染色体显带原理与技术分析解析

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人类显带染色体核型分析

人类显带染色体核型分析

医学遗传学实验报告【实验题目】人类显带染色体核型分析【实验目的】掌握染色体核型分析的常用方法及G分带的带型特征,会初步识别G分带人类染色体。

【实验原理】将一个细胞内的染色体按照一定的顺序排列起来构成的图像称为该细胞的核型(karyotype),这通常是用显微摄影得到的染色体相片剪贴而成。

在显带技术问世以前,人们主要根据染色体的大小、着丝粒的位置,将人类染色体顺次由1编到22号,并分为7组。

但要想精确、有把握地鉴别每条染色体是比较困难的。

70年代初出现了染色体显带技术,不仅解决了染色体识别困难的问题,而且为深入研究染色体异常及基因定位创造了条件。

将染色体标本用显带方法处理后,再用Giemsa染色,这类技术称为G分带,通过显微摄影,就可得到G带染色体的显微相片。

【实验方法和步骤】(1)胰酶液的配制:称取胰酶0.2g溶于100mlHanks液中,搅拌30min,用1mol/L NaOH调pH值至7.0~7.2,冷冻保存(最好现配现用)。

(2)先将胰酶液水浴加热到37℃。

(3)将染色体标本浸入胰酶液中,作用时间几秒到几十秒不等,依标本存放时间长短而定(标本需预先经60℃~70℃烤2h,或37℃恒温老化5~7d。

若标本太新鲜,则染色体有些毛糙)。

(4)取出玻片标本,在生理盐水中过一下,再用蒸馏水洗。

(5)Giemsa染液染色8min。

(6)自来水洗、晾干。

(7)镜检:选择分散及显带良好的分裂象,在油镜下观察。

如观察到染色体变粗并显得边缘毛糙,有时甚至呈糊状,是处理过度了。

观察细胞的标准:1)细胞完整,轮廓清晰,染色体在同一平面上均匀分布。

2)染色体形态和分散良好,最好无重叠现象,即使染色体个别重叠,也要能明显辨别。

3)所观察的染色体长短大致一样,处于同一有丝分裂时期。

4)在所观察的染色体周围没有多个或单个散在的染色体。

(8)显微摄影,将相片上的染色体逐个剪下,按丹佛和人类染色体遗传学命名的国际机制(ISCN)排列编号。

《染色体显带技术》课件

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THANKS
感谢观看
随着技术的不断发展和完善,染色体显带技术经历了多个阶段,从最早 的简单染色法到后来的荧光染料标记、基因芯片等技术,使得染色体显
带技术越来越精确和高效。
目前,染色体显带技术已经广泛应用于生物学、医学、农学等领域的研 究,为人类认识生命本质、预防和治疗遗传疾病等方面做出了重要贡献 。
染色体显带技术的应用领域
优点
能够检测DNA复制活跃区域 ,有助于了解基因表达和细 胞增殖的机制。
04
CATALOGUE
染色体显带技术的应用实例
染色体显带技术在遗传病诊断中的应用
总结词
染色体显带技术能够检测染色体异常,为遗传病的诊断提供有力依据。
详细描述
染色体显带技术通过染色、分带和特殊染色等手段,使染色体呈现特定的深浅、明暗条纹,从而能够检测染色体 数目和结构的异常,如染色体缺失、重复、倒位等。这些异常可能导致遗传性疾病的发生,如唐氏综合征、威廉 姆斯综合征等。染色体显带技术为遗传病的产前诊断和遗传咨询提供了重要手段。
染色体显带技术在法医学中的应用
总结词
染色体显带技术可用于个人识别和亲子 鉴定,在法医学中具有重要意义。
VS
详细描述
每个人的染色体组成是独特的,因此染色 体显带技术可以用于个人识别和身份验证 。在法医学中,该技术可用于亲子鉴定、 犯罪嫌疑人身份确认以及灾难事故中遇难 者身份识别等。通过染色体显带技术,可 以准确地进行个体识别,为司法公正提供 科学依据。
染色体显带技术在未来的应用前景
遗传疾病诊断
随着基因组学研究的深入,染色 体显带技术将在遗传疾病的诊断
中发挥更加重要的作用。
生物科学研究
在生物科学研究中,染色体显带技 术将为科学家提供更深入的染色体 结构和功能认识,促进相关领域的 发展。

