生化检验中的定标
生化仪器中的空白定标和质控
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第二,标准液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准 确。吸光度受仪器状况、试剂状况的影响,如果您 的仪器相当稳定,试剂是影响K值的一个主要因素。 如何确定K值是正确的? 一般我们用质控血清来检 查,最好是两种水平的质控来检查,如果质控结果 很好,可以说K值是准确的,用这个K值计算出来病 人的结果也是准确的,所以K值非常关键。 K值的真 面目: K值实际上代表了斜率,截距代表试剂空白, 试剂空白每天都在变化,所以K值的稳定性决定您 的仪器与试剂,如果仪器与试剂都十分稳定,那K 值也很稳定。 多长时间定一次标合适? 这要看您 试剂的稳定性,质控结果不好,有些项目做试剂空 白可以解决,有些项目要做两点定标。 酶的项目如 何确定K值: 一是计算出来的理论K值; K = (TV × 1000)/(SV × L × ε) 二是用有酶项目的定标液得出K 值:目前各公司可以提供多项目的定标液,不仅有 底物类的项目,也有酶类的项目。
(仪器的精度、波长的准确度) 检测方法的选择和评价 (重复实验、回收实验、干扰实验、方法比较实验) 试剂和标准品的选择和评价 (线性范围测定、反应曲线的观察、稳定性实验) 标本准备 (血清、血浆、胸腹水等)
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生化检验中的各种空白概念
1、试剂空白: 由于生化测试测量的吸 光度为相对吸光度,所以从理论上说,所 有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光 度扣除。试剂本身的吸光度就是 试剂空白。 测量方法是按照正常测试的试剂和样本量
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把样本换成蒸馏水来测量。 在传统手工方法 中,每次测定都要做至少三个管:测定管、标准管、 空白管。其中空白管是试剂加蒸馏水,测出来也 就是试剂空白。因为 操作环境、仪器状态、试剂
生化定标及质控操作说明
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生化定标及质控操作说明生化定标及质控操作说明1.引言1.1 目的本文档旨在提供关于生化定标及质控操作的详细说明,以确保实验室能够准确、可靠地进行生化定标及质控工作。
1.2 适用范围本文档适用于实验室中进行生化定标及质控的操作人员。
2.定标操作2.1 实验室准备①确保实验室设备齐全,包括定标仪器、试剂等。
②根据实验需要准备样品及标准溶液。
2.2 标准曲线制备①根据实验要求选择适当的标准品。
②针对每个标准品制备一系列浓度的标准溶液。
③依次将所有标准溶液按照特定的顺序加入定标板。
④使用定标仪器对标准溶液中的目标物进行测试,记录各标准溶液的测量值。
2.3 标准曲线拟合①将记录的标准溶液测量值与对应的标准品浓度建立图表。
②使用拟合软件将标准曲线拟合成一条直线。
2.4 样品测试与计算①取样品,按照实验要求进行预处理。
②使用定标仪器对样品进行测试,记录测量值。
③根据标准曲线和测量值计算样品中目标物的浓度。
3.质控操作3.1 质控样品准备①确定质控样品的来源和类型。
②根据要求制备质控样品。
3.2 质控样品测试与计算①将质控样品按照实验要求进行预处理。
②使用定标仪器对质控样品进行测试,记录测量值。
③根据标准曲线和测量值计算质控样品中目标物的浓度。
3.3 质控数据分析①将质控样品的测量结果与参考范围进行比较。
②分析质控数据,记录并纠正异常结果。
