纸层析法鉴定转氨基作用
转氨基作用及氨基酸的纸层析实验讨论
转氨基作用及氨基酸的纸层析实验讨论转氨基作用是指氨基酸中的氨基团与另一种物质中的羰基团发生反应，从而产生新的氨基酸或新的化合物。
这个作用在生物体内起着重要的生理和代谢功能，参与蛋白质合成、氨基酸代谢、能量代谢等过程。
为了研究转氨基作用及氨基酸的特性，科学家们开展了许多实验研究，其中纸层析实验是一种常用的方法。
纸层析实验是一种基于物质在纸上移动的原理进行分离和鉴定的技术。
在氨基酸研究中，纸层析实验可以用来分离和检测不同氨基酸的存在和含量。
这种实验方法简便易行，不需要昂贵的设备和大量试剂，因此深受科研工作者的喜爱。
在进行纸层析实验前，首先需要准备一张具有吸附性能的纸层析纸。
将待检测样品溶液滴在纸的一端，然后将纸的另一端浸入移液池中。
待液体在纸上上升至一定高度后，取出纸并晾干。
接下来，可以用各种显色试剂处理纸上的样品，使不同的氨基酸显示出不同的色带。
在进行纸层析实验时，可以通过探讨不同氨基酸的特性来讨论转氨基作用。
每种氨基酸在纸上的运动速度和颜色表现会受到其分子结构、极性和分子量的影响。
例如，极性较大的氨基酸在纸上运动较慢，而极性较小的氨基酸则会相对快速地移动。
这种差异可以通过纸层析实验中的色带位置来观察和比较。
转氨基作用还可以通过纸层析实验中的反应产物来进行研究。
例如，将某种氨基酸与特定的酶反应，可以观察到新的氨基酸或产物的形成。
这种方法可以用来研究酶的催化作用和氨基酸代谢途径。
总结一下，转氨基作用及氨基酸的纸层析实验是研究氨基酸特性和生物代谢的重要手段。
通过纸层析实验，可以分离和鉴定不同氨基酸的存在和含量，并观察氨基酸在纸上的运动速度和颜色表现。
此外，纸层析实验还可以研究转氨基作用产生的新的氨基酸或产物。
这些实验方法为我们深入了解氨基酸的生理功能和代谢机制提供了重要的工具和线索。
转氨基作业实验报告
一、实验目的1. 了解转氨基作用的基本原理及过程。
2. 掌握实验操作步骤，学会使用纸层析法观察转氨基作用。
3. 分析实验结果，加深对转氨基作用的认识。
二、实验原理转氨基作用是指氨基酸分子中的氨基和α-酮酸分子中的酮基相互转移，生成新的氨基酸和α-酮酸的过程。
本实验通过纸层析法观察转氨基作用，利用纸层析技术分离反应产物，分析反应过程中氨基酸和α-酮酸的变化。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：L-苯丙氨酸、α-酮戊二酸、FeCl3、NaOH、层析纸、滤纸、铅笔、剪刀、烧杯、滴管、移液器、紫外灯等。
2. 实验仪器：实验台、天平、烘箱、显微镜、冰箱等。
四、实验步骤1. 配制反应液：取L-苯丙氨酸、α-酮戊二酸、FeCl3和NaOH按一定比例配制反应液。
2. 进行反应：将配制好的反应液放入烧杯中，在室温下反应一段时间。
3. 层析分离：取一张层析纸，用铅笔在距一端1cm处划一条起始线，用滴管将反应液滴在起始线上，待液滴干燥后，将层析纸放入装有展开剂的层析箱中。
4. 展开剂：取适量展开剂（如正丁醇-冰醋酸-水，体积比为4:1:5）倒入层析箱中，使展开剂液面略高于层析纸上的反应液滴。
5. 展开过程：待展开剂上升至层析纸的另一端时，取出层析纸，晾干。
6. 观察结果：用紫外灯照射层析纸，观察反应产物在层析纸上的分布情况。
五、实验结果与分析1. 实验现象：在紫外灯照射下，层析纸上出现两个明显的色带，分别对应L-苯丙氨酸和α-酮戊二酸。
2. 实验分析：通过观察层析纸上反应产物的分布情况，可以判断转氨基作用是否发生。
在本实验中，层析纸上出现了两个明显的色带，说明L-苯丙氨酸和α-酮戊二酸发生了转氨基作用，生成了新的氨基酸和α-酮酸。
六、实验总结1. 通过本实验，我们了解了转氨基作用的基本原理及过程，掌握了实验操作步骤，学会了使用纸层析法观察转氨基作用。
2. 实验结果表明，在FeCl3和NaOH的催化作用下，L-苯丙氨酸和α-酮戊二酸发生了转氨基作用，生成了新的氨基酸和α-酮酸。
转氨基作用
将圆形滤纸置于水平位置，使流动相溶
剂由中心向四周扩散。
纸色谱法
实验原理
转氨基反应是由专一转氨酶 催化的α-氨基与α-酮酸之间基团 互换反应, 广泛存在于机体各组 织器官，是体内氨基酸代谢的重
要途径。
实验原理
本实验以丙氨酸和α-酮戊二
酸为底物，加含有谷丙转氨酶
（ALT）的肝匀浆，保温后用纸层 析法检查谷氨酸的出现，以证明