《染色体带型分析》课件

《染色体带型分析》课件

自动化与智能化
通过引入人工智能和机器学习技术, 实现染色体带型分析的自动化和智能
化,提高分析速度和准确性。
高通量与快速检测
开发高通量、快速检测的染色体带型 分析技术,满足大规模临床和科研需
求。
分辨率提升
提高染色体带型分析的分辨率,以便 更准确地识别染色体变异和异常。
染色体带型分析在临床诊断中的应用前景
染色体带型观察与拍照
显微镜观察
在显微镜下观察染色体的 带型特征。
拍照记录
使用显微摄影设备对染色 体进行拍照记录。
图像分析
对拍摄的染色体照片进行 分析,提取染色体的特征 信息。
染色体带型分析结果解读
结果解读
根据染色体的特征信息,对其进 行分析和解读。
异常染色体的识别
识别异常染色体,并分析其对疾病 的影响。
如染色体着丝粒异染色质增多、 次缢痕增长或缩短等,可能与某 些遗传性疾病相关。
染色体带型异常与遗传性疾病的关系
唐氏综合征
由于21号染色体多了一条,导致智力低下、生长 发育迟缓、特殊面容等症状。
威廉姆斯综合征
由于7号染色体部分缺失,导致生长发育迟缓、心 血管疾病、智力障碍等症状。
克氏综合征
由于X染色体部分缺失或结构异常,导致男性生殖 器官发育不全、身材矮小等症状。
进化关系,为物种保护和改良提供依据。
在法医学领域,染色体带型分析也被用于个体识别和亲缘关系鉴定中, 通过对个体的染色体带型特征进行分析,可以确定个体身份和亲缘关系 。
02
染色体带型分析的基本原 理
染色体显带技术
1
染色体显带技术是通过特定的染色方法,使染色 体呈现出深浅不同、明暗相间的带纹,以便于对 染色体进行分析和识别。

医学遗传学-染色体分组、核型与显带

医学遗传学-染色体分组、核型与显带

染色体的结构包括着丝粒、端粒、 次缢痕等,这些结构对于染色体 的稳定性和功能发挥具有重要作
用。
染色体数目与形态
人类体细胞中有23对染色体, 其中22对为常染色体,1对为性
染色体。
染色体形态多样,可分为长臂、 短臂、着丝粒、端粒等部分,不 同物种的染色体形态也存在差异。
染色体数目的异常会导致遗传性 疾病的发生,如唐氏综合征、特
染色体异常类型及发生率
பைடு நூலகம்
1 2 3
染色体数目异常
包括整倍体和非整倍体异常,如21三体综合征 (唐氏综合征)等,发生率相对较低,但后果严 重。
染色体结构异常
包括缺失、重复、倒位和易位等,如猫叫综合征 (5号染色体短臂缺失)等,发生率较高,临床 表现多样。
染色体多态性
包括随体大小、着丝粒位置等微小变异,通常不 引起表型效应和疾病,但在特定情况下可能与疾 病风险相关。
G显带技术
利用Giemsa染料对染色 体进行显带处理,根据显 带图谱进行分组。
C显带技术
采用C-分带技术,通过特 定的染色程序显示染色体 特定区域的结构异染色质, 从而进行分组。
荧光原位杂交技术
FISH技术
利用荧光标记的DNA探针与染色 体上的特定DNA序列进行杂交, 通过荧光显微镜观察杂交信号, 实现染色体分组。
03 核型分析技术
核型概念及意义
核型定义
是指生物体细胞内的染色体组型,包括染色体的数量、形态、大小等特征。
核型意义
核型分析是遗传学研究的基础,对于了解物种的遗传特性、染色体变异以及进 化关系具有重要意义。同时,在临床上,核型分析对于遗传病的诊断、预防和 治疗也具有重要的指导作用。
核型分析流程与方法

染色体显带技术的名词解释

染色体显带技术的名词解释

染色体显带技术的名词解释染色体显带技术,是一种通过特定的实验方法将染色体分解和染色,然后通过显微镜观察和分析染色体的带状图案,来揭示染色体结构和组成的一种分析技术。

