血凝分析PPT课件
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样本及试剂分配系统通常包括：样本臂、试剂臂及样本 注射器、试剂注射器，样本及试剂针，冲洗池。
4.检测系统 仪器检测系统通常包括两种以上的检测方法：
双磁路磁珠法、散射比浊法、透射比浊法、底物 显色法等等。
5.计算机系统 系统软件控制凝血仪的所有工作过程，并将
检测到的数据进行分析处理最终得到测试结果。 对检测结果进行存储、质控统计等工作
凝
光电磁珠法——吸光度衰减程度判断终点
仪
检
双磁路磁珠法——钢珠振幅衰减程度判断终点
测 原 理
（二）底物显色法 ：以底物释放产色基团量的变化测定有关因子 生物化学法
免疫扩散法
（三）免疫学法 抗原抗体
火箭电泳
双向免疫电泳
免疫比浊 ELISA法
直接比浊 乳胶比浊
散射比浊 透射比浊
• 生物物理法
生物物理法亦可称为凝固法。通过检测血浆在凝血 激活剂的作用下光、电、机械运动等一系列变化，再由 计算机采集分析数据得出最终结果。由于是检测血浆在 凝固过程中的物理变化，因此该法 也可称为生物物理法。
三、血凝仪的基本结构
1.半自动血凝仪的基本结构 样本预温槽 试剂预温槽 加样器 检测系统（光、磁） 微机
2、全自动血凝仪的基本结构
1.样本传送及处理装置 样本传送及处理装置通常包括：自动进样系统、自动穿
盖系统、及样本条形码扫描系统。 2.试剂冷藏及测试杯供应系统
试剂冷藏位可以提供几十个试剂位置并提供一个8-10度 低温环境。测试杯供应系统则为每一个测试提供测试杯， 并在测试完成后将测试杯自动抛弃。 3.样本及试剂分配系统
人工合成可以被待测凝血活酶催化裂解的多肽底 物，且多肽底物连接上产色物质。
在检测过程中产色物质可被解离下来，使被检样 品中出现颜色变化，根据颜色变化可推算出被检凝血 活酶的活性。
产色物质一般选用连接对硝基苯胺（PNA）。 游离的PNA呈黄色，其测定波长选用405nm。
• 生物化学法
凝血分析仪使用产色物质在检测血栓／止血指标时的生化反 应对酶的检测如下所示：
•磁珠法检测系统简介
磁珠法检测用于凝固法是Stago的专利技术，如图所示。
一旦被测血浆开始凝固（ 加入激活试剂）血浆黏度增加 使钢球的运动速度减慢，振幅 减小。
测量线圈检测到此振幅的 变化并通过计算得到凝血时间。
• 生物化学法
这类方法主要是通过测定产色物质的吸光度变 化，以推算待测物质的含量。这类方法也称为底物显 色法。
出血与凝血机制
生理性止血过程示意图
5HT：5羟色胺，TXA2:血栓烷A2
二:凝血过程
凝血酶原酶复合物 可通过内源性 凝血途径和外 源性凝血途径 生成。
胶原 内源性(接触因子)途径
外源性(组织因子wk.baidu.com途径
XIIa 激活
VIIa 组织因子
激活
XIa
激活
激活
IXa 激活
VIIIa
Xa Va
激活
IIa
纤维蛋白原
血凝分析
.
第一节 血凝分析理论知识
• 一、血管壁的止血功能(P153) • 二、血小板的止血功能(P155) • 三、抗凝及纤溶系统(P156)
出血与凝血机制
一、生理性止血的基本过程 1、血管收缩 2、血小板血栓形成 3、血液凝固
血液凝固是由凝血因子按一定顺序相 继激活而生成的凝血酶最终使纤维蛋白原 变为纤维蛋白的过程。因此，凝血过程可 分为凝血酶原酶复合物的形成、凝血酶原 的激活和纤维蛋白的生成三个基本步骤。
散射比浊法
由经过放大处理后的电信号产生的血浆凝固曲线 如图所示。取整个测量过程中随时间变化的散射光强 度为 100 %，计算从测定开始至散射光强度增加到50% 时所对应的时间为凝固点。
透射比浊法
透射比浊法的光源与接收器呈直线排列。当待测血浆中纤维蛋白 凝块形成时，来自发光源的光强度被其吸收。接收器将变化的光强度 转变成电信号。
PC PS
凝血酶原时间 活化部分凝血活酶时间 纤维蛋白原 凝血酶时间 D-二聚体 抗凝血酶Ⅲ 内原性凝血因子 外原性凝血因子 蛋白C 蛋白S
血凝仪基本检测方法
凝固法
主要检测方法
底物显色法 乳胶凝集法
免疫法
电流法——纤维蛋白原——纤维蛋白——导电
血
（一）凝固法 生物物理法
光学法
散射比浊法——凝固过程中散射光变 浊度变化 化透射比浊法——凝固过程中吸光度变化 光度变化
电流法(已淘汰)
当一定时间后血浆中纤维蛋白形成，电极 向上移动时可钩起纤维蛋白丝。此时由于 纤维蛋白丝的存在，电路仍处于接通状态 即可判断为凝固终点。
• 生物物理法