附件:1.标准曲线拟合图表2.样品测试记录表3.质控样品测试记录表法律名词及注释:1.样品●源自生物体的物质,通常用于实验分析。
2.标准溶液●已知浓度的溶液,用于定量分析的参考。
3.标准曲线●通过一系列标准溶液的测量值与浓度建立的曲线,用于计算样品中目标物的浓度。
4.质控样品●用于验证分析方法准确性和稳定性的样品。
5.参考范围●表示特定目标物在正常生理状态下的范围。
生化检验中的定标
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精心整理定标的意义:定标就是要找出一个参考点,就是一个K值(或F值)。
它是由仪器与试剂共同确定下来。
当我们测定一个标本时,无论是手工或全自动生化分析仪,测出来的值只是一个吸光度,这个吸光度对我们没有什么意义,我们要把这个吸光度转化成一个浓度或是酶的活性,那就要乘上一个K值,计算出来的结果对我们就有意义了。
K值就是我们通过定标找出来的。
一般来说测定K值的最低要求是用标准品和试剂空白来测定,经过仪器测定出这两个吸光度,即标准品的吸光度和试剂空白的吸光度。
K=标准浓度/(A标准-A试剂空白)PS:A表示吸光度以K值就得到了其浓度值。
因此,KK值的决定因素:我们看看K值会受到什么影响呢?K值是准确的,用这K值的稳定性由仪器与试剂决定,多长时间定一次标合适?这要看您试剂的稳定性,质控结果不好,有些项目做试剂空白可以解决,有些项目要做两点定标。
酶的项目如何确定K值:一是计算出来的理论K值;K=(TV×1000)/(SV×L×ε)二是用有酶项目的定标液得出K值(K=标准浓度/(A标准-A试剂空白)):目前各公司可以提供多项目的定标液,不仅有底物类的项目,也有酶类的项目。
生化检验中的各种空白概念时间:2009-5-8 9:54:09,点击:?61 对所谓"试剂空白""样本空白""水空白""杯空白"等"空白"名词,有些同行可能感到困惑.特此汇集了一下各种言论(包括本论坛高手们发表的一些意见)并结合自己的理解,总结如下,希望大家指正和补充:2、样本空白:???由于溶血、脂血、黄疸等情况,会导致样本本身的吸光度对测试结果造成影响。
所以对样本本身吸光度的测量,即样本空白,可以去除这方面的影响。
测量方法是按照正常测试的试剂和样本量,把试剂换成蒸馏水或生理盐水来进行测量。
自动生化仪上,很难界定样本空白。
生化定标及质控操作说明
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生化定标及质控操作说明⊙定标液及质控液在溶解之后避光、-20℃保存一个月一.定标程序1.设置定标液:点击定标→定标液设置一般选用的都是线性定标;设置2个定标点一个是蒸馏水,另一个是定标液。
(蒸馏水要求是干净新鲜的,要是没有蒸馏水就使用0.9%的生理盐水代替,不要用注射器抽取生理盐水那样瓶塞会污染生理盐水,直接倒出适量生理盐水即可)再点击添加设置①名称:例如:水②批号、浓度水平一般无意义可以不设置③有效期:尽量设的时间长一些,在每次定标的时候要注意是否超过有效期,保证定标过程顺利④位置:因为样本检测是从1盘开始的,所以设置的时候设置虚拟盘例如:10盘作为定标的专用位置,此位置不能进行其他测试,只能用于定标⑤在项目列表一栏选中项目,并将定标项目的靶值浓度输入浓度一栏。
设置完成后点击确认。
2.设置定标规则点击参数→项目设置→选中项目→点击定标规则→在定标列表中选中所使用的定标液→重复测量次数为3.每个项目都要设置3.定标申请①点击定标→点击定标申请,在定标类型上选择定标,在项目选择选择要定标的项目(注明:使用双试剂终点法检测的项目如:TB、DB、GLu、UA四个项目要做试剂空白,需要在定标类型上选择试剂空白,然后在项目选择中选择以上四个项目)然后点击确认。
②将蒸馏水放在样本盘1号位置,把定标液放在2号位置。
点击换杯换上干净杯子。
