国家自然科学基金申请标书案例参考——风湿免疫科

申请代码受理部门收件日期受理编号检查保护国家自然科学基金申请书(**** 版)申报日期：**** 年2 月28 日国家自然科学基金委员会资助类别：亚类说明：附注说明：项目名称：申请人：电话：依托单位：通讯地址：邮政编码：单位电话：电子邮箱：申请人信息姓名****性别男出生年月民族满族学位博士职称副研究员每年工作时间（月）6电话 **** 电子邮箱传真国别或地区中国个人通讯地址工作单位 ****人民医院主要研究领域类风湿关节炎的发病机制及治疗策略依托单位信息名称****联系人电子邮箱电话网站地址w 合作研究单位信息单位名称[在此录入修改][在此录入修改]项目基本信息项目名称类风湿关节炎中Th17-like调节性T细胞的表型特点和免疫调节功能研究英文名称Investigation on the phenotype and immunological functions ofTh17-like regulatory T-cells in rheumatoid arthritis资助类别面上项目亚类说明附注说明申请代码H1008:自身免疫性疾病基地类别研究期限2015 年1 月—2018 年12 月中文关键词类风湿关节炎;调节性 T 细胞;Th17 细胞;可塑性英文关键词rheumatoid arthritis;regulatory T cell;Th17;plasticity中文摘要(限 400 字)：在类风湿关节炎(RA)中，调节性 T 细胞 (Treg) 免疫调节功能的缺陷在自身免疫反应发生和发展的过程中发挥着重要作用。

本课题组最近在 RA 患者中发现了一群具有Th17表型的Treg亚群（Th17-like Treg）。

该Treg亚群很可能参与了RA的致病过程。

本课题将对比来源于 RA 患者和健康人的不同 Th17-like Treg 与普通 Treg 亚群，通过系统的细胞实验、动物实验和患者临床相关性研究，对 RA 中Th17-like Treg 的细胞表型、免疫抑制功能、趋化迁移特点及 RA 中促进其分化的因子进行研究，力图揭示 RA 中的 Th17-like Treg 的免疫调节功能特点，从而揭示这一特殊的调节性 T 细胞亚群及其表现出的 Treg-Th17 可塑性在 RA 疾病发展中的作用，进一步深化我们对 RA 中免疫调节机制的认识，并为基于 Treg 的细胞治疗技术的进一步完善提供新的参考。

英文摘要(限 3000 Characters)：The impaired functions of regulatory T-cells (Treg) play an essential role in the initiation and development of autoimmunity in rheumatoid arthritis (RA). Recently, we identified a subset of Tregs which showed Th17 characteristics in RA (Th17-like Treg). It is very likely that the Th17-like Treg population is involved in the pathogenesis of RA. We are going to investigate the phenotypes, immunological functions, chemotaxis and differentiation factors of Th17-like Treg cells in RA in a series of studies in cell culture systems, animal models and clinical association analysis by comparing the Th17-like Tregs and conventional Tregs from RA patients and healthy controls. The roles of Th17-like Treg subset showing Treg-Th17 plasticity in RA development will be revealed by this investigation, which will deepen the understanding of immune regulatory mechanism in RA and provide novel references for the improvement of Treg cell therapies on RA.国家自然科学基金申请书**** 版项目组主要参与者（注: 项目组主要参与者不包括项目申请人）编号姓名出生年月性别职称学位单位名称电话电子邮箱项目分工每年工作时间（月）123456789总人数高级中级初级博士后博士生硕士生说明:高级、中级、初级、博士后、博士生、硕士生人员数由申请人负责填报（含申请人），总人数由各分项自动加和产生。

