维生素B12的定性定量检测
维生素B12注射液的定性鉴定及含量
实验步骤
3. 依据在361nm处测得的吸光度值，计算 试样中维生素B12的质量浓度。
思考题
1. 紫外—可见分光光度计测定维生素B12含量及定性鉴 定的原理是什么？
2. 称取0.0500g维生素C，溶于0.01mol/L H2SO4溶液中， 然后转移至100mL容量瓶中，稀释至刻度。吸取该溶 液2.00mL，准确稀释至100.0mL。取此溶液在1cm厚的 吸收池中用245nm波长的单色光测其吸光度为0.551， 试求维生素C的质量分数。已知 (245nm)标= 560。
2. 按药典方法，取维生素B12注射液1支（1mL），倒入 25mL容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，充分混匀，置于 1cm石英吸收池中以蒸馏水作参比溶液，在波长 230nm～580nm的范围内，每间隔20nm测定一次吸光 度，在最大吸收峰278nm、361nm、550nm附近，每间 隔2nm测量一次，然后绘制A—λ吸收曲线图，确定最 大吸收峰位置，并计算吸光度之比值，进行定性鉴定。
维生素B12注射液的定性鉴 定及含量的测定
实验目的
了解紫外—可见分光光度计的构造及正确 使用方法。
掌握吸收曲线的绘制方法。 掌握紫外—可见分光光度法对物质的定性
鉴定和含量测定。
实验原理
紫外分光光度法仍然是基于Lambert—Beer 定律
A = k·c·b
其中k为吸光系数。在条件改nm
E1% 1cm
278nm
A361 A278
1.70 ~ 1.88
E1% 1cm
361nm
E1% 1cm
550nm
A361 A550
3.15 ~
3.45
实验原理
维生素B12注射液含量测定是依据标准维生素
8维生素B12注射液的定性鉴定及含量
实验原理
维生素B12注射液含量测定： 标准维生素B12的 E1cm 361nm 207
1%
中国药典2015年版规定：本品维生素B12的灭菌水溶 液，含维生素B12应为标示量的90.0%-110.0%。
实验步骤
1.
参看紫外—可见分光光度计仪器简介和
使用操作部分，熟悉其性能和操作方法。 接通电源，打开仪器，预热20min。
实验步骤
2. 取维生素B12注射液1支（1mL:0.5mg），全部转入
25mL容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，
置于1cm石英比色皿中以蒸馏水作参比溶液， 在波长230nm～580nm的范围内，每间隔20nm测定一次 吸光度，并记录每次测量的吸光度A值，
在最大吸收峰278nm、361nm、550nm附近，每间隔2nm 测量一次，然后绘制A—λ吸收曲线图，确定最大吸收峰 位置，并计算吸光度之比值，进行定性鉴定。
吸收池中用245nm波长的单色光测其吸光度为0.551，
试求维生素C的质量分数。已知 (245nm)标= 560。
实验步骤
3.