因为一个项目的定标需要6个杯子,所以要保证杯子够用。
4.质控定标做的好不好主要是看质控做的怎么样。
做完定标后接着做质控。
(1)设置质控液点击质控→点击质控液设置→设置①批号、有效期一定是质控液上标示的数字②位置:1号盘40号位,此位置是质控专用位置,不可用于样本检测,如果样本量多,可将样本编在2号盘上。
在项目列表一栏上选择项目并填上质控液的浓度和标准差,全部设置好后,点击确认。
(2)操作做质控有两种方法,一种是:把质控当样本做。
第二种是点击质控申请,选中项目进行测试,此过程查询结果比较麻烦。
生化检验中的定标 各种空白
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定标的意义:定标就是要找出一个参考点,就是一个K值(或F值)。
它是由仪器与试剂状态确定下来的。
当我们测定一个标本时,无论您是用手工的方法或全自动生化分析仪,测出来的值只是一个吸光度,这个吸光度对我们没有什么意义,我们要把这个吸光度转化成一个浓度或是酶的活性。
那就要乘上一个K值,计算并打印出来的结果对我们就有意义了。
K值就是我们通过定标找出来的。
一般上最低要求是由试剂空白与标准品。
经过仪器测定出两个吸光度。
K=标准浓度/(A标准-A试剂空白)标准液的浓度我们是知道的,这两个吸光度可以由仪器测出,这样就得出一个K值。
无论什么样的标本,用其吸光度乘以K值我们就得到了答案。
因此,K值具有非常决定性的意义,可以决定标本的准确性。
K值的决定因素:我们看看K值会受到什么影响呢?第一,标准液的浓度一定要准确(标准液最好与标本一样是以血清为基质的)。
第二,标准液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准确。
吸光度受仪器状况、试剂状况的影响,如果您的仪器相当稳定,试剂是影响K值的一个主要因素。
如何确定K值是正确的?一般我们用质控血清来检查,最好是两种水平的质控来检查,如果质控结果很好,可以说K 值是准确的,用这个K值计算出来病人的结果也是准确的,所以K值非常关键。
K值的真面目:K值实际上代表了斜率,截距代表试剂空白,试剂空白每天都在变化,所以K值的稳定性决定您的仪器与试剂,如果仪器与试剂都十分稳定,那K值也很稳定。
多长时间定一次标合适?这要看您试剂的稳定性,质控结果不好,有些项目做试剂空白可以解决,有些项目要做两点定标。
酶的项目如何确定K值:一是计算出来的理论K值;K = (TV × 1000)/(SV × L × ε)二是用有酶项目的定标液得出K值:目前各公司可以提供多项目的定标液,不仅有底物类的项目,也有酶类的项目。
生化检验中的各种空白概念时间:2009-5-8 9:54:09,点击:61 对所谓"试剂空白""样本空白""水空白""杯空白"等"空白"名词,有些同行可能感到困惑.特此汇集了一下各种言论(包括本论坛高手们发表的一些意见)并结合自己的理解,总结如下,希望大家指正和补充:空白概念区别要点:**空白=只含**的空白(吸光度)1、试剂空白:由于生化测试测量的吸光度为相对吸光度,所以从理论上说,所有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光度扣除。
生化检验中的定标

生化检验中的定标集团标准化办公室:[VV986T-J682P28-JP266L8-68PNN]定标的意义:定标就是要找出一个参考点,就是一个K值(或F值)。
它是由仪器与试剂共同确定下来。
当我们测定一个标本时,无论是手工或全自动生化分析仪,测出来的值只是一个吸光度,这个吸光度对我们没有什么意义,我们要把这个吸光度转化成一个浓度或是酶的活性,那就要乘上一个K值,计算出来的结果对我们就有意义了。
K 值就是我们通过定标找出来的。
