考虑到发酵环境的清洁、员工个人卫生习惯以及设备设施的维护和清洁等方面，从多个角度综合预防染菌问题的发生，保障生产的稳定和安全进行。
小型发酵罐条件下树干毕赤酵母木糖发酵条件优化
小型发酵罐条件下树干毕赤酵母木糖发酵条件优化杨盛茹;丁长河;惠明;张雪;王向向【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2010(000)012【摘要】以树干毕赤酵母m4为发酵木糖菌株,研究了5L发酵罐中不同培养条件对酵母发酵木糖生成乙醇和酵母生长规律的影响.结果表明,5L发酵罐中最佳发酵条件为:初始木糖浓度108g/L,温度28℃,通气量30L/h,转速300r/min,接种量12.5%,最适pH值为4.8,此时木糖转化率、乙醇得率最高,分别为98.5%,0.47g/g,乙醇产量有较大提高,50.0g/L.【总页数】4页(P65-68)【作者】杨盛茹;丁长河;惠明;张雪;王向向【作者单位】河南工业大学,粮油食品学院,河南,郑州,450052;河南工业大学,粮油食品学院,河南,郑州,450052;河南工业大学,生物工程学院,河南,郑州,450001;郑州牧业工程高等专科学校,食品工程系,河南,郑州,450011;河南工业大学,粮油食品学院,河南,郑州,450052【正文语种】中文【中图分类】TQ920.6【相关文献】1.紫外和60Co-γ诱变对树干毕赤酵母发酵木糖产乙醇的影响 [J], 刘阳;熊冬梅;熊兴耀;苏小军;蔡柳;曾璐2.发酵木糖高产乙醇树干毕赤酵母菌株的Co60诱变选育 [J], 吴仁智;陈东;芦志龙;陆琦;张穗生;黄日波3.树干毕赤酵母对玉米秸秆蒸汽爆破水解液及其蒸馏釜底液中木糖的发酵 [J], 赵晨;方浩;孔端男;朱均均;余世袁4.木糖浓度及补料发酵对树干毕赤酵母乙醇发酵的影响 [J], 吴仁智;陈东;黄俊;陆琦;芦志龙;陈英;陈小玲;黄日波5.高产耐热β-木糖苷酶重组毕赤酵母发酵条件优化及酶学特性研究 [J], 刘文龙;曹世源;钱娟娟;王兴吉;王克芬;刘胜利因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
重组毕赤酵母的高密度发酵工艺[发明专利]
![重组毕赤酵母的高密度发酵工艺[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/1193d3cf4b35eefdc9d33329.png)
专利名称：重组毕赤酵母的高密度发酵工艺
专利类型：发明专利
发明人：才学鹏,侯俊玲,王颖,骆学农,丁军涛,张少华,郑亚东,赵松波
申请号：CN200810212868.2
申请日：20080908
公开号：CN101348820A
公开日：
20090121
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开一种重组毕赤酵母高密度发酵工艺，特别是采用全自动控制发酵罐进行发酵的工艺。
本发明的工艺方法是将工作种子接种于BSM培养基中，培养温度为28℃，并进行搅拌，加氨水或磷酸控制发酵体系的pH值为4.8，罐压为0.8个大气压，当发酵罐中的甘油耗尽后一次缓慢加入甘油溶液280ml，待甘油再次彻底耗尽后，分五次缓慢加入每升含PTM12ml的甲醇溶液进行甲醇诱导，诱导72小时后结束发酵。
申请人：中国农业科学院兰州兽医研究所
地址：730046 甘肃省兰州市城关区盐场路徐家坪1号
国籍：CN
代理机构：兰州振华专利代理有限责任公司
代理人：张晋
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重组毕赤酵母表达水蛭素发酵工艺の研究
而先在体外用人工方法构建好多拷贝载体，然后转化到宿主菌中获得多拷贝转化子（见图１，５）。
图１．２ＡＯＸｌ位点的基因替换Ｆｉｇ．１．２ＧｅｎｅｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔａｔＡＯＸｌ图１．３ＡＯＸｌ位点的基因插入Ｆｉｇ．１．３ＧｅｎｅｉｎｓｅｒｔｉｏｎａｔＡＯＸｌ在Ｈｉｓ４菌株如ＧＳｌｌ５中，载体及基因组中ＡＯＸｌ启动子及３’ＡｏＸｌ区的双十字交换事件。