依据在361nm处测得的吸光度值，计算
试样中维生素B12的质量浓度。
思考题
1. 紫外—可见分光光度计测定维生素B12含量及定性鉴 定的原理是什么？
2. 称取0.0500g维生素C，溶于0.01mol/L H2SO4溶液中， 然后转移至100mL容量瓶中，稀释至刻度。吸取该溶 液2.00mL，准确稀释至100.0mL。取此溶液在1cm厚的
2018/12/11
实验原理
维生素B12是含有Co的有机化合物，为深红色
结晶或结晶性粉末。其注射液在278±1nm、 361±1nm、550±1nm波长处有最大吸收。
B12定量测定作业指导书
B12定量测定作业指导书1.原理抗原或抗体包被的微粒子，是由多孔高分子粒子制成，具有很好的亲水性，悬浮性极佳，微粒子可与玻璃纤维不可逆结合，从而提高了反应的特异性。
标本与微粒子以一定比例混合，标本中被检物质与微粒子上包被的抗体进行一定时间的反应，以反应终了后，反应液的一部分被移到玻璃纤维上，洗去未反应的被检物质与其它的不要成份，加入基质液，基质液被碱性磷酸所分解生成Methylumbelliferoneo当该物受荧光照射后就产生荧光，测定荧光强度的分化率，从而决定被测物质的浓度。
2.标本采集：2.1标本采集前病人准备：受检者应空腹2.2标本种类：血清或血浆2.3标本要求：采集血清样本，取被检者静脉血，用无菌取血针抽取病人静脉血3ml,收集干燥试管中，室温放置不超过8小时，2000转/分离心20分钟备用。
采集血浆样本，用无菌取血针取被检者静脉血3ml,收集于含有EDTA作抗凝剂的试管中，室温放置不超过8小时，2000转/分离心20分钟备用。
3.标本储存：待测样本室温不超过8小时，4-8°C不超过72小时，-20℃可长期保存，避免反复冻融。
4.标本运输：室温运输。
5.标本拒收标准：细菌污染，严重溶血或脂血标本不能作测定。
6.试剂：6.1试剂名称：B12诊断试剂盒。
6.2试剂生产厂家：XX制药有限公司6.3包装规格：IoOTeSt/kit6.4试剂盒组成：B12诊断试剂6.5试剂储存条件及有效期：试剂盒贮存2-8°C条件，有效期12个月。
7.仪器设备：7.1仪器名称：AXSYM免疫自动分析仪7.2仪器厂家：XX公司7.3仪器型号：AXSYMTm型7.4仪器校准：本仪器校准由厂家工程师负责校准8.操作步骤：8.1样本处理：取待测样本血清或血浆置于样本杯中（不能有纤维蛋白，不能有气泡）。
8.2仪器准备：检查纤维杯，反应杯数量满足实验需要，废物桶和废液桶是否连接好，仪器的光路是否正常，环境温度是否符合要求，打印机的连接。
维生素B12注射液的定性鉴别及定量分析
实验十六维生素B12注射液的定性鉴别及定量分析一、实验目的1．掌握定性鉴别的方法和吸光系数法的定量方法；2．熟悉紫外分光光度计的操作方法；3．了解含量测定、标示量的百分含量及稀释度等计算方法。
二、实验原理维生素B12是一类含钴的卟啉类化合物，具有很强的生理作用，可用于治疗恶性贫血等疾病。
维生素B12不是单一的一种化合物，共有七种。
通常所说的维生素B12是指其中的氰钴素，为深红色吸湿性结晶，制成注射液其标示含量有每毫升含维生素B1250、100或500μg等规格。
维生素B12的水溶液在278n m±1nm、361nm±1nm与550nm±1nm三波长处有最大吸收。
药典规定，在361nm波长处的吸光度与278nm波长处的吸光度的比值应为1.70～1.88。
361nm波长处的吸光度与550nm波长处的吸光度比值在3.15～3.45范围内，这为定性鉴别E值（207）为测定注射液的依据。
药典规定，以361nm±1nm处吸收峰的百分吸光系数%11cm实际含量的依据。
三、实验仪器及试剂1．仪器紫外－可见分光光度计、石英吸收池、容量瓶、吸量管。
2．试样维生素B12注射液。
四、实验内容与步骤1．试样溶液制备精密吸取维生素B12注射液样品（100μg/mL）3.0mL，置于10mL量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，得试样溶液。
2．测定将试样稀释液装入1cm石英吸收池中，以蒸馏水为空白，在278nm、361nm波长处与550nm 波长处分别测定吸光度。
五、数据处理1．定性鉴别根据测得的278nm、361nm与550nm波长处的吸光度数据，计算该两两波长处的吸光度比值，并与药典规定的幅度值比较，进行维生素B 12的鉴别。