光学法
光学测定法是通过测定血浆在加入激活剂后浊度的变化来测定 测定凝血时间的。可分为散射比浊法和透射比浊法两种。
散射比浊法
散射比浊法当待测血浆 中纤维蛋白凝块形成时， 来自发光二极管的光被 其散射。接收器接收散 射光并将其转变成电信 号。
纤维蛋白
12 11
凝血途径 （简化）
3 7
98
1 纤维蛋白原：
10+5
2 凝血酶原
Fibrin
第二节 仪器检测原理
• 血凝仪可进行血栓与止血的实验室检查。
• 可为出血性和血栓性疾病的诊断、溶栓以 及抗凝治疗的监测及疗效观察提供有价值 的指标。
• 血栓与止血的基本检测指标 ：
PT APTT FIB TT D-Dimer AT-Ⅲ ⅡⅤⅦⅩ ⅧⅣⅥⅫ
仪器的数据处理部分连 续记录样品的吸光度变化曲线，计算出单 位时间内吸光度的变化量，并以每分钟吸光度的变化量来报告结果。
• 生物物理法
双磁路磁珠法
在待测血浆中加入小铁珠，如图 所示。测试杯两侧的驱动线圈产生一 恒定的交变电磁场，使杯内的小钢珠 保持等幅运动。凝血激活剂加入后， 纤维蛋白的产生增多，血浆的粘稠度 增加，迫使小钢珠的运动幅度逐步减 弱。当运动幅度衰减到先前的50%时， 可确定为凝固终点。
6.输出设备 通过计算机屏幕或打印机输出测试结果。
四、血凝仪的检测项目
在含酶的样品中直接加入合成物质，因为酶可裂解合成物质释放 PNA，监测由于PNA释放而导致被检样品在405nm处光吸收的变化， 就可推算样品中酶的活性。如对凝血酶、纤溶酶等的检测
合成物 质
凝血酶样本
光电比色
多肽+PNA
间接得到 酶的含量
• 免疫学方法
免疫学方法是以被检测物质作为抗原，然后用免疫 动物的方法制备相应的抗体，利用抗原抗体的特异性结 合反应来对被检测物质进行定量检测。自动凝血仪多采 用免疫比浊法。
4.检测系统 仪器检测系统通常包括两种以上的检测方法：
双磁路磁珠法、散射比浊法、透射比浊法、底物 显色法等等。
5.计算机系统 系统软件控制凝血仪的所有工作过程，并将
检测到的数据进行分析处理最终得到测试结果。 对检测结果进行存储、质控统计等工作
凝
光电磁珠法——吸光度衰减程度判断终点
仪
检
双磁路磁珠法——钢珠振幅衰减程度判断终点
测 原 理
（二）底物显色法 ：以底物释放产色基团量的变化测定有关因子 生物化学法
免疫扩散法
（三）免疫学法 抗原抗体
火箭电泳
双向免疫电泳
免疫比浊 ELISA法
直接比浊 乳胶比浊
散射比浊 透射比浊
• 生物物理法
生物物理法亦可称为凝固法。通过检测血浆在凝血 激活剂的作用下光、电、机械运动等一系列变化，再由 计算机采集分析数据得出最终结果。由于是检测血浆在 凝固过程中的物理变化，因此该法 也可称为生物物理法。
三、血凝仪的基本结构
1.半自动血凝仪的基本结构 样本预温槽 试剂预温槽 加样器 检测系统（光、磁） 微机
2、全自动血凝仪的基本结构
1.样本传送及处理装置 样本传送及处理装置通常包括：自动进样系统、自动穿
盖系统、及样本条形码扫描系统。 2.试剂冷藏及测试杯供应系统
试剂冷藏位可以提供几十个试剂位置并提供一个8-10度 低温环境。测试杯供应系统则为每一个测试提供测试杯， 并在测试完成后将测试杯自动抛弃。 3.样本及试剂分配系统
人工合成可以被待测凝血活酶催化裂解的多肽底 物，且多肽底物连接上产色物质。
在检测过程中产色物质可被解离下来，使被检样 品中出现颜色变化，根据颜色变化可推算出被检凝血 活酶的活性。
产色物质一般选用连接对硝基苯胺（PNA）。 游离的PNA呈黄色，其测定波长选用405nm。
• 生物化学法
凝血分析仪使用产色物质在检测血栓／止血指标时的生化反 应对酶的检测如下所示：
•磁珠法检测系统简介
磁珠法检测用于凝固法是Stago的专利技术，如图所示。
一旦被测血浆开始凝固（ 加入激活试剂）血浆黏度增加 使钢球的运动速度减慢，振幅 减小。
测量线圈检测到此振幅的 变化并通过计算得到凝血时间。
• 生物化学法
这类方法主要是通过测定产色物质的吸光度变 化，以推算待测物质的含量。这类方法也称为底物显 色法。
出血与凝血机制
生理性止血过程示意图
5HT：5羟色胺，TXA2:血栓烷A2
二:凝血过程
凝血酶原酶复合物 可通过内源性 凝血途径和外 源性凝血途径 生成。
胶原 内源性(接触因子)途径
外源性(组织因子wk.baidu.com途径
XIIa 激活
VIIa 组织因子
激活
XIa
激活
激活
IXa 激活
VIIIa
Xa Va
激活
IIa
纤维蛋白原
血凝分析
.