可产生基因替代（∞插入）。
结果ＡＯＸｌ编码区全部被取代，产生Ｈｉｓ＋Ｍｕｔｓ表型。
以ＡＯＸｌ位点由于基因替代而产生的Ｍｕｔｓ表型作为指示，可很容易地筛选Ｈｉｓ＋转化子的Ｍｕｔ表型。
基因取代的结果是缺失了ＡＯＸｌ位点（Ｍｕｆ），增加了含一Ｄ盯、目的基因、ＨＩＳ４的表达盒。
ＧＳｌｌ５的ＡＯＸＩ或ＫＭ７１的ＡＯＸＩ：：ＡＧＲ４位点与载体上三个ＡＯＸｌ区：ＡＯＸＩ启动子，ＡＯＸｌ转录终止子（＂ＩＴ）或ＡｏＸｌ下游远侧序列（３’ＡｏＸｌ）中的任～个之问发生单十字交换事件都会形成基因插入。
结果在ＡＯＸｌ或ＡＯＸＩ：：ＡＧＲ４基因的上游或下游插入一个或多个载体。
转化子在ＧＳｌｌ５中为ＨＩＳ＋Ｍｕｔ＋表型，在ＫＭ７１中为ＨＩＳ＋Ｍｕｔｓ表型。
在重组质粒５’或３’ＡＯＸｌ区用限制酶进行线性化，依转化宿主菌的不同，可方便地产生Ｍｕｔ＋或Ｍ酊重组子。
图１．４ｈｉｓ４位点的基因插入Ｆｉｇ．１．４Ｇｅｎｅｉｎｓｅｒｔｉｏｎａｔｈｉｓ４在ＧＳｌ１５（Ｍｕｔ＋）或ＫＭ７１（Ｍｕｆｆ）中，染色体上Ｈｉｓ４位点与载体上ＨＩＳ４基因之间发生单十字交换事件后会在ｈｉｓ４位点形成插入。
结果在Ｈｉｓ４位点插入一个或多个载体。
由于基因组—Ｅ彳ＯＸｌ或彳似，？■Ｇ尺４位点未发生重组，这些Ｈｉｓ＋转化子的表型均与亲本菌株相同。
通过ＨＩＳ４基因处限制性内切酶线性化，依转化宿主菌不同，可方便地产生Ｍｕｔ＋或Ｍｕｔ８重组子。
图中显示质粒插入双拷贝ＨＩＳ４／ｈｉｓ４基因。
一个为突变子，另一个为野生型。
图１．５多拷贝基因表达盒的构建Ｆｉｇ．１．５ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＭｕｌｔｉｐｌｅＣｏｐｙＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＣａｓｓｅｔｔｅ细胞中单位点多基因插入确实可自发形成，虽然比例低，占所有Ｈｉｓ＋转化子的１－１０％，但却是可测的。
毕赤酵母转化方案
毕赤酵母转化方案引言毕赤酵母（Baker’s Yeast）是一种常见的酵母菌，广泛用于食品加工和发酵过程中。
毕赤酵母可以将碳源转化为二氧化碳和乙醇，从而实现食品发酵和面团膨胀。
本文将介绍毕赤酵母的转化方案，包括酵母培养、酵母转化条件以及转化效果的评价。
酵母培养在进行毕赤酵母的转化实验之前，首先需要进行酵母的培养。
以下是酵母培养的步骤：1.将酵母菌存活液取出适量转移到含有酵母培养基的培养皿中。
2.用无菌棉签在培养皿上划线，以便观察酵母生长情况。
3.将培养皿封闭并置于恒温摇床中，在适当的温度下培养酵母。
酵母转化条件酵母的转化条件对于转化效果具有重要影响。
以下是常见的酵母转化条件：温度酵母转化的温度是一个重要的参数，常用的温度范围为25-40摄氏度。
不同温度下酵母的代谢和生长速率不同，因此选择合适的转化温度可以提高转化效率。
pH值pH值是影响酵母生长和代谢的另一个重要参数。
酵母转化的pH范围通常为4-7，在这个范围内酵母的生长和代谢能力较强。
溶氧量溶氧量是影响酵母转化效果的另一个因素。
较高的溶氧量可以促进酵母的生长和代谢，提高转化效率。
因此，在实验过程中应保证适当的氧气供应，通过搅拌或通气的方式提高溶氧量。
传质条件传质条件（如搅拌速度、传质面积等）也会对酵母转化效果产生影响。
适当的搅拌可以保证培养液中养分的均匀分布，提高转化效率。
同时，增加传质面积（如使用气泡或转子发酵罐）可以增加酵母与培养基之间的接触面积，促进转化反应进行。
转化效果评价转化效果通常通过酵母的生长情况、代谢产物的生成以及发酵过程的监测来进行评价。
1.酵母的生长情况可以通过观察培养液中的酵母颗粒的数量和大小以及液体的浑浊度来判断。
较好的转化效果应该能够促使酵母迅速生长和繁殖。
2.代谢产物的生成是评价转化效果的重要指标之一。
对于毕赤酵母来说，主要的代谢产物是二氧化碳和乙醇。
可以通过气体检测仪或化学分析方法来测定其生成量，以评估转化的效果。
毕赤酵母发酵过程的染菌分析及预防策略
毕赤酵母发酵过程的染菌分析及预防策略【摘要】本文主要探讨了毕赤酵母发酵过程中可能出现的染菌问题，并提出了相应的分析及预防策略。
在染菌分析部分，详细分析了可能引起染菌的原因，为后续的预防提供了指导。