该技术是生物学和遗传学领域中非常重要的实验手段之一,广泛应用于生物体的遗传分析、基因定位和重组等研究方向。

染色体显带技术的原理是通过染色剂将染色体进行染色,然后通过显微镜观察和记录染色体的带状图案。

常用的染色剂有吉姆萨染剂、醋酸酯染剂等。

这些染剂能够与染色体特定的结构和组成发生特定的反应,从而在显微镜下呈现出不同的带状图案。

这些带状图案是染色体的一种特征,通过对带状图案的分析,可以确定染色体的个数、结构和组成等信息。

染色体显带技术在生物学和遗传学中有着广泛的应用。

首先,它可以用于确定染色体的数量和形态。

通过观察染色体的带状图案,可以准确地确定染色体的个数。

同时,不同的染色体在带状图案上呈现出不同的形态,通过对形态的观察和分类,可以对染色体进行鉴定和区分。

其次,染色体显带技术可以用于研究基因的定位和重组。

通过对染色体显带图案的分析,可以确定某个基因位于染色体的哪个区域,从而帮助研究人员进行基因的定位。

此外,如果两个染色体上的带状图案发生了重组,也可以通过染色体显带技术来检测和确认重组的事件。

此外,染色体显带技术还可以用于进行遗传变异的分析。

在染色体显带图案中,可以观察到染色体的缺失、重复、倒位等变异。

通过对变异的分析,可以了解染色体结构的稳定性和遗传变异的机制。

总之,染色体显带技术是一种重要的实验手段,通过对染色体的染色和观察,可以揭示染色体的结构和组成,帮助研究人员进行遗传分析和基因定位等研究。

在生物学和遗传学研究中,染色体显带技术起着重要的作用,对我们深入了解生命的本质和遗传机制提供了有力的支持。

染色体显带技术和带型分析

染色体显带技术和带型分析

实验三染色体显带技术和带型分析一、实验目的学习和掌握植物染色体Giemsa显带技术和带型分析方法,进一步鉴别植物染色体组和染色体结构。

二、实验原理对植物有丝分裂中期染色体进行酶解,酸、碱、盐等处理,再经染色后,染色体可清楚地显示出很多条深浅、宽窄不同的染色带。

各染色体上染色带的数目、部位、宽窄、深浅、相对稳定,为鉴别染色体的形态提供依据,也为细胞遗传学和染色体工程提供新的研究手段。

植物染色体显带技术包括荧光分带和Giemsa(吉姆萨)分带两大类。

在植物染色体显带上最常用的是Giemsa分带技术,其中C带和N带较为常用。

C带的形成认为是高度重复序列的DNA(异染色质)经酸碱变性和复性处理后,易于复性,而低重复序列和单一序列DNA(常染色质)不复性,经Giemsa染色后呈现深浅不同的染色反应。

这种差异反映染色体结构的差异。

三、实验材料洋葱、蚕豆、大麦、黄麻的根尖。

四、实验仪器及用具多媒体系统(附显微演示),显微镜(附摄影装置),半异体致冷器,冰箱,恒温水浴锅,电子天平,液态氮装置,容量瓶,试剂瓶烧杯,染色缸,载玻片,盖玻片,剪刀,镊子,玻璃板,滤纸,标签,铅笔五、药品和试剂冰醋酸,无水酒精,甲醇,盐酸,柠檬酸钠,氢氧化钡,氯化钠,磷酸二氢钠,磷酸二氢钾,磷酸氢二钠,甘油,Giemsa粉剂,果胶酶,纤维素酶试剂1:Giemsa液:0.5克Giemsa,33ml甘油,33ml甲醇,用少量甘油将Giemsa粉末研磨至无颗粒,剩余甘油分次洗涤至棕色瓶内,置56℃恒温2h,加入甲醇,过滤后保存于棕色瓶中。

试剂2 :5%氢氧化钡:5gBa(OH)2加入100ml沸蒸馏水中溶解后过滤,冷却至18-28℃。

试剂3:2×SSC溶液:0.3M氯化钠+0.3M柠檬酸钠。

试剂4:1M NaH2PO4溶液。

试剂5:1%纤维素酶和果胶酶混合液。

试剂6:1/15磷酸二氢钾和1/15磷酸氢二钠缓冲液。

六、实验步骤(一)染色体分带1. 材料准备待洋葱鳞茎发根长2cm左右,切取根尖进行预处理。

人类染色体标本的制备及G显带核型分析ppt课件(完整版)

人类染色体标本的制备及G显带核型分析ppt课件(完整版)
事项。 3.制作人的G显带正常核型配对分析图。
感谢观看
人类体细胞的正常核型

大 A组
B组 C组 D组 E组 F组
小 G组
染色体号
1
3
2
4 ———— 5 6 ———— 12、X
13 ———— 15
17 16 18
19 ———— 20
21———— 22、Y
主要特征
中央着丝粒染色体 亚中着丝粒染色体
亚中着丝粒染色体、无随体
亚中着丝粒染色体
近端着丝粒染色体、有随体
六号是个小白脸 七上八下九苗条
十号长臂近带好 十一低来十二高
十三四十五
下、中、上
十六q2缢痕大
十七长臂带脚镣
十八人小肚皮大 十九一点腰
二十头重又脚轻 二十一象个葫芦瓢
二十二头带小黑帽 X一担挑,Y是黑脚
[注意事项]
1. 染色体标本制备中的关键因素包括秋水仙素的用量和 作用时间、低渗和固定的处理。其中低渗时间很重要, 处理时间过长则细胞膜过早破裂导致染色体丢失,处理 时间不足则致染色体分散不好,不利于计数分析。
2、作取用股均骨匀:充用分一。只手的拇指和食指按住小鼠 3.漂洗:迅速的用头0部.85,%另生一理只盐手水漂拉洗住,它以的终尾止巴胰,蛋用白酶
的作用。 力向后拉断其颈椎。处死后立即用剪 4.染色:用吉刀姆剪萨工开作后液腿染上色的1皮0毛~,15取m出in小。鼠的股 5.冲洗干燥:骨用,缓剔流除自上来面水的冲肌洗肉载,玻洗片净,。空气干燥或电
9. 弃上清,重复固定1次。 10.弃上清,根据沉淀量多少加入适量滴数新鲜固定
液,轻轻混匀,制成磨砂状悬液。 11.制片:取上述悬液1~2滴,滴至沾有冰水或干燥的
洁净载玻片上,吹散,过火,空气干燥。 12.37℃温箱放置3~4天或70℃烘烤2 h进行老化处

