裸大鼠人肝癌原位模型的建立及其生物学特性的初步观察
裸鼠人肝癌原位移植耐药模型的建立的开题报告
裸鼠人肝癌原位移植耐药模型的建立的开题报告【开题报告题目】裸鼠人肝癌原位移植耐药模型的建立【研究背景】肝癌是常见的恶性肿瘤之一，严重危害人类健康。
目前，肝癌可通过手术、化疗、放疗等综合治疗。
然而，由于肝癌细胞的异质性和基因突变等因素，导致治疗效果仍不尽如人意。
因此，开展肝癌治疗的研究非常必要，尤其是建立一种有效的肝癌耐药模型。
【研究目的】本研究旨在建立一种裸鼠人肝癌原位移植耐药模型，以此用于开展肝癌治疗药物的筛选和耐药机制的研究。
【研究内容】本研究主要包括以下内容：1.采用原位移植方法建立裸鼠肝癌模型，采用人肝癌细胞原位移植至裸鼠肝脏；2.通过连续药物选压，筛选出耐药肝癌细胞株；3.建立肝癌细胞原位移植耐药模型，并研究耐药机制；4.对耐药肝癌细胞株进行化学治疗药物筛选。
【研究方法】本研究采用原位移植法建立模型，连续药物选压筛选出耐药肝癌细胞株。
建立肝癌细胞原位移植耐药模型，并通过实时荧光定量PCR、Western blotting等手段进行耐药机制研究。
在耐药肝癌细胞株中，筛选可逆转耐药的化学治疗药物。
【研究意义】本研究将建立一种裸鼠肝癌原位移植耐药模型，以此作为研究肝癌治疗药物的筛选平台和耐药机制研究的手段。
通过研究耐药机制，并对耐药肝癌细胞株进行化学治疗药物筛选，有望为肝癌的治疗提供有力的参考和帮助。
【研究进展】目前，已通过原位移植法建立裸鼠人肝癌模型，连续药物选压成功筛选出耐药肝癌细胞株，正在进行建立耐药模型，并研究耐药机制的工作。
【研究预期成果】本研究预期能够建立一种裸鼠肝癌原位移植耐药模型，并研究耐药机制。
在此基础上，筛选出可逆转耐药的化学治疗药物，为肝癌的治疗提供新的思路和方法。
【研究周期和预算】本研究周期为2年，预算总共10万元。
包括实验室耗材费、动物实验费、仪器设备购置和维护费、研究人员工资和报酬等。
SCID鼠人胃癌原位移植模型的构建及其生物学特性初探
癌变・畸变・突变 1998年第10卷第3期 Carcinogenesis Teratogenesis and Mutagenesis Vol10No31998SCID鼠人胃癌原位移植模型的构建及其生物学特性初探章月星1 陈金联2 李明烈11上海市肿瘤研究所 上海 200032 2上海市第六人民医院消化科 200233摘要 将传代于裸鼠皮下的人胃癌SGC-7901完整组织原位移植于SCID鼠,探讨移植后自主生长的肿瘤生物学特性及其侵袭转移与形态学特征。
移植成功率为100%。
移植瘤保持了人胃癌选择素表达的生物学特性并显示人胃癌侵袭转移的体内表现。
表明移植部位的微环境对移植瘤的生物学行为有一定影响。
原位移植后自主生长的肿瘤较皮下移植模型更客观地模拟了患者体内的侵袭转移过程,可适用于人类胃癌的实验治疗研究和为进一步探讨粘附分子介导的胃癌侵袭转移机制提供有效工具。
关键词 原位移植;胃癌;选择素;RT-PCRSTU DY ON SCID MOUSE MODE L OF HUMAN GASTRIC CANCER CONSTRUCTED USING ORTH OTOPIC IMPLANTATION AN D THEIR BIOLOGICAL PROPERTIESZhang Yuexing1,Chen Jinlian2,Li Minglie11S hang hai Cancer Instit ute,S hanghai2000322Depart ment of Gast roenterology,S hanghai N o. 6People’s Hospital,200233Abstract Histologically intact tissue of human gastric carcinoma SGC-7901maintained by pas2 sage in the subcuitis of nude mouse was implanted orthotopically into the stomach wall of SCID mouse.Their biological properties,ways of invasion and metastasis and morphological characteris2 tic were studied,All mice with transplanted tumours exhibited100%transplantability and metastatic ability,as well as various manifestation reminescent of tumour behaviour in patients. These included:local growth,regional invasion,spontaneous metastasis to lymph nodes and liver, and peritoneal seeding.R T2PCR confirmed that transplanted tumours had identical characteristic of expression of cell adhesion molecules P2selectin as fresh human specimens of gastric cancer.This indicated that the microenvironment in the transplantation site had certain influience on the bio2 logical behaviour of the transplahted tumours which grew independentely in the stomach of SCID, making a better model than that of subcutaneously transplanted tumours for futther study on inva2 sion and metastasis mediated by adhesion molecules and experimental therapy further of human gastric cancer.K ey w ords Orthotopic implantation;G astric canner;P2selectin;R T2PCR 癌细胞侵袭与转移(invasion and metasta2sis)是晚期胃癌病人死亡的主要原因。
人类肿瘤裸鼠异种移植及其生物学特性的研究(综述)
人类肿瘤裸鼠异种移植及其生物学特性的研究(综述)
张保华;赖钦声;王生;蔡有余
【期刊名称】《中国比较医学杂志》
【年(卷),期】1992()Z1
【摘要】60年代初,裸鼠及其它免疫缺陷动物被发现后,人类肿瘤的实验动物模型研究得到了迅速发展。
我国自1979年引进裸鼠,1981年上海第一医学院首次报道人肝癌在裸鼠体内移植成功,随之又有结肠癌、舌癌、鼻咽癌、腮腺癌、筛窦癌及喉癌等10余种人类肿瘤在裸鼠体内移植成功的报道。
移植于裸鼠体内的人类肿瘤能保持原肿瘤的许多重要特征。
【总页数】4页(P49-52)
【关键词】异种移植;肿瘤干细胞;人肝癌;腮腺癌;生物学特性;实验动物模型;筛窦癌;组织培养方法;移植瘤;细胞生长
【作者】张保华;赖钦声;王生;蔡有余
【作者单位】北京协和医院口腔科;中国医学科学院实验动物研究所
【正文语种】中文
【中图分类】R
【相关文献】
1.人类肝门部胆管癌裸鼠瘤株的建立及其生物学特性研究 [J], 丛超;吴小鹏;孙文娟
2.人类炎性乳腺癌移植肿瘤裸鼠动物模型的建立和生物学特性的研究 [J], 丁健
3.人类肿瘤裸鼠异种移植及其生物学特性的研究（综述） [J], 张保华
4.人类肿瘤裸鼠异种移植及其生物学特性的研究 [J], 张保华
5.裸鼠体内人类肿瘤常位异种移植 [J], 齐茂松;郑杰
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关于人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及其生物学特性观察
关于人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及其生物学特性观察【摘要】目的建立一种能很好模拟人体内生物学行为的胃癌裸小鼠原位移植和转移模型。
方法采用人胃癌SGC-7901细胞株在裸鼠皮下经反复传5代形成实体瘤的完整组织块，建立人胃癌裸小鼠原位移植生长和转移模型16个。
观察所建立的模型肿瘤生长状况、移植成功率和自发转移的发生率，常规H-E染色光镜下观察胃癌原位移植瘤、胃癌淋巴结转移和肝转移情况。
电镜下观察肿瘤超微结构及免疫组化S-P法检测肿瘤诱导型环氧化酶-2（COX-2）。
结果胃癌裸鼠原位移植块再次原位移植的原位成瘤率达100％（16/16），淋巴结广泛转移率为87.5%（14/16），肝转移发生率为75.0％（12/16），腹腔积液形成率为12.5%（2/16）。
结论原位移植和转移模型均具有人胃癌自然生长过程的特点，具有人胃癌的生物学活性。