在预防策略部分，从加强消毒管理、控制环境温湿度、严格进料检验等方面提出了针对性的预防措施。
文章还介绍了预防策略的实施方法，为质量管理提供了具体操作方案。
结论总结了本文的研究成果，展望了未来可能的研究方向，为相关领域的研究提供了参考价值。
通过本文的研究，将对毕赤酵母发酵工艺的质量控制和生产实践提供重要的指导和帮助。
【关键词】毕赤酵母、发酵过程、染菌分析、染菌原因、预防策略、实施、结论总结、未来展望、研究背景、研究意义1. 引言1.1 研究背景毕赤酵母是一种在食品工业中广泛应用的发酵剂，能够有效地促进面包、酒类等食品的发酵过程，提高其品质和口感。
在毕赤酵母的发酵过程中，常常会出现染菌现象，从而影响产品的质量和安全。
对毕赤酵母发酵过程中的染菌问题进行深入研究，寻找原因并提出有效的预防策略，对于保障食品安全和质量具有重要意义。
目前，针对毕赤酵母发酵过程中的染菌现象的研究相对较少，有待进一步探讨。
通过对染菌分析和染菌原因分析，可以更好地了解毕赤酵母发酵过程中染菌问题的发生机制，为制定针对性的预防策略提供实质性的依据。
本研究旨在探讨毕赤酵母发酵过程中的染菌问题，分析染菌原因并提出有效的预防策略，为食品工业的生产提供指导和参考。
1.2 研究意义毕赤酵母是一种常用的工业微生物，其发酵过程在食品和饮料生产中起着重要作用。
染菌是影响发酵过程的主要因素之一，严重影响产品质量和生产效率。
对毕赤酵母发酵过程中的染菌进行分析和预防具有重要的研究意义。
通过深入研究毕赤酵母发酵过程中的染菌情况，可以揭示染菌对发酵过程的影响及其机制，为解决发酵过程中的质量问题提供理论支持。
通过分析染菌原因，可以找到引起染菌的关键环节，有针对性地加强相关环节的监测和控制，从而提高发酵产品的质量和产量。
毕赤酵母发酵过程甲醇补料策略优选
毕赤酵母发酵过程甲醇补料策略优选发布时间：2023-02-21T01:00:46.803Z 来源：《中国科技信息》2022年19期作者：许超[导读] 总结优化目前的甲醇补料方式，结合实际生产情况，以根据在线溶氧即时反应情况，使用不同浓度的甲醇甘油混合溶液的分批补料策略以提高甲醇诱导的前体蛋白的表达量。
许超连云港润众制药有限公司江苏连云港 222000摘要：总结优化目前的甲醇补料方式，结合实际生产情况，以根据在线溶氧即时反应情况，使用不同浓度的甲醇甘油混合溶液的分批补料策略以提高甲醇诱导的前体蛋白的表达量。
关键词：原料药生产；毕赤酵母；甲醇诱导引言目前生物医药主要诱导产物系统有大肠杆菌IPTG诱导系统，毕赤酵母甲醇表达系统，哺乳动物细胞系统，昆虫细胞系统。
其中，毕赤酵母的表达系统与原核生物的表达系统相比，可以分泌外源蛋白到胞外和具有蛋白翻译后增加修饰的能力，表达在大肠杆菌中难以表达或者产量较低的物质。
因此具有生产成本较低，产物应用方面广，产能大等诸多优点。
1、毕赤酵母的研究现状巴斯德毕赤酵母广泛应用于各种规模的的蛋白质表达、制备以及结构分析等方面，已经有数以千计的外源蛋白在毕赤酵母系统中得到成功地表达。
巴斯德毕赤酵母的在工业发酵的大规模应用上有着以下五个优点：(1)能够在碳源只有甲醇的培养基上存活并且生长。
由于巴斯德毕赤酵母体内含特殊的醇氧化酶, 能够在碳源或能源只有甲醇的培养体系中存活并且生长几乎不受抑制,甚至能够达到非常高的菌体数量。
在这里。
甲醇是醇氧化酶的诱导剂；而当以Glu作为碳源时，AOX1启动子几乎不表达，以甘露醇山梨醇等为底物时，醇氧化酶不会被抑制。
(2)表达高效、生长迅速,在一般培养基中依旧能到非常高的菌浓, 和独特AOX1基因强启动子, 是较为适宜的表达载体,外源蛋白的表达产量甚至可以达到蛋白总数四成。
(3)适用于表达分泌到不同场所的蛋白。
(4)基因遗传具有高稳定性。
被插入的基因不是像大肠杆菌那样导入到会独立遗传的质粒当中,而是随载体同源重组整合到染色体上,随酵母的繁殖一起遗传,极大避免了外源基因的丢失现象。
毕赤酵母发酵过程的染菌分析及预防策略
毕赤酵母发酵过程的染菌分析及预防策略毕赤酵母发酵是一种常见的工业发酵过程，其在食品、饮料和医药等领域都有着广泛的应用。
毕赤酵母发酵过程中由于环境条件的复杂性，容易受到微生物的污染，特别是细菌和霉菌的污染。