滤纸上结合水为固定相，有机溶剂作为 流动相。 滤纸纤维与水亲合力强，能吸收20-22% 的水，且其中6-7%的水是以氢键形式与 纤维素的羟基结合，在一般情况下很难 脱去，而滤纸纤维与有机溶剂的亲和力 甚弱。
纸层析法分类
按操作方式分成两类：垂直型和水平型。 顾名思义垂直型是将滤纸条垂直悬挂， 使流动相向上或者向下扩散。水平型是
【实验步骤】
（3）测定管取出后立即放沸水浴中煮
10min(终止反应)，取出后冷却， 过滤，滤液备用。
3．层析
取直径9cm圆形滤 纸一张，用圆规作 半径1cm同心圆， 通过圆心做两条相 互垂直的线，找到 4个位点。
层析纸准备
在滤纸圆心处打一小孔，取 滤纸一条，下半剪成须状，卷成
灯芯状捻, 上端插入滤纸中心孔
4 、显色
在层析滤纸上滴0.5
%茚三酮溶液,在烤 箱中烘吹干滤纸,可见同心弧状色斑。
用铅笔圈下各色斑。比较各色斑的位置
及颜色深浅，并按下列公式计算各色斑 的Rf值，分析是否发生了转氨基反应。
注意事项
1．点样时手要洗净，操作中手尽可 能少接触滤纸，以免污染。 2. 点样点不宜过大，直径应小于 0.5cm，为什么？ 3. 层析液有腐蚀性，操作时注意安 全，防止溅到皮肤或者眼睛。
22 生物化学实验--纸层析法测定肝组织的转氨基作用
纸层析法测定肝组织的转氨基作用【目的】1 ．掌握纸层析法的原理和方法。
2 ．熟悉相关转氨酶的临床意义。
【原理】转氨基作用是氨基酸代谢的一个重要反应。
在转氨酶作用下，将氨基酸的氨基转移到α - 酮酸上。
每种转氨基反应均由专一的转氨酶催化。
转氨酶广泛分布于机体各器官、组织，例如肝细胞中存在的丙氨酸氨基转移酶，能催化α - 酮戊二酸与丙氨酸之间的转氨基作用。
反应式如下：纸层析是以滤纸作为支持物，与滤纸纤维素结合的水（约占纸重 20 ～ 30 ％）称为层析中的“固定相”。
另一种和固定相不能混合或部分混合的溶剂则为“流动相”。
把欲分离的物质加在纸的一端，并使流动相借滤纸的毛细现象移动，此时，待分离溶质因分配系数不同而逐渐分布于滤纸的不同部位。
层析过程中或层析结束时，用显色剂使被分离的物质显出颜色，成为一个个色斑。
分配在固定相中趋势较大的成分在纸上随流动相移行的速度就小，色斑距原点的位置就较近。
反之，分配在固定相内趋势较小的成分移行就远，色斑位置离原点也远。
溶质在纸上的移动速率可用比移（R f ）表示：同一氨基酸在相同的层析条件下 R f 值相同，不同氨基酸在相同层析条件下 R f 值不同，因此可以根据 R f 值来鉴定被分离的氨基酸。
层析时，用显色剂茚三酮使氨基酸显色，将样品氨基酸的 R f 值与标准氨基酸的 R f 值比较，即可确定所分离氨基酸的种类。
【器材】1 ．研钵2 ．剪刀3 ．恒温水浴4 ．点样毛细管5 ．漏斗6 ．表面皿或小平皿7 ．新鲜动物肝脏8 ．直径 10cm 圆型新华滤纸9 ．中试管和小试管10 ．电炉或吹风机或烘箱11 ．直径 10cm 的培养皿【试剂】1 ． 0.2mol/L ， pH7.4 磷酸缓种液Na 2 HPO4 溶液 81ml 与 0.2mol/L NaH 2 PO4 溶液 19ml 混匀，再用蒸馏水稀释 20 倍。
2 ． 0.1mol/L 丙氨酸溶液称取丙氨酸 0.891g 先溶于少量 pH7.4 磷酸盐缓冲液中，以 0.1mol/LNaOH 仔细调节至 pH7.4 后，用磷酸缓冲液加至 100ml 。
转氨基实验报告
一、实验目的1. 理解转氨基作用的基本原理。
2. 掌握利用纸层析法观察转氨基作用的方法。
3. 通过实验验证转氨基作用在生物体内的重要性。
二、实验原理转氨基作用是一种生物体内重要的生化反应，主要是指在酶的催化下，氨基酸分子中的氨基与α-酮酸分子中的羰基进行交换，从而形成新的氨基酸和新的α-酮酸。
这一过程对于生物体内氨基酸的代谢和蛋白质的合成具有重要意义。
纸层析法是一种常用的分离和鉴定技术，通过在固定相（如滤纸）上展开待测物质，根据物质在固定相和流动相之间的分配系数不同，实现物质的分离和鉴定。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 丙氨酸（Ala）- 丙酮酸（Pyruvate）- 苹果酸（Malic acid）- 乙酸（Acetic acid）- 硫酸铵- 磷酸二氢钠- 水合三氯乙醛- 硝酸银- 氨水- 乙醇- 氨基苯甲酸- 硫酸铜- 铁氰化钾- 酚酞- 氢氧化钠- 氨基酸标准品2. 实验仪器：- 纸层析装置- 热水浴- 烘箱- 移液器- 移液管- 电子天平- 恒温水浴锅- 离心机- 紫外分光光度计四、实验步骤1. 配制氨基酸和α-酮酸混合溶液：将丙氨酸和丙酮酸按照一定比例混合，加入适量水合三氯乙醛，搅拌均匀，作为待测溶液。