第一节 血凝分析理论知识
• 一、血管壁的止血功能(P153) • 二、血小板的止血功能(P155) • 三、抗凝及纤溶系统(P156)
出血与凝血机制
一、生理性止血的基本过程 1、血管收缩 2、血小板血栓形成 3、血液凝固
血液凝固是由凝血因子按一定顺序相 继激活而生成的凝血酶最终使纤维蛋白原 变为纤维蛋白的过程。因此，凝血过程可 分为凝血酶原酶复合物的形成、凝血酶原 的激活和纤维蛋白的生成三个基本步骤。
散射比浊法
由经过放大处理后的电信号产生的血浆凝固曲线 如图所示。取整个测量过程中随时间变化的散射光强 度为 100 %，计算从测定开始至散射光强度增加到50% 时所对应的时间为凝固点。
透射比浊法
透射比浊法的光源与接收器呈直线排列。当待测血浆中纤维蛋白 凝块形成时，来自发光源的光强度被其吸收。接收器将变化的光强度 转变成电信号。
PC PS
凝血酶原时间 活化部分凝血活酶时间 纤维蛋白原 凝血酶时间 D-二聚体 抗凝血酶Ⅲ 内原性凝血因子 外原性凝血因子 蛋白C 蛋白S
血凝仪基本检测方法
凝固法
主要检测方法
底物显色法 乳胶凝集法
免疫法
电流法——纤维蛋白原——纤维蛋白——导电
血
（一）凝固法 生物物理法
光学法
散射比浊法——凝固过程中散射光变 浊度变化 化透射比浊法——凝固过程中吸光度变化 光度变化
电流法(已淘汰)
当一定时间后血浆中纤维蛋白形成，电极 向上移动时可钩起纤维蛋白丝。此时由于 纤维蛋白丝的存在，电路仍处于接通状态 即可判断为凝固终点。
• 生物物理法
光学法
光学测定法是通过测定血浆在加入激活剂后浊度的变化来测定 测定凝血时间的。可分为散射比浊法和透射比浊法两种。
散射比浊法
散射比浊法当待测血浆 中纤维蛋白凝块形成时， 来自发光二极管的光被 其散射。接收器接收散 射光并将其转变成电信 号。
纤维蛋白
12 11
凝血途径 （简化）
3 7
98
1 纤维蛋白原：
10+5
2 凝血酶原
Fibrin
第二节 仪器检测原理
• 血凝仪可进行血栓与止血的实验室检查。
• 可为出血性和血栓性疾病的诊断、溶栓以 及抗凝治疗的监测及疗效观察提供有价值 的指标。
• 血栓与止血的基本检测指标 ：
PT APTT FIB TT D-Dimer AT-Ⅲ ⅡⅤⅦⅩ ⅧⅣⅥⅫ
仪器的数据处理部分连 续记录样品的吸光度变化曲线，计算出单 位时间内吸光度的变化量，并以每分钟吸光度的变化量来报告结果。
• 生物物理法
双磁路磁珠法
在待测血浆中加入小铁珠，如图 所示。测试杯两侧的驱动线圈产生一 恒定的交变电磁场，使杯内的小钢珠 保持等幅运动。凝血激活剂加入后， 纤维蛋白的产生增多，血浆的粘稠度 增加，迫使小钢珠的运动幅度逐步减 弱。当运动幅度衰减到先前的50%时， 可确定为凝固终点。
6.输出设备 通过计算机屏幕或打印机输出测试结果。
四、血凝仪的检测项目
在含酶的样品中直接加入合成物质，因为酶可裂解合成物质释放 PNA，监测由于PNA释放而导致被检样品在405nm处光吸收的变化， 就可推算样品中酶的活性。如对凝血酶、纤溶酶等的检测
合成物 质
凝血酶样本
光电比色
多肽+PNA
间接得到 酶的含量
• 免疫学方法
免疫学方法是以被检测物质作为抗原，然后用免疫 动物的方法制备相应的抗体，利用抗原抗体的特异性结 合反应来对被检测物质进行定量检测。自动凝血仪多采 用免疫比浊法。