对毕赤酵母发酵过程中的染菌情况进行分析，并针对性地制定预防策略，对保证发酵过程的正常进行具有重要的意义。
一、毕赤酵母发酵过程的染菌分析1. 染菌来源毕赤酵母发酵过程中的染菌主要来源于空气、设备、原料和操作人员等多方面。
空气中的微生物是主要的污染源之一，霉菌和细菌通过空气传播，进入发酵罐内生长繁殖。
设备和原料表面的微生物也可能成为污染源，而操作人员是最主要的传播者之一，他们带入的微生物会在整个生产过程中传播。
2. 染菌类型毕赤酵母发酵过程中常见的污染微生物主要包括大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、酵母菌等。
这些微生物在发酵过程中会引起产品变质、发酵过程中断甚至损坏生产设备。
3. 染菌对发酵过程的影响毕赤酵母发酵过程中的染菌会对产品质量产生负面影响。
细菌和霉菌的生长会产生代谢产物，例如：酸、醇、酸酐等，这些物质会使发酵液的pH值发生变化，抑制毕赤酵母的生长和发酵，进而影响产品品质。
染菌还会导致产品发酵时间延长、产量降低、产品产生异味、变质等。
二、毕赤酵母发酵过程的染菌预防策略1. 空气处理空气中的微生物是毕赤酵母发酵过程中最主要的污染来源之一。
对空气中的微生物进行有效处理是预防染菌的关键。
首先要对生产车间进行合理的空气过滤，安装高效过滤器，过滤空气中的微生物。
其次要对生产车间进行定期通风，保持空气清新。
还可在生产车间内设置紫外线杀菌灯，对空气中的微生物进行消毒。
2. 设备和原料消毒设备和原料表面的微生物也是毕赤酵母发酵过程中的污染源之一。
要对生产设备和原料表面进行定期清洁和消毒。
在生产过程中，要定期清洁发酵罐、管道、搅拌器等设备，以确保设备表面的微生物得到有效控制。
要对原料进行严格的检验和消毒处理，确保其不受到外源污染。
毕赤酵母发酵罐发酵资料讲解
毕赤酵母发酵罐发酵微生物发酵罐发酵（毕赤酵母）灭菌前：室温下校准PH电极，先校6.86零点再4.0斜率（若的发酵pH很长时间是酸性的（如酵母发酵）用6.86校正零点，4.0校正斜率；若你的发酵pH很长时间是碱性的（如某些细菌发酵）用6.86校正零点，9.18校正斜率）；室温下校准溶氧电极，1.0点在不接溶氧电极时候标定，100%点接上溶氧电极，放置在空气中较定；或2.0点在灭菌过程中，温度达到121度左右压力0.12mpa左右时候标定，100%在灭菌结束，降温至发酵温度并稳定，转速在发酵初始转速，通气量在发酵初始通气量时候标定灭菌：1.灭菌，先将各排气阀打开，将蒸汽引入夹套或蛇管进行预热，待罐温升至80~90℃，将排气阀逐渐关小。
接着将蒸汽从进气口、排料口、取样口直接通入罐中（如有冲视罐也同时进汽），使罐温上升到118~120℃，罐压维持在0.09~0.1Mpa（表压），并保持30min左右。
2.保温结束后，依次关闭各排汽、进汽阀门，待罐内压力低于空气压力后，向罐内通入无菌空气，在夹套或蛇管中通冷却水降温，使培养基的温度降到所需的温度，进行下一步的发酵和培养。
（注意压力：灭菌时，总蒸汽管道压力要求不低于0.3~0.35Mpa，使用压力不低于0.2Mpa。
）灭菌后:A.消耗甘油阶段1.灭菌后冷却30℃时：2.冷却至30℃时，开启搅拌(转速最大)和通气(0.1-1.0vvm),接通28%氨水(未稀释)调PH5.0;每升加4.35ml的无菌PTM1基础盐；3.从摇瓶中接种种子液，DO值为100%，开始培养后会消耗，导致DO值下降，通氧气以确保DO值超过20％，速率先为0.1vvm。
4. 发酵过夜甘油被完全消耗（18-24h），标志为DO值增加到100％。
【每天至少两次取样，测OD600，湿重，显微观察. 将菌体和上清（离心后）在-80℃下保藏，用于后面的分析。
】5. 这个阶段所期望达到的细胞产量为90-150g/L湿细胞。
毕赤酵母发酵手册
毕赤酵母发酵手册毕赤酵母发酵手册总览简介：毕赤酵母和酿酒酵母非常相似，都非常适合发酵生长。
毕赤酵母在可能提高总体蛋白质产量的发酵中能够达到非常高的细胞浓度。
我们建议只有那些有过发酵经验或能得到有经验的人的指导的人参与发酵。
因为发酵的类型很多，所以我们很难为您的个人案例提供详细的过程。
下面所给出的指导是基于Mut+和Muts两种基因型的毕赤酵母菌株在15L的台式玻璃发酵罐中发酵而成。