2. 纸层析：将混合溶液点在滤纸上，将滤纸放入展开剂中，进行纸层析。
3. 显色：取出滤纸，晾干，用硝酸银和氨水进行显色，观察氨基酸和α-酮酸分离情况。
4. 定性鉴定：将滤纸放入展开剂中，加入氨水，观察氨基酸和α-酮酸分离情况，并进行定性鉴定。
5. 定量分析：将滤纸放入紫外分光光度计中，测定氨基酸和α-酮酸的吸收峰，计算其浓度。
6. 重复实验：重复以上步骤，验证实验结果的准确性。
五、实验结果与分析1. 转氨基作用实验结果：在纸层析过程中，氨基酸和α-酮酸在滤纸上分离，说明转氨基作用发生了。
2. 定性鉴定结果：通过观察滤纸上的颜色变化，可以判断出分离出的物质为氨基酸和α-酮酸。
3. 定量分析结果：通过紫外分光光度计测定，可以计算出氨基酸和α-酮酸的浓度。
转氨基作用(纸层析法)
转氨基作用原理氨基酸分子上的氨基转移到α-酮酸分子上的反应过程称为转氨基作用（或称氨基移换作用）。
转氨基作用是氨酸代谢的重要反应之一，由转氨酶催化。
经转氨后，原来的α-—氨基酸变成了相应的α-—酮酸，原来的α-—酮酸则成为新的、相应的α-—氨基酸。
本实验观察谷氨酸与丙酮酸在肌匀浆中的谷氨酸—丙酮酸转氨酶（简称GPT）的催化进行转氨基的过程。
然后用纸层析法检查反应体系中丙氨酸的生成。
为便于观察转氨基作用，在反应中须加一碘醋酸（或—溴醋酸），以抑制谷氨酸和丙酮酸的其它代谢过程。
试剂0.9% NaCl溶液；0.01mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）；1%谷氨酸钾溶液；1%丙酮酸钠溶液；0.25%一碘酸钠溶液；2%HAc。
操作1、肌匀浆的制备（该步由实验室准备室制备）取小白兔一只，猛击头部处死后，立即剪颈放血，取肌肉若干经0.9%NaCl溶液洗去血污后，称取肌肉约100g置电动匀浆器中，再加0.01mol/LpH7.4磷酸缓冲液500ml磨成匀浆。
2混匀后同置37-40℃水浴中保温1小时（时加振摇）。
取出两管各加入2%醋酸2滴，再同置沸水浴中5分钟，使反应停止，稍冷却，将上清液用于纸层析。
纸层析（氨基酸）原理层析法又称色层分离法，原指有色物质在吸附剂上因吸附能力不同而得到分离的方法。
后来此方法也应用于无色物质的分离。
层析法除了吸附层析以外，还有离子交换层析、分配层析和亲和层析等。
纸层析是分配层析中的一种。
分配层析是利用不同的物质在两个互不相溶的溶剂中的分配系数不同而得到分离的。
通常用a表示分配系数。
溶质在固定相中的浓度（Cs）a = —————————————溶质在流动相中的浓度（CL）一种物质在某溶剂系统中的分配系数，在一定的温度下是一个常数。
纸层析是以纸作为惰性支持物的分配层析，纸纤维上的羟基具有亲水性，因此以滤纸吸附的水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。
有机溶剂沿着滤纸自下而上流动的，称为“上行法”；自上而下流动的，称为“下行法”。
转氨基实验报告结论(3篇)
第1篇一、实验概述本次实验通过纸层析法观察转氨基作用，旨在学习氨基酸纸层析的基本原理，掌握氨基转移反应的过程和条件，以及通过纸层析法分析转氨基反应的结果。
实验过程中，我们使用了多种氨基酸作为底物，转氨酶作为催化剂，通过观察层析板上氨基酸的迁移情况，分析了转氨基作用的效率及其影响因素。
二、实验结果与分析1. 氨基酸纸层析原理纸层析法是一种常用的分离和鉴定化合物的方法。
在本次实验中，纸层析法用于分离混合氨基酸，并观察转氨基反应的结果。
层析原理基于不同物质在固定相（滤纸）和流动相（层析溶剂）中的分配系数不同，导致物质在层析过程中的迁移速率不同，从而实现分离。
2. 转氨基反应的观察实验中，我们选取了多种氨基酸作为底物，包括丙氨酸、甘氨酸、谷氨酸等。
在转氨酶的催化下，这些氨基酸发生转氨基反应，生成相应的α-酮酸和新的氨基酸。
通过观察层析板上氨基酸的迁移情况，我们可以分析转氨基反应的效率。
（1）丙氨酸转氨基反应：实验结果显示，丙氨酸在转氨酶的催化下，发生转氨基反应生成丙酮酸和新的氨基酸。
层析板上丙氨酸的斑点明显减少，丙酮酸的斑点明显增多，表明转氨基反应发生。
（2）甘氨酸转氨基反应：实验结果显示，甘氨酸在转氨酶的催化下，发生转氨基反应生成甘酮酸和新的氨基酸。
层析板上甘氨酸的斑点明显减少，甘酮酸的斑点明显增多，表明转氨基反应发生。