【关键词】胃肿瘤肿瘤细胞原位移植疾病模型裸小鼠Abstract： Objective To develop a nude mouse model of human gastric cancer that can mimic its natural human biologic activities. Methods Human gastric cancer cell line SGC-7901 was cultured in nude mice repeatedly for 5 generations to get the subcutaneous solid tumor， which was then emulsified and orthotopicly inplanted into the anterior wall of the stomach in 16 nude mice. The tumor growth characters， tumor-take rate and metastatic rate were studied grossly， the transplanted tumor and its lymphatic and hepatic metastases， after routine H-E staining; the ultrastructures， by electron microscopy; and COX-2， by immunohistochemical method． Results The tumor-take rate was 100％（16/16）， the rates of metastasis to lymph nodes and liver were 87.5％（14/16） and 75.0％（12/16） respectively， the rate of ascites formation was 12.5%（2/16）. Conclusion The model of human stomach cancer established is qualified， exhibiting natural growth characters and biological activities.Key words: stomach neoplasms; orthotopic thansplantation; disease model; nude mouse既往胃癌动物模型的建立多采用皮下接种方式，虽然这种移植方式简单易行，肿瘤的生长情况也便于观察，且在一定程度上也近似地模拟了原有肿瘤的形态学、生物学及生物化学特性；然而接种于裸小鼠皮下组织毕竟属于异位移植，脱离了其起源组织器官的微环境，因此在实验中移植瘤的某些行为常不同于患者原发恶性肿瘤的生物学行为。
裸鼠肺癌原位模型的建立及螺旋CT、近红外荧光成像评价
裸鼠肺癌原位模型的建立及螺旋CT、近红外荧光成像评价郑晓涛;李靖煦;夏亭亭;张超亮;何绮华;刘翔;关玉宝【期刊名称】《医学影像学杂志》【年(卷),期】2015(025)011【摘要】目的利用A549细胞系建立原位肺癌的动物模型,并采用螺旋CT扫描和近红外荧光成像评价胸内肿物生长情况.方法将A549细胞悬液(5×106 ml-1)接种于20只裸鼠胸腔内,分别于接种后第7天、14天、21天,连续3周对荷瘤裸鼠行螺旋CT检查,动态观察胸内肿瘤生长情况,主要观察裸鼠的生存时间、体重变化及胸腔内肿瘤浸润和转移情况,并对裸鼠进行解剖后行近红外荧光成像和病理切片检查.结果本次A549细胞的造模成功率为90％,中位生存期为30.7(20～41)天.荷瘤裸鼠胸内肿瘤转移发生率100％.经螺旋CT扫描肿瘤显示率100％,CT上测得平均肿瘤直径随时间逐步递增,而近红外荧光成像对胸腔内肿瘤显示率为零.结论 A549细胞接种于裸鼠肺部所建立的肺癌原位模型简单,成功率高;采用螺旋CT扫描能动态直观评价裸鼠胸内肿物生长情况,近红外荧光成像对胸腔内肿瘤显示能力有限.【总页数】4页(P2012-2015)【作者】郑晓涛;李靖煦;夏亭亭;张超亮;何绮华;刘翔;关玉宝【作者单位】广州医科大学附属第一医院放射科广东广州 510120;广州医科大学附属第一医院放射科广东广州 510120;广州医科大学附属第一医院放射科广东广州 510120;广州医科大学附属第一医院放射科广东广州 510120;广州医科大学附属第一医院胸外科广州呼吸疾病研究所广东广州510120;广州医科大学附属第一医院胸外科广州呼吸疾病研究所广东广州510120;广州医科大学附属第一医院放射科广东广州 510120【正文语种】中文【中图分类】R734.2;R814.42【相关文献】1.裸鼠胃癌移植瘤的近红外荧光成像 [J], 张修石;任翠;国飞;邢永丽;邵金月2.近红外荧光分子成像在裸鼠卵巢癌移植瘤模型中的应用 [J], 詹连珊;袁耿彪;潘东风;范永增;郑元义3.EGFP标记的人肺癌裸鼠原位移植模型的建立 [J], 魏淑珍;孙宇;杨志坚;宋勇4.工程化人胃癌裸鼠原位模型的建立及其活体荧光成像观察 [J], 孙培鸣;金润森;杜晓辉;徐迎新;孙慧伟;李荣5.裸鼠近红外肿瘤体内转移模型的建立 [J], 汤锋;嘎琴;李润乐;格日力;奚涛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
rnu)生物学特性及肿瘤动物模型建立的开题报告
裸大鼠（rnu/rnu）生物学特性及肿瘤动物模型建立的开题
报告
1. 研究背景和意义
实验动物模型在生命科学研究中发挥着重要作用，其中裸大鼠（rnu/rnu）作为一种严重免疫缺陷的小鼠模型，广泛应用于肿瘤生物学和药理学研究领域。
裸大鼠因其缺乏干扰素信号通路和免疫细胞的弱化，可以对异种移植肿瘤的没有排斥反应，从而形成较为理想的实验肿瘤模型。
同时，裸大鼠体表无毛，易于观察移植肿瘤的生长情况和药物疗效等参数，因此成为药物筛选和肿瘤转移机制研究的理想实验动物模型。
2. 研究内容和方法
本项目的研究内容包括：裸大鼠（rnu/rnu）的生物学特性研究和肿瘤动物模型的建立。
研究生物学特性方面，将通过体重、饮食、运动等多种指标对裸大鼠的生理调节机制进行分析，为建立肿瘤模型提供科学依据。
建立肿瘤模型方面，将先选择多种肿瘤细胞株体外培养，经过相关检测筛选适宜的细胞株，待细胞株培养稳定后将细胞悬液注入裸大鼠体内，观察肿瘤的移植和生长情况，并进行组织切片和染色等相关检测。
3. 预期成果和意义
本项目将建立裸大鼠（rnu/rnu）肿瘤模型，对选择合适的肿瘤细胞株和移植时间等关键参数进行分析总结，为以后的肿瘤生物学和药理学相关研究提供重要的实验依据。
同时，通过对裸大鼠生物学特性的研究，可以了解其生理调节机制，为以后相关实验结果的解释提供科学依据，对裸大鼠这一实验动物模型的进一步利用也将更加精准和有效。
原位裸小鼠肝癌模型的建立及高场MR成像的实验研究
［ ｂｔａ ｔ Ｏ ｊｃｉ ： ｏ ｅｔｂ ｉ ｌｎｅ ｖ ｒ ｕ ｒ ｎｎ ｄ ｃ ｉ Ａｓ ｃ ｒ ］ ｂｅ ｔ ｅ Ｔ ｓａ ｌ ｈｉ ａ ｔｄｌ ｅ ｔｍｏ ｕ ｅ ｖ ｓ ｍｐ ｉ ｉ ｍｉ ｗ ｔ ｉ ｅ ｈ ｍｍｅ ｉ ｅｉ ｅ ｔ ｎ ｍｅｈ ｄａ ｄ ｔ ｏ ｓｒ ｅ ｄａ ｊｃｉ ｔｏ ｎ ｏ ｂ ｅ ｖ ｔ ｎ ｏ
ａ ｄｔ ｅｆ ｄｎ ｓｗｅｅｃ ｅｋ ｄ ｗｉｈｐ ｔ ｏｏ ｉａ ｅ ａ ｎ ｔ ｎ ． ｓ ｌ ： ｅｆ ｒ ｔ ｎ ｒｔ ｆｔｍｏ ｔ ｍｍｅ ｉｔ ｎ — ｎ ｈ ｉ ｉｇ ｒ ｈ ｃ ｅ ｔ ａｈ ｌｇｃ ｌ ｘ ｍｉａｉ ｓ Ｒｅｕｔ Ｔｈ ｏ ｍａｉ ａｉ ｏ ｕ ｒｗｉｈ ｉ ｎ ｏ ｓ ｏ ｏ ｄａｅｉｊｃ ｅ
Ｈ２ ｅ１ ｉｅｗａ ｎ ｅ ｔ ｄ ｉ ｔ ｈ ｉ ｅ ｆ２ ｕ ｅ ｍｉｅ ｄ ｒ ｃ ｌ ． ｅ ｆ ｒ ｔ ｎ ｏ ｕ ｒ ｗａ ｂ ｅ ｖ ｄ ｂ Ｒ ａ ｄ Ｍ ＲＩ ２ ｃ １ ｍ ｃ ｓ ｉ ｃ ｅ ｎ ｏ ｔ ｅ ｌ ｒ ｏ ０ ｎ ｄ ｃ ｉｅ ｔ Ｔｈ ｏ ｍａ ｉ ｆｔ ｍｏ ｓ ｏ ｓ ｒ ｅ ｙ Ｍ ｎ ｖ ｙ ｏ ，
【 键 词】 肝 肿 瘤 ；动 物模 型 ；裸 小 鼠 ； 共 振 成 像 关 磁
【 中图 分 类 号】Ｒ １ ． ６ Ｒ７ ５７ 【 献 标 识 码 】Ａ 【 章 编 号】１ ０—３ ３ ２ １ ） ２１ ４—３ ８４４ ； ３． 文 文 ０ ００ １ （０ １１ —２ ６０
Ｅｓａ ｉｈｍｅ ｆｌｖ ｒｔ ｍ ｏ ｎ ｎｕ ｅ ｍｉｅ ａ ｄ ｏｂ ｅ ｖ ｔｏｎ ｏ ｕ ｏ ｒ ｗｔ ｗｉｈ ７． Ｔ Ｒ ｍａｇｎｇ Ｍ Ａ ＩＸｉ ｏ ｌ， ｏ ｘｎ， ｔ ｂＩｓ ｎｔｏ ｉｅ ｕ ｒｉ ｄ ｃ ｎ ｓ ｒ ａ ｉ ｆｔ ｍ ｒｇ ｏ ｈ ｔ ０ Ｍ ｉ ｉ ａ —ｉＬＩＢａ — ｉ
裸鼠人肝癌原位移植模型的建立
裸鼠人肝癌原位移植模型的建立韩克起;顾伟;张亚妮;黄雪强;刘岭;王喜;凌昌全【期刊名称】《第四军医大学学报》【年(卷),期】2004(025)017【摘要】0 引言自1969年裸鼠用于人类恶性肿瘤异种移植模型成功以来,先后建立了皮下、体内移植模型,近年来随着原位移植模型的复制成功,裸鼠人肝癌原位移植模型不仅能保持原有肝癌组织的结构,而且还能保持原发性肝癌的生物学行为[1,2]. 本实验我们就人肝癌细胞BEL-7402建立裸鼠原位移植肝癌模型进行探讨.……【总页数】1页(P封2-封2)【作者】韩克起;顾伟;张亚妮;黄雪强;刘岭;王喜;凌昌全【作者单位】第二军医大学长海医院中医科,上海,200433;第二军医大学长海医院中医科,上海,200433;第二军医大学长海医院中医科,上海,200433;第二军医大学长海医院中医科,上海,200433;第二军医大学长海医院中医科,上海,200433;第二军医大学长海医院中医科,上海,200433;第二军医大学长海医院中医科,上海,200433【正文语种】中文【中图分类】R361【相关文献】1.人食管癌裸鼠皮下移植及原位移植模型的建立 [J], 姚文健;白玉;赵宝生2.人U87-MG脑胶质瘤细胞裸鼠原位移植模型的建立 [J], 王艳华;奚苗苗;文爱东;翁琰;楚建杰;李子敏;胡娜平;李会会;郑建民;张彩勤;师长宏;杨志福3.人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的建立 [J], 白俊文;苏秀兰;杨成旺;王玉芳4.荧光素酶标记人胃癌细胞裸鼠原位移植模型的建立 [J], 李小颖;董伟;张连峰5.人上皮性卵巢癌细胞系SKOV3-luc裸鼠皮下及原位移植瘤模型的建立与研究[J], 朱沁怡;王昕婧;汪希鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
裸鼠人胃癌原位移植模型的建立
裸鼠人胃癌原位移植模型的建立
汪芳裕;孙敬芳
【期刊名称】《癌症》
【年(卷),期】1997(016)005
【摘要】目的：建立裸鼠人胃癌原位移植模型。
方法：将ＳＧＣ－７９０１人胃癌细胞株细胞接种至裸鼠皮下，建立皮下模型并反复传代，再以第八代移植瘤组织为材料，通过剖腹手术将其移植到裸鼠胃壁，待动物自然死亡后尸检。
结果：该模型原位瘤沿胃壁呈浸润性生长，潜伏期为３￣４周，以后迅速增长并与腹膜粘连，约１２周以后逐渐消瘦，生存期为１６￣２４周，原位成瘤率及局部浸润率均为１００％，部分运动（２／６）出现肝脏转移。
结论：裸鼠
【总页数】4页(P343-344,347,F003)
【作者】汪芳裕;孙敬芳
【作者单位】南京军区南京总医院消化科;南京产军区实验动物研究中心
【正文语种】中文
【中图分类】R735.2
【相关文献】
1."纤维蛋白原-凝血酶"法建立人胃癌组织块裸鼠胃癌原位移植模型 [J], 黄玲;朱伟;许晓蒙;钱晖;许文荣