一般来说测定K值的最低要求是用标准品和试剂空白来测定,经过仪器测定出这两个吸光度,即标准品的吸光度和试剂空白的吸光度。
K=标准浓度/(A标准-A试剂空白)PS:A表示吸光度标准液的浓度我们是知道的,这两个吸光度可以由仪器测出,这样就得出一个K值。
任何标本,用其吸光度乘以K值就得到了其浓度值。
因此,K值具有非常决定性的意义,可以决定标本的准确性。
K值的决定因素:我们看看K值会受到什么影响呢?第一,标准液的浓度一定要准确(标准液最好与标本一样是以血清为基质的)。
第二,标准液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准确。
吸光度受仪器、试剂的影响,如果仪器稳定,试剂也稳定,那K值就稳定。
仪器和试剂是影响K值的主要因素。
如何确定K值是准确的?一般我们用质控血清来检查,最好是两种水平的质控来检查,如果质控结果很好,可以说K值是准确的,用这个K值计算出来病人的结果也是准确的,所以K值非常关键。
K值的真面目:K值实际上代表了斜率,截距代表试剂空白,试剂空白每天都在变化,所以K值的稳定性由仪器与试剂决定,如果仪器与试剂都十分稳定,那K值也很稳定。
多长时间定一次标合适?这要看您试剂的稳定性,质控结果不好,有些项目做试剂空白可以解决,有些项目要做两点定标。
酶的项目如何确定K值:一是计算出来的理论K值;K=(TV×1000)/(SV×L×ε)二是用有酶项目的定标液得出K值(K=标准浓度/(A标准-A试剂空白)):目前各公司可以提供多项目的定标液,不仅有底物类的项目,也有酶类的项目。
生化检验中的定标修订版
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生化检验中的定标 Document number:PBGCG-0857-BTDO-0089-PTT1998定标的意义:定标就是要找出一个参考点,就是一个K值(或F值)。
它是由仪器与试剂共同确定下来。
当我们测定一个标本时,无论是手工或全自动生化分析仪,测出来的值只是一个吸光度,这个吸光度对我们没有什么意义,我们要把这个吸光度转化成一个浓度或是酶的活性,那就要乘上一个K值,计算出来的结果对我们就有意义了。
K值就是我们通过定标找出来的。
一般来说测定K值的最低要求是用标准品和试剂空白来测定,经过仪器测定出这两个吸光度,即标准品的吸光度和试剂空白的吸光度。
K=标准浓度/(A标准-A试剂空白) PS:A表示吸光度标准液的浓度我们是知道的,这两个吸光度可以由仪器测出,这样就得出一个K值。
任何标本,用其吸光度乘以K值就得到了其浓度值。
因此,K值具有非常决定性的意义,可以决定标本的准确性。
K值的决定因素:我们看看K值会受到什么影响呢第一,标准液的浓度一定要准确(标准液最好与标本一样是以血清为基质的)。
第二,标准液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准确。
吸光度受仪器、试剂的影响,如果仪器稳定,试剂也稳定,那K值就稳定。
仪器和试剂是影响K值的主要因素。
如何确定K值是准确的一般我们用质控血清来检查,最好是两种水平的质控来检查,如果质控结果很好,可以说K值是准确的,用这个K值计算出来病人的结果也是准确的,所以K值非常关键。
K值的真面目:K值实际上代表了斜率,截距代表试剂空白,试剂空白每天都在变化,所以K值的稳定性由仪器与试剂决定,如果仪器与试剂都十分稳定,那K值也很稳定。
多长时间定一次标合适这要看您试剂的稳定性,质控结果不好,有些项目做试剂空白可以解决,有些项目要做两点定标。
酶的项目如何确定K值:一是计算出来的理论K值;K = (TV × 1000)/(SV × L × ε)二是用有酶项目的定标液得出K值(K=标准浓度/(A标准-A试剂空白)):目前各公司可以提供多项目的定标液,不仅有底物类的项目,也有酶类的项目。
检验科生化定标做什么?