2．吸光系数法将361nm 波长处测得的吸光度A 值与48.21相乘，即得试样稀释液中每毫升含维生素B 12的微克数。
按照百分吸光系数的定义，每100mL 含1g 维生素B 12的溶液（1％）在361nm 处的吸光度应为207。
分子荧光法测定维生素B12含量实验报告
分子荧光法测定维生素B12含量实验报告【实验项目】分子荧光法定量测定维生素B2的含量【实验目的】1.掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。
2.了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。
【实验原理】荧光是光致发光。
任何荧光物质都具有激发光谱和发射光谱，发射波长总是大于激发波长。
荧光激发光谱是通过测定荧光体的发光通量随波长变化而获得的光谱，反映不同波长激发光引起荧光的相对效率。
荧光发射光谱是当荧光物质在固定的激发光源照射后所产生的分子荧光，是荧光强度对发射波长的关系曲线，表示在所发射的荧光中各种波长相对强度。
由于各种不同的荧光物质有它们各自特定的荧光发射波长，可用它来鉴定荧光物质。
有些发荧光的物质其荧光强度与物质的浓度成正比，故可用荧光分光光度法测定其含量。
维生素B2溶液在430~440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm 附近。
维生素B2在pH=6~7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。
维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质一光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
在稀溶液中，荧光强度F与物质的浓度C有以下关系：F=2.303ΦT0Ebc当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=Kc【仪器与试剂】1.仪器：荧光分光光度计（型号：F2500HITA[H));1cm石英比色皿l:50mL容量瓶2.试剂：维生素B2标准溶液(10.0μg/mL)(已加乙酸)》【实验内容与步骤】1.系列标准溶液和待测溶液的配制取维生素B2(10.0μg/mL)标准溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL 分别置于50mL的容量瓶中，标定，摇匀。
取2.00mL待测溶液于50mL的容量瓶中，标定，摇匀。
维生素B12注射液的定性鉴别及含量测定2
实验十一 维生素B 12注射液的定性鉴别及含量测定实验者：李丽贝 合作者：倪佳琴一、实验目的1.1掌握722G 型分光光度计的操作方法 1.2熟悉定性鉴别及定量测定方法二、实验原理维生素B 12注射液为含钴的有机药物，为粉红色至红色的澄明液体，用于治疗贫血等疾病。
维生素B 12在278±1mm 、361±1mm 与550±1mm 波长处最大吸收，根据其吸收光谱的形状和最大吸收波长下吸光度比值，可进行定性鉴定。
测量最大吸收波长下吸光度，可算出供试品浓度。
三、实验仪器与试剂仪器 722G 型分光光度计，玻璃洗手池，容量瓶（10ml ），吸量管（1ml ） 试剂 维生素B 12注射液（1ml ：0.5mg ）四 、操作步骤4.1定性鉴别 根据中国药典（1995年版）规定，取含量测定项下的溶液，在361±1nm 与550±1nm 处测得的吸光光度比值应为3.15~3.45，即为合格。
4.2定量分析 精密量取本品适量，加水定量稀释成1ml 含维生素B 1225ug 的溶液，在361±1nm 处测得吸光度，维生素B 12的吸光系数（E 1%1cm ）按207计算，即得可求得样品的含量五、实验结果 1.（1）定性鉴别（吸光度比值）结果=3.357(规定为3.15~3.45)1% E 1cm 1% E 1cm 361nm 361nm = A 361nm A 550nm（2）定量分析（吸光系数法）A/E1%1cm x1/100x稀释因子标示量%= x100% =90.821标示量（g/ml）(规定为90.0~110.0)六、实验体会这个实验要求我们能正确使用分光光度计，所以还得提前捉摸一下，在这个实验过程中出现了与实际不符合的情况，应该是由于我们的操作失误，又因为数据与数据之间相差很小，所以更加需要细心，在老师的帮助下，顺利的得到了较为准确的数据，体会到自己仍应该更用心地去学习。