2.人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及三种方法比较 [J], 林奇;周士福
3.人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及两种方法比较 [J], 刘平;赵志泉;张小勇;潘世扬;杨国平;丁小健
4.人胃癌裸鼠原位移植和转移模型的建立及其生物学特性观察 [J], 林奇;周士福
5.人胃癌裸鼠胃原位移植转移模型的建立 [J], 白飞虎;郭新宁;杨力;翟惠虹;吴开春;樊代明
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裸大鼠人高转移肝癌皮下和原位移植模型的建立
表 １皮下移植裸 大鼠体重和瘤体积 变化
１ ． 病理取材及形态学观察 处死裸大 鼠，肉眼 ．２ ６ 大 体 观 察 皮 下 和 原位 移 植 瘤 生长 部 位 、体 积 、质
地 、 活 动 度 、 有 无 胸 腹 水 ， 肝 、肺 、 肾 、脾 等
雌雄 兼用 ， １ ０ｇ左 右 。 由复旦 大 学 附属 公 共卫 生 ０ 临床 中心提 供 ［Ｃ Ｓ ＸＫ（ ）０ ５０ ０ ］ 沪 ２ ０ ．０ １（ 从美 国 Ｃ ａｌｓ ｈｒ ｅ
Ｒｖｒ ａｏａｏｉｓ ｉｅ ｂ ｒｔｒ 引进） Ｌ ｅ 。裸 大 鼠饲 养于 复旦大 学 附 属公共 卫 生临床 中心 动物 中心 Ｓ Ｆ屏 障系统 中 ，饲 Ｐ 以 高压灭 菌 水和 辐照 饲 料 ，饲 养 室相对 湿 度（０± ５ １） ％，温 度 （ ２４ ２ ℃ ，光 照 １ ０ ２ － ） ｈ明暗 交 替 。 ２
１ ３５ ５ ．４± １６ ．９
ｌ １４ ５ ． ４± １８ ．８
液化 ，有弹性 的实性瘤体 ，４周左右 时瘤块增大 ，
实验动物与 比较医学 Ｌ ｂ ｒｔｒ ｉ ｌｎ ｏ ａａｉｅ ｄ ｉ ａ ｏａ ｙ ｍａａ ｄ ｍｐｒｔ ｉ ｎ ｏ Ａｎ Ｃ ｖ Ｍｅ ｃ ｅ
２ 结果
２１ 皮 下移 植模 型 ．表 ２ 原 位 移 植 裸 大 鼠 体 重 变 化 后时间 ／ 周 体重 儋
１ ０８ ０ ．９± １ ３ ． ７ １ ４６ １ ． １± １６ ．６
２１１ 裸 大 鼠及 皮下瘤 的生 长情 况 ．．
连续观 察皮下
１ ６３ ± １２ ２ ．８ ．０
（） ｂ ，依据 公 式 Ｖ＝ ｂ ２计算 肿 瘤体 积 ； ａＶ 原位 移植 和大 小 ， 以腹部 出现可 触及 的实体 性包块 作 为成瘤 标 志 。 当裸 大 鼠出现 明 显 消瘦 、 弓背 、精 神萎 靡 等衰竭体征时结束实验 。
rnu)生物学特性及肿瘤动物模型建立的开题报告
裸大鼠（rnu/rnu）生物学特性及肿瘤动物模型建立
的开题报告
1. 研究背景和意义
裸大鼠是指没有毛发的小鼠，由于其免疫系统缺陷，因此被广泛应
用于肿瘤研究、医药开发等领域。
裸大鼠作为免疫缺陷动物模型，能够
接受异体移植物并产生明显的免疫反应，有利于研究肿瘤生物学特性、
肿瘤治疗和药物筛选。
因此，研究裸大鼠的生物学特性和建立肿瘤动物
模型，对于深入了解肿瘤发病机理、探索肿瘤治疗新途径和新策略具有
重要的理论和实际意义。
2. 研究内容和方法
本研究将选用裸大鼠（rnu/rnu）作为研究对象，通过建立人类肿瘤移植模型，探讨裸大鼠的肿瘤生物学特性以及该模型在肿瘤研究中的应用。
具体研究内容如下：
（1）裸大鼠（rnu/rnu）的主要生物学特性研究，包括生长发育规律、繁殖生殖能力、免疫学特性等。
（2）建立人类肿瘤移植模型，包括肿瘤细胞的预处理、裸大鼠的接种和肿瘤生长观察等步骤。
（3）评估肿瘤模型的可行性和有效性，包括观察移植瘤的生长速度和形态、细胞分化程度、肿瘤组织学特征等。
3. 预期结果和意义
预计本研究通过对裸大鼠（rnu/rnu）的生物学特性研究和人类肿瘤移植模型的建立，能够深入了解裸大鼠的生物学特性及其在肿瘤研究中
的应用，为进一步探索肿瘤治疗和药物筛选提供理论和实践基础。
同时，本研究的成果还有望为人类筛选肿瘤药物提供可靠的、优化的动物试验
平台，推动肿瘤研究和治疗领域的发展。
裸鼠肝癌模型构建实验技术原理
裸鼠肝癌模型构建实验技术原理
裸鼠肝癌模型构建：取对数生长期细胞消化后离心，定量的PBS 缓冲液及培养基将细胞吹打成3个不同细胞浓度组。
将裸小鼠分为6组，每组10只，将以PBS缓冲液混悬的细胞和以完全培养基混悬的细胞分别接种在小鼠左后肢腋下及右后肢腋下，以每个接种部位0.2ml 皮下注射，注射完毕缓缓拔出注射器，酒精棉球按压穿刺部位10s左右以防细胞混悬液流出。
裸鼠肝癌模型注意：接种前进行空白混悬剂皮下注射，观察空白混悬剂PBS缓冲液及培养基对裸鼠的影响。
每隔一日用游标卡尺测量肿瘤的长径、短径，计算肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线。
两周后，颈椎脱臼处死荷瘤小鼠，剪开肿瘤生长处的皮肤，取出肿瘤称重。
方法比较：裸鼠肝癌模型的建立中，接种的条件尤为重要。
为了给癌细胞稳定的生长环境和充足的生长空间，一般选择在动物的皮下接种细胞或肿瘤组织。
直接接种肿瘤组织的办法具有肿瘤组织生长快速的、大小均匀的特点，但操作复杂，需要对动物进行麻醉、切口、缝合等。
对于裸鼠来说，这无一不增加了感染的风险，影响术后生存质量。
腹水癌细胞皮下注射的方法也需要先对细胞进行在腹水中的增殖、分离和稳定传代，增加了工作量。
相比较这两种方法，癌细胞直接接种的方法简单、快速、有效、风险低。
两种方法构建自发转移且便于观察的裸鼠原位肝癌模型
２０２０年３月第３０卷㊀第３期中国比较医学杂志ＣＨＩＮＥＳＥＪＯＵＲＮＡＬＯＦＣＯＭＰＡＲＡＴＩＶＥＭＥＤＩＣＩＮＥＭａｒｃｈꎬ２０２０Ｖｏｌ.３０㊀Ｎｏ.３郭平ꎬ许敏华ꎬ张晶晶ꎬ等.两种方法构建自发转移且便于观察的裸鼠原位肝癌模型[Ｊ].中国比较医学杂志ꎬ２０２０ꎬ３０(３):３２－３８.ＧｕｏＰꎬＸｕＭＨꎬＺｈａｎｇＪＪꎬｅｔａｌ.Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇａｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔｌｙｍｏｎｉｔｏｒｅｄｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｍｏｄｅｌｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｔｈｒｏｕｇｈｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓｉｎｎｕｄｅｍｉｃｅ[Ｊ].ＣｈｉｎＪＣｏｍｐＭｅｄꎬ２０２０ꎬ３０(３):３２－３８.ｄｏｉ:１０ ３９６９/ｊ.ｉｓｓｎ.１６７１－７８５６ ２０２０ ０３ ００６[基金项目]广东省自然科学基金(２０１６Ａ０３０３１０２９９)ꎻ广东省科技计划项目(２０１７Ａ０９０９０５４４)ꎮ[作者简介]郭平(１９９４ )ꎬ男ꎬ硕士研究生ꎬ研究方向:病原生物学ꎮＥ￣ｍｉａｌ:６７００１２３９１＠ｑｑ.ｃｏｍ[通信作者]马艳(１９７８ )ꎬ女ꎬ副研究员ꎬ研究方向:病原生物学ꎮＥ￣ｍｉａｌ:ｍａｙａｎ８２０９０１＠１２６.ｃｏｍ两种方法构建自发转移且便于观察的裸鼠原位肝癌模型郭㊀平ꎬ许敏华ꎬ张晶晶ꎬ金小宝ꎬ李小波ꎬ马㊀艳∗(广东药科大学生物活性药物研究重点实验室ꎬ广州㊀５１０００６)㊀㊀ʌ摘要ɔ㊀目的㊀构建Ｌｕｃ￣ＧＦＰ标记的高转移性人肝癌细胞株ꎬ两种方法建立方便观察且自发转移的裸鼠原位肝癌模型ꎮ方法㊀构建ｐＣＤＨ￣ＣＭＶ￣Ｌｕｃ￣ＥＦ１￣ＧＦＰ￣Ｐｕｒｏ重组慢病毒表达载体ꎬ并转染人肝癌细胞株ＨＣＣＬＭ３ꎬ通过细胞悬液肝左叶注射法或皮下移植瘤组织块肝内植入法构建裸鼠原位肝癌模型ꎬ利用活体成像技术和组织病理学比较两种方法肿瘤的生长和转移情况ꎮ结果㊀构建稳定表达荧光素酶(Ｌｕｃ)和绿色荧光蛋白(ＧＦＰ)的高转移性人肝癌细胞株ＨＣＣＬＭ３￣Ｌｕｃ￣ＧＦＰꎬ裸鼠活体成像和病理学结果发现ꎬ两种方法建立的原位肝癌模型成瘤率均为１００％ꎮ其中细胞悬液法建模周期短ꎬ对宿主肝的损伤小ꎬ更能模拟出肝癌患者的微环境ꎬ转移率高ꎻ而肿瘤组织块法的成瘤大小和位置较易控制ꎬ但转移率较低ꎮ结论㊀成功构建Ｌｕｃ￣ＧＦＰ标记的高转移性人肝癌细胞系ＨＣＣＬＭ３￣Ｌｕｃ￣ＧＦＰꎬ细胞悬液法和肿瘤组织块转接法分别建立了自发转移且便于观察的裸鼠原位肝癌模型ꎬ为连续㊁直观地监测肿瘤的生长转移ꎬ评价抗肝癌生长转移药物的疗效奠定了基础ꎮʌ关键词ɔ㊀裸鼠ꎻ原位肝癌模型ꎻ活体成像ꎻ高转移性人肝癌细胞ʌ中图分类号ɔＲ－３３㊀㊀ʌ文献标识码ɔＡ㊀㊀ʌ文章编号ɔ１６７１￣７８５６(２０２０)０３￣００３２￣０７ＥｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇａｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔｌｙｍｏｎｉｔｏｒｅｄｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｍｏｄｅｌｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｔｈｒｏｕｇｈｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓｉｎｎｕｄｅｍｉｃｅＧＵＯＰｉｎｇꎬＸＵＭｉｎｈｕａꎬＺＨＡＮＧＪｉｎｇｊｉｎｇꎬＪＩＮＸｉａｏｂａｏꎬＬＩＸｉａｏｂｏꎬＭＡＹａｎ∗(ＧｕａｎｇｄｏｎｇＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＢｉｏａｃｔｉｖｅＳｕｂｓｔａｎｃｅｓꎬＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＧｕａｎｇｚｈｏｕ５１０００６ꎬＣｈｉｎａ)㊀㊀ʌＡｂｓｔｒａｃｔɔ㊀Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ㊀ＴｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔａＬｕｃ￣ＧＦＰ￣ｌａｂｅｌｅｄｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ(ＨＣＣ)ｃｅｌｌｌｉｎｅｗｉｔｈｈｉｇｈｍｅｔａｓｔａｔｉｃｐｏｔｅｎｔｉａｌ.