[人体显微形态学]_实验:染色体G显带核型分析

[人体显微形态学]_实验:染色体G显带核型分析

[人体显微形态学]_实验:染色体G显带核型分析
人体显微形态学的染色体G显带核型分析是实验室里一项非常重要的实验。

它主要是
为了研究人体染色体G显带核型,以了解非常微小部分染色体结构和功能,从而可以准确
评估人体染色体安全性和染色体病变。

染色体G显带核型分析实验,是微生物学实验室中常用的分子生物技术之一。

它包括
用荧光原子瞳(FISH)技术来检测和辨识人体染色体G显带上的特定片段,是按比例放大
微小结构的,目的是在极端放大的条件下观察其形状和染色体结构,以调查染色体G显带
核型的特征。

实验之前,需要准备染色体DNA样本,采用逆转录聚合酶反应(RT-PCR)技术,提取
染色体DNA样本。

取染色体DNA样本,用供体核酸进行探针结合,以染色技术对染色体进
行染色,并在特定稀释条件下进行配对图谱比较,以得出染色体G显带核型分析的结果。

染色体G显带核型分析的过程中,要采用专业的放大技术,如荧光显微镜和电子显微
镜等,来放大染色体核酸片段的结构,以准确观察染色体G显带核型。

采用特定稀释技术,给出多种图形,作为染色体G显带核型分析的依据。

最后,运用解剖切片、拍片、再加以染色,用荧光显微镜染色,最后才得出染色体G
显带核型分析的结论。

比较同一组DNA样本中染色体G显带核型分析的结果,便可得出染
色体上显带特征的特点;进而确定人体染色体的安全性及疾病的分析结果。

染色体G显带核型分析是一种十分详细、复杂的实验,其实验步骤也十分耗时,但是
它为弄清染色体G显带的结构提供了最佳的依据,直接关系到人类健康,因此在临床实践中,染色体G显带核型分析实验备受重视,具有极为重要的意义。

染色体显带原理与技术

染色体显带原理与技术

不同染色体在显带中的位置和条 带数量都独特,这种特征可用于 鉴定异常染色体。
荧光显带
荧光显带可根据不同的染料使用 不同波长的激光来激发,显示出 不同颜色的条带。
染色体显带技术
染色体显带技术主要有两种类型,其中短臂染色体显带技术较为常见,它将染料质体停留在短臂上,形 成条带。
1
样本预处理
样本处理步骤包括细胞培养、细胞均质、制备染色体悬液等。
染色体显带在医学诊断中的应用
染色体显带技术在医学诊断中成为了一项重要的检测方式,可以帮助医生诊断疾病、确认确诊和 预测病程。
1 唐氏综合症
常规方法可以检测到95%的唐氏综合症,但应用染色体显带技术可以精确到99%。
2 染色体异常
染色体显带技术在识别染色体异常、染色体缺失等方面具有突出的优势。
3 遗传病
染色体显带可以应用于众多预测疾病和研究遗传变异的领域,例如,分析发育、遗传咨询、研究遗传性疾病等 等。
基因研究
染色体显带技术是基因研究中的 重要手段,可以对遗传突变或缺 陷进行深入探索。
产前检测
染色体显带技术可对孕妇进行产 前检测,判断胎儿是否存在染色 体病变。
肿瘤分析
在肿瘤分析中,染色体显带技术 可以帮助确定癌细胞与正常细胞 之间的差异。
染色体显带技术可以帮助识别常染色体显性遗传疾病,如遗传性失聪等。
染色体显带技术的发展和前景
染色体显带技术在不断发展,人们正在探索和发掘更加高效和准确的分析技术,以及更加广泛的应用领域。
技术创新
随着生物技术得到快速发展,新的染色体分析技术 得到不断研发,比如FISH(荧光原位杂交)技术等。
数据深度挖掘
未来前景
随着生物技术快速发展,染色体显带技术应用领域将越来越广泛。

染色体显带原理与技术分析解析82页PPT

染色体显带原理与技术分析解析82页PPT
40、人类法律,事物有规律,这是不 容忽视 的。— —爱献 生
61、奢侈是舒适的,否则就不是奢侈 。——CocoCha nel 62、少而好学,如日出之阳;壮而好学 ,如日 中之光 ;志而 好学, 如炳烛 之光。 ——刘 向 63、三军可夺帅也,匹夫不可夺志也。 ——孔 丘 64、人生就是学校。在那里,与其说好 的教师 是幸福 ,不如 说好的 教师是 不幸。 ——海 贝尔 65、接受挑战,就可以享受胜利的喜悦 。——
36、如果我们国家的法律中只有某种 神灵, 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法, 总体上 来说, 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日,便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持,法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例,它们 迅速累 聚,进 而变成 法律。 ——朱 尼厄斯