请在您的发酵开始前先阅读操作员手册。
下面所给出的表是整个指导的概况。
步骤标题页码1 发酵参数 12 设备推荐和培养基的制备 23 培养中溶氧的测量和使用 34 种子液的培养 45 在分批和分批补料培养中生物量对应于4-5甘油的生成6 Mut+和Muts基因型重组子在甲醇分批补料状态下表达的介绍 6-77 细胞的成熟与衰退 88 参考文献 9-109 配方 11发酵参数：在整个发酵过程中监测和调控下列参数非常重要。
下面的表格描述了这些参数和监测这些参数的原因。
参数原因温度（30℃）在32℃以上的温度下生长不利于蛋白质的表达溶氧（＞20％）毕赤酵母利用甘油和甲醇需要氧气pH（5.0-6.0和3.0）对于外源蛋白分泌到培养基中和最适生长非常重要转度（500-1500rpm）通气（玻璃发酵罐中为0.1-1.0vvm※）使培养基中的氧浓度达到最大值消泡剂（消除泡沫的最小量）碳源（变化率）每分钟1体积发酵液（L）中氧气的体积（L）使培养基中的氧浓度达到最大值取决于设备推荐：下面是所推荐设备的清单：发酵罐的夹套需要在发酵过程中给酵母菌降温，尤其是在甲醇流加过程中。
你需要一个固定的来源来提供冷却水（5-10℃）。
这可能意味着你需要一个冷冻装置来保持水的冷却。
一个泡沫探针就像消泡剂一样不可或缺。
一个氧气的来源——空气（不锈钢的发酵罐需要1-2vvm）或者纯氧（玻璃发酵罐需要0.1-0.3vvm）。
添加甘油和甲醇的补料泵。
pH的自动控制。
毕赤酵母高密度发酵产脂肪酶条件的研究
毕赤酵母高密度发酵产脂肪酶条件的研究徐明;付会兵;刘鹏;钱建阳;求赵明;王浩均;柳志强;郑裕国【摘要】以毕赤酵母基因工程菌为材料,通过单因素试验在15L发酵罐中对发酵的pH、通气量、接种量、搅拌转速及诱导剂的量进行优化;进而对影响明显的因素在700 L发酵罐中进行三因素三水平正交试验,最终确定最佳的发酵条件为:pH为5.0,温度为30℃,转速为250 r/min,接种量为5％,溶氧为20％～30％,诱导剂甲醇的量为129 L,培养时间为160～170 h,在开始诱导后分3次(48 h/次)向发酵液中添加0.5％的酵母膏(w/v)和1％的蛋白胨(w/v)可以显著提高发酵液酶活,酶活可以达到18 U/mL.【期刊名称】《发酵科技通讯》【年(卷),期】2015(044)001【总页数】5页(P33-37)【关键词】脂肪酶;毕赤酵母;正交试验;中试【作者】徐明;付会兵;刘鹏;钱建阳;求赵明;王浩均;柳志强;郑裕国【作者单位】浙江来益生物技术有限公司,浙江嵊州312400;浙江工业大学生物工程研究所,浙江杭州310014;浙江工业大学生物工程研究所,浙江杭州310014;浙江来益生物技术有限公司,浙江嵊州312400;浙江来益生物技术有限公司,浙江嵊州312400;浙江来益生物技术有限公司,浙江嵊州312400;浙江工业大学生物工程研究所,浙江杭州310014;浙江工业大学生物工程研究所,浙江杭州310014【正文语种】中文【中图分类】TQ920.1脂肪酶（EC 3.1.1.3），又称三酰基甘油酰基水解酶，是一类能够催化高级脂肪酸和丙三醇形成脂肪酸甘油酯键或者催化天然底物油脂（三脂酰甘油酯）水解产生脂肪酸和甘油的酶[1]。
目前，脂肪酶被广泛应用于食品、饲料、化工等工业领域[2-3]。
脂肪酶是人们研究最早的酶之一，其广泛存在于原核生物和真核生物中，由于哺乳动物和植物脂肪酶的量较少而且分离纯化难度也较大，而微生物脂肪酶在这方面表现出了很好的优越性[4]，所以微生物脂肪酶自发现后就得到了较深入的研究。
毕赤酵母发酵补料生长原理
毕赤酵母发酵补料生长原理嘿，朋友们！今天咱来唠唠毕赤酵母发酵补料生长原理。
你说这毕赤酵母啊，就像是个贪吃的小孩子。
它在发酵的过程中，得不断地给它喂好吃的，也就是补料，这样它才能快快长大，好好干活呀！
想象一下，毕赤酵母就像一个在努力成长的运动员，补料呢，就是它的营养大餐。
没有这些营养，它怎么能有足够的能量去冲刺，去发挥它的本领呢？
在发酵过程中，一开始，毕赤酵母就像刚起跑的选手，活力满满。
这时候给它合适的营养补料，那就是给它加油打气呀！随着发酵的进行，它不断消耗着营养，就像运动员跑了一段路，体力开始下降了。
