维生素B12的定性定量检测

实验七 维生素B12的定性定量检测

实验目的和要求

1. 掌握紫外可见分光光度计的结构及基本操作；

2. 掌握吸收曲线的绘制；

3. 掌握利用分光光度法进行定性鉴别及定量检测的方法。 实验原理

维生素B12的水溶液在278土1nm 、3611土1nm 、550土1nm 三个波长处有较强吸收峰，壁纸根据其吸收光谱的形装和吸收峰的吸光度比值，可对维生素B12进行定性鉴别；采用吸光系数法，测量其在最大吸收波长的吸光度值，可计算样品中维生素B12的含量。 实验仪器与试剂

1.V-1100D 型分光光度计

2.维生素B12注射液

3.10ml 容量瓶1个

4.500ul 加样器

5.1cm 玻璃比色皿2个

6.500ul 加样器吸头 实验步骤 1、溶液配制

用加样器移取维生素B12注射液500ul ，转移至10ml 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。

2、吸光度、透射比及吸收曲线的绘制

用1cm 比色皿，以蒸馏水作为参比溶液，测定所配置的维生素B12溶液在下列各个波长处的吸光度、透射比；在坐标纸上以测定的吸光度为纵坐标，波长为

1、定性鉴别

根据中国药典规定，维生素B12的水溶液在3611土1nm 、550土1nm 波长的吸光的比值在3.15~3.45之间，表明样品为维生素B12，即为合格药品。

E

E nm cm nm cm %1)

544(1%1)357(1=

A

A nm nm )

544()357(=

162

.0518

.0=3.20 因此该药为合格药品。

2、定量检测

根据浓度25ug/ml 维生素B12的注射液在3611土1nm 、550土1nm 波长的吸光的比值，按照下列计算的维生素B12注射液含量，结果在90.0%~110.0%之间，表明维生素B12注射液含量合格；其中207维生素B12为在波长的吸收系数，20为稀释因子（稀释倍数）。

维生素B12含量=100g/ml 20

207357⨯⨯）标示量（A

nm

x100％=100

)/(5.020207518

.0103

⨯⨯⨯-ml g x100％=100.1%

因此，该瓶维生素B12注射液含量合格。 3.吸收曲线的绘制：

（1）360nm 附近的吸收曲线：

（2）550nm 附近的吸收曲线：

实验讨论

1. 实验得到的吸收峰值的波长均比理论数据偏小，可能是的原因是：（1）实验过程中存在着误差。误差可能存在于读数、维生素B12溶液移取过程、比色皿上有污渍水迹及其润洗、分光光度计的操作中。（2）分光光度计调节的波长可能不够准确。

2.使用分光光度计之前，需要预热30分钟左右，而未放入比色皿时，必须将样品室仓盖打开，以免影响分光光度计的使用期限和灵敏度。

0.5mg/ml

3.稀释因子是怎样得到的：稀释因子就是稀释倍数，

=20得到的。

25ug/ml