染色体显带技术、常见的显带技术和原理、---小雨啵啵

染色体显带技术、常见的显带技术和原理、---小雨啵啵

染色体显带技术的概念:染色体异染色质和常染色质区段存在差异,序列AT和GC含量存在差异。

使用特定的染色体显色技术,使差异个体之间的染色体或同一个体不同染色体之间显现不同的显色条纹,进而进行核型分析。

染色体显带技术是核型分析的重要技术。

适用于更微观水平上鉴定染色体,并获取遗传信息。

是更精确的核型分析,在应用时往往带型分析与核型分析合二为一。

常见的染色体显带(分带)技术及其原理
1.Q带:喹吖因荧光染色技术。

中期染色体经氮芥因喹吖染色后,在紫外线下呈现的明暗带,DNA富含AT碱基区为明带,富含GC碱基区呈暗带。

2.G带:Giemsa带,中期染色体制片经胰酶或碱、尿素、去污剂等处理后,用Giemsa染色,呈现的染色体区带,一般与Q带相符(AT 区深色,GC区为浅色)。

3.R带:中期染色体磷酸盐缓冲液保湿处理,经吖啶橙或Giemsa染色呈明暗相见的带型,与G带正好相反又称反带(AT区为浅带,GC 区为深带)。

4.C带:主要显示着丝粒结构区异染色质以及染色体其它区段的异染色质部分,异染色质区染色较深。

5.T带:也称末端带,染色体端粒经吖啶橙染色后所呈现的区带。

6.N带:又称Ag-As染色法,主要用于核仁组织区的酸性蛋白质染色。

染色体显带技术

染色体显带技术

染色体显带技术简介。
1.
2.
3. 4. 5. 6. 7.
目前常用的几种显带方法有: 荧光显带法(Q带):用荧光染料喹吖因处理后,在 荧光显微镜下显现的带型。 吉姆萨显带法(C):经热、碱、胰酶等处理后,进 行吉姆萨染色所显的带型。 反带法(R带):应用本法显示的带与带及带相反, 即G带的暗区在R带中为明区。 末端显带法(T带):对染色体末端区的特殊显带法, 对分析染色体易位有一定价值。 G–带法:先用酸和碱作变性处理,再用吉姆萨染色, 专门显示着丝点区附近的结构异染色质。 银染色法(Ag带):用硝酸银染色,专门显示染色体 上具有转录活性的核仁组织区域。 此外,还有N带、高分辨带、复制带等等,并还在不 断产生新的显带方法。
染色G-带技术 (原理)
G带染色技术也称改良的吉姆萨染色法。因 用吉姆萨染色,所以称为G带。是目前应用 最广泛的染色体分带技术之一。 关于G带的显带机制,有许多说法,目前尚 无定论,比较公认的一种看法是:染色体 上富含A-T碱基对的区段,与蛋白质结合比 较紧密,较耐受胰酶处理,从而被Giemsa 深染,而富含G-C碱基对的区段,与蛋白质 结合疏松,在经胰酶处理后,蛋白质受到 破坏,而不被Giemsa染色,显示为淡染的 明区。
染色体C带技术(方法)
⑴染色体标本置0.2MHCl中浸泡1小时 ⑵蒸馏水漂洗2次,在室温晾至半干。 ⑶将标本插入装有预热至50℃的 Ba(OH2)5%饱和溶液的染色缸,保温10分钟 ⑸取出染色体标本,立即用自来水冲去 Ba(OH2)溶液 ⑹趁标本仍潮湿时置入预热至60℃的 2xSSC中性盐溶液中,保温1小时。 ⑺蒸馏水洗去盐溶液。 ⑻Giemsa染色10min以上,空气干燥,镜 检

染色体G-带技术 (方法)

染色体C-显带技术

染色体C-显带技术

大麦的N带
、碱处理后,在缓冲盐溶液中热水解,
再以Giemsa染液染色。
(2)经此法处理后显示的带型是
:常染色质部位染色较浅,而结构异
染色质部位染色较深。
(3)人和动物染色体中,C带的 位置一般在着丝粒或其附近的次缢痕 及染色体的长臂远端处。而在植物中C 带分布较广,染色体末端、中部、着 丝粒两侧、次缢痕部位,都可能出现
染色体C-显带技术
一、实验目的
1、掌握染色体C-显带技术; 2、了解C-显带法分析染色体的 方法。
二、实验原理
1 、染色体分(显)带:是指 染色体标本经过某些化学因素,
如酸通过一种或几种显带技术处
理,使染色体上呈现染色深浅不
同、明暗相间的条纹。。
二、实验原理
1 、染色体分(显)带:是 指染色体标本经过某些化学因素, 如酸、硷、盐、酶或物理因素, 如温度等处理,再经染色后,在 染色体纵向结构的特定部位上显 示出染色深浅不同、明暗相间的 带纹。带型具有染色体、种、属 的特异性。
。在植物中应用广、准确性重复性低。
(4) C显带的方法:
a、BSG法:
Ba(OH)2 2ⅩSSC Giemsa
b、酶处理:胰蛋白酶
c、变性剂处理:尿素法等
4、G显带技术:
( 1 )概念:染色体标本在染色 前的处理比较温和,经 Giemsa 染色 后,在染色体的全部长度上显示出 丰富的带纹(1971,Sumner)。 (2)方法:几种,
• 核 型 ( karyotype): 一个体细胞全部中期染色体的图像;根据染色体的结 构特征,可以把染色体分为若干组。 • 组 型 : 核型的模式图。 • 显 带 : 用不同的染料处理染色体显示的带型,每一个染色体 都有特定的带型。