维生素b12检测方法标准
维生素b12检测方法标准
维生素B12检测方法标准通常是由专业医学组织或者卫生管理机构制定并推荐的。
常见的维生素B12检测方法包括血清维生素
B12测定、全血维生素B12测定和甲基辛酸测定等。
血清维生素B12测定是最常用的方法，它通过采集静脉血样本，然后在实验室中使用特定的化学试剂来测定血清中维生素B12的浓度。
全血维生素
B12测定则是直接测定全血中的维生素B12含量，通常用于评估维生素B12的储备情况。
甲基辛酸测定是一种新型的维生素B12功能性检测方法，通过测定尿液中的甲基辛酸浓度来评估维生素B12的代谢情况。
这些方法的标准通常包括了样本采集、实验室分析、结果解读和质量控制等方面的详细步骤和要求。
对于样本采集，标准通常会规定使用特定类型的采血管和采血技术，以确保样本的准确性和可靠性。
在实验室分析过程中，标准通常会规定使用特定的仪器设备和试剂，以及严格的操作流程和质量控制措施，以确保测定结果的准确性和可比性。
对于结果解读，标准通常会规定参考范围和异常结果的判定标准，以便医生能够准确诊断患者的维生素B12状况。
此外，标准还会要求实验室具有相应的认证和资质，并且参与
外部质量评估和监测，以确保检测结果的可靠性和准确性。
总的来说，维生素B12检测方法的标准涵盖了从样本采集到结果解读的全过程，旨在确保检测结果的准确性和可靠性，以指导临床诊断和治疗。
单体维生素定性鉴别方法
定性鉴别维生素A乙酸酯微粒的定性鉴别：称取试样0.1g，用无水乙醇湿润后，研磨数分钟，加氯仿10mL，振摇过滤，取滤液2mL，加三氯化锑的氯仿溶液0.5mL，即呈蓝色，并立即退色。
维生素D3微粒的定性鉴别：称取试样0.1g，精确到0.0002g，加三氯甲烷（氯仿）10mL，研磨数分钟，过滤。
取滤液5mL，加乙酸酐0.3mL，硫酸0.1mL，振摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后呈绿色。
维生素E的定性鉴别：称取试样约相当于维生素E 15mg，加无水乙醇10ml溶解后，加硝酸2mL，摇匀，在75℃加热约15min，溶液显橙红色。
维生素K3（亚硫酸氢钠甲萘醌）的定性鉴别：①称取试样约0.1g，加水10mL溶解，加碳酸钠溶液3mL，即发生甲萘醌的鲜黄色沉淀，用氯仿5mL萃取甲萘醌沉淀，氯仿溶液通过用氯仿洗涤过的滤器过滤，滤液在热水浴上蒸去氯仿，残余物用少量乙醇溶解，并重新蒸干，残渣测其熔点应为104～107℃。
②称取①项下得到的甲萘醌沉淀约50mg，加水5mL后，加亚硫酸氢钠75mg，在水浴上加热并剧烈振摇，直至全部溶解呈几乎无色的溶液，用水稀释到50mL，摇匀，取2mL，加氨水的乙醇溶液2mL，振摇，加氰乙酸乙酯3滴，即产生深紫蓝色，随即加氢氧化钠溶液1mL，溶液转变为绿色，随即变成黄色。
③移取试样4%的水溶液2mL，加数滴盐酸溶液，并温热，即发生二氧化硫的臭气。
维生素C的定性鉴别：①称取试样0.2g，加水10mL溶解后，取溶液5mL，加硝酸银溶液0.5mL，即发生银的黑色沉淀。
②另取溶液5mL，加2，6-二氯靛酚钠溶液1-3滴，即可看到2，6-二氯靛酚钠试液的蓝色即消失。
维生素B1（硝酸硫胺素）的定性鉴别：①移取2%试样溶液2mL，冷却后缓缓加入硫酸亚铁溶液2mL，两层溶液接触后产生棕色环。
②溶解试样约5mg于乙酸铅溶液1mL和氢氧化钠溶液1mL的混合液中，产生黄色；再在水浴上加热几分钟，溶液变成棕色；放置有硫化铅析出。
VB12注射液鉴别实验教学
2、定量分析
样品名称 所用仪器 型号 测定序号 吸光度A 吸光度 平均值 结果：含量= 1 检验日期 检测波长 2 3
数据处理
计算样品标示量（含量）
对照样品标示量%=90%-110%，合格
结果讨论
1、试比较用标准曲线法及吸收系数法定量的优 缺点。
2、利用其他组同学的实验结果，比较同一溶液 在不同仪器上测得的吸收曲线的形状、 吸收峰 波长以及相同浓度的吸光度有无不同，试作解 释。
数据记录
1、定性鉴别