检验科生化定标做什么?一、为什么要进行生化定标?因为生化分析仪检测的数值是吸光度(A)值,而检验报告单显示的是浓度值(或活力单位)。
定标,就是要找出一个参考点,就是一个K值(或F值)。
它是由仪器与试剂状态确定下来的,当我们测定一个标本时,无论是用手工的方法或全自动生化分析仪,测出来的值只是一个吸光度,这个吸光度对我们没有什么意义,我们要把这个吸光度值转化成一个浓度或酶的活性,那就要乘上一个K值(或F值)。
定标,即测定已知浓度(或活力单位)的校准品,根据生化仪测得的吸光度,进行拟合,得到浓度和吸光度之间的关系曲线—校准曲线,将样本+试剂反应的吸光度带入校准曲线,就可以得到浓度。
数据拟合又称曲线拟合,俗称拉曲线,是一种把现有数据透过数学方法来代入一条数式的表示方式。
科学和工程问题可以通过诸如采样、实验等方法获得若干离散的数据,根据这些数据,我们往往希望得到一个连续的函数(也就是曲线)或者更加密集的离散方程与已知数据相吻合,这过程就叫做拟合(fitting)。
在数值分析中,曲线拟合就是用解析表达式逼近离散数据,即离散数据的公式化[1]。
二、定标类型有哪些?定标类型通常由试剂厂家提供相应参数,下列定标类型以AU5800为例。
1、单个浓度标准品定标:标准类型为AB,如GLU、TP、ALB、UA、UREA等项目检测。
计算公式为Y=AX+B,定标时以水作为零点,标准液作为另一点,建立标准曲线。
2、多个浓度标准品定标:定标类型为5AB或6AB,定标品浓度常用倍比稀释梯度递减,如APOA1、APOB、LP(a)、CRP、PA等项目检测。
计算公式为样条函数法(spline)。
3、两个浓度标准品定标:定标类型2AB,常用于Hcy、FMN、HDLC、LDLC等项目检测。
计算公式为折线法(polygonal)。
4、MB类型因子: 其实就是人工定标的因数,也就是手工输入常数K值。
当选择MB定标时常数K必须输入,常用于连续监测法测定酶类,如ALT、AST、ALP、GGT、CK等项目检测。
生化检验中的定标

生化检验中的定标 Document number:PBGCG-0857-BTDO-0089-PTT1998定标的意义:定标就是要找出一个参考点,就是一个K值(或F值)。
它是由仪器与试剂共同确定下来。
当我们测定一个标本时,无论是手工或全自动生化分析仪,测出来的值只是一个吸光度,这个吸光度对我们没有什么意义,我们要把这个吸光度转化成一个浓度或是酶的活性,那就要乘上一个K值,计算出来的结果对我们就有意义了。
K值就是我们通过定标找出来的。
一般来说测定K值的最低要求是用标准品和试剂空白来测定,经过仪器测定出这两个吸光度,即标准品的吸光度和试剂空白的吸光度。
K=标准浓度/(A标准-A试剂空白) PS:A表示吸光度标准液的浓度我们是知道的,这两个吸光度可以由仪器测出,这样就得出一个K值。
任何标本,用其吸光度乘以K值就得到了其浓度值。
因此,K值具有非常决定性的意义,可以决定标本的准确性。
K值的决定因素:我们看看K值会受到什么影响呢?第一,标准液的浓度一定要准确(标准液最好与标本一样是以血清为基质的)。
第二,标准液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准确。
吸光度受仪器、试剂的影响,如果仪器稳定,试剂也稳定,那K值就稳定。
仪器和试剂是影响K值的主要因素。
如何确定K值是准确的?一般我们用质控血清来检查,最好是两种水平的质控来检查,如果质控结果很好,可以说K值是准确的,用这个K值计算出来病人的结果也是准确的,所以K值非常关键。
K值的真面目:K值实际上代表了斜率,截距代表试剂空白,试剂空白每天都在变化,所以K值的稳定性由仪器与试剂决定,如果仪器与试剂都十分稳定,那K值也很稳定。
多长时间定一次标合适?这要看您试剂的稳定性,质控结果不好,有些项目做试剂空白可以解决,有些项目要做两点定标。
酶的项目如何确定K值:一是计算出来的理论K值;K = (TV × 1000)/(SV × L × ε)二是用有酶项目的定标液得出K值(K=标准浓度/(A标准-A试剂空白)):目前各公司可以提供多项目的定标液,不仅有底物类的项目,也有酶类的项目。
检验科生化定标做什么?