Ｉｎａｄｄｉｔｉｏｎꎬｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｍｅｔａｓｔａｓｉｓａｎｄｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔｌｙｍｏｎｉｔｏｒｅｄｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｍｏｄｅｌｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｔｈｒｏｕｇｈａｃｅｌｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｉｎｊｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｏｒａｔｕｍｏｒｆｒａｇｍｅｎｔｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｉｎｎｕｄｅｍｉｃｅ.Ｍｅｔｈｏｄｓ㊀ＴｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｌｅｎｔｉｖｉｒａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐＣＤＨ￣ＣＭＶ￣Ｌｕｃ￣ＥＦ１￣ＧＦＰ￣ＰｕｒｏｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄａｎｄｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏｔｈｅｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅＨＣＣＬＭ３.Ｔｈｅｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｘｅｎｏｇｒａｆｔｍｏｄｅｌｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｔｈｒｏｕｇｈｔｈｅｃｅｌｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｉｎｊｅｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄａｎｄｔｈｅｔｕｍｏｒｆｒａｇｍｅｎｔｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ.Ｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｔｈｅｔｕｍｏｒｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｉｎｖｉｖｏｉｍａｇｉｎｇａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌａｎａｌｙｓｉｓ.Ｒｅｓｕｌｔｓ㊀ＨＣＣＬＭ３￣Ｌｕｃ￣ＧＦＰꎬａｈｉｇｈｌｙｍｅｔａｓｔａｔｉｃＨＣＣｃｅｌｌｌｉｎｅｗｉｔｈＧＦＰｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＬｕｃａｃｔｉｖｉｔｙꎬｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄ.Ｔｈｅｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｒａｔｅｓｏｆｔｈｅｔｗｏｍｅｔｈｏｄｗｅｒｅ１００％.Ｈｏｗｅｖｅｒꎬｔｈｅｆｏｒｍｅｒｃａｎｓｉｍｕｌａｔｅｔｈｅｍｉｃｒｏｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔｏｆｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｐａｔｉｅｎｔｓꎬｗｉｔｈｈｏｓｔｆａｃｔｏｒｓｈａｖｉｎｇｌｅｓｓｉｎｆｌｕｅｎｃｅ.Ｔｈｅｔｕｍｏｒｓｉｚｅａｎｄｌｏｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｌａｔｔｅｒａｒｅｅａｓｉｅｒｔｏｃｏｎｔｒｏｌꎬｗｉｔｈｔｈｅｌｕｎｇｍｅｔａｓｔａｔｉｃｒａｔｅｂｅｉｎｇｌｏｗｅｒｉｎｔｈｅｆｏｒｍｅｒｔｈａｎｉｎｔｈｅｌａｔｔｅｒ.ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓＴｈｅＬｕｃ￣ＧＦＰ￣ｌａｂｅｌｅｄｈｉｇｈｌｙｍｅｔａｓｔａｔｉｃｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌｌｉｎｅＨＣＣＬＭ３￣Ｌｕｃ￣ＧＦＰｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ.ＴｈｅｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｍｏｄｅｌｏｆｈｉｇｈｌｙｍｅｔａｓｔａｔｉｃａｎｄＬｕｃ￣ＧＦＰ￣ｌａｂｅｌｅｄＨＣＣｉｎｎｕｄｅｍｉｃｅｗａｓｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｔｈｅａｂｏｖｅｍｅｔｈｏｄ.Ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｐｒｏｖｉｄｅｓａｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓａｎｄｅｆｆｅｃｔｉｖｅｍｅａｎｓｔｏｍｏｎｉｔｏｒｔｈｅｇｒｏｗｔｈａｎｄｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｔｕｍｏｒｓｉｎｖｉｖｏꎬｆｏｒｅｖａｌｕａｔｉｎｇｔｈｅｅｆｆｉｃａｃｙｏｆａｎｔｉ￣ｍｅｔａｓｔａｔｉｃｄｒｕｇｓａｇａｉｎｓｔＨＣＣ.ʌＫｅｙｗｏｒｄｓɔ㊀ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｍｏｄｅｌｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｉｎｎｕｄｅｍｉｃｅꎻｉｎｖｉｖｏｉｍａｇｉｎｇꎻｈｉｇｈｌｙｍｅｔａｓｔａｔｉｃｈｕｍａｎｈｅｐａｔｏｍａｃｅｌｌ㊀㊀原发性肝癌是目前常见的恶性肿瘤之一[１－２]ꎮ建立自发转移且便于观察的人肝癌裸鼠模型是研究人肝癌的发展规律的基础ꎮ复旦大学肝癌研究所建立的高转移人肝癌细胞系ＭＨＣＣ９７Ｈ㊁ＨＣＣＬＭ３以及高转移人肝细胞癌裸鼠模型等为肝癌治疗及转移复发研究提供了有效的手段ꎬ但这些模型不能连续㊁直观地观察原位肿瘤及肺和腹腔转移灶ꎬ定量也不够准确[３－４]ꎮＹａｎｇ等建立一种可用荧光蛋白监视的人肝细胞癌裸鼠模型ꎬ可通过活体荧光成像ꎬ无创诊断和监测小鼠体内肿瘤ꎬ但生物体内有些物质在受到激发光后也产生荧光ꎬ造成假阳性[５－６]ꎮ后有学者构建稳定表达荧光素酶基因Ｌｕｃ人肝癌细胞株建立裸鼠原位模型ꎬ可以体外实时监测活体动物体内肝脏肿瘤的生长情况ꎬ并能灵敏可靠地用于抗肿瘤治疗效果的评价ꎬ但未探讨肿瘤转移情况[７－１１]ꎮ本研究采用肝内细胞悬液移植法和肿瘤组织块移植法建立Ｌｕｃ－ＧＦＰ标记的高转移性人肝癌细胞裸鼠原位肝癌模型ꎬ通过非侵袭性的生物发光成像技术和激发荧光成像技术ꎬ在活体水平观察两种方法建立的裸鼠原位肝癌模型肿瘤生长和转移情况ꎬ可监控肿瘤的生长㊁评价治疗效果以及肿瘤的转移ꎮ１㊀材料和方法１ １㊀实验动物ＳＰＦ级ＢＡＬＢ/ｃ裸小鼠２４只ꎬ６~８周龄ꎬ雄性ꎬ体重１８~２２ｇꎬ购于广东省医学实验动物中心ʌＳＣＸＫ(粤)２０１６－０００２ɔꎮ实验地点为广东药科大学实验动物中心ʌＳＹＸＫ(粤)２０１６－０１２５ɔ小鼠饲养在ＳＰＦ条件下ꎬ动物实验程序批准号:ＩＡＣＵＣ￣２０１８０５０３６ꎬ使用３Ｒ原则对待实验动物ꎮ１ ２㊀主要试剂与仪器ＭＥＭ培养基㊁胰酶消化液和澳洲胎牛血清(ＦＢＳ)均购自Ｇｉｂｃｏ公司ꎬ荧光素酶底物￣Ｄ￣荧光素钾盐购自上海翊圣生物科技有限公司ꎬｐＣＤＨ￣ＣＭＶ￣Ｌｕｃ￣ＥＦ１￣ＧＦＰ￣Ｐｕｒｏ和ｐｓｉＣＨＥＣＫ－２载体由广州赛哲生物股份有限公司馈赠ꎮ人肝癌细胞株(ＨＣＣＬＭ３)购自中国典型培养物保藏中心(武汉)ꎬ由本实验室保存ꎮ手术器械:手术剪㊁眼科弯镊㊁直镊ꎬ持针钳㊁缝合针(４ˑ１０)㊁７－０缝合线均购自广州速研究生物科技有限公司ꎮ主要仪器:荧光倒置相差显微镜ＣＫＸ４１ＦＳ购自日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司ꎬＡＴＰ荧光检测仪Ｓｙｓｔｅｍｓｕｒｅｐｌｕｓ购自美国Ｈｙｇｉｅｎａ公司ꎬ化学发光图片分析系统Ｔａｎｏｎ５２００购自上海天能公司ꎬ实时荧光定量ＰＣＲ仪ＣＦＸＴＭ购自美国Ｂｉｏ￣Ｒａｄ公司ꎮ１ ３㊀实验方法１ ３ １㊀ＰＣＲ扩增Ｌｕｃ基因根据载体上Ｌｕｃ基因序列和慢病毒表达载体上多克隆位点设计２条特异性引物Ｐ１㊁Ｐ２ꎬ以载体为模版ꎬ引物Ｐ１㊁Ｐ２扩增Ｌｕｃ基因序列ꎮ１ ３ ２㊀构建ｐＣＤＨ￣ＣＭＶ￣Ｌｕｃ￣ＥＦ１￣ＧＦＰ￣Ｐｕｒｏ慢病毒重组表达载体对ＰＣＲ扩增的Ｌｕｃ基因产物进行双酶切ꎬ参照文献[１２]ꎬ获得目的基因Ｌｕｃꎬ连接到相同酶切的慢病毒表达载体ꎬ构建重组表达载体ｐＣＤＨ￣ＣＭＶ￣Ｌｕｃ￣ＥＦ１￣ＧＦＰ￣Ｐｕｒｏꎬ经筛选㊁酶切鉴定后送去测序ꎮ１ ３ ３㊀Ｌｕｃ￣ＧＦＰ标记的人肝癌细胞ＨＣＣＬＭ３￣Ｌｕｃ￣ＧＦＰ的构建及鉴定人肝癌细胞株ＨＣＣＬＭ３培养于含１０％ＦＢＳ的ＭＥＭ培养基中ꎬ取对数生长期细胞接种ꎬ过夜后转染ꎬ加入总体积３００μＬꎬ含包装有重组表达载体病毒液及聚凝胺的培养基ꎬ５ｈ后补加入３００μＬ新鲜培养基以稀释聚凝胺ꎬ１ｄ后更换为６００μＬ含病毒液的培养基ꎬ３ｄ后观察细胞荧光发光情况ꎮ向转染后的人肝癌细胞每２ｄ更换含有嘌呤霉素的培养基进行细胞筛选并观察细胞形态及荧光发光情况ꎬ调整细胞密度为８ˑ１０５ｃｅｌｌ/ｍＬꎬ进行倍比稀释获得４个梯度细胞数ꎮ分别将倍比稀释的细胞悬液各取２００μＬ并加入相同浓度的荧光素酶底物ꎬ观察细胞荧光发光情况ꎮ１ ３ ４㊀裸鼠原位肝癌模型的构建(１)细胞悬液注射法:细胞悬液注射法:取对数生长期的ＨＣＣＬＭ３－Ｌｕｃ－ＧＦＰ细胞ꎬ胰酶消化调整细胞密度为５ˑ１０７ｃｅｌｌ/ｍＬꎬ将裸小鼠戊巴比妥溶液麻醉ꎬ沿左肋缘下方开腹ꎬ暴露出肝脏左叶ꎬ使用无菌微量进样器分别将１０μＬ㊁２０μＬ细胞悬液缓慢注射入肝脏ꎬ将肝脏轻送回腹腔ꎬ缝合腹壁关腹ꎬ每天定时观察裸小鼠的情况ꎮ(２)肿瘤组织块植入法:皮下移植瘤的建立:将处于对数生长期的ＨＣＣＬＭ３－Ｌｕｃ－ＧＦＰ细胞ꎬ胰酶消化调整细胞密度为２ˑ１０７ｃｅｌｌ/ｍＬꎬ取１００μＬ细胞悬液接种于裸鼠右肢腋下ꎮ待皮下瘤有明显生长ꎬ无菌条件下分离皮下肿瘤块ꎬ在无菌生理盐水中切成１ｍｍˑ１ｍｍˑ１ｍｍ备用ꎮ瘤组织离体后３０ｍｉｎ内植入裸鼠肝脏ꎮ(３)肝原位肿瘤组织种植:将裸小鼠戊巴比妥腹腔注射麻醉ꎮ沿左肋缘下方开腹ꎬ暴露出肝脏左叶ꎬ用尖头眼科镊沿肝脏包膜刺一隧道ꎬ植入上述切好的肿瘤组织块ꎬ将肝脏轻送回腹腔ꎬ缝合腹壁关腹ꎬ每天定时观察裸小鼠的情况ꎮ１ ３ ５㊀活体成像观察荷瘤裸鼠肿瘤生长情况在裸小鼠原位肝癌植入后第１㊁２㊁３㊁４和５周ꎬ按荷瘤裸鼠体重ꎬ腹腔注射相应体积的戊巴比妥麻醉剂及荧光素酶混悬ꎬ分别进行生物发光和绿色荧光下成像ꎬ检测荷瘤裸鼠肿瘤进展情况ꎬ根据发光的强弱比较两种方法构建的裸鼠原位肝癌模型以及不同发光技术的差异ꎮ１ ３ ６㊀病理解剖观察荷瘤裸鼠肿瘤形态及肺转移情况第７周成像结束后ꎬ戊巴比妥麻醉裸鼠ꎬ打开腹腔和胸腔ꎬ观察肝脏肿瘤组织的大体形态㊁生长浸润情况以及远处转移情况ꎮ取肺ꎬ用Ｂｏｕｉｎ'ｓ液固定２ｄ后ꎬ无水乙醇浸泡洗脱１２ｈꎬ观察肺转移灶ꎮ苏木素－伊红(ＨＥ)染色ꎬ镜下观察肝脏肿瘤和肺转移灶的病理情况ꎮ１ ４㊀统计学方法数据统计采用ＳＰＳＳ２３.