波长（nm） 峰3 277 278 279 峰2 360 A 0.421 0.423 0.403 0.761
A361 /A550=3.15~3.45
A361 /A278=1.70~1.88
361
362 峰1 549
0.778
0.756 0.245
550
551
0.246
0.243
按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。
4 检测器 5 信号显示系统
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用方法
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
1.接通电源，开机预热钟
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
2.调节波长
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
3.比色皿加样，依次放入比色槽中 注意：手拿比色皿毛 面，高度为比色皿的 2/3。
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
4.调“100%”：光标调到T,将参比溶液对准光路， 按“100%”，仪器自动校正；完毕后显示“100.0”， 即T=100%。
UV-2000紫外-可见分光光度计的使用
5. 测定吸光度：将样品溶液对准光路，仪器数值 变动；完毕后显示即样品溶液的吸光度。
维生素B12的定性定量检测
维生素B 12的定性定量检测一、实验目的和要求1. 掌握紫外可见分光光度计的结构及基本操作；2. 掌握吸收曲线的绘制；3. 掌握利用分光光度法进行定性鉴别及定量检测的方法。
二、实验原理维生素B 12的水溶液在278土1nm 、3611土1nm 、550土1nm 三个波长处有较强吸收峰，壁纸根据其吸收光谱的形装和吸收峰的吸光度比值，可对维生素B 12进行定性鉴别；采用吸光系数法，测量其在最大吸收波长的吸光度值，可计算样品中维生素B 12的含量。
三、实验步骤 1、溶液配制用加样器移取维生素B 12注射液500μl ，转移至10ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
2、吸光度、透射比及吸收曲线的绘制用1cm 比色皿，以蒸馏水作为参比溶液，测定所配置的维生素B 12溶液在下列各个波长处的吸光度、透射比；在坐标纸上以测定的吸光度为纵坐标，波长为1、定性鉴别根据中国药典规定，维生素B 12的水溶液在3611土1nm 、550土1nm 波长的吸光的比值在3.15~3.45之间，表明样品为维生素B 12，即为合格药品。
EE %1nm 550cm 1%1)nm 361cm 1）（（=AA nm 550nm 360）（）（=136.0467.0=3.432、定量检测根据浓度25μg/ml 维生素B 12的注射液在3611土1nm 、550土1nm 波长的吸光的比值，按照下列计算的维生素B 12注射液含量，结果在90.0~110.0之间，表明维生素B 12注射液含量合格；其中207维生素B 12为在波长的吸收系数，20为稀释因子。
维生素B 12含量=）标示量（ml /g 20207Anm361⨯x100％=100)/(5.020207467.0x ml mg ⨯=90.2五、实验体会1.实验得到的数据偏小，可能是实验过程中存在着误差。
误差可能存在于读数、维生素B12溶液移取过程、比色皿上有污渍水迹及其润洗、分光光度计的操作中。
维生素B12注射液的定性分析与定量分析.doc
注意事项与上个步骤所注意的相同
3.仪器的使用：
（１）安装好打印机和UV-1600型紫外-可见分光光度计然后打开两个的开关，UV-1600型紫外-可见分光光度计进入自检菜单，8秒钟后按任意键开始自检（但不能按红色的键），“ＯＫ”表示仪器正常，可以工作。“ＥＲＲ”表示有故障，待排除故障后方可使用。
——“F4”打印
注意事项：
（1）在使用紫外－可见分光光度计前，应熟悉本仪器的结构、功能和操作注意事项。
（2）吸收池的光学面，必须清洁干净，不准用手触摸，只可用擦镜纸擦拭，并只能顺着一个方向擦.
五、实验数据的记录与处理
1.数据的记录
光度测量 标准法
no.