（3）谷氨酸转氨基反应：实验结果显示，谷氨酸在转氨酶的催化下，发生转氨基反应生成α-酮戊二酸和新的氨基酸。
层析板上谷氨酸的斑点明显减少，α-酮戊二酸的斑点明显增多，表明转氨基反应发生。
3. 影响转氨基反应的因素（1）pH值：实验结果显示，不同pH值条件下，转氨基反应的效率有所不同。
在适宜的pH值范围内，转氨基反应的效率较高。
因此，pH值是影响转氨基反应的一个重要因素。
（2）温度：实验结果显示，不同温度条件下，转氨基反应的效率有所不同。
在一定温度范围内，随着温度的升高，转氨基反应的效率逐渐提高。
转氨基作用(精)
0.5 37℃ 10min 1.0 0.5 1.5
0.5 沸水浴 10min 1.0 0.5 1.5
置37℃水浴中40min，保温完毕，立即将测定管放入沸水中 10min以终止反应，取出冷却后。
3、层析：
①
点样：Ala；Glu；测定管；空白管；（滤纸的 处理，点样3-4次）
②
展层：约25min后，溶剂前缘距滤纸边缘约1cm 时即可取出，用吹风机吹干。
转氨基作用与
氨基酸纸层析
咸宁学院医学院生化教研室
• 一、目的要求：
验证氨基酸的氨基移换作用
了解纸层析基本原理。 初步掌握利用纸层析法分离及鉴定氨基酸的技 术（包括：点样、展层、显色等技术）。
• 二、实验原理：
1、转氨基作用： Ala+α-酮戊二酸
ALT
丙酮酸+Glu
2.层析法
层析法又称色谱法（Chromatography），是广 泛应用的一种生物化学技术。层析法是利用混合物各 组分物理化学性质（如溶解度、吸附能力、电荷和分 子量等）的差别，使各组分在支持物上集中分布在不 同区域，借此将各组分分离。 层析系统有两个相，一个相称为固定相；另一
个相称为流动相。由于各组分受固定相的阻力和受流
动相的推力影响不同，各组分移动速度各异，从而使
各组得到分离。
按两相所处的状态分类
流动相 液 体 气 体
方法名称
液相层析法（LC）
气相层析法（GC）
固定相
固
体
液
体
固
体
液
体
分离原理
吸
附
分
配
吸
附
分
配
方法名称
液-固层析法 （LSC）
转氨作用实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除转氨作用实验报告篇一：实验六纸层析法观察转氨基作用实验报告实验六纸层析法观察转氨基作用【实验名称】：纸层析法观察转氨基作用09救援一班第三大组李岚宇20XX222336室温：28°（一）实验目的：1、学习氨基酸纸层析的基本原理。
2、掌握氨基酸纸层析的操作原理。
（二）实验原理：转氨基作用是氨基酸代谢过程中的一个重要反应，在转氨酶的催化下，氨基酸的а-酮酸与α-酮基的互换反应称为转氨基作用。
转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的重要途径。
氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的α－氨基转移到另一α－酮基酸上。
各种转氨酶的活性不同，其中肝脏的丙氨酸氨基转移酶（ALT）催化如下反应：α—酮戊二酸+丙氨酸谷氨酸+丙酮酸本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析法检查谷氨酸的出现，以证明转氨基作用。
纸层析属于分配层析。
以滤纸为支持物，滤纸纤维与水亲合力强，水被吸附在滤纸的纤维素的纤维之间形成固定相。
有机溶剂与水不相溶，把预分离物质加到滤纸的一端，使流动溶剂经此向另一端移动，这样物质随着流动相的移动进行连续、动态的不断分配。
由于物质分配系数的差异，而使移动速度就不一样，在固定相中，分配趋势较大的组分，随流动相移动的速度就慢，反之，在流动相分配趋势较大的成分，移动速度快，最终不同的组分彼此分离，物质在纸上移动的速率可以用比值Rf表示：ALT物质在一定的溶液中的分配系数是一定的，故比值Rf也相对稳定，因此在同一层析体系中可用Rf值来鉴定被分离的物质。
（三）实验材料与仪器：试剂：1、0.01mol/Lph7.4磷酸盐缓冲液。
2、0.2mol/Lna2hpo4溶液81ml与0.2mol/Lnah2po4溶液19ml混匀,用蒸馏水稀释20倍。
3(:转氨作用实验报告)、0.1mol/L丙氨酸溶液称取丙氨酸0.891克,先溶于少量0.01mol/Lph7.4磷酸盐缓冲液中,以1.0nnaoh仔细调至ph7.4后,加磷酸盐缓冲液至100ml。
转氨基作用及氨基酸的纸层析实验讨论误差