17、 g显带核型分析

17、 g显带核型分析

的某些部位对染料不敏感,由此形成明暗相
间的条带。
三、实验的方法与步骤

G显带染色体核型分析方法和各号染色体的带型 特点。 对正常人G显带中期染色体相片中每条染色体分 组列号,根据G带特点明确区分各号染色体。 分析核型,写出结论:正常女性46,XX或正常 男性46,XY。


正常人女性G显带核型分析:46,XY
实验三
人类G显带染色体核型分析
一、实验目的

观察G显带染色体的形态结构,掌握各号染色 体G显带特征。

掌握G显带核型分析方法。
二、实验原理

G显带是指以Giemsa染料染色后,使染色体显 带的技术。Giemsa染料是由噻嗪和曙红组成
的,着色时DNA 先与2个噻嗪分子结合,然后
再与一个曙红分子结合,形成沉淀物,而DNA

染色体G显带技术及其原理

染色体G显带技术及其原理

8.2
97.0
3.0
►2×SSC溶液的配制
用分析天平称取氯化钠17.53克,柠檬酸钠 8.82克溶于蒸馏水中,加蒸馏水至1000毫升。
完整版pt
25
实验方法
►(一) 胰蛋白酶消化法 ►(二) 胰蛋白酶-EDTA法
►(三)ASG(Acetic-saline-Giemsa)法
完整版pt
26
(一) 胰蛋白酶消化法
1. 准备常规方法制备的人外周血淋巴细胞染色 体玻片标本,置75 ℃烤箱中预热5分钟。
2. 在立式染色缸中加磷酸缓冲液100ml( 1/15M NaH2PO4 80.8 ml ,KH2PO4 19.2ml),再加 入2.5%的胰蛋白酶原液1ml配成终浓度为 0.025%的工作液。
完整版pt
27
(一) 胰蛋白酶消化法
完整版pt
39
影响G显带的一些因素(5)
胰蛋白酶处理的时间
这当然取决于上面所有这些因素,但一 般推荐处理的时间不宜少于30秒钟。
完整版pt
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影响G显带的一些因素(6)
无论是用胰蛋白酶法还是EDTA-胰蛋白酶法, 均可得到良好而稳定的效果。中期分裂相中的绝大 多数(有时超过90%)细胞都显示出良好的G带。 为了在同一标本上显示不同的带型,例如Q带和G带, 那末应当先作Q带,然后同一标本还可作C带染色。 在摸索胰蛋白酶处理的时间时,可在同一玻片上分 别摸索2-3个时间,经染色后即在镜下观察。如果细 胞呈蓝紫色(与常规染色相似)说明胰蛋白酶的作 用时间不够;如细胞的色泽为桃红色,那就差不多 了。
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DNA核苷酸的组成
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实验原理(6)
非显带的标本上虽然可以根据染色体的 形态识别1,2,3,16,17和18号,有时还 可以识别Y染色体,但却不能有把握地鉴别其 他大多数染色体。自1970年Caspersson等首 次报道用喹吖因对人体染色体进行染色可在 各号染色体上显现出宽窄和位置不同带纹以 来,细胞遗传学工作者以不同的染色方法为 基础,提出了各种显带方法的名称。
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实验用品
光学显微镜,恒温水浴箱,培养皿,小镊 子,未染色的染色体标本片(片龄一周内), 5%氢氧化钡水溶液,2×SSC液,0.2mol/L HCl,PBS,吉姆萨染液。
实验方法
1、制片:常规外周血法制备的标本。
2、HCl处理:取5-7天标本龄的染色体标本, 选择染色体分散 好的标本在0.2mol/L HCl中室温下处理10分钟-1小时,然 后用自来(蒸馏)水冲洗干净。这一处理是使DNA脱嘌呤, 但没有DNA骨架的断裂。(此步也可省略)
6、 镜检:用显微镜高倍镜镜下检查显带标本,如着丝粒区域 或异染色质部位( 1,9,16 号染色体次缢痕)及 Y 染色体长 臂q12 深染,染色体其它部位染色浅,即为可取标本。若 观察到染色体均呈白色,那么,可能是碱处理或 2×SSC 温育过度。
显带观察
严格地讲,C带显示的是紧邻着丝粒的异 染色质区。可见,在人体染色体C带标本中, 深染的有:1、绝大多数染色体的着丝粒区; 2、第1,9和16号染色体的次缢痕;3、Y染 色体长臂的远侧端。
各种组织标本的染色体制作
不同的标本,不同的检查目的, 需要调整染色体的制作过程。处 理原则:使尽可能多的细胞进入 细胞周期,旺盛生长,大量分裂, 防止污染。
外周血:5%小牛血清RPMI-1640,+PHA。检查体细胞核型。 骨髓:10 %小牛血清RPMI-1640,不含PHA。检查肿瘤细胞核型。 羊水:标本珍贵。专用羊水培养基,防止母体细胞污染。检查胎儿细
秋水仙素主要作用在于能阻滞微管(纺锤丝)形成,或使已形成的微管 解聚,从而使染色体停留在中期。 秋水仙素浓度大,则处理时间短,如浓度小,则处理时间长。但若秋水仙 素加入过量,或处理时间过长,分裂细胞多,染色体凝集和收缩变小,或 发生异常分裂现象,甚至染色体破碎,不宜用于观察染色体的形态及计数 ;秋水仙素加入太少,或处理时间偏短,染色体形态偏长或无中期分裂相 。
只有可以分裂的活细胞,才能制备染色体。实验材料:人外周血淋巴细胞,
植物血凝素(PHA)刺激血中的淋巴细胞转化成淋巴母细胞,使其恢复增殖 能力。
使用秋水仙素或者秋水仙碱破坏纺锤丝的形成,将细胞阻留在有丝分裂中期。
从而获得大量的细胞中期分裂相供染色体分析。--采取少量外周静脉血,做 短期培养,培养至72小时细胞进入增殖旺盛期,此时加入秋水仙素抑制细胞 分裂,使细胞分裂停止在中期以获得足够量的分裂期细胞。 细胞低渗技术使细胞中的染色体在玻片上铺散得更好,易于计数和观察。 甲醇/冰醋酸固定液快速杀死和固定细胞。
R显带
原理: 在细胞的培养过程中加入碱基的类似物,
然后用紫外线照射后再用 Giemsa 染料染色,可以 得到和 G—显带相反的带纹,称为 R—带。
即G显带的深带变为浅带,浅带染成深带。当G显 带显示的染色体两臂末端为浅带时,如果两臂末端 发生缺失等异常,一般难以发现和识别,而R带正 好能将此处显示出易于识别的深带。所以,R显带 技术有利于检测染色体的末端缺失、重排等。
巴黎会议(1971)对各条染色体的C带描述如下: 1号 大,从着丝粒扩展到q。 2号 小。 3-8号 中等 9号 大,从着丝粒扩展到q。 10号 中等。 11号 中等,但比10号或12号大些。 12号 中等。 13号 中等,有时分为二节。 14号-15号 中等。 16号大,从着丝粒向q扩展。
17号 中等。 18号 中等,但比17号大些。 19-22号 中等。 X 中等 Y在着丝粒处有一条非常窄的带;q的末端有 一宽带。1,9,16号的C带和Yq上的宽阔的 远侧带都有明显的形态变异及异态性。
基本概念