０统计软件ꎬ数据以平均数ʃ标准差( ｘʃｓ)表示ꎬ计量资料进行单因素方差分析ꎬ以Ｐ<０.０５为差异有统计学意义ꎮ２㊀结果２ １㊀ＰＣＲ扩增Ｌｕｃ基因如图１所示ꎬ有清晰的特异性目的条带ꎬ大小在１.６ｋｂ~１.８ｋｂ之间ꎬ与理论值相符ꎮ２ ２㊀重组表达载体的鉴定双酶切鉴定ꎬ得到２个片段(见图２)ꎬＬｕｃ基因在１ ６ｋｂ~１ ８ｋｂ之间ꎬ慢病毒重组表达载体片段在７ ０ｋｂ~１０ ０ｋｂ之间ꎬ酶切结果与预期相符ꎮ测序结果目的基因Ｌｕｃ无突变ꎬ重组表达载体构建成功ꎮ注:Ｍ:Ｍａｒｋꎻ１~４:Ｐ１㊁Ｐ２为引物扩增的Ｌｕｃ基因片段ꎮ图１㊀ＰＣＲ扩增Ｌｕｃ基因电泳图Ｎｏｔｅ.ＭꎬＭａｒｋ.１－４ꎬａｍｐｌｉｆｉｅｄＬｕｃｇｅｎｅｆｒａｇｍｅｎｔ.Ｆｉｇｕｒｅ１㊀ＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＬｕｃｇｅｎｅｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ注:Ｍ１:ＭａｒｋꎻＭ２:Ｍａｒｋꎻ１~４:慢病毒重组表达载体㊁单酶切ＸｂａⅠ㊁单酶切ＢａｍＨＩ㊁双酶切ＸｂａⅠ和ＢａｍＨꎮ图２㊀重组表达载体酶切鉴定图Ｎｏｔｅ.Ｍ１ꎬＭａｒｋ.Ｍ２ꎬＭａｒｋ.１ꎬＬｅｎｔｉｖｉｒａｌｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｗｉｔｈｏｕｔｄｉｇｅｓｔｉｏｎ.２ꎬｐＣＤＨ￣ＣＭＶ￣Ｌｕｃ￣ＥＦ１￣ＧＦＰ￣ＰｕｒｏｐｌａｓｍｉｄｄｉｇｅｓｔｅｄｂｙＸｂａⅠ.３ꎬｐＣＤＨ￣ＣＭＶ￣Ｌｕｃ￣ＥＦ１￣ＧＦＰ￣ＰｕｒｏｐｌａｓｍｉｄｄｉｇｅｓｔｅｄｂｙＢａｍＨＩ.４ꎬｐＣＤＨ￣ＣＭＶ￣Ｌｕｃ￣ＥＦ１￣ＧＦＰ￣ＰｕｒｏｐｌａｓｍｉｄｄｉｇｅｓｔｅｄｂｙＸｂａⅠａｎｄＢａｍＨⅠ.Ｆｉｇｕｒｅ２㊀Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｂｙｅｎｚｙｍｅｄｉｇｅｓｔｉｏｎ２ ３㊀ｐＣＤＨ￣ＣＭＶ￣Ｌｕｃ￣ＥＦ１￣ＧＦＰ￣Ｐｕｒｏ转染肝癌细胞后荧光鉴定慢病毒转染人肝癌细胞后３ｄꎬ在倒置荧光显微镜白光下观察ꎬ在白光条件下转染与未转染的细胞形态没有明显差异ꎬ在激发光条件下观察ꎬ相比较于未转染ꎬ转染后的人肝癌细胞有明显绿色荧光且均匀的分布于整个细胞(见图３)ꎮ注:Ａ:白光下观察结果ꎻＢ:荧光下观察结果ꎮ图３㊀慢病毒转染前后细胞荧光显微镜检测Ｎｏｔｅ.Ａꎬｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓｉｎｗｈｉｔｅｌｉｇｈｔ.Ｂꎬｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｓｕｎｄｅｒｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ.Ｆｉｇｕｒｅ３㊀Ｃｅｌｌｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓｂｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ２ ４㊀阳性克隆细胞株荧光素酶活性分析将嘌呤霉素抗性筛选后的ＨＣＣＬＭ３￣Ｌｕｃ￣ＧＦＰꎬ梯度稀释后加入相同浓度荧光素酶底物ꎬ进行荧光素酶活性检测ꎮ结果显示(见表１)ꎬ转染组荧光相比较于未转染组荧光值明显提高ꎬ并且随着细胞密度数量的增加荧光值也会增加ꎮ２ ５㊀细胞悬液注射法构建裸鼠肝癌模型的活体成像观察ＨＣＣＬＭ３￣Ｌｕｃ￣ＧＦＰ细胞在裸鼠肝内接种(见图４)后的第１周即可通过活体成像系统检测到生物发光信号ꎬ随着时间的延长ꎬ荧光信号逐渐增强ꎬ在接种后第５周荧光信号达到最强ꎬ细胞接种量为１０μＬ第３周有远处转移㊁细胞接种量为２０μＬ第１周有远处转移(见图５)ꎮ表１㊀细胞荧光素酶活性测定(ｎ＝３ꎬ ｘʃｓ)Ｔａｂｌｅ１㊀Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｌｕｃｉｆｅｒａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙ浓度Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ未转染Ｎｏ￣ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ转染Ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ８ˑ１０５２２.２０ʃ０.０８９６８２７.２５ʃ２５９９.６０∗４ˑ１０５２２.４６ʃ０.２０４５８５５.９７ʃ２３１５.４３∗２ˑ１０５２１.５６ʃ０.１５１３８７１.６０ʃ２０４.１９∗１ˑ１０５２２.６８ʃ０.０５５７４３.１５ʃ２４.２１∗注:未转染与转染比较ꎬ∗Ｐ<０ ０５ꎮＮｏｔｅ.Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｎｏ￣ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎꎬ∗Ｐ<００５.图４㊀肝癌细胞悬液法原位移植瘤的手术过程Ｆｉｇｕｒｅ４㊀Ｓｕｒｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｄｕｒｅｏｆｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｂｙｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｍｅｔｈｏｄ注:Ａ:Ｌｕｃ生物发光检测ꎻＢ:ＧＦＰ绿色荧光检测ꎮ图５㊀细胞悬液接种法的活体成像Ｎｏｔｅ.ＡꎬＬｕｃｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎꎻＢꎬＧＦＰｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎ.Ｆｉｇｕｒｅ５㊀Ｉｎｖｉｖｏｉｍａｇｉｎｇｏｆｃｅｌｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ２ ６㊀肿瘤组织块植入法构建裸鼠肝癌模型的活体成像观察ＨＣＣＬＭ３￣Ｌｕｃ￣ＧＦＰ细胞注射到裸鼠腋下皮下ꎬ可见明显皮丘ꎬ约１０ｄ左右见瘤体生长ꎬ待瘤体直径至６ｍｍ时ꎬ取肿瘤组织进行肝原位种植(见图６)ꎮ应用Ｔａｎｏｎ５２００ＭμＬｔｉ动物活体成像系统检测荷瘤裸鼠肿瘤动态变化ꎬ接种后的第２周于种植部位可见生物发光信号随着时间的延长即肿瘤的生长而逐渐增强ꎬ然而ＧＦＰ标记在肝原位发光不明显ꎮ２ ７㊀肿瘤组织实体观察肝原位肿瘤生长５周后ꎬ处死裸小鼠ꎬ解剖暴露肝ꎬ发现两种方法肝上都有质地较硬颜色灰白色的肿瘤组织ꎬ如图８Ａ所示:肝脏表面有多个病灶且体积小ꎬ肿瘤块均匀分布于肝ꎬ图８Ｂ所示肝脏表面病灶单一且体积大ꎬ几乎覆盖于整个肝ꎬ肿瘤聚集生长不能渗透于整个肝ꎮ肺组织颜色发现ꎬ黄色的肺组织中有白色肿瘤转移灶见图８Ｃꎬ图９ＨＥ染色结果显示ꎬ肝脏原位肿瘤和肺转移可见肿瘤结节ꎮ３㊀讨论裸鼠原位肝癌模型一直以来都是肝癌研究领域的重要工具ꎬ对于肝癌发生㊁转移机制研究及抗肝癌新途径的探索都具有重要的应用价值[１３－１４]ꎮ目前ꎬ构建裸鼠原位肝癌模型的方法主要有肿瘤组织块植入法和细胞混悬液接种法[１５－１６]ꎬ但是这些方法都有各自的优缺点ꎮ本文通过两种不同的方法成功构建肝原位模型ꎬ并且成瘤率均为１００％ꎬ但组织块接种法只在肝种植部位局部生长ꎻ而细胞悬液法则整叶肝都能成瘤ꎬ且有明显的肝外转移ꎬ可能细胞容易扩散ꎬ更能模拟出肿瘤生长的微环境ꎮ本课题组在模型构建中ꎬ发现５０μＬ细胞体积大ꎬ肝容易破裂㊁部分细胞悬液溢出ꎻ建议尽量提高细胞浓度ꎬ减少注射体积ꎬ可减少肝损伤ꎬ避免肿瘤腹腔内广泛种植ꎮ本文研究了细胞悬液注射法和肿瘤组织块植入法两种方法建立的高转移性人肝癌细胞裸鼠原位肝癌模型肿瘤生长和转移情况ꎬ比较了绿色荧光蛋白[１７－１８]和荧光素酶[１９－２０]在裸鼠原位肝癌模型中的活体成像效果的差异ꎬ本实验选用了绿色荧光蛋白和荧光素酶作为报告基因ꎬ同时用于分子成像ꎬ综合了两者优势的同时弥补了彼此的不足ꎬ为以后研究者在选择构建便于活体观察且高转移的人肝癌裸鼠模型方面提供了帮助ꎮ图６㊀肝癌肿瘤组织块法移植瘤的手术过程Ｆｉｇｕｒｅ６㊀Ｓｕｒｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｄｕｒｅｏｆｔｕｍｏｒｔｉｓｓｕｅｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｆｏｒｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒ注:Ａ:Ｌｕｃ生物发光检测ꎻＢ:ＧＦＰ绿色荧光检测ꎮ图７㊀肿瘤组织块法的活体成像Ｎｏｔｅ.ＡꎬＬｕｃｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎ.ＢꎬＧＦＰｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎ.Ｆｉｇｕｒｅ７㊀Ｉｎｖｉｖｏｉｍａｇｉｎｇｏｆｔｕｍｏｒｔｉｓｓｕｅｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ注:Ａ:细胞悬液法种植肝原位肿瘤ꎻＢ:肿瘤组织块法种植肝原位肿瘤ꎻＣ:Ｂｏｕｉｎ ｓ染色后的组织ꎮ图８㊀肿瘤实体观察Ｎｏｔｅ.ＡꎬＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｂｙｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ.ＢꎬＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｂｙｔｕｍｏｒｔｉｓｓｕｅｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ.ＣꎬＢｏｕｉｎ ｓｓｔａｉｎｅｄｌｕｎｇｔｉｓｓｕｅ.Ｆｉｇｕｒｅ８㊀Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｔｕｍｏｒｅｎｔｉｔｉｅｓ注:Ａ肝脏原位肿瘤ꎻＢ肝脏肿瘤的肺转移ꎮ图９㊀肿瘤ＨＥ染色Ｎｏｔｅ.Ａꎬｌｉｖｅｒｔｕｍｏｒｉｎｓｉｔｕ.Ｂꎬｐｕｌｍｏｎａｒｙｍｅｔａｓｔａｓｉｓｏｆｌｉｖｅｒｔｕｍｏｒｓ.Ｆｉｇｕｒｅ９㊀ＴｕｍｏｒＨＥｓｔａｉｎｉｎｇ参考文献:[１]㊀ＡｈｍｅｄｉｎＪꎬＦｒｅｄｄｉｅＢꎬＭｅｌｉｓｓａＭＣꎬｅｔａｌ.Ｇｌｏｂａｌｃａｎｃｅｒｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ[Ｊ].ＣＡＣａｎｃｅｒＪＣｌｉｎꎬ２０１１ꎬ６１:６９－９０. 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[８]㊀ＰａｒｋＪＨꎬＫｉｍＫＩꎬＬｅｅＹＪꎬｅｔａｌ.Ｎｏｎ￣ｉｎｖａｓｉｖｅｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌμＬａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｉｎｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｍｏｕｓｅｗｉｔｈｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔｉｍａｇｉｎｇ[Ｊ].ＣａｎｃｅｒＬｅｔｔꎬ２０１１ꎬ３１０(１):５３－６０.[９]㊀ＣｈｏｕＳＴꎬＨｓｉａｎｇＣＹꎬＬｏＨＹꎬｅｔａｌ.Ｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎｏｆａｎｔｉ￣ｃａｎｃｅｒｅｆｆｅｃｔｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆＺｕｏ￣Ｊｉｎ￣ＷａｎａｎｄｉｔｓａｌｋａｌｏｉｄｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｉｎｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃＨｅｐＧ２ｘｅｎｏｇｒａｆｔｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｅｔｅｎｔｍｉｃｅ[Ｊ].ＢＭＣＣｏｍｐｌｅｍｅｎｔＡｌｔｅｒｎＭｅｄꎬ２０１７ꎬ１７(１):１２１.[１０]㊀ＬｉＧꎬＣｈｉＣＷꎬＳｈａｏＸＦꎬｅｔａｌ.ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｍｏｌｅｃμＬａｒｉｍａｇｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎｅｖａｌｕａｔｉｎｇｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆａｐｉｇｅｎｉｎｉｎｖｉｖｏｏｎｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｈｅｐａｔｏｃｅｌｌμＬａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ[Ｊ].ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎꎬ２０１７ꎬ４８７(１):１２２－１２７.[１１]㊀刘宇ꎬ陈恒伟ꎬ温悦婷ꎬ等.基于Ｔｅｔ￣Ｏｎ系统构建Ａｌｂ启动子调控猪ｕＰＡ转基因表达的慢病毒载体[Ｊ].中国比较医学杂志ꎬ２０１９ꎬ２９(５):２３－２８.[１２]㊀ＷａｎｇＱꎬＬｕａｎＷꎬＶａｄｉｍＧｏｚꎬｅｔａｌ.Ｎｏｎ￣ｉｎｖａｓｉｖｅｉｎｖｉｖｏｉｍａｇｉｎｇｆｏｒｌｉｖｅｒｔｕｍｏｒｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｕｓｉｎｇａｎｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｈｅｐａｔｏｃｅｌｌμＬａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｍｏｄｅｌｉｎｉｍｍｕｎｏｃｏｍｐｅｔｅｎｔｍｉｃｅ[Ｊ].ＬｉｖｅｒＩｎｔꎬ２０１１ꎬ３１(８):１２００－１２０８.[１３]㊀ＷｕＴꎬＨｅｕｉｌｌａｒｄＥꎬＬｉｎｄｎｅｒＶꎬｅｔａｌ.ＭｕｌｔｉｍｏｄａｌｉｍａｇｉｎｇｏｆａｈｕｍａｎｉｚｅｄｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃｍｏｄｅｌｏｆｈｅｐａｔｏｃｅｌｌμＬａｒｃａｒｃｉｎｏｍａｉｎｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｔｍｉｃｅ[Ｊ].ＳｃｉＲｅｐꎬ２０１６ꎬ６:３５２３０. [１４]㊀ＫｏｌｌｍａｒＯꎬＳｃｈｉｌｌｉｎｇＭＫꎬＭｅｎｇｅｒＭＤ.Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｉｖｅｒｍｅｔａｓｔａｓｉｓｓｔａｎｄａｒｄｓｆｏｒｌｏｃａｌｃｅｌｌｉｍｐｌａｎｔａｔｉｏｎｔｏｓｔｕｄｙｉｓｏｌａｔｅｄｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈｉｎｍｉｃｅ[Ｊ].ＣｌｉｎＥｘｐＭｅｔａｓｔａｓｉｓꎬ２００４ꎬ２１(５):４５３－４６０.[１５]㊀王诺ꎬ姚嘉琪ꎬ王弋ꎬ等.３种方法构建ＢＡＬＢ/ｃ裸鼠ＢＥＬ￣７４０２人肝癌模型[Ｊ].广州中医药大学学报ꎬ２０１９ꎬ３６(１):１１９－１２３.[１６]㊀ＨｏｆｆｍａｎꎬＲｏｂｅｒｔＭ.Ｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎｉｍａｇｉｎｇｏｆｔｕｍｏｕｒｇｒｏｗｔｈꎬｍｅｔａｓｔａｓｉｓꎬａｎｄａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｍｏｕｓｅｍｏｄｅｌｓ[Ｊ].ＬａｎｃｅｔＯｎｃｏｌꎬ２００２ꎬ３(９):５４６－５５６.[１７]㊀ＺｈａｎｇＱꎬＤｕＹꎬＸｕｅＺꎬｅｔａｌ.Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｔｈｅａｎｔｉ￣ａｎｇｉｏｇｅｎｉｃａｎｄａｎｔｉ￣ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔｓｏｆＥｎｄｏｓｔａｒｏｎｌｉｖｅｒｃａｎｃｅｒｔｈｒｏｕｇｈｏｐｔｉｃａｌｍｏｌｅｃμＬａｒｉｍａｇｉｎｇ[Ｊ].ＰＬｏＳＯｎｅꎬ２０１４ꎬ９(１):ｅ８５５５９.[１８]㊀ＳａｒｋｉｓｙａｎＫＳꎬＢｏｌｏｔｉｎＤＡꎬＭｅｅｒＭＶꎬｅｔａｌ.Ｌｏｃａｌｆｉｔｎｅｓｓｌａｎｄｓｃａｐｅｏｆｔｈｅｇｒｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔｐｒｏｔｅｉｎ[Ｊ].Ｎａｔｕｒｅꎬ２０１６ꎬ５３３(７６０３):３９７－４０１.[１９]㊀师长宏.基于近红外荧光制剂的多模态多功能分子影像技术在肿瘤模型中的应用[Ｊ].中国实验动物学报ꎬ２０１８ꎬ２６(２):２３４－２３８.[２０]㊀ＭｅｚｚａｎｏｔｔｅＬꎬｖａｎ ｔＲｏｏｔＭꎬＫａｒａｔａｓＨꎬｅｔａｌ.ＩｎｖｉｖｏｍｏｌｅｃμＬａｒｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇｎｅｗｔｏｏｌｓａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ[Ｊ].ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌꎬ２０１７ꎬ３５(７):６４０－６５２.收稿日期 ２０１９－０９－２７。
SD大鼠原位肝癌模型构建及影像学检查
SD大鼠原位肝癌模型构建及影像学检查李鑫;刘凤永;袁宏军;管阳;付金鑫;王茂强【摘要】目的探讨一种成瘤周期短、操作便捷、安全性高、适用于肝癌治疗研究的SD大鼠原位种植型肝癌模型制作方法,同时进行彩色超声、增强CT、MR等3种影像学检查和诊断.方法 20只SD大鼠随机分为McA-RH7777组和N1S1组,每组10只.称重后将McA-RH7777和N1S1肝癌细胞分别注入两组大鼠肝左中叶内,术后连续3 d腹腔注射青霉素(20万U/只)和地塞米松(2.5 mg/只),以抗感染和免疫抑制治疗.术后7 d,采用彩色超声、增强CT、MR鉴别肝脏肿瘤,记录模型鼠体重,取出肿瘤组织进行形态学观察和病理学检查.结果术后7 d,McA-RH7777组、N1S1组大鼠分别死亡2只、1只,影像学检查显示成活大鼠全部成瘤,建模成功率分别为80％(8/10)和90％(9/10),差异无统计学意义(P=0.86);大鼠体重分别减轻(50.00±24.93)g、(36.44±7.75)g;肿瘤体积分别为(316.43±265.84)mm3、(188.58±137.47)mm3.两组大鼠处死后,尸检结果与影像学检查一致;肉眼观察McA-RH7777肝癌外观呈团块状,N1S1肝癌呈结节状.HE染色显示McA-RH7777肝癌为高分化肝癌,N1S1肝癌为低分化肝癌.结论该方法能成功、高效地构建SD大鼠原位肝癌模型,同时通过不同影像学技术实现诊断和评价,为肿瘤介入治疗研究提供了一种可供选择的实验工具.【期刊名称】《介入放射学杂志》【年(卷),期】2018(027)012【总页数】5页(P1177-1181)【关键词】肝癌;大鼠;McA-RH7777肝癌细胞;N1S1肝癌细胞;动物模型;彩色超声;增强CT;磁共振成像【作者】李鑫;刘凤永;袁宏军;管阳;付金鑫;王茂强【作者单位】100853 北京解放军总医院介入放射科;100853 北京解放军总医院介入放射科;100853 北京解放军总医院介入放射科;100853 北京解放军总医院介入放射科;100853 北京解放军总医院介入放射科;100853 北京解放军总医院介入放射科【正文语种】中文【中图分类】R735.7目前临床上尚未出现原发性肝癌有效治疗方法，其发生、治疗、预后及进展等始终是医学研究热点和重点［1-2］。