转氨基作用及氨基酸的纸层析实验讨论误差转氨基作用是指一些酶（转氨酶）催化下，氨基酸中的氨基基团与其他有机物中的羰基（如酮体、醛体、羧酸等）发生相互转移的化学反应。
这种转移可以使氨基酸的氨基基团被转移到其他分子上，并将原分子上的基团转移到氨基酸上。
纸层析实验是通过纸层析技术对混合物中的物质进行分离和鉴定的方法。
在氨基酸的纸层析实验中，通常是将待测的混合物和标准氨基酸点于纸上，然后通过溶剂的上升运动，使待测物质和标准物质在纸上产生色斑，并根据它们的迁移速度和颜色对其进行分离和鉴定。
在讨论误差时，需要考虑以下因素：1. 纸张的质量和用量：纸张的质量和用量可以影响实验的结果。
使用较差质量的纸张或者使用过多或过少的纸张都可能导致分离效果不佳。
2. 溶剂的选择和准备：溶剂的选择和准备也会影响纸层析实验的结果。
溶剂的纯度、浓度和pH值等因素都应该被控制在合适的范围内，以避免对实验结果产生干扰。
3. 样品的准备和处理：样品的准备和处理方法可能会引入一些误差。
例如，样品的浓度、含量和纯度等可以影响实验的结果。
4. 运动时间和温度：运动时间和温度的控制也是关键因素。
运动时间过短或太长，以及温度过高或过低，都可能导致实验结果的误差。
为了减小误差，可以采取以下措施：1. 选择优质的纸张，并在合适的量上施加样品和标准氨基酸。
2. 使用高纯度、适当浓度和pH值合适的溶剂。
3. 在样品准备和处理过程中严格控制条件，确保样品的浓度和纯度符合要求。
4. 控制运动时间和温度，使其处于适宜的范围内。
此外，还应注意实验操作的规范性，仔细记录实验过程和观察结果，以便后续分析和讨论误差。
转氨基作用(纸层析法,Paper Chromatography)
转氨基作用（纸层析法,Paper Chromatography）一．目的了解动物组织的转氨基作用，学习转氨基反应产物的纸层析鉴定方法。
二．原理氨基酸在体内分解代谢的主要方式是脱氨基作用。
脱氨基作用的主要方式有氧化脱氨基、转氨基、联合脱氨基及非氧化脱氨基。
转氨基是指在转氨酶的催化下，氨基酸的α-氨基与α-酮酸的α酮基的互换反应。
转氨酶广泛分布于动物体的各器官组织中，各种转氨基作用都有专一的转氨酶催化。
本实验将谷氨酸和丙酮酸与肝匀浆一起保温，在肝细胞的丙氨酸转氨酶催化下产生丙氨酸。
利用纸层析法鉴定丙氨酸的存在，证明组织内的转氨基作用。
为了防止底物丙酮酸被组织中其它酶所氧化或还原，可加碘乙酸（或溴乙酸）抑制糖的酵解作用和氧化作用。
结果：丙氨酸和α酮戊二酸没有反应产物用纸层析法鉴定转氨基产物丙氨酸的存在与否。
原理为：谷氨酸和丙氨酸是理化性质不同的两种氨基酸，前者为亲水性氨基酸，后者为疏水性氨基酸，据此二者在固定相（水）与流动相（酚试剂）中的分配程度不同，因而流速不同。
最后用茚三酮显色。
三．材料（一）仪器试管；离心管；离心机；剪刀及镊子；培养皿；表面皿；毛细管；喷雾器；吹风机。
（二）试剂1．0.1%丙氨酸溶液2．1%谷氨酸溶液3．1%丙酮酸钠溶液4．0.25%碘乙酸溶液5．0.01 mol/LpH7.4磷酸缓冲液6．0.1%茚三酮乙醇溶液7．层析溶剂（酚的饱和水溶液）四．方法（一）肝匀浆的制备取新鲜动物肝脏1克，置研钵中剪碎，加细砂少许，5ml预冷的0.01 mol/LpH7.4磷酸缓冲液，研磨成匀浆。
(二)转氨基反应1．取小试管2支，分别标明测定和对照，各加肝匀浆10滴，将对照管立即置沸水浴中10分钟，取出冷却。
2．两管各加1%谷氨酸10滴，1%丙酮酸钠 10滴，0.25%碘乙酸5滴，置4 0℃水浴中保温30分钟后取出。
3．两管各加5%三氯醋酸2滴，置沸水浴中5分钟（2000rpm），将上清液分别移入同样编号的小试管中备用。
实验四 转氨基作用
实验四转氨基作用（纸层析法）原理氨基酸分子上的氨基转移到α-酮酸分子上的反应过程称为转氨基作用（或称氨基移换作用）。
转氨基作用是氨酸代谢的重要反应之一，由转氨酶催化。
经转氨后，原来的α-—氨基酸变成了相应的α-—酮酸，原来的α-—酮酸则成为新的、相应的α-—氨基酸。
本实验观察谷氨酸与丙酮酸在肌匀浆中的谷氨酸—丙酮酸转氨酶（简称GPT）的催化进行转氨基的过程。
然后用纸层析法检查反应体系中丙氨酸的生成。
为便于观察转氨基作用，在反应中须加一碘醋酸（或—溴醋酸），以抑制谷氨酸和丙酮酸的其它代谢过程。
试剂1．0.9% NaCl溶液。
2．PH7.4 0.01mol/L磷酸缓冲液：取0.2mol/LNa2HPO4溶液81ml与0.2mol/LNaH2PO4溶液19ml 混匀，稀释至2000ml。