波长
A
T%
no.
c
A
T%
1
279.0
0.243
57.2
0.117
2
204.0
1.292
208.0
1.336
7
330.0
0.101
361.0
0.497
3
210.0
1.290
211.0
1.297
8
400.0
0.034
412.0
0.042
4
266.0
0.189
279.0
0.239
9
435.0
0.038
520.0
0.134
5
299.0
0.136
306.0
0.140
项目：维生素B12注射液含量测定
（通则0401） P56
13
三、实验实施
1
2 3 34
在给定波长±2nm处 测样品吸光度，选择 实际最大吸收波长
34
测定波长是多少？
三、实验实施
（三）. 紫外-可见分光光度计的使用 4.确定测定波长
测定时除另有规定者外，应在规定的吸收峰±2nm处，再测几点的
吸光度，以核对供试品的吸收峰位置是否正确，并以吸光度最大的波长
作为测定波长，除另有规定外吸光度最大波长应在该品种项下规定的波
W样（V样）：
品的吸光度后应减去空白读数，或由仪器自动扣除空白读数 后再计算含量。
37
（通则0401）
37
三、实验实施
（三）. 紫外-可见分光光度计的使用
5.供试品溶液的吸光度值的测定
供试品溶液的浓度，除各品种项下已有注明者外，供试品溶液的吸 光度以在0.3～0.7之间为宜，吸光度读书在此范围误差较小，并应结合
维生素B12注射液含量测定
一、 任务依据
【中国药典】2015版 二部 P1236
维生素B12注射液
本品为维生素B12的灭菌水溶液。含维生素B12（ C63H88CoN14O14P）应为标示量的90.0%~110.0%
【含量测定】避光操作。精密量取本品适量，用水定
量稀释成每1mL中约含维生素B12 25μg的溶液，照紫 外-可见分光光度法（通则02401），在361nm的波长处
维生素B12注射液的定性鉴定及含量
气味鉴定
02
03
折射率鉴定
通过嗅觉判断维生素B12注射液 是否有异常气味，如霉味、酸败 味等。
测定维生素B12注射液的折射率， 与标准值进行比较，以确定其纯 度。
化学性质鉴定
酸碱度鉴定
测定维生素B12注射液的酸碱度（pH值），以检查其 是否符合规定范围。
紫外可见光谱鉴定
通过紫外可见光谱法测定维生素B12注射液的吸收光 谱，与标准品进行比较，以确定其成分和含量。
结果准确性评估
通过对比标准品和其他已知值，对实验结果进行准 确性评估。
结果可靠性评估
对实验结果进行可靠性分析，如重复性、再现性等， 以确保结果的可靠性。
04 含量测定结果的分析与解 读
Байду номын сангаас据处理与统计分析
数据清洗
去除异常值、缺失值，确保数据准确性。
统计分析方法
选择合适的统计方法，如t检验、方差分析等，对 数据进行处理。
荧光法
荧光法是一种基于荧光物质与维生素B12相互作用所产生 的荧光特性的测定方法。通过测量荧光信号的强度，可以 间接测定样品中维生素B12的含量。
荧光法的原理是利用荧光物质与维生素B12结合后产生的 荧光信号，该荧光信号的强度与维生素B12的浓度成正比 。通过测量荧光信号的强度，可以得出样品中维生素B12 的含量。
遵循标准的实验操作规程， 确保实验步骤的准确性和 一致性。
实验环境控制
保持实验室内适宜的温度、 湿度和清洁度，以减少环 境因素对实验结果的影响。
实验数据记录
详细记录实验过程和数据， 以便后续分析和处理。
实验结果的质量控制
数据处理方法
采用合适的数据处理方法，如回归分析、统计检验 等，对实验数据进行处理和分析。
维生素B12注射液含量测定
1 ml
ml
二、 任务分解
3. 制定计划
(1)填写所需溶液、药品及仪器
表1 维生素B12注射液含量测定所需药品
药品名称
规格
数量
用途及可用量
维生素B12注射液 2ml：0.5mg/2盒
2盒
药品，1人
水
纯化水
500ml，1人 仪器清洗、溶剂
二、 任务分解
3. 制定计划
(1)填写所需溶液、药品及仪器