人肝癌裸鼠移植模型的研究进展
Shijie Huaren Xiaohua Zazhi 200Biblioteka ;14(36):3500-3503
Research progress of human hepatocellular carcinoma models in nude mice
Pian Ye, Shu-Ling Zhang, Sheng-Hua Jie, Ji-Hua Dong Pian Ye, Shu-Ling Zhang, Sheng-Hua Jie, Ji-Hua Dong, Department of Infectious Disease, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China Correspondence to: Shu-Ling Zhang, Department of Infectious Disease, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China. yp_breezy@ Received: 2006-06-14 Accepted: 2006-08-10
Key Words: Hepatocellular carcinoma; Nude mouse; Transplantation; Animal Model
Ye P, Zhang SL, Jie SH, Dong JH. Research progress of human hepatocellular carcinoma models in nude mice.
人胃癌组织块裸鼠胃癌原位移植模型的建立实验具体方法及步骤
人胃癌组织块裸鼠胃癌原位移植模型的建立实验具体方法及步骤一、实验材料准备BALB /C nu /nu裸鼠12只，雌雄兼用，4～6周龄，体质量18～20 g，SPF级条件下饲养。
传代于裸鼠皮下的SGC-7901人胃癌细胞株。
二、裸鼠皮下移植瘤的建立和传代1. 收集体外培养的SGC-7901细胞，使细胞含量为5 x107 /ml，制成细胞悬液然后取0.2 ml注入裸鼠颈背部皮下。
2. 当皮下移植瘤长至直径为1 cm左右时无菌操作取出移植瘤，去除坏死组织，漂洗后，将瘤组织切成约1～2 mm的小块，研磨过滤制备成单细胞悬液局部注入另一只裸鼠颈背部皮下，如此成瘤后鼠间反复传5代。
三、原位移植模型的建立1. 将第5代致瘤的裸鼠脱颈处死后无菌操作取出第5代皮下移植瘤，剔除纤维包膜和坏死组织，选取生长良好呈淡红色鱼肉状的瘤组织用眼科剪切成1 mmx1 mm x2 mm的小块，浸泡于已配好的纤维蛋白原溶液中置于冰袋上备用。
2. 实验裸鼠术前禁食，以1 ml氯胺酮( 5 g/ml)腹腔注射麻醉后，固定四肢并进行常规皮肤消毒，选腹左侧正中切开皮肤1. 5 cm，逐步进腹，显露胃壁后将胃拉出，在胃大弯处近胃窦旁用1 ml无菌空针头划破胃壁浆肌层，植入3～4块瘤组织块，并在瘤表面滴上约10 μl凝血酶，使其覆盖瘤组织表面，约10 s左右待凝血酶与纤维蛋白原发生反应形成胶状物后，瘤组织块黏合在胃壁破损处，然后将胃壁口纳入腹腔。
3. 分别采用6-0缝合线缝合腹膜(含肌层) ，3-0缝合线缝合腹壁，关腹结束手术，以上操作均在超净台内进行，共建6例模型。
四、原位移植致瘤率及移植瘤侵袭和转移情况观察1. 移植术后精心饲养，定时观察所有裸鼠全身状况、进食情况、运动情况和腹部体征。
2. 当荷瘤鼠出现消瘦、精神萎靡及弓背等全身衰竭体征时，脱颈处死，探查腹腔中瘤体生长状况、有无腹腔积液形成及周围脏器受累情况。
3. 然后留取原位瘤组织，胸腹腔重要脏器胃、肺、肝、腹膜等组织，用10%甲醛固定后，石蜡包埋、切片、HE染色，进行组织病理学检查。
人肝癌裸小鼠模型的建立及其生物学特性的研究
人肝癌裸小鼠模型的建立及其生物学特性的研究
刘锡忠;胡敬群;崔惠云
【期刊名称】《中国医学科学院学报》
【年(卷),期】1995(17)2
【摘要】将７例原发性肝癌手术切除标一分别移植于ＢＡＬＢ／ｃ裸小鼠皮下，１例获得成功，并能在裸鼠体内连续传代。
１１个月内已传了１０代。
其潜伏期为１１ｄ左右，荷瘤鼠血清可测得甲脂蛋白、γ－谷氨酰转肽酶和酸性同工铁蛋白三种有意义的肝癌血清标记物。
移植癌病理结构与瘤原相似，其遗传学特征与人类恶性肿瘤相同。
【总页数】1页(P98)
【作者】刘锡忠;胡敬群;崔惠云
【作者单位】不详;不详
【正文语种】中文
【中图分类】R735.702
【相关文献】
1.人肝恶性淋巴瘤裸小鼠原位和皮下移植模型的建立及生物学特性的研究 [J], 张宁;脱帅;刘秋珍;杨波;王明耀;朱希伟
2.人肝原发性恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型的建立及生物学特性的研究 [J], 脱朝伟;刘秋珍;张宁;杨波;王明耀;朱希伟
3.人胃恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型的建立及其生物学特性的研究 [J], 脱朝伟;吴泽全;刘秋珍;张宁;王明耀
4.人胰腺癌裸小鼠模型的建立及其生物学特性的研究 [J], 李敏杰;陈永珍;何杨
5.人胰腺癌荷瘤裸小鼠模型的建立及其生物学特性的研究 [J], 张波;赵玉沛;邓一伶;张太平;刘卫平
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人肝原发性恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型的建立及生物学特性的研究
人肝原发性恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型的建立及生物学特性的研究脱朝伟;刘秋珍;张宁;杨波;王明耀;朱希伟【期刊名称】《解放军医学杂志》【年(卷),期】2005(30)10【摘要】目的为探讨肝原发性恶性淋巴瘤发病机制和为实验治疗提供动物模型.方法采用人肝原发性恶性淋巴瘤术中新鲜组织块植入裸小鼠肝实质内,观察原位移植成瘤率和移植瘤的侵袭、转移,并进行形态学(光镜、电镜、免疫组织化学)、血清学(AFP、乙型肝炎HBsAg、LDH)、染色体核型和流式细胞仪分析.结果在裸小鼠体内建成了一株人肝原发性恶性淋巴瘤原位移植模型(命名为HLBL-0102).移植瘤的病理组织学为肝原发性(非霍奇金B细胞性)恶性淋巴瘤,免疫组织化学显示,CD19、CD20、CD45RO、CD79a阳性,CD3、CD7阴性,血清学AFP阴性,HBsAg、HBsAb、HBeAb及 HBcAb均为阳性,LDH 1 267.5U/L.染色体众数范围55～59条;移植瘤细胞DI值1.57～1.61,均为异倍体.目前该瘤株在裸鼠体内生长3年,已经传至37代,共移植裸鼠283只;肿瘤的移植生长率和液氮冻存复苏成活率均为100%.人肝原发性恶性淋巴瘤在裸鼠肝内自主侵袭性生长,瘤细胞侵入并破坏临近肝组织和门脉区内胆管及静脉,无其他组织、器官侵犯及远处淋巴结累及.原位移植瘤组织经病理学和超微结构观察,流式细胞仪DNA含量测定及染色体核型的分析,结果表明与来源人肝原发性恶性淋巴瘤细胞相一致.结论 HLBL-0102是首次建立成功的人肝原发性恶性淋巴瘤裸鼠原位移植模型,完整地模拟了人肝原发性恶性淋巴瘤患者的临床过程,为研究肝原发性恶性淋巴瘤生物学和实验治疗提供了理想的动物模型.【总页数】4页(P877-880)【作者】脱朝伟;刘秋珍;张宁;杨波;王明耀;朱希伟【作者单位】110003,沈阳,解放军第202医院肝胆外科;110003,沈阳,解放军第202医院肝胆外科;110003,沈阳,解放军第202医院肝胆外科;110003,沈阳,解放军第202医院肝胆外科;110003,沈阳,解放军第202医院肝胆外科;110003,沈阳,解放军第202医院肝胆外科【正文语种】中文【中图分类】R735.7【相关文献】1.人原发性直肠恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型的建立及其生物学特性 [J], 刘秋珍;脱朝伟;张宁;杨波;朱希伟;王明耀2.人原发性胃恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型的建立 [J], 脱帅;刘秋珍;张宁;朱希伟;王明耀3.人脾原发性恶性淋巴瘤裸小鼠皮下及原位移植模型的建立 [J], 张宁;脱朝伟;刘秋珍;吴泽全4.人原发性结直肠恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植高转移模型的建立 [J], 刘秋珍;脱朝伟;张宁;杨波;王明耀5.人胃恶性淋巴瘤裸小鼠原位移植模型的建立及其生物学特性的研究 [J], 脱朝伟;吴泽全;刘秋珍;张宁;王明耀因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
大鼠肝癌模型的建立及影像学表现
大鼠肝癌模型的建立及影像学表现
张嘉宁;顾为望;许乙凯;吴清洪;袁进;邱添武
【期刊名称】《中国比较医学杂志》
【年(卷),期】1999(009)002
【摘要】用二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌,观察其影像学表现,同时与病理学进行对照.结果,30只雄性Wistar大鼠中,诱癌过程死亡13只,余17只经病理学检查,证实均成功诱发出肝癌灶.癌结节直径为0.2～2.5cm,每个肝脏平均有9±2.1个.其影像学特征为:平扫CT癌结节为略低密度区,增强扫描低密度影显示更加清楚;MRIT1加权像呈等或略低信号,T2加权像为高信号.认为化学诱导法建立的大鼠肝癌模型具有人肝癌相似的影像学表现,是一种适合于医学影像学研究的理想模型.