这时候不及时补料，那可不行，它就没力气跑下去啦！
而且啊，这补料也不是随便乱给的。
就跟咱人吃饭一样，得讲究个营养均衡。
给多了，它消化不了，那不就浪费了嘛；给少了，它吃不饱，又怎么能茁壮成长呢？这可真是个技术活呢！
你说这毕赤酵母发酵补料生长，是不是跟咱培养孩子有点像？得精心照顾，得给它合适的东西，让它在一个良好的环境里成长。
如果不管不顾，那能行吗？肯定不行呀！
再想想，这毕赤酵母在发酵罐里努力生长，不就是为了给我们带来好东西嘛。
我们可得好好对待它，让它能发挥出最大的作用呀！
咱平时做面包、酿酒啥的，不都得靠这毕赤酵母嘛。
要是不了解它的发酵补料生长原理，怎么能做出好吃的面包、好喝的酒呢？这可不是开玩笑的呀！
所以说呀，咱得重视这个毕赤酵母发酵补料生长原理。
别小看了这些小小的微生物，它们的作用可大着呢！咱得好好利用它们，让它们为我们的生活增添更多的美好。
怎么样，是不是觉得很有意思呢？这就是毕赤酵母的神奇世界呀！。
毕赤酵母发酵过程的染菌分析及预防策略
毕赤酵母发酵过程的染菌分析及预防策略毕赤酵母是一种常用的发酵剂，其发酵过程非常重要，但同时也容易受到细菌、霉菌、酵母等微生物的污染。
为了保证毕赤酵母的发酵质量，减少污染对生产的影响，需要对发酵过程进行染菌分析，并制定有效的预防策略。
1. 采样点的选择毕赤酵母发酵过程中，应该选择合适的采样点进行染菌分析。
常见的采样点包括发酵罐内、发酵罐表面、发酵液中等。
这些采样点能够全面反映发酵过程中的微生物污染情况。
2. 样品的获取获取样品时应采取无菌操作，避免外界微生物的污染。
在获取样品时应穿戴无菌手套，使用无菌器具，并及时密封样品瓶，防止外界微生物污染。
3. 染菌分析方法常用的毕赤酵母发酵过程染菌分析方法包括培养法、PCR法、荧光定量PCR法等。
其中培养法是最常用的方法，通过将样品接种到适当的培养基上，观察培养基上的细菌、霉菌、酵母等微生物的数量和种类，从而判断发酵过程中的微生物污染情况。
根据染菌分析结果，可以了解到发酵过程中存在的微生物种类、数量及其对发酵的影响程度。
根据染菌分析结果，可以制定相应的预防策略，确保毕赤酵母的发酵质量。
二、毕赤酵母发酵过程的预防策略1. 严格控制生产环境在毕赤酵母生产过程中，应该严格控制生产环境，避免外界微生物的污染。
生产车间应该保持洁净，空气中的微生物浓度应该控制在合理范围内。
生产设备和器具应该经常进行消毒和清洁，避免微生物的残留。
2. 采取适当的处理措施在毕赤酵母发酵过程中，可以采取适当的处理措施来预防微生物的污染。
在原料投入前对原料进行消毒处理，使用含有抗菌成分的添加剂等。
3. 加强对发酵过程的监控加强对发酵过程的监控，及时发现发酵过程中的微生物污染情况，可以采取相应的应对措施，减少微生物对发酵的影响。
4. 建立完善的质量控制体系建立完善的毕赤酵母发酵质量控制体系，对发酵过程进行全面、系统的质量控制，以确保发酵过程中微生物的质量。
5. 培训员工对生产中的员工进行相关的微生物防控知识培训，提高其对微生物的认识和预防能力。
江南大学科技成果——重组毕赤酵母发酵生产碱性果胶酶
江南大学科技成果——重组毕赤酵母发酵生产碱性果胶酶项目简介
该项目成功构建了一株高产碱性果胶酶的毕赤酵母工程菌，通过对发酵过程的优化控制，在3L罐中酶活达到890U/mL。
在此基础上进行了碱性果胶酶的中试及其工业化研究，在10吨发酵罐中产酶达到1305U/mL.采用该重组碱性果胶酶代替传统的强碱高温工艺，废水COD显著降低，可生化性较大提高。
处理体系pH值为9.4，代于碱精练水平；酶处理温度低于碱处理，这些结果对棉织物前处理的清洁生产具有重要的应用价值。
本项目受到国家863计划资助，获中国轻工业联合会科学技术一等奖。
创新要点
在10吨发酵罐中产酶达到1305U/mL.采用该重组碱性果胶酶代替传统的强碱高温工艺，废水COD显著降低，可生化性较大提高。
处理体系pH值为9.4，代于碱精练水平。
效益分析
纺织业是污染非常严重的工业，在棉制物前处理的退浆加工中，传统工艺耗费大量的水和化学品，不仅耗费资源，同时造成环境污染。
利用碱性果胶酶处理织物后，替代传统的高温大量漂洗的前处理水平，以达到在处理过程中节约水耗与能耗，并减少废水排放量。