3．1%谷氨酸钾溶液：取谷氨酸1g ，加水20ml，用5%KOH调到中性，然后用pH7.4 0.01mol/L 磷酸缓冲液稀释至100ml。
4．1%丙酮酸钠溶液：取丙酮酸1g加pH7.4 0.01mol/L磷酸缓冲溶液溶解成100ml。
5．0.25%一碘酸钠溶液：取一碘醋酸0.25g加水1ml，用5%KOH调到中性，然后加pH7.4，0.01mol/L磷酸缓冲液成100ml。
（一碘醋酸可用一溴醋酸代替）。
6．2%HAc操作1．肌匀浆的制备（由实验室准备室制备）取小白兔一只，猛击头部处死后，立即剪颈放血，取肌肉若干经0.9%NaCl溶液洗去血污后，称取肌肉约100g置电动匀浆器中，再加0.01mol/LpH7.4磷酸缓冲液500ml磨成匀浆。
2.转氨基反应：取小试管2支编号，所加试剂以滴为单位。
编号1 2试剂肌匀浆10 10将2号管置沸水浴中5分钟，然后取出冷却1%谷氨酸钾10 101%丙酮酸钠10 100.25%—碘醋酸钾 5 5混匀后同置40℃水浴中保温45分钟（或60分钟）。
在保温过程中，时加振摇。
取出两管各加入2%醋酸2滴，再同置沸水浴中5分钟，使蛋白质完全凝固，冷却后，离心（200r/min）5分钟，（或静置10分钟），将上清液作氨基酸的纸层析。
转氨酶转氨基作用的鉴定
1.谷丙转氨酶和谷草转氨酶在什么情况下发生异常变化 ？它们的临床意义是什么？ 2.本实验层析过程中哪一种氨基酸距离原点最远？为什么？ 3.影响Rf值的因素有哪些？
用纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用
一、实验目的
掌握纸层析法鉴定转氨酶转氨基作用的原理和方法
Байду номын сангаас
二、基本原理
转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的 重要途径。氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的 α－氨基转移到另一α－酮基酸上。各种转氨酶的活性不同，其中肝 脏的谷丙转氨酶（Glutamic Pyruvic Transaminase ,GPT）活性较 高，它催化如下反应： GPT α—酮戊二酸 + 丙氨酸 谷氨酸 + 丙酮酸 本实验以丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，加肝匀浆保温后，用纸层析 法检查谷氨酸的出现，以证明转氨基作用。
三、操作步骤
1．匀浆制备 2．酶促反应过程
肝0.5克+0.01mol/LpH 7.4磷酸盐缓冲液2.5 ml, 研成匀浆
2支试管
测定管① 肝匀浆0. 5ml
对照管② 肝匀浆0. 5ml
加热
0.1mol/L丙氨酸0.5 ml 0.1mol/Lα-酮戊二酸0.5 ml 0.01mol/L pH 7.4磷酸盐缓冲液1.5 ml
37℃保温，1小时 沸水浴中煮5分钟
离心2000rpm 5分钟
上清液供层析用
3．层析
1 4 2
3
丙氨酸液2 谷氨酸液4 测定液1 对照液3
4．显色
用喷雾器向上述滤纸均匀喷上0.5 %茚三酮溶液, 用吹风机热风吹干,可见出现同心弧状色斑,用铅笔 圈下各色斑。比较各色斑的位置及颜色深浅，并算 各色斑的Rf值，以此判定结果。
转氨基活性实验报告
一、实验名称转氨基活性实验二、实验目的1. 了解转氨基作用在氨基酸代谢中的重要性。
2. 掌握通过纸层析法检测转氨基活性的原理和方法。
3. 学习如何通过实验结果分析转氨基活性的变化。
三、实验原理转氨基作用是指氨基酸分子中的氨基转移至α-酮酸分子上，形成新的氨基酸和新的α-酮酸的过程。
这个过程在生物体内通过转氨酶的催化作用实现。
本实验采用纸层析法，通过观察氨基酸在纸层析上的迁移情况，来检测转氨基活性。
四、实验材料与仪器1. 材料：L-苯丙氨酸、L-丙氨酸、α-酮戊二酸、纸层析纸、丙酮、层析缸、滤纸、铅笔、剪刀、镊子等。
2. 仪器：分析天平、移液管、滴管、酒精灯、电热恒温水浴锅等。
五、实验步骤1. 配制层析液：将丙酮和蒸馏水按体积比1:1混合，配制成层析液。
2. 准备层析纸：将纸层析纸剪成适当大小，用铅笔在纸的一端标记起始线。
3. 配制样品：将L-苯丙氨酸和L-丙氨酸分别溶解于蒸馏水中，配制成一定浓度的溶液。
4. 制备层析样品：取两根毛细管，分别蘸取L-苯丙氨酸和L-丙氨酸溶液，在层析纸上距离起始线1cm处滴加，重复两次，待溶剂挥发后，再滴加α-酮戊二酸溶液，重复两次。