检验科生化定标做什么?检验科在进行检验时,为保证检测结果的准确性,通常会对生化分析仪进行定标处理。
生化分析仪定标的目的就是要保证其测量的准确性,主要原因在于生物化学分析仪校准的好坏将会对测试的准确率产生很大的影响,所以必须要经过校准之后,再进行临床检验。
一、什么是定标所谓的定标,就是要找到一个参数,也就是K值,也可将其称作F值,本文将以K值为主要称呼,其是通过设备和药剂状态而得到的。
我们在做样品的时候,不管是手动检测,还是用自动化的化学分析器,都只能测量一个吸收率,这时吸收率对检测工作来说没有任何意义,所以要用该吸光度来转化其浓度或者酶的活性那么其价值就会被 K所乘以,计算和输出对进行生化检测来说是有意义的。
K就是用比例计算出来的。
通常情况下,需要有一份空白和一份样品,通过设备检测,可以得到两种不同的吸收率:K=(标准浓度-试剂空白)/(A标准- A试剂空白),这时试剂空白通常为0,标准溶液的浓度大家都清楚,通过设备可以测量倒吸光度,所以能够获得一个 K值。
不管是哪种样品,都可以用其吸收能力乘以K值进行计算。
所以 K值具有极高的选择性,可以对样本进行精确的筛选。
二、K值的含义K值实际上代表了斜率,截距代表了试剂空白,试剂空白每天都在改动,所以K值的安稳性选择您的仪器与试剂,假设仪器与试剂都很安稳,那K值也很安稳。
K值分为计算K值和实测K值,以ALT例,先测定在线性范围内每分钟吸光度的变化(ΔA/min),以U/L代表酶活性浓度时,则可按下式进行计算U/L=△A/min×K==△A/min×Vt×1000/(Lp×ε×Vs)式中Vt的为反应总体积;Vs为样品体积;ε为对NADH的毫摩尔吸光系数6.22;将U/ml转换成U/L;Lp为比色杯光径(cm)。
当条件固定时,从理论上讲Vt、Vs和Lp均为固定值,ε值为常数,所以常数K是恒定的。
常数K值的选择很重要,比值过高虽然测定的线性范围较宽,但重复性差,反之,虽然精密度好,但线性窄。
生化仪器中的空白定标和质控

(二)分析中质控
建立项目操作程序 标准化的操作规程(SOP文件)。 室内质控和结果分析 对各个项目进行室内质量控制,并对质控结 果进行分析与处理。
(三)分析后质控
审核实验结果 室内质控的数据管理 参加室间质量评价 建立投诉调查与反馈机制
二、临床生化检验室内质量控制
(一)、概念与意义 室内质量控制:指各实验室为了监测和评 价本实验室工作质量,以决定常规检验报 告能否发出,而采取的一系列检查,控制 手段,包括实验室工作的全过程。 意义:是检测常规工作中的精密度,并观 察准确度的改变,提高本实验室常规工作 中天内与天间标本检测的一致性。
室内质控的结果分析 (1)测定值的分布规律 ①95%的测定结果应落在X±2SD范围内。 ②不能有连续5次结果逐渐上升或下降。 ③不能有连续5次结果在均值的同一侧。 ④不能有连续2次结果在X±2SD 以外。 ⑤不能有数据落在X±3SD 外。
如违反上述规律时,称为失控。
(2)质控图的几种 失控表现 ①曲线漂移:是由于 系统误差造成,准确 度发生了一次性的向 上或向下的改变,这 种往往是由于一个突 然出现的新的情况引 起。如更换质控血清、 试剂及操作人员。