本研究成果总体达到国际先进水平，发酵水平处于国际领先水平，保障了其巨大的市场需求。
推广情况已转让相关企业。
授权专利
一种用温度策略促进重组毕赤酵母高产碱性果胶酶的方法，200710134521.6；一株产碱性果胶酶工程菌及其构建和用该菌生产碱性果胶酶的方法，200710130976.0；一种用添加山梨醇提高发酵生产碱性果胶酶产量的方法，200910030831.2。
毕赤酵母的摇瓶发酵方法
毕赤酵母的摇瓶发酵方法：一、摇瓶发酵方法:毕赤酵母摇瓶发酵方法分为两个阶段，1、酵母菌株生长阶段；2、脂肪酶诱导表达阶段。
1、酵母生长阶段。
准备试剂：1000ml BMGY培养基，1000ml BMMY培养基，10X的甲醇，摇瓶1L（灭菌），温控摇床，50ml离心管（灭菌）。
紫外分光光度计，石英比色皿。
以下所有操作均在超净台内或者无菌条件下完成。
（1）往灭好菌的IL摇瓶中加入100mlBMGY培养基，然后加入约1ml 脂肪酶菌株（培养基：菌液=100：1），用透气膜封口（透气，但是细菌不能透过）。
置于温控摇床上，温度调至300C，转速为250-300rpm/min，使酵母生长，OD600=2.0-6.0，时间约为15-24小时。
（2）将发酵液转入50ml离心管，1500g-3000g离心5min。
去掉上清，用BMMY培养基将菌体浓度稀释至OD600=1.0，约有500ml左右。
将稀释后的发酵液分别加入到1L的药瓶中，每个摇瓶150ml 发酵液（绝不能超过200ml）。
（3）将摇瓶置于温控摇床上，温度调至300C，转速为250-300rpm/min，使酵母表达脂肪酶，每24小时加入一次5%的甲醇，使甲醇的终浓度为0.5%。
连续诱导表达48小时。
（4）将发酵液进行12000rpm/min离心5min，取上清（若上清仍混浊，可反复离心）；进行酶活分析和蛋白含量分析。
BMGY培养基的配制（1000ml）：20g蛋白胨（peptone）,10g酵母提取物（Yeast Extract）,加水至700ml；1210C高温灭菌20min。
然后分别在无菌条件下加入10X YNB 100ml，10X 磷酸钾缓冲液（PH6.0）100ml，10X甘油 100ml。
rhHSP110毕赤酵母工程菌的大规模发酵及产物纯化
rhHSP110毕赤酵母工程菌的大规模发酵及产物纯化韩冬;徐煌;张新民;姜爽;张婷;关铭;颜炜群【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2008(034)003【摘要】目的:探讨重组人HSP110 (rhHSP110)毕赤酵母工程菌在80L发酵罐中大规模发酵的工艺及发酵产物rhHSP110的纯化方法.方法:在摇瓶中制备rhHSP110工程菌种子2L,将种子接种到80L发酵罐中,采用补料分批培养方式对工程菌进行高密度发酵.控制和优化各种发酵条件,经历72h后结束发酵.将发酵液离心,经阳离子交换层析对上清中的表达产物进行纯化.结果:控制发酵温度为30℃, pH值为4.2,溶氧值为20%以上,在酵母细胞湿重达到200g·L-1时开始甲醇诱导表达,72h后结束发酵.发酵上清通过阳离子交换层析纯化后获得纯度为80%的rhHSP110,产量为500mg·L-1.结论:rhHSP110酵母工程菌在80L发酵罐高密度发酵成功,为rhHSP110的产业化生产及临床研究了莫定基础.【总页数】4页(P385-388)【作者】韩冬;徐煌;张新民;姜爽;张婷;关铭;颜炜群【作者单位】吉林大学药学院生物工程教研室,吉林长春,130021;嘉兴学院医学院生物化学教研室,浙江嘉兴,314001;吉林大学药学院生物工程教研室,吉林长春,130021;北华大学药学院药物分析教研室,吉林吉林,132001;吉林大学药学院生物工程教研室,吉林长春,130021;吉林大学药学院药物分析教研室,吉林长春,130021;吉林大学药学院生物工程教研室,吉林长春,130021【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.HER2/neu ECD毕赤酵母工程菌大规模发酵工艺研究 [J], 韩冬;徐煌;牟旭鹏;孔宁;颜炜群;关铭2.