5. 展开层析：将层析纸放入层析缸中，加入层析液，待层析液上升到距起始线1cm处时，取出层析纸，晾干。
6. 观察结果：用铅笔在层析纸上标记出各样品的迁移位置，比较L-苯丙氨酸和L-丙氨酸的迁移距离，分析转氨基活性。
六、实验结果与分析1. 实验结果：L-苯丙氨酸和L-丙氨酸在层析纸上的迁移距离不同，说明两种氨基酸的转氨基活性存在差异。
2. 分析：L-苯丙氨酸的迁移距离较L-丙氨酸远，说明L-苯丙氨酸的转氨基活性较低。
这可能是因为L-苯丙氨酸的氨基转移速率较慢，或者其α-酮酸与层析液之间的相互作用较强。
七、实验结论通过本实验，我们掌握了纸层析法检测转氨基活性的原理和方法。
实验结果表明，L-苯丙氨酸的转氨基活性低于L-丙氨酸。
这为进一步研究氨基酸代谢提供了实验依据。
转氨基作用及氨基酸的纸层析实验讨论醋酸作用
转氨基作用及氨基酸的纸层析实验讨论醋酸作用一、引言在生物学中，转氨酶是一种重要的酶类，参与了人体内许多重要的生化过程。
转氨酶可以促使氨基酸之间发生转移，这一过程被称为转氨基作用。
本文将通过纸层析实验证明转氨酶与醋酸之间的作用，并进一步探讨相关的机制和应用。
二、纸层析实验的介绍及原理纸层析实验是一种常用的分离和检测氨基酸的方法。
它基于氨基酸在纸上运动的差异，利用静止相与流动相的相互作用来分离和检测不同氨基酸。
纸层析实验的原理如下： 1. 静止相：通常使用纤维素纸作为静止相。
静止相吸附了水分子，并且对不同氨基酸有不同的吸附能力。
2. 流动相：通常使用合适的溶液作为流动相，根据需要可以调节pH值等参数。
流动相的作用是使氨基酸在纸上迁移，并且根据不同氨基酸的吸附性质，使得它们在纸上的运动速度不同。
三、实验步骤及结果1. 实验步骤1.准备纤维素纸并切成合适的大小。
2.准备合适的液体流动相，并将纤维素纸的一端浸泡其中一段时间，以使其吸附足够的水分。
3.在纤维素纸上加上待测试的醋酸溶液。
4.将纤维素纸的另一端放入合适的容器中，使其与另一种溶液接触，作为对照组。
5.要求流动相能够覆盖纤维素纸全程，并保持连续流动。
2. 实验结果根据实验进行的情况，我们可以观察到以下结果： 1. 醋酸在纸上的运动速度明显快于对照组，说明醋酸在纸上的吸附性质较弱。
2. 不同氨基酸在纸上的运动速度也不相同，可以通过与标准氨基酸进行比较来确定待检测的氨基酸。
四、转氨基作用及醋酸的关系探讨1. 什么是转氨基作用转氨基作用是指氨基酸之间发生转移，将氨基和羧基交换的化学反应。
在生物体内，转氨基作用是由转氨酶催化的。
2. 醋酸与转氨基酶的作用关系醋酸是一种较为简单的羧酸，与转氨酶之间也存在着一定的作用关系。
具体表现为：1. 醋酸可以作为转氨基作用的供体或受体之一，参与氨基酸之间的转移。
2. 醋酸可以调节转氨酶的活性，进而影响转氨基作用的速率。
纸层析法鉴定转氨基作用
各色斑的Rf值与已知氨基 将 “ 对 ” 、 “ 测 ” 各色斑的 值与已知氨基 酸的Rf值进行对比 确定它们各是什么氨基酸。 值进行对比， 酸的 值进行对比 ， 确定它们各是什么氨基酸 。 据此解释转氨基作用。 据此解释转氨基作用。
[步骤 步骤] 步骤 4.用铅笔描出色斑轮廓 并按下表记录有关数 用铅笔描出色斑轮廓,并按下表记录有关数 用铅笔描出色斑轮廓 据,计算 值。 计算Rf值 计算 丙 “谷” “丙” “对”“测” 谷 对 测
点样处至色斑中心距离(cm) 点样处至色斑中心距离 点样处至溶剂前沿距离(cm) 点样处至溶剂前沿距离 Rf值 值
试剂（d） 试剂（
取直径13cm圆形滤纸 13cm圆形滤纸1 2.点样 取直径13cm圆形滤纸1张，用圆 规在滤纸正中作一半径为1cm的小圆圈作为层 规在滤纸正中作一半径为 1cm 的小圆圈作为层 析底线，用铅笔通过圆心作两点互相垂直的线， 析底线，用铅笔通过圆心作两点互相垂直的线， 并在两线外端等距离点4个原点，标明1 并在两线外端等距离点4个原点，标明1、2、3、 4 。 分别用毛细吸管吸取测定管上清液、 对照 分别用毛细吸管吸取测定管上清液 、 管上清液、 谷氨酸溶液、 管上清液、0.1M谷氨酸溶液、0.1M丙氨酸溶液 依次点在滤纸上标明1 各 3 滴 ， 依次点在滤纸上标明 1 、 2 、 3 、 4 的原 点处。 注意点样斑点不可太大。 点处 。 注意点样斑点不可太大 。 直径应小于 cm， 每点一滴， 0.5cm ， 每点一滴 ， 用吹风机吹干后方可再点 第二滴，并且点样量应力求均匀相等。 第二滴，并且点样量应力求均匀相等。