表2 维生素B12注射液含量测定所需仪器
7.记录与计算 1.计算供试品的百分含量% 2.计算平均百分含量%
标示量%= 平均百分含量%
8.结果与判定 1.将测得的含量与药典规定值比较，得出 结论。 2.相对偏差均应在±0.5%以内。
相对偏差= 结论：
三、实验实施
（一）.使用前仪器的校正和检定
1.波长准确度 1.1 波长准确度的允差范围 紫外-可见分光光度计波长准确 度允许误差，紫外区为±1nm，500nm处±2nm。
表1 分光光度法允差范围
波长 235 257 313 350
吸收强度 最小 最大 最小 最大
吸收系数 E 1 % 1cm
124.5 144.0 48.6 106.6
允差范围 123.0～126.0 142.8～146.2
47.0～50.3 105.5～108.5
（通则0401） P56
三、实验实施
三、实验实施
（三）. 紫外-可见分光光度计的使用
2. 吸收池（比色皿）的配对检查
比色皿的配对（测透光率 ）
进入透光率测量界面
透光率相差应在0.3%以下， 否则必须加以校正值
三、实验实施
（三）. 紫外-可见分光光度计的使用
维生素B12吸光谱的绘制及其注射液的鉴别和测定结果
维生素B12吸光谱的绘制及其注射液的鉴别和测定分类: 仪器分析实验报告一、实验目的(略)二、实验原理1、定性鉴别利用VB在278nm。
、361nm、550nm处的特征峰，进行定性鉴别:A361/A550=3.15~3.452、定量分析根据朗伯-比尔定律，用吸光系数法测定。
对某一确定的物质，在一定的波长下，某吸光系数为一定值(查表得)，测得吸光度A后，即可计算浓度:维生素B12吸光谱的绘制及其注射液的鉴别和测定三、实验步骤1.精密移取VB12注射液1.00mL于25.00容量瓶，以蒸馏水定容2.用上述稀释液在200.0-650.0nm扫描，记录特征峰波长3.做定性鉴别4.以最大吸收峰处的吸光度计算VB12的含量及标示百分量注:VB12标示量百分含量在90%~110.0%内均为合格。
四、仪器与试剂(注意:紫外-可见光光度计记得写明厂家、型号)五、实验结果与数据处理(一)计算式VB12浓度: 维生素B12吸光谱的绘制及其注射液的鉴别和测定(二)实验数据:1维生素B12吸光谱的绘制及其注射液的鉴别和测定结果(三)计算分析维生素B12吸光谱的绘制及其注射液的鉴别和测定结论:A361/A550在3.15~3.45范围内，所以溶液中含有VB12该VB12含量合格六、思考题1.利用邻组的实验结果，比较同一溶液在不同仪器上测得的吸收曲线的形状、吸收峰波长以及相同浓度的吸光度等有无不同，试作解释。
答:(1)、本组和邻组的吸收曲线和吸收波长大致相同，但相同的浓度吸收度稍微不同，本组各波长吸收度偏低。
原因包括:1、同仪器的灵敏度不同;(2)、配制溶液时定容等操作导致的误差。
2、比较用吸光系数和工作曲线定量方法，你认为哪种方法更好?为什么?吸光系数法需要从文献、药典等资料查得吸光系数(单位浓度的吸光度)，所以只能用于测定有吸光系数的已知物质，并且测定吸光度的仪器与自身的仪器灵敏度和实验条件均存在差异，所以比标准曲线法存在更大的误差。
紫外分光光度法测定维生素B12注射液的含量
实验四 紫外分光光度法测定维生素B12注射液的含量一、实验目的1、理解紫外—可见分光光度法定性分析、定星分析的原理。
2、掌握紫外—可见分光光度法测定维生素B12含量的原理。
3、掌握UV—7502PC紫外—可见分光光度计的结构、原理与操作。
二、原理分子中的电子发生跃迁需要的能量约在1~20eV之间，其对应的吸收光的波长范围大部分处于紫外和可见光区域，通常将分子在这一区域的吸收光谱称为电子光谱或紫外—可见吸收光谱。
物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。
由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。
分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。