在细胞周期的有丝分裂中期,染色体的形态结构比较稳定,
一般所描述的染色体的形态结构都是中期染色体。
染色体组型:又称核型Karyotype,是指将动物、植物、真菌 等的某一个体或某一分类群(亚种、种、属等)的体细胞内 的整套染色体,按它们相对恒定的特征排列起来的图像。
核型模式图 Idiogram :是指将一个染色体组的全部染色体逐



2.制片
2.1收集细胞:将全部培养物吸入刻度离心管中,2000 rpm离心5分钟 2.2 低渗:弃上清液,加入37℃预温的 0.075 mol/L KCl溶液8 ml,用吸管轻
轻吹打细胞团混匀后,置37℃恒温水浴箱低渗处理20~25分钟。

2.3预固定:加入 1ml新配制的固定剂(甲醇:冰乙酸=3:1)或清质剂300ul ,用吸管小心吹打、混匀,2000rpm离心5分钟。
实验用品
光学显微镜、恒温水浴箱、紫外灯、培养皿、
常规制片材料、BrdU、秋水仙素、2×SSC溶
液(0.3mol/L NaCl+0.03mol/L柠檬酸钠)、 Gimesa染液等。
实验方法
1.常规培养细胞,终止前10小时在培养基中加BrdU(使其 终浓度为12µg/ml)。 2.继续培养6小时后加秋水仙素20µg/ml的3滴(7号针头垂 直竖滴,使终浓度为0.04-0.08µg/ml)。 3.常规收获、处理细胞,制片。 4.在60℃恒温水浴箱中,置一培养皿于水面上(皿内加1/3 2×SSC溶液,将所制玻片浸泡在内)。距玻片10cm处 放置一20瓦紫外灯,照射玻片30-45分钟。 5.待紫外处理时间结束后,用自来水冲净。 6.Gimesa染色5分钟,自来水冲净,室温干燥后于镜下观察 。