三、步骤 1.肝匀浆的制备 1.肝匀浆的制备 取兔肝剪碎，在研钵中先加磷酸盐缓冲液１ml， 取兔肝剪碎，在研钵中先加磷酸盐缓冲液１ml，待 研匀后再加２ml缓冲液 缓冲液。 研匀后再加２ml缓冲液。 取干净试管2 分别标明测定管与对照管， ２.取干净试管2支，分别标明测定管与对照管，按 下表操作。 下表操作。 测定管 对照管 肝匀浆 10 10 37℃水浴 37℃水浴 10min 沸水浴 10min 丙氨酸 10 10 α-酮戊二酸 10 10 37℃水浴 37℃水浴 20min
转氨基作用纸层析法实验报告
转氨基作用纸层析法实验报告
静态硝基呋喃实验报告
本实验采用离子转氨基作用纸层析法对静态硝基呋喃样品进行分析，
以了解静态硝基呋喃的性质。
首先，我们将样品溶液采用端正操作稀
释至0.5％，v / v。
然后，采用离子网的设计，将离子转氨基作用纸浸
渍到溶质中，使其充分地渗入浸渍纸中。
并用湿润的抹布擦拭浸渍纸，以保持它的稳定性。
接着，把离子转氨基作用纸张插入乙醇中，以防
止乙醇的氧化作用。
下一步，在乙醇中加入五氧化二磷，用于硝基基
团与乙醇的反应。
随后，样品离子溶液倒入离子转氨基作用纸条，并
敷设在操作台上，使样品不断滴漏入乙醇中，以反映静态硝基呋喃化
合物的名称。
最后，均匀洒上碳化钙，慢慢加热，总热量达到120°C 时，静态硝基呋喃就可以分解了。
经过离子转氨基作用纸层析法实验，我们可以确定静态硝基呋喃是一
种非常活跃的有机物质，有毒性。
静态硝基呋喃与乙醇酯的反应可以
充分地反映出静态硝基呋喃的分解机理，以及其有机物的活性性质。
经过实验，我们发现，在120°C的加热环境下，静态硝基呋喃可以完
全分解。
综上，本实验使用离子转氨基作用纸层析法，完成了对静态硝基呋喃
样品的分析，充分地反映了静态硝基呋喃有机物质的性质和活性性质，由此可以了解静态硝基呋喃的分解机理。
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6.显色 将滤纸平放在培养皿上，用喷瓶向滤纸均匀喷洒 0.1%茚三酮溶液，再用吹风机吹干，可见紫红色的同 心弧形斑点。 7.计算 按下表记录有关数据，计算Rf值。
“谷” “丙” “对” “测1、2”
点样处至色斑中心距离(A)
点样处至溶剂前沿距离(B) Rf值(A/B)
将“对”、“测”各色斑的 Rf值与已知氨基酸的 Rf 值进行对比，确定它们各是什么氨基酸。据此解释转 氨基作用。
[步骤] 1.制备肝匀浆 2. 转氨基反应 取干净试管 2 支，分别标明测定管与 对照管，按下表操作。
管号 试剂（滴） 肝匀浆 丙氨酸 α-酮戊二酸 测定管 对照管
10d 10d 37℃水浴10min 沸水浴10min 10d 10d 10d 10d 37℃水浴20min
3. 准备：取直径 15cm 圆形滤纸 1 张，用圆规在滤纸正 中作一半径为 1cm 的小圆圈，用铅笔通过圆心作两点 互相垂直的线，并在两线外端等距离点 4 个原点，标 明测、对、谷、丙。在滤纸圆心处打一小孔（如铅笔 芯粗细），另取同类滤纸小片 1.5cm×3cm，下三分之 二剪成须状。将其卷成圆筒如灯芯状，插入小孔（略 突出于滤纸面）
[步骤]
4. 点样 分别用采血管吸取测定管上清液、对照管 上清液、谷氨酸溶液、丙氨酸溶液各 1 滴，依次点在 滤纸上标明测、对、谷、丙的点样处。注意点样斑点 不可太大。直径应小于 0.5cm 。必要时可再点一次， 每点一滴，用吹风机吹干后方可再点第二滴，并且点 样量应力求均匀相等。 5. 层析 将滤纸放在培养皿上，灯芯下端浸入层析液 中进行层析。约40分钟后，去除灯芯，立即用铅笔划 出溶剂前沿，用吹风机吹干。
纸层析法鉴定转氨基作用
[目的] 1.验证氨基酸的转氨基作用 2.掌握纸上层析法分离和鉴定氨基酸的基本原 理和方法。 [原理] 在转氨酶的作用下，某一氨基酸去掉α- 氨基 生成相应的α-酮酸，而另一种α-酮酸得到此氨基 生成相应的氨基酸的过程，称为氨基酸的转氨基作 用。
层析理论 层析法（色谱法）：是利用混合物各组分物理、 化学性质（如溶解度、吸附能力、电荷和分子量等） 的差别，使各组分在支持物上集中分布在不同的区域， 借以将各组分分离。 固定相——滤纸结合的水 流动相——乙醇 由于混合物中的有效成分和杂质受固定相的阻力 和受流动相的推力影响不同，各组分移动速度不同， 有效成分和杂质在这两个相中连续多次地进行分配、 吸附和交换作用，最终结果是使混合物