重组毕赤酵母胸腺肽α1-人血清白蛋白基因工程菌高密度发酵及分离纯化 [J], 马娇颖;章成昌;仇黎鹏;姜玉涛;闫璐颖;陈菁;陈建华3.HBscFv毕赤酵母工程菌的中试发酵及产物纯化 [J], 熊盛;谢秋玲;王一飞;邓宁;粟宽源4.重组海参溶菌酶工程菌发酵及表达产物纯化和性质的研究 [J], 王丹;丛丽娜;谢三群;张欢5.重组戊型肝炎病毒抗原工程菌的发酵及表达产物的纯化 [J], 应莲芳;梁凌宇;杨军;高雪峰;蒋琳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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微生物发酵罐发酵（毕赤酵母）
灭菌前：
室温下校准PH电极，先校6.86零点再4.0斜率（若的发酵pH很长时间是酸性的（如酵母发酵）用6.86校正零点，4.0校正斜率；若你的发酵pH很长时间是碱性的（如某些细菌发酵）用6.86校正零点，9.18校正斜率）；
室温下校准溶氧电极，1.0点在不接溶氧电极时候标定，100%点接上溶氧电极，放置在空气中较定；或2.0点在灭菌过程中，温度达到121度左右压力0.12mpa左右时候标定，100%在灭菌结束，降温至发酵温度并稳定，转速在发酵初始转速，通气量在发酵初始通气量时候标定
灭菌：
1.灭菌，先将各排气阀打开，将蒸汽引入夹套或蛇管进行预热，待罐温升至
80~90℃，将排气阀逐渐关小。
接着将蒸汽从进气口、排料口、取样口直接通入罐中（如有冲视罐也同时进汽），使罐温上升到118~120℃，罐压维持在
0.09~0.1Mpa（表压），并保持30min左右。
2.保温结束后，依次关闭各排汽、进汽阀门，待罐内压力低于空气压力后，向罐内通入无菌空气，在夹套或蛇管中通冷却水降温，使培养基的温度降到所需的温度，进行下一步的发酵和培养。
（注意压力：灭菌时，总蒸汽管道压力要求不低于0.3~0.35Mpa，使用压力不低于
0.2Mpa。
）
灭菌后:
A.消耗甘油阶段
1.灭菌后冷却30℃时：
2.冷却至30℃时，开启搅拌(转速最大)和通气(0.1-1.0vvm),接通28%氨水(未稀释)调PH5.0;每升加4.35ml的无菌PTM1基础盐；
3.从摇瓶中接种种子液，DO值为100%，开始培养后会消耗，导致DO值下降，通氧气以确保DO值超过20％，速率先为0.1vvm。
4. 发酵过夜甘油被完全消耗（18-24h），标志为DO值增加到100％。
【每天至少两次取样，测OD600，湿重，显微观察.将菌体和上清（离心后）在-80℃下保藏，用于后面的分析。
】
5.这个阶段所期望达到的细胞产量为90-150g/L湿细胞。
重组蛋白质不产生。
B.甘油补料阶段
1.将12ml/L PTM1加入50%VVM的甘油中，将补料速率设为18.15ml每小时每升初试发酵液体积。
2.甘油补料将进行约4h或更长。
在本阶段完成后细胞产量应达到180-220g/L湿细胞，但是不会有重组蛋白质的产生。
【4％甘油的是所建议的在补料中的最大水平，更高的甘油浓度将会产生毒害问题。
】
重要:如果溶氧低于20％，应该停止甘油或甲醇的补料并且不做任何提高溶氧的事直到溶氧稳定。
这时开始调整搅拌、通气、压力或氧气的补充。
有报道称如果培养基的pH 低于3.0，中性蛋白酶会被抑制。
故如果有必要可设为3.0保持4-5h 甘油补料阶段。
甲醇补料培养
在甲醇补料前甘油都必须消耗干净。
1.12mlPTM1基本盐类每升的100％的甲醇进行诱导。
速率为3.6ml/h 每升初试发酵液体积。
开始的2-3h 内甲醇会在发酵液中累积，溶氧值会有变化。
2. DO 值不能维持在20％以上，停止流加甲醇，等到DO 值稳定后继续以当前速率流加甲醇。
增加搅拌、通气、压力或者氧气的补充来使DO 维持在20％以上。
DO 值会一直变化。
3.当培养物完全适应利用甲醇
）并且甲醇成为其限制性生长因子后，将会有一个稳定的DO 读数和一个较快的DO 稳定时间点（通常不到1min ）。
在培养物适应甲醇后而将流加速率翻倍前在限制条件下保持这个较低的流加速率最少
然后流加速率）
4.调10.9 ml/h 到最后。
5.一共加入接近740ml ，约70h 。
细胞浓度会最终增加到350-450g/L 湿细胞。