室内质控血清浓度水平要求
1、三级以上医院的临床实验室,定量测 定每批(不超过24小时)至少使用两个浓度水 平的质控血清。 2、二级、一级医院临床实验室,至少使 用一个浓度水平(医学决定水平)的质控血清。
3、医学决定水平:是指某项待测物的含 量,围绕该浓度的升高或降低,对确定疾 病的诊断或治疗起帮助甚至关键的作用。
胆红素等反应 掉,再加入R2开始测定反应。在一 定范围内都可以消除样本空白。 c).现代全自动 生化仪大多采用双波长测定.双波长测定的原则是 根据干扰组分和待测物质吸收光谱的峰形特征, 选择两个波长和 ,使干扰组分在这两个波长处的 吸光系数相等,而使待测物质在两波长处的吸光 系数有显著差别。以两波长分别测定分析溶液的 吸光度, 以两个吸光度值之差(△A)计算。这也可 以扣除一部分样本空白. d).有些仪器,例如日立 系列,有专门的“血清信息”功能的设置。做法都 是单 独占用一个空白通道来计算,这也叫做样品 空白校准。 3、水空白: 比色杯在加入水以后 的吸光度。水空白的意义主要是对光路系统进行 检查和校正,如光源,比色杯等,同时在计算中 起到消除“杯差”的 作用。日立7060中的Cell Blank(杯空白)测定的就是水空白。
生化仪器定标的流程

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定标的意义:
定标就是要找出一个参考点,就是一个K值(或F值)。
它是由仪器与试剂共同确定下来。
当我们测定一个标本时,无论是手工或全自动生化分析仪,测出来的值只是一个吸光度,这个吸光度对我们没有什么意义,我们要把这个吸光度转化成一个浓度或是酶的活性,那就要乘上一个K值,计算出来的结果对我们就有意义了。
K值就是我们通过定标找出来的。
一般来说测定K值的最低要求是用标准品和试剂空白来测定,经过仪器测定出这两个吸光度,即标准品的吸光度和试剂空白的吸光度。
K=标准浓度/(A标准-A试剂空白) PS:A表示吸光度
标准液的浓度我们是知道的,这两个吸光度可以由仪器测出,这样就得出一个K值。
任何标本,用其吸光度乘以K值就得到了其浓度值。
因此,K值具有非常决定性的意义,可以决定标本的准确性。
K值的决定因素:
我们看看K值会受到什么影响呢?
第一,标准液的浓度一定要准确(标准液最好与标本一样是以血清为基质的)。
第二,标准液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准确。
吸光度受仪器、试剂的影响,如果仪器稳定,试剂也稳定,那K值就稳定。
仪器和试剂是影响K值的主要因素。
如何确定K值是准确的?
一般我们用质控血清来检查,最好是两种水平的质控来检查,如果质控结果很好,可以说K 值是准确的,用这个K值计算出来病人的结果也是准确的,所以K值非常关键。
K值的真面目:
K值实际上代表了斜率,截距代表试剂空白,试剂空白每天都在变化,所以K值的稳定性由仪器与试剂决定,如果仪器与试剂都十分稳定,那K值也很稳定。
多长时间定一次标合适?