3.G显带 3.1 取2.5%胰酶溶液0.5ml,加入50 ml生理盐水染色缸中(终浓度 0.025%),用 1N HCl或1N NaOH调节PH7.0左右,置 37OC预温。

3.2 将烤好的玻片标本放入胰酶溶液中处理60秒钟左右(胰酶消化时间
需不断调试,摸索。不同时间配制,不同批号胰酶,以及随着处理标本数量增加,胰 酶逐渐消耗,胰酶作用时间都会变化)
个按其特征绘制下来,再按长短、形态等特征排列起来的图 像。
二、染色体显带技术
Q带:喹丫因染色后,紫外照射下的明暗带(富含AT的明带, 富含GC的暗带);
G带:Giemsa染料染色后所呈现的染色体区带;(AT区是深 色)
R带:是中期染色体经碱性磷酸盐处理,丫啶橙或Giemsa染 色后所呈现的带型,一般与G带正好相反; C带:显示着丝粒结构异染色质及其它染色体区段的异染色质 。
①G1期,指从有丝分裂 完成到期DNA复制之前 的间隙时间; ②S期,指DNA复制的时 期; ③G2期,指DNA复制完 成到有丝分裂开始之前的 一段时间; ④M期,细胞分裂开始到 结束。 G0期:间期细胞,细胞 周期之外的细胞。
有丝分裂
(二 )从DNA 到染色体
DNA
压 缩 7 倍
核小体
压 缩 6 倍

常染色质:在间期核中分布较稀疏,浅
染色,是转录活跃的DNA部分,一般位于核 中央。在分裂期,位于染色体臂,深染色。 含大量功能基因。

异染色质:是呈凝集状态的DNA与组蛋
白的复合物,由于螺旋化程度高,又称为浓 缩染色质,一般位于核内膜的边缘形成一薄 圈,即称周围染色质。主要位于位于染色体 的着丝粒、次缢痕、端粒等位置。间期和分 裂期都深染色。基本无功能基因。
螺线管
压 缩 40 倍
超螺线管
压 缩 5 倍
染色单体
共计压缩8400倍
核小体 nucleosome:
染色质的基本结构
DNA分子的不同存在形式: 染色质和染色体
染色质:间期细胞核中遗传物质的存在形式。
染色体:分裂中期遗传物质的存在形式。一条
染色体是一个DNA分子。
染色质:
根据在分裂期和间期的染色不同,分为
3 、氢氧化钡处理:将标本浸入 60-65℃的 5% (饱和)氢氧化 钡液中, 10 秒至几分钟(随标本龄而变动,常规: 1-4 分 钟; 1 月龄片: 8-16 分钟,最好设置梯度),碱性处理可 能通过产生一个高水平的DNA变性,促进DNA溶解。
4、 2×SSC处理:在60-65℃的2×SSC液中处理90分钟时, 用自来水冲洗干净, 2×SSC 温育可使 DNA 骨架断裂并使 断片溶解。 5、 染色:用蒸馏水配制5%Giemsa,染色5-10分钟,用自来 水冲洗干净,室温下风干后即可镜检。
实验原理
C显带技术由Arrighi和Hsu于1971年发明,是显带技术中
最 简 单 的 一 种 带 型 。 其方法的本身是起源于原位杂交。 Arrighi和Hsu发现用碱处理载玻片上的染色体使 DNA变性之 后,再在SSC溶液中、65℃的条件下使其复性,在受控制的 条件下经 Giemsa 染色可显示出在染色体的一定部位是深染 的。70年代用原位杂交的方法证明深染的区域(C带区)是 结构异染色质的区域,也就是一般而言的DNA高度重复序列 的区域。然而,现在更为流行的看法认为氢氧化钡或其它碱 性物质的处理是优先提取了非 C带区的DNA,SSC的处理有 助于带型的清晰。
72 hrs 后 收集细胞
制作玻片标本
固定
预固定 紫外线照射
低渗处理 Giesma染色 R—带
Giesma染色 C—带
Giesma 染色 G —带
Ba(OH)2 处理
荧光染料染色 Q—带
染色体带的制作方法
G显带实验原理
基础G显带:制备的染色体标本经胰蛋白酶消化、Giemsa染色后,可在染色体纵 轴上显示出着色深、浅相间的横纹——带,表明每条染色体的特征。


2.5 固定:
第一次:弃上清液,加入3ml固定剂,吹打细胞团制成细胞悬液后,室温下固定15分钟, 2000rpm 离心5分钟。

第二次:弃上清液,重复固定一次。 第三次: 弃上清液,根据细胞数量的多少适当加入数滴新配制的固定剂,吹打细胞制成悬液。

2.6 滴片: 吸取少量细胞悬液,滴2~3滴于冰水浸泡过的载玻片上,吹散, 水蒸气熏蒸,70 ℃ 2小时烤片,待染色。
染色体显带原理与技术
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