紫外可见分光光度法的定量分析基础是朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律，即物质在一定浓度的吸光度与它的吸收介质的厚度呈正比。
在紫外可见光的范围内，对于一个特定的波长，吸收的程度正比于试样中该成分的浓度，因此测量光谱可以进行定性分析，而且根据吸收与已知浓度的标样的比较，还能进行定量分析。
1. 紫外-可见分光光度计的基本结构紫外-可见分光光度计由光源、单色器、吸收池、检测器以及数据处理及记录系统组成。
图1 紫外—可见分光光度计基本结构图2.透光率和吸光度如图2所示：入射光强度I0，吸收光强度I a，透过光强度I t， 反射光强度为I r I0═ I a + I t + I r被测溶液和参比的吸收池同样材料和厚度，反射光强度影响相互抵消，上式简化为I0═ I a + I t透光率愈大，溶液对光的吸收愈少；反之，透光率愈小，溶液对光的吸收愈多透光率的负对数称为吸光度，用符号A 表示。
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实验七 维生素B12的定性定量检测
实验目的和要求
1. 掌握紫外可见分光光度计的结构及基本操作；
2. 掌握吸收曲线的绘制；
3. 掌握利用分光光度法进行定性鉴别及定量检测的方法。
实验原理
维生素B12的水溶液在278土1nm 、3611土1nm 、550土1nm 三个波长处有较强吸收峰，壁纸根据其吸收光谱的形装和吸收峰的吸光度比值，可对维生素B12进行定性鉴别；采用吸光系数法，测量其在最大吸收波长的吸光度值，可计算样品中维生素B12的含量。
实验仪器与试剂
1.V-1100D 型分光光度计
2.维生素B12注射液
3.10ml 容量瓶1个
4.500ul 加样器
5.1cm 玻璃比色皿2个
6.500ul 加样器吸头 实验步骤 1、溶液配制
用加样器移取维生素B12注射液500ul ，转移至10ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
2、吸光度、透射比及吸收曲线的绘制
用1cm 比色皿，以蒸馏水作为参比溶液，测定所配置的维生素B12溶液在下列各个波长处的吸光度、透射比；在坐标纸上以测定的吸光度为纵坐标，波长为
1、定性鉴别
根据中国药典规定，维生素B12的水溶液在3611土1nm 、550土1nm 波长的吸光的比值在3.15~3.45之间，表明样品为维生素B12，即为合格药品。
E
E nm cm nm cm %1)
544(1%1)357(1=
A
A nm nm )
544()357(=
162
.0518
.0=3.20 因此该药为合格药品。
2、定量检测
根据浓度25ug/ml 维生素B12的注射液在3611土1nm 、550土1nm 波长的吸光的比值，按照下列计算的维生素B12注射液含量，结果在90.0%~110.0%之间，表明维生素B12注射液含量合格；其中207维生素B12为在波长的吸收系数，20为稀释因子（稀释倍数）。
维生素B12含量=100g/ml 20
207357⨯⨯）标示量（A
nm
x100％=100
)/(5.020207518
.0103
⨯⨯⨯-ml g x100％=100.1%
因此，该瓶维生素B12注射液含量合格。
3.吸收曲线的绘制：
（1）360nm 附近的吸收曲线：
（2）550nm 附近的吸收曲线：
实验讨论
1. 实验得到的吸收峰值的波长均比理论数据偏小，可能是的原因是：（1）实验过程中存在着误差。
误差可能存在于读数、维生素B12溶液移取过程、比色皿上有污渍水迹及其润洗、分光光度计的操作中。
（2）分光光度计调节的波长可能不够准确。
2.使用分光光度计之前，需要预热30分钟左右，而未放入比色皿时，必须将样品室仓盖打开，以免影响分光光度计的使用期限和灵敏度。
0.5mg/ml
3.稀释因子是怎样得到的：稀释因子就是稀释倍数，
=20得到的。
25ug/ml。