这要看您试剂的稳定性,质控结果不好,有些项目做试剂空白可以解决,有些项目要做两点定标。
酶的项目如何确定K值:
一是计算出来的理论K值;
K = (TV × 1000)/(SV × L × ε)
二是用有酶项目的定标液得出K值(K=标准浓度/(A标准-A试剂空白)):目前各公司可以提供多项目的定标液,不仅有底物类的项目,也有酶类的项目。
生化检验中的各种空白概念
时间:2009-5-8 9:54:09,点击:61 对所谓"试剂空白""样本空白""水空白""杯空白"等"空白"名词,有些同行可能感到困惑.特此汇集了一下各种言论(包括本论坛高手们发表的一些意见)并结合自己的理解,总结如下,希望大家指正和补充:
空白概念区别要点:**空白=只含**的空白(只含**的吸光度)
1、试剂空白:
由于生化测试测量的吸光度为相对吸光度,所以从理论上说,所有终点法的测试都需要把试剂本身的吸光度扣除,试剂本身的吸光度就是试剂空白。
测量方法是按照正常测试的试剂和样本量,把样本换成蒸馏水来测量。
在传统手工方法中,每次测定都要做至少三个管:测定管、标准管、空白管。
其中空白管是试剂加蒸馏水,测出来也就是试剂空白。
因为操作环境、仪器状态、试剂稳定性等变异,所以要求每次都要测定试剂空白,称为实时试剂空白。
在全自动分析仪上,大体上是模拟手工操作。
但许多全自动分析仪为追求速度,在设计上采用一些折中方法来测定试剂空白。
以日立全系列生化仪为例。
该系列分析仪是做不了实时试剂空白,因为它们全是先加入样本后加试剂,为了折中,只好在定标时做一个试剂空白,保存起来,需要扣除试剂空白时再减这个预先保存的值。
这种做法,对于比较稳定的试剂来讲,对结果影响不大。
通俗的讲,日立的仪器工作流程中首先是将标本加入到比色杯中,然后依次加入R1
试剂、R2试剂,所以试剂空白在每个测定项目曲线中是无法看到的。
但是7170从CALIBRATION 中是可以看到的,S1ABS就是代表试剂空白吸光度,在CALIBRAT ION画面里的下方找到Reaction Monitor(反应监察),其中STD(1)就是代表试剂空白反应曲线.为了减小误差,日立仪器会连续做两次测定,所以你看到 FIRST和SECOND两条,计算时是取他们的平均值。
做试剂空白目的之一就是观察试剂是否稳定,积极采取措施纠正。
对于日立的这种试剂空白测定很多仪器都采用这种方法,也叫做试剂空白校准。
总的说来,自动生化仪上的试剂空白一般表现为零点吸光度,该吸光度是通过校准确立的。
2、样本空白:
由于溶血、脂血、黄疸等情况,会导致样本本身的吸光度对测试结果造成影响。
所以对样本本身吸光度的测量,即样本空白,可以去除这方面的影响。
测量方法是按照正常测试的试
剂和样本量,把试剂换成蒸馏水或生理盐水来进行测量。
自动生化仪上,很难界定样本空白。
消除样本空白有关的大约有如下几点:
a).在双试剂测定时,加入试剂1和样品后的吸光度可一定程度上扣除样本空白,所以有单试剂不能扣除样本空白的说法。
b).现在优质的试剂的抗干扰能力都比较强,比如有些双试剂,R1加入后先和样本孵育一段时间,将血红蛋白、脂肪、胆红素等反应掉,再加入R2开始测定反应。
在一定范围内都可以消除样本空白。
c).现代全自动生化仪大多采用双波长测定.双波长测定的原则是根据干扰组分和待测物质吸收光谱的峰形特征,选择两个波长和,使干扰组分在这两个波长处的吸光系数相等,而使待测物质在两波长处的吸光系数有显著差别。
以两波长分别测定分析溶液的吸光度,以两个吸光度值之差(△A)计算。
这也可以扣除一部分样本空白.
d).有些仪器,例如日立系列,有专门的“血清信息”功能的设置。
做法都是单独占用一个空白通道来计算,这也叫做样品空白校准。
3、水空白:
比色杯在加入水以后的吸光度。
水空白的意义主要是对光路系统进行检查和校正,如光源,比色杯等,同时在计算中起到消除“杯差”的作用。
日立7060中的Cell Blank(杯空白)测定的就是水空白。
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