第4 页版本1.006.209经*申请表（金额单位：万元）科目申请经* 备注（计算依据与说明）一.研究经* 74.40001.科研业务* 26.8000（1）测试/计算/分析* 20 用于 siRNA 慢病毒载体制备，DNA 测序，亚硫酸盐测序等项目的测试*用（2）能源/动力* 1.8000 用于实验室运行消耗的水、电*用（3）会议*/差旅* 3.0000 用于本课题人员参加国内学术会议的差旅、会议注册和住宿*用（4）出版物/文献/信息传播* 2.0000 用于论文发表的版面*和专利申请*用支出（5）其他0.00002.实验材料* 41.1000（1）原材料/试剂/药品购置* 41.1000 用于购置和饲养实验所需的实验动物、免疫学试剂、细胞培养试剂耗材所需的*用（2）其他0.00003.仪器设备* 6.5000（1）购置 6.5000 用于更换课题组已经老化故障的移液器和梯度 PCR仪的*用（2）试制0.00004.实验室改装* 0.00005.协作* 0.0000二.国际合作与交流* 2.00001.项目组成员出国合作交流2.0000 在课题实施期间参加国际学术会议的差旅、住宿和注册*用2.境外专家来华合作交流0.0000三.劳务* 9.1000 直接参加项目研究的研究生、博士后的劳务*用四.管理* 4.5000 项目依托单位为组织和支持项目研究而支出的*用合计90.0000与本项目相关的其他经*来源国家其他计划资助经* 0.0000 其他经*资助（含部门匹配）0 其他经*来源合计0.0000申请者在撰写报告正文时，请遵照以下要求：1、请先选定"项目基本信息"中的"资助类别"，再填写报告正文；2、在撰写过程中，不得删除系统已生成的撰写提纲（如误删可点击“查看报告正文撰写提纲”按钮，通过"复制/粘贴"恢复）；3、请将每部分内容填写在提纲下留出的空白区域处；4、对于正文中出现的各类图形、图表、公式、化学分子式等请先转换成JPG 格式图片，再粘贴到申请书正文相应位置5、本要求将作为申请书正文撰写是否规范的评判依据，请遵照要求填写。

查看报告正文撰写提纲报告正文报告正文：参照以下提纲撰写，要求内容翔实、清晰，层次分明，标题突出。

（一）立项依据与研究内容（4000-8000 字）：1.项目的立项依据（研究意义、国内外研究现状及发展动态分析，需结合科学研究发展趋势来论述科学意义；或结合国民经济和社会发展中迫切需要解决的关键科技问题来论述其应用前景。

附主要参考文献目录）；（1）研究目的和意义：类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis, RA）是临床常见的全身性自身免疫病，以慢性破坏性关节病变为主要特征，是我国主要的致残性疾病之一。

本课题组和其他单位的研究显示，RA 在我国的患病率为0.41%，患病人数预计近500 万，且多为20-50 岁中青年，致残率高，给我国社会和患者均造成了沉重负担【1，2】。

图一RA 是导致我国人群肢体致残的主要原因之一针对自身抗原的免疫耐受被打破是包括RA 在内的多种自身免疫疾病的共同致病机制，而Foxp3+调节性T 细胞（regulatory T cell, Treg）在保持机体的外周免疫耐受中发挥着核心作用【3】。

Foxp3+ Treg 功能的异常在自身免疫疾病的发生中发挥着重要作用，在RA 患者中，虽然Treg 在细胞数量上与健康人没有显著的差别【4】，但本课题组和其他研究者均发现，自RA 患者关节炎症部位分离的Treg 抑制T 细胞活化增殖的能力受损【5,6】（见后文工作基础），RA 中Treg 抑制T 细胞和单核细胞分泌炎性细胞因子能力也出现下降【7】。

这些现象说明，在RA 中，Treg 的免疫调节功能发生了缺陷。

所以，针对RA 中Treg 免疫调节功能发生变化的机制进行深入研究，充分揭示RA 中Treg 表型和功能的改变，是目前RA 研究的重要方向。

本课题申请人最近在国内外首次报道了RA 中存在着Th17-like regulatory T-cell 亚群( 即表达IL-17A 、RORc 等Th17 功能分子的C D4+CD25+CD161+Foxp3+Treg），相关论文已发表在国际风湿病学一流的专业学术刊物《Ann Rheum Dis》上（IF=9.11）【5】。

本课题组发现这群具有Th17 表型的Treg 亚群很可能参与了RA 的致病过程（详见后文工作基础部分），是RA 自身免疫反应调控异常的表现。

近年的一系列研究证实，在自身免疫反应的炎症环境中，Treg 可以获得部分Th17 或Th1 细胞的表型，其免疫调节功能很可能随之发生改变，这种现象被称为Treg 的可塑性（Treg plasticity）【16】。

本课题组发现，在RA 患者外周血和关节液的Treg 细胞中，表达IL-17A 的CD4+ Foxp3+调节性T 细胞即Th17-like Treg 细胞的比例显著增加（见后文前期工作基础图五、图六）。

对这一Th17-like Treg 亚群的生理或病理功能、分化来源及分化所需的调控因子，目前学术界还存在着很多争议。

特别是在自身免疫疾病中，对这一细胞亚群的研究，目前还很缺乏，本课题申请人在前期工作中发表的论文首次在RA 中对该Treg 亚群进行了研究【5】。

由于Treg免疫调节功能的变化是导致RA 自身免疫反应发生的重要原因之一，因此有必要深入研究这一Th17-like Treg 细胞亚群的免疫调节功能特点，从而揭示其在RA 疾病发展中的作用，进一步深化我们对RA 免疫调节机制的认识。