【总页数】4页(P98-101)
【作者】张嘉宁;顾为望;许乙凯;吴清洪;袁进;邱添武
【作者单位】第一军医大学实验动物中心,广州;第一军医大学实验动物中心,广州;第一军医大学南方医院影像中心;第一军医大学实验动物中心,广州;第一军医大学实验动物中心,广州;第一军医大学实验动物中心,广州
【正文语种】中文
【中图分类】Q95
【相关文献】
1.兔Vx-2移植性肝癌模型的建立及其影像学表现 [J], 张洪新;王执民;曹伟;郭卫平;王义清;李文献;倪代会;关彦;韩瑞炀;樊爱玲;刘毅勇
2.诱发性大鼠肝癌模型的建立 [J], 杨新宇;徐蓓蕾;沈芸
3.二乙基亚硝胺诱导建立Apc基因突变大鼠与F344大鼠肝癌模型的比较 [J], 谢蓓;赵磊;孙婧;张丽娟;库本高志;魏虎来
4.大鼠肝癌模型建立的研究进展 [J], 韦武;郭红星
5.兔VX_2肝癌模型的建立及其影像学表现 [J], 刘峰;孙业全;崔新江;吴圆圆;桑莉;王滨
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肝 癌细 胞系（ ｈ７ 裸 大 鼠原位 移植 模 型 ，并对 人 Ｈｕ ．）
肝 癌在 裸大 鼠体 内的 生物 学行 为进 行探 讨 。
下 。成瘤 后，用 组织 块移 植 的方 法连 续传 代 ， 成 形
稳定传 代 的皮 下移 植 瘤模 型，作为 瘤源 供试 验用 。 １ 人肝癌 裸大 鼠皮下移 植瘤 ． ３
裸 大 鼠人肝癌 原位模 型 的建 立
及其生 物 学特 性 的初步 观 察
沈 艳 彭秀华 一徐 春 华 一周文 江 １ ， ， ， ， ２ （． １上海 市公 共 卫生 床 中心 ， 海 ２ １０ ， ． Ｊ 毒 上 ０ ５ ８２ 复旦 大学 实验 动物科 学部 ， 海 ２０ ３ ） 上 ０ ０２ ［ 摘要］ 目的 探讨人肝癌原位移植后肿瘤在裸 大鼠（ ／ ｕ生长和转移等生物学特性。方法 Ｈｕ． ｍｕｎ） ｒ ｈ７ 细胞株接 种 于裸 小 鼠皮 下成瘤组 织块移植 于裸 大 鼠皮 下成瘤 ，之后 将裸 大 鼠皮下肿 瘤移植 至其肝 脏 以建立原位移 植模型 ，观 察所 建立模 型原位 成瘤率 、移植瘤 生长 、侵 袭和转移 情况 ，同时进行 病理组织 学 、超微 结构 、细胞增 殖 周期和异 倍体 的观 察 。结 果 原位 移植 瘤模 型裸 大 鼠成瘤 率
生长 活跃 的鱼 肉样 组织 ， 成直 径为 １ 剪 ｍｍ３ 的小块
６周龄 裸大 鼠（ ｕｒｕ （ ｒ： Ｈ． ｏ ｎ ）４只 、 ｒ ／ ） ｌ ｎ ｎ Ｃ ＮＩ Ｆ ｘ １２
【 收稿 日期】 ０ ００ —６ ２ １—４０ 【 者 简介 】 作 沈 艳 （９ ７）女， １７ ． ， 硕士 ， 主要 从 事 动物 模 型 的建
４８ ２
实验动物 ｌ 卜比较 医学 Ｌ ｂ ｒｔｒ Ａ ｉ ｌｎ ｏ ａａｖ ｄ ｉｅ ａｏａ ｙ ｎｍａａｄＣ ｍｐ ｒｔ ｅ ｏ ｉ Ｍｅｉ ｎ ｃ
ｄ ｉ ０３ ６ ￣ｉ ｎ１ ７ —８ ７２ １ ．６ ０ ｏ： ． ９ ． ｓ．６ ４５ １ ． ００ ． ８ １ ９ ｓ ０ ０
物 管理及动 物模 型建 的实验研究 。
Ｅｍａ ： ｊｈ ｕ ｈ ． ｕ ｎ — ｉ ｗ ｚｏ ＠ｓｍｕ ｄ ． ｌ ｅ ｃ
Ｄ ｃ ０ ０ ０６ ｅ ． １． （） ２ ３
实 验 动物 比较 医 学 Ｌ ｂ ｒｔｒ ｎｍａ ａｄ ｏ ａａｉ ｄｃ ｅ ａｏａ ｙＡ ｉ ｌｎ ｍｐｒｔ ｅ ｏ Ｃ ｖ Ｍｅ ｉｎ ｉ
立及 实 验研 究 。Ｅｍａ ：ｈ ｎ ａ ＠ｓａ ｈ ． ｇ ． ｉ ｓｅ ｙｎ ｈ ｐ ｃ ｒ ｌ ｏ 【 讯 作 者】 文江 （９ ３）男 ， 主 任技 师 ， 要 从事 实 验 动 通 周 １６ ． ， 副 主
用套 管 针分 别移 植 到裸 大 鼠右 侧近 腋 部皮 下 。 １ 人 肝癌裸 大鼠原位 移植瘤 模型建 立方法 ． ４ 将 裸大 鼠分两组， 每组 １ ０只， 实验分 ３批进行 。
裸 小 鼠 ５只 ，所有 动物均 为雌雄 兼用 ，饲 养于 Ｓ Ｆ Ｐ
屏障 系统 中［ ＣＸＫ（ ２ ０ — ０ １ 。体 重 分别 为 Ｓ 沪） ０ ５ ０ ０ 】 １ ０ １ ０ｇ和 １ ～ １ 。Ｓ Ｆ裸大 鼠于 ２ ０ 年 从 ３～ ５ ６ ８ｇ Ｐ ０６
前在 人类 常见的肿瘤 当中， 肝癌 在世界范围 内排第六 位（ 发病 率）每年 全世界 发病 ６ ． ， ２６万人， 其死 亡率在 世界 范 围 内排 第 三位 ，每 年 的死 亡率 达 到 ５ ．％。 ８９ 因此 ， 它是一个 危害人类 健康 的非常 重要 的疾 病 【。 近 年来 ， 国内 已利 用裸 小 鼠建立 了数 例人 肝 癌原 位移植 模 型【 ，其 中 ，复旦 大学肝 癌研 究所 ２】 ￣ 还建 立 了高、低转 移裸 小 鼠模 型 。但 利用 裸大 鼠
供 ， １ ％ＤＭＥＭ 常 规 培养 传 代 。 １２ 瘤 源制备 ．
将 冻存 的人肝 癌细 胞复 苏， 体外培 养至对 数 生
长时离心， Ｂ Ｐ Ｓ冲洗后， 制成细胞浓度 为 ２× １７ ／ ， ０个 ｍｌ
以 ０２ ｍｌ ． 的剂 量 移植 于裸 小 鼠右 侧近 前 腋背 部 皮
建 立此 类 动 物模 型 ，报 道很 少 。本 实验 是 建 立 人
美 国 Ｃ ａｌｓＲ ｖ ｒ ａ ｏａｏｉｓ ｈ ｒ ｉｅ ｂ ｒｔｒ 引进 后繁殖 ，Ｓ Ｆ ｅ Ｌ ｅ Ｐ 裸小 鼠由本单位 提供 ［ＹＸＫ 沪）０ ５０ ０ 】 Ｓ （ ２ ０ ．０ ７ ，人肝 癌细胞系（ ｕ 一） 瘤细胞株 由上 海市肿瘤研 究所 提 Ｈ ｈ７肿
［ 中图分类号】 ５３ ［ Ｑ９ —３ 文献标 识码］ ［ Ａ 文章编 号】 ６ ４５ １ （０ ００ ．４ ８０ １７ —８ ７２ １）６０ ２ —４
原发性肝癌 （ｒ ｒ ｅ ａｏ ｅｌａ ａｃｎ ｍａ Ｐｉ ｙＨ ｐ ｔｃ ｌ ｒ ｒｉｏ ） ｍａ ｕ Ｃ 是一种常见 的恶性肿瘤 ， 是我 国和某些 亚洲地 区常见 的恶性 肿瘤之 一， 国近年 发病 率呈 增高趋 势 。 目 我
１ 材料与方法
１１ 实验动物 及细胞株 ．
取裸 大 鼠 ４只 ，待 成 瘤裸 小 鼠瘤长 至 直径 为 １ ｍ 时 ，脱 颈法 处 死动 物 ，浸 泡入 ７ ％ 乙醇 ～２ ｃ ５ 中全 身 消 毒 ，在 超 净 Ｔ 作 台 中分 离 实 体肿 瘤 ，放 入无菌 的生理 盐水 中， 再用 无菌 生理 盐水清洗 两次 ， 选择无坏死 的新鲜肿瘤 组织 ， 眼科 剪剪取肿瘤边缘 用
高达 ９ ．％，其肺转移 率形成率 为 ５ ．％。结论 应用裸 大 鼠建 立肝癌原位 移植模型 ，为探 讨肝 ０ ０ ００
癌 转移 的生物 学机 制和抗 转移 治疗提供 了理 想 的实验动物模 型 。 【 关键词 】 大 鼠（ ｕｒｕ ； 裸 ｒ ／ ） 皮下移植 ； ｎ ｎ 原位 